SECCIÓN 6: MÉTODOS DE SEPARACIÓN

Introducción a la Cromatografía
 Contenido
SECCIÓN 1: INTRODUCCIÓN
Tema 1. Generalidades sobre Química Analítica Instrumental / 3 horas
SECCIÓN 2: ESPECTROSCOPIA MOLECULAR
Tema 2. Introducción a los métodos ópticos / 3 horas
Tema 3 Espectroscopia Ultra violeta – Visible / 3 horas
Tema 4. Espectroscopia Infrarroja / 3 horas
Tema 5. Espectroscopia de Resonancia Magnética Nuclear / 6 horas
Tema 6. Espectrometría de masas / 3 horas
SECCIÓN 3: ESPECTROSCOPIA ATÓMICA
Tema 7. Absorción y emisión atómica / 3 horas
SECCIÓN 4: ESPECTROSCOPIA DE RAYOS X
Tema 8. Bases de la espectroscopia de rayos X. Fluorescencia de rayos X / 3 horas
Tema 9. Difracción de Rayos X / 3 horas
SECCIÓN 5: MÉTODOS ELECTROANALÍTICOS
Tema 10. Potenciometría. Conductimetría.
Electrogravimetría. Coulombimetría. Voltamperometría / 6 h
SECCIÓN 6: MÉTODOS DE SEPARACIÓN
Tema 11. Introducción a la Cromatografía / 3 horas
SECCIÓN 7: MÉTODOS DIVERSOS
Tema
Lic. 12.Timaná
Carlos Análisis
de LaTérmico
Flor / 3 horas
Lic. Carlos Timaná de La Flor
 CROMATOGRAFIA DE GASES

Lic. Carlos Timaná de La Flor

Concepto General de Cromatografía

◼ Es una técnica que abarca un conjunto

importante y diversos de métodos, que
permite a los científicos separar componentes
estrechamente ligados en mezclas complejas, y
que en muchas ocasiones resulta imposible
resolver por otros medios.
◼ Se basa en las diferentes interacciones entre
un soluto y una fase estacionaria.

5
Cromatografía de Capa Fina
Siembra de la muestra

Silica gel
(fase estacionaria)
Placa de vidrio
(soporte inerte) Solvente-eluyente
(fase móvil)

6
Cromatografía de Capa Fina

cromatograma

Desarrollo del cromatograma Separación de bandas coloreadas

7
Objetivo de la GC

◼ Es separar, detectar y cuantificar una mezcla

de componentes químicos que sean volátiles
para ser arrastrados en una corriente de gas a
una temperatura que va entre -90°C y +450°C.
◼ La Cromatografía de gases es un método de
separación que incluye a todas aquellas
técnicas de separación cromatográficas en las
que la fase móvil es un gas.

8
Requerimientos de la GC

◼ Son necesarios:
❑ Una fase móvil (gas portador)
❑ Una fase estacionaria (columna de relleno o
recubrimiento de columnas capilares)
❑ Un sistema detector
◼ Gas portador: N2, He, Ar, H2.
◼ Columna: Empacadas o capilares
◼ Detector: según el analito

9
Divisiones de la GC
◼ Se basa en la naturaleza de la fase estacionaria

CGS CGL

Cromatografía Gas-Sólido: Fase estacionaria es un sólido

(polímero o tamiz molecular)
Cromatografía Gas-Líquido: El analito se distribuye entre la fase
móvil gaseosa y la fase líquida inmovilizada sobre la superficie de
un sólido.

10
Mecanismo de la separación

◼ Se realiza por que el soluto se distribuye entre dos fases:

❑ Una fase estacionaria y una fase móvil.
◼ En GC la separación se logra en una columna que contiene
un sólido o líquido impregnado en un soporte inerte (fase
estacionaria) y que tiene un flujo constante de un gas
(fase móvil).
◼ Se produce una adsorción diferencial o reparto.

11
Principios de la GC

◼ Distribución entre la fase movil gaseosa y la fase estacionaria.

◼ Algunos componentes interactúan en mayor grado con la fase
estacionaria, lo que origina un movimiento más lento a través de
la columna, obteniendo así su separación.

Inyección Migración Elución

12
Principios de la GC

13
Mecanismo de la separación

14
Elución

15
Separación de analitos

FASE ESTACIONARIA POLAR

Polar Poco polar No Polar

He He

FASE ESTACIONARIA POLAR

16
El Cromatógrafo de gases

◼ Sus partes son:

❑ Fuente de gas portador
❑ Cámara de inyección de muestra.
❑ Horno de columna
❑ Columna
❑ Detector
❑ Registrador , computadora.
◼ La separación de analitos se lleva a cabo en la
columna.

17
Partes de un cromatógrafo

Interfase:
Módulo de
comunicación

18
Gas portador (Carrier gas)

◼ Conduce la muestra y sus componentes a

través de la columna al detector a un flujo
constante.
◼ Deben ser químicamente inertes.
◼ Su selección depende su pureza, sensibilidad,
velocidad, tipo de columna.
◼ La resolución (separación de picos) depende de
la presión.
◼ Ejemplo: He, N2
19
Sistema de Inyección al GC

•Vaporiza la muestra Sistema de Inyección

•La transfiere a la
cabeza de la columna
•Debe ser cuantitativo
y reproducible.
•Existen diferentes
modos de inyección
según la muestra.
20
Introducción de la muestra

MUESTRA

solvente
Gas Líquido Sólido
•Válvula de
Micro jeringa (µL) SPME
muestreo de
Gas •Manual

•Jeringa Gas- •Automático

Tight

21
Sistemas de Inyección

◼ Unidad de Inyección Directa

❑ Permite inyección de muestras de amplio rango de concentración.
◼ Inyección On-Column
❑ Muestras de alto p.eb. La muestra es inyectada directamente a la
entrada de la columna. Mínima pérdida de componentes de la mezcla.
◼ Inyección Split
❑ Componentes de bajo p.eb. Para concentraciones elevadas. Se toma solo
una fracción de la muestra.
◼ Inyección Splitless
❑ Para analitos en trazas. Es rápida. Se toma toda la muestra.

22
Inyección Split

23
Columnas
◼ Empacadas
❑ 2 – 3 m de largo
❑ 2 – 4 mm de DI
❑ Vidrio o metal
◼ Capilares
❑ 10 – 150 m de largo
❑ 0,1 - 0,8 mm DI
❑ Sílica fundida con una capa de
poliamida

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Columnas Capilares (1)

◼ Tubos de pequeño diámetro cubiertos de una

película de fase líquida.
◼ Tiene 3 partes:
❑ Tubo de sílice fundida
❑ Cubierta de poliamida
❑ Fase estacionaria

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Columnas Capilares (2)

❑ Tubo de sílica fundida: ❑ Cubierta de poliamida

◼ De cuarzo sintético con ◼ Llena algunas
menos de 1 ppm de imperfecciones del
impurezas metálicas. tubo capilar.
◼ De diámetro constante ◼ Es una barrera
(se usan micrómetros impermeable.
láser)

26
Columnas capilares (3)
Cubierta de poliamida
◼ Fase estacionaria:
❑ Polímero que cubre la Sílica fundida
pared interna del tubo
de sílica.
❑ La mayoría son
polímeros de silicio.
❑ Influyen mucho: su
uniformidad y
naturaleza química.

Fase estacionaria

27
Columnas Capilares

28
Tipos de columnas capilares (1)

Columnas Columnas
No polares Polares
CH3
O Si H OCH2CH2 OH
* n * n

CH3 poli(etilénglicol)
Polidimetilsiloxano
SUPELCOWAX 10
SPB-1
Usada en separaciones de muchos
Usada en columnas Petrocol. compuestos polares: alcoholes,
Permite separaciones según p.eb. aromáticos, otros solventes.

29
Tipos de columnas capilares (2)

Columnas Columnas
intermedias especiales
SUPEL-Q-PLOT
CH3
Polímero de divinilbenceno
O Si c50
O Si c50 poroso que separa CO2 de
CH3 hidrocarburos C1-C4 a
temp. ambiente (GNP-
GLP). También apropiadas
poli(50%-difenil-50%-dimetilsiloxano)
para otros compuestos
SPB-50 polares

30
Finalidad de la columna

◼ En GC la separación se ◼ Al fluir la fase móvil a

lleva a cabo en la
columna, la cual esta
rellena de sólido o
líquido impregnado en
un sólido inerte. Sobre la
columna se hace fluir el
gas portador (fase móvil)
para mover los analitos a
través de la columna.
través de la columna,
ocurren diferentes
mecanismos que
generan la separación.
Estos son por lo
general:
❑ Adsorción
❑ Reparto
❑ Intercambio iónico
❑ Permeación de gel.

31
Horno de la columna

◼ Control exacto de
la temperatura
(máxima variación:
0,01–0,02 °C)
◼ Programa de
temperatura

Horno
32
Detectores (1)

◼ Generan una
respuesta o
señal para cada
componente
◼ Detección G
A
universal o S
P
selectiva O
R
T
A
D
O
R

33
 Detectores (2)

Existen muchos detectores para su uso en GC,

dependiendo su uso del tipo de compuesto a
analizar.
DETECTORES Detector de Ionización de Llama (FID)

Detector de Conductividad Térmica (TCD)

Detector Fotométrico de Llama (FPD)

Detector de Captura Electrónica (ECD)

34
Detectores: FID (1)

◼ Se usa con frecuencia por su alta sensibilidad ante compuestos

orgánicos carbonados.
◼ Consiste en una pequeña llama de difusión de H2/aire que
prende en el extremo de un quemador, colocado entre 2
electrodos a una diferencia de potencial de 100-300 V.
◼ Cuando un compuesto orgánico penetra la llama se quema
(2000ºC), se forman iones que se recogen mediante la tensión a
través de la llama. La corriente se amplifica y se mide con
electrómetro.
◼ La respuesta depende de la estructura. La respuesta es
directamente proporcional a la masa que entra en el FID e
independiente de la concentración en el gas portador.
◼ CO, CO2, COS, CS2 dan poca o ninguna señal.

35
Detectores: FID (2)

◼ Ventajas:
❑ Alta sensibilidad a todo compuesto orgánico con
carbono (10-13 g/mL)
❑ No responde a impurezas del gas portador, como
agua, CO2
❑ Amplia respuesta lineal y excelente línea base.
❑ Relativamente insensible a cambios de flujo.
❑ Fiable, resistente, fácil manejo, rápido.
◼ Desventajas:
❑ Detector destructivo de la muestra.

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Detectores: TCD (1)

◼ Primer detector utilizado.

◼ Se debe usar un gas portador de alta conductividad
térmica (He).
◼ Detecta cualquier componente menos el gas portador.
◼ Mide la diferencia de conductividad térmica entre el
portador y su mezcla con un soluto.
◼ Uso: Para análisis de gases permanentes y cuando la
cantidad de muestra no es limitada.

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Detectores: TCD (2)

Conductividad
Conductividad térmica de los Gas Térmica
gases Cal / cm2.s.ºC

•Basada en la rapidez de la hidrógeno 458,72

movilidad de las moléculas. Helio 368,63
•La rapidez es una función de la masa metano 85,54
molecular. oxígeno 65,91
•Cuando más pequeña la molécula, es
nitrógeno 64,06
más rápida y más alta la conductividad
térmica. CO 61,99
•H2 y He son las moléculas de menor agua 44,63
tamaño y tienen las mayores argón 44,22
conductividades térmicas CO2 41,74

38
Circuito TCD

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Detectores: TCD (3)

❑ Ventajas
➢ Diseño simple
➢ Gran rango dinámico lineal
➢ Respuesta a compuestos orgánicos e inorgánicos
➢ No destructivo – puede usarse en serie
➢ No usa gases combustibles.
❑ Desventajas
➢ Baja sensibilidad
➢ Requiere grandes cantidades de gas para purgar la celda.
➢ Sensible a cambios de velocidad de flujo y fluctuaciones de
temperatura.

40
Detectores: ECD

◼ Para analizar compuestos con altas afinidades

electrónicas. Es selectivo en su respuesta. Muy
sensible a compuestos que contengan grupos
electronegativos: halógenos, peróxidos,
quinonas y grupos nitrogenados. No sensible a:
aminas, alcoholes o hidrocarburos.
◼ Aplicable en: pesticidas, medicamentos y sus
metabolitos.

41
Detectores: ECD (2)

◼ El eluyente pasa sobre una material beta emisor (Ni-63).

Un e- de éste ioniza al portador (N2) y produce un tren de
e-. La energía de estos e- secundarios se reduce al nivel
térmico y son capturados por moléculas electrófilas.
◼ Los e- se recogen en la celda ECD al aplicar una pequeña
tensión sobre los electrodos de ésta.
◼ La intensidad de corriente resultante se compara luego
con una corriente de referencia con un electrómetro.

42
Detectores: FPD

◼ Detecta componentes con P y S.

◼ Usado en análisis de: pesticidas residuales fosforados;
tiofenos, mercaptanos, H2S en productos de petróleo.
◼ Los componentes llegan a una llama de H2/aire(O2) y son
quemados. Las muestras con S y P emiten luz de 
específica, la que pasa a través de un filtro óptico que solo
transmite la  especificada y es convertida en señal
eléctrica por un fotomultiplicador.

43
Cromatograma

◼ Gráfico de la señal del detector

en función del tiempo.
◼ Compuestos aparecen como
picos desde la línea base.
◼ Importantes:
❑ Tiempo de retención del pico.
❑ Area del pico.
◼ Análisis Cualitativo: identidad
del compuesto
◼ Análisis cuantitativo: cantidad
del componente
(concentración).

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Obtención del cromatograma

Registrador
Muestra A + B
Inyector Detector
Columna

A
A

B
B

45
El Cromatograma

◼ Gráfico de la señal del mV

detector en función pico
del tiempo.
◼ Los compuestos
aparecen como picos
desde la línea base. Pico de
aire Altura de
◼ Importantes: tiempo pico
Inyección Línea base
de retención del pico
(identidad del
compuesto) y el área
to tR
tiempo
del pico (cantidad del
componente).
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Resolución

◼ Es el grado de tR
separación entre dos
solutos.
◼ Mide el ancho del pico y W1 W2
la distancia entre picos. h
h/2
◼ Una columna capilar
tiene mayor resolución
Si R = 1,0 la separación de picos
que una columna es 98%; si R = 1,5 la separación de
empacada. picos es 99,7%; la resolución de la
◼ R = 1,18 tR / (W1 + W2) línea base se halla únicamente a R
> 1,5

47
Selectividad y Eficiencia de la columna

•Selectividad es la habilidad para distinguir entre dos

componentes (depende de la fase estacionaria)
•Eficiencia es una medida del ancho del pico (siempre
se buscan picos lo más angostos posibles)
Selectividad de la Eficiencia de la
columna columna

RESOLUCION

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Aplicaciones GC

◼ Industria del petróleo: Gases permanentes,

gases nobles, mercaptanos, gasolinas.
◼ Medio ambiente: pesticidas, semivolátiles
(fenoles), halocarburos, análisis de aguas.
◼ Alimentos: sabores, olores, aceites esenciales,
productos naturales, alcoholes, otros.
◼ Industria: ésteres, carbonílicos, solventes.
◼ Química Forense, Industria Farmaceútica.

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