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FICHA DE IDENTIFICACIÓN DE TRABAJO DE INVESTIGACIÓN

Título: SISTEMA GENEXPERT EN EL DIAGNOSTICO DE LA TUBERCULOSIS


Autor: Código:
CANDIDO, JORGE MARIO 51234

Fecha: 27/NOVIEMBRE/2018
Carrera: MEDICINA
Asignatura: COMPUTACION
Grupo: A
Docente: Ing. Wilson Javier Contreras Vargas
Periodo Académico: GESTION 2018 – II
Subsede: COCHABAMBA
Título: Sistema Genexpert en el Diagnostico de la Tuberculosis

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RESUMEN:

El Programa de Tuberculosis boliviano es uno de los programas de salud pública más


antiguos implementados en el país, y también uno de los más exitosos. Gracias al trabajo de
los equipos de salud comprometidos y a la organización y evaluación sistemática de las
actividades, el país ha estado a la vanguardia en la incorporación de tecnologías efectivas
para combatir la enfermedad, como lo fueron los fármacos antituberculosos y la vacunación
BCG. Estas tecnologías, junto con la organización de un Sistema Nacional de Salud público
con alta cobertura, permitieron ofrecer diagnóstico y tratamiento a los enfermos, siempre en
forma gratuita, resultando en la disminución de las tasas de mortalidad y morbilidad por
tuberculosis. El diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis ha venido siendo uno de los
pilares para combatir la enfermedad. El tamizaje de la población consultante sintomática
respiratoria mediante la realización de la baciloscopía y el cultivo, permiten diagnósticos
certeros y ofrecen la posibilidad de un seguimiento durante el tratamiento que asegure la
curación. Ambos exámenes de laboratorio, además de la incorporación progresiva de
pruebas de susceptibilidad a los fármacos, han jugado un rol fundamental en el control de la
tuberculosis durante las últimas décadas. Sin embargo, actualmente en el mundo la
tuberculosis continúa siendo una epidemia. Con casi 11 millones de casos anuales, el
aumento de las tasas en relación a la epidemia del VIH en muchos países y la emergencia de
cepas resistentes a los fármacos, hoy en día esta enfermedad es una de las principales causas
de muerte en el mundo, y la primera por un agente infeccioso. Ante este escenario han
surgido nuevas tecnologías buscando específicamente adelantar los tiempos de diagnóstico
y de la resistencia a los fármacos. En el escenario chileno, la prevalencia baja de la
enfermedad disminuye la sensibilidad de la baciloscopía, por lo que alrededor de un 30% de
los casos de tuberculosis pulmonar se diagnostican a través del cultivo. Esto implica una
demora diagnóstica de 45 a 60 días en los cuales un paciente con tuberculosis pulmonar se
mantendrá como fuente de infección. Por otra parte, si bien la prevalencia de resistencia a
fármacos es baja, adelantar este diagnóstico permite ajustar los tratamientos en forma
precoz y evitar la amplificación de la resistencia. El GeneXpert MTB/RIF es un examen de
biología molecular que permite un diagnóstico bacteriológico rápido y ofrece la posibilidad
de conocer la susceptibilidad a la rifampicina de las cepas en estudio en menos de dos horas.

Asignatura: Computación 2
Carrera: Medicina
Título: Sistema Genexpert en el Diagnostico de la Tuberculosis

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El Programa de Tuberculosis ha decidido incorporar esta nueva tecnología a nivel nacional,
enfocándose en aquellas poblaciones en las que tendrá el mayor beneficio. El presente
trabajo especifica las bases teóricas del uso del GeneXpert MTB/RIF e indica los lineamientos
programáticos para su uso.

Asignatura: Computación 3
Carrera: Medicina
Título: Sistema Genexpert en el Diagnostico de la Tuberculosis

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SUMARIO
CAPITULO I - INTRODUCCIÓN ................................................................................................. 5
CAPITULO II - MARCO TEORICO ............................................................................................. 7
2. TUBERCULOSIS ............................................................................................................ 7
MUESTRA PARA GENEXPERT MTB/RIF .......................................................................... 16
EL INFORME DE RESULTADOS DEL XPERT MTB/RIF .................................................. 19
CONTENIDO DEL EQUIPO GINEXPERT............................................................................ 21
CAPITULO III - OBJETIVOS ..................................................................................................... 22
3.1 OBJETIVO GENERAL ................................................................................................. 22
3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS ......................................................................................... 22
CAPITULO IV - METODOLOGIA ............................................................................................. 23
TIPO Y DISEÑO DE ESTUDIO .............................................................................................. 23
4.1 ESTUDIO ....................................................................................................................... 23
INTRUDUCCION .................................................................................................................... 23
CAPÍTULO V - CONCLUSIONES ............................................................................................. 29
BIBLIOGRAFIA .......................................................................................................................... 31

Asignatura: Computación 4
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CAPITULO I - INTRODUCCIÓN

La tuberculosis es una enfermedad infecciosa, generalmente crónica, causada por


un grupo de bacterias del orden Actinomicetales de la familia Mycobacteriaceae: el
complejo Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis, M. bovis y M. africanum y M.
canettii), que se transmite del enfermo al sujeto sano, principalmente por contacto con
personas enfermos bacilíferos, a través de la inhalación de material infectante, ingestión
de leche de vaca infectada por dicho complejo o contacto con animales bovinos enfermos
son mecanismos de transmisión infrecuentes. El M. tuberculosis puede diseminarse a
cualquier parte del organismo desde las primeras fases de su agresión, por ello la
Tuberculosis puede afectar cualquier órgano o tejido, aunque la localización más
frecuente es la pulmonar que es la vía de entrada del bacilo y representa 80-85% de los
casos.
La tuberculosis continúa ocupando el primer lugar como la enfermedad infecciosa
humana más importante que existe en el mundo, a pesar de los esfuerzos que se han
invertido para su control en la última década, sobre todo en los grupos etareos en edad
productiva y reproductiva (15 a 34), así como los mayores de 60 años presentan alta tasa
de incidencia a predominio del sexo masculino, con una razón de 1,5 hombres por mujer.
A nivel Mundial para el año 2011 se presentaron 7 a 8 millones de casos de
tuberculosis (todas las formas) y 1,45 millones de personas que mueren por la misma
causa, países con alta incidencia son Brasil, Perú y Haití (se excluye las personas con
VIH).

La tasa de detección de casos de Tuberculosis con baciloscopía positiva alcanzo


el 80% en el 2010 equivalente a 214 mil casos diagnosticados y 5 países priorizados de
alta carga de Tuberculosis continuaban teniendo tasa por debajo del promedio regional:
Bolivia (64%), Haití (62%), República Dominicana (59%), Ecuador (51%) y Guatemala
(37%).

Asignatura: Computación 5
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En Bolivia en el año 2011 la tasa de incidencia notificada de Tuberculosis en
Todas sus Formas fue de 76.4 por 100.000 habitantes y la tasa de incidencia notificada
de Tuberculosis Pulmonar B.A.A.R. (+) fue de 54.1 por 100.000 habitantes. Con 6.750
casos positivos.
Una alta proporción de casos de tuberculosis podría evitarse, identificando sus
factores de riesgo con la finalidad implementar medidas de prevención y profilaxis en
aquellos sujetos considerados como de alto riesgo para el desarrollo de tuberculosis. A
nivel mundial, se ha planteado como objetivo del milenio la disminución de la prevalencia
y muertes por de TB en un 50% para el 2015. Por ello, es necesario optimizar las
estrategias dirigidas a la prevención y control de la TB, con un enfoque integral,
incorporando a todos los sectores involucrados en la prevención y control de este
problema sanitario.
El Ministerio de Salud y Deportes de Bolivia cumple un rol normativo en la lucha
contra este mal que tiene características endémicas en el país y su plan estratégico tiene
un enfoque básicamente preventivo y curativo. El diagnostico y tratamiento gratuito están
garantizadas por el estado Boliviano. La estrategia DOTS (Tratamiento Directamente
Observado) es eficaz para la lucha contra la tuberculosis y garantiza el diagnostico
precoz de los casos de tuberculosis Pulmonar B.A.A.R. (+) y su tratamiento hasta la
curación, siendo una de las medidas fundamentales del control de la tuberculosis.

Asignatura: Computación 6
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CAPITULO II - MARCO TEORICO

2. TUBERCULOSIS

2.1 Agente etiológico

La tuberculosis está causada por bacterias del complejo Mycobacterium


tuberculosis y afecta principalmente a los pulmones aunque, en un 33 % de los
pacientes, hay afectación de otros órganos. El complejo Mycobacterium
tuberculosis, o Mycobacterium tuberculosis complex, pertenece al género
Mycobacterium, único género en la familia Mycobacteriaceae, donde también se
engloban M. leprae y muchas especies ambientales denominadas globalmente
micobacterias atípicas o no tuberculosas. En el complejo se incluye M.
tuberculosis, M. bovis, el bacilo de Calmette-Guérin (M. bovis atenuado), M.
africanum, M. microti, M. pinnipedii3 y M. canetti. Todos ellos presentan una
homología del ADN mayor al 95 %.
▪ M. tuberculosis provoca la mayoría de los casos de tuberculosis en los países
industrializados y, en muchas ocasiones, se asocia a personas con malas
condiciones higiénicas sanitarias, a inmigrantes provenientes de zonas con
alta prevalencia de infección o a contactos con enfermos de tuberculosis.
▪ M. bovis provoca tuberculosis en animales como vacas, perros, gatos, cerdos,
pájaros y, menos frecuentemente, en primates y humanos 5-7.
▪ M. bovis bacilo de Calmette-Guérin (BCG) es una cepa menos virulenta que
M. bovis y es la cepa usada para la vacunación. En 1924 se distribuyó a
laboratorios de todo el mundo y se mantiene a través de pases sucesivos.
▪ M. africanum causa tuberculosis en zonas de África tropical.
▪ M. microti provoca tuberculosis en roedores, cerdos, conejos, llamas y gatos
y, en menor cuantía, en humanos.
▪ M. pinnipedii afecta principalmente a focas y leones marinos con pocos casos
conocidos en humanos

Asignatura: Computación 7
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▪ M. canettii se presenta en pocos casos humanos y su reservorio natural es
desconocido.
Las micobacterias son bacilos aerobios estrictos, no forman esporas y no
tienen movilidad. Miden de 0,2 a 0,6 µm de ancho por 1,0 a 10 µm de largo.
Respecto a su material genético presentan un alto contenido en guanina y citosina
en el ADN.
Las bacterias del complejo Mycobacterium tuberculosis pueden sobrevivir
durante semanas o meses en objetos inanimados siempre que no reciban luz
solar, pero no puede replicarse si no se encuentra en tejidos humanos o de otros
animales de sangre caliente. Poseen una importante resistencia a ácidos, álcalis
y desinfectantes químicos aunque mueren fácilmente si se superan los 65 ºC al
menos durante 30 minutos y por la acción de la luz ultravioleta del sol. El frío o la
desecación no son eficaces para destruir el bacilo.

2.2 Transmisión

La tuberculosis es bacilifera al hablar, reír, estornudar, cantar y sobre todo,


al toser elimina diminutas gotas al aire (con tamaño menor a 5 micras de diámetro
– Gotitas de Flugge) que contienen bacilos, penetran a la vía respiratoria de otra
persona y se depositan en sus alveolos pulmonares. Los macrófagos en primera
instancia, luego las células “natural Killer” y finalmente los linfocitos T, acudirán a
la zona de la infección donde se encuentran los bacilos, son fagocitados y se
multiplican libremente en el interior de los macrófagos (inhiben lisossomo y
respuesta de los macrófagos) y de ahí pasan a la circulación sanguínea o linfática
diseminándose en todo el organismo. La respuesta inmune específica se produce
después de 2-10 semanas de la penetración del bacilo al organismo. En la gran
mayoría de los casos lograrán detener su multiplicación, pero en otros se verán
incapacitados y se desarrollará la tuberculosis pulmonar.
Tos: 350 000 partículas infectantes (cada partícula contienen de 3-5 bacilos)
Estornudo: 1 000 000 de partículas infectantes.

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Los factores que favorecen la transmisión son: Concentración de los bacilos en el
ambiente, Poca ventilación de los ambientes (que favorecen la concentración y
persistencia de los bacilos), Grado de contacto y Ausencia de luz solar.

2.3 Patogenia e infección

El bacilo ha ingresado al cuerpo de una persona, pero debido a que su


sistema inmunológico lo aísla y detiene su multiplicación no se produce la
enfermedad. Cuando la infección se produce por primera vez se habla en
PRIMOINFECCIÓN. Es asintomática, con BK y cultivo negativos, y rayos x normal.

ENFERMEDAD TUBERCULOSA: La enfermedad tuberculosa se desarrolla


cuando el sistema inmunológico no puede controlar los bacilos responsables de
la infección o reinfección, que comienzan a multiplicarse activamente produciendo
lesiones en los órganos afectados. Es sintomática, con BK y cultivo positivos,
presenta alteraciones en la radiografía.

2.4 Clínica
La tuberculosis carece de manifestaciones clínicas propias. Los síntomas y
signos sugestivos de la tuberculosis pulmonar se clasifican en síntomas locales
(respiratorios) y generales (sistémicos).
▪ Los síntomas generales o sistémicos son los primeros en aparecer:
decaimiento, hiporexia y anorexia, astenia, cansancio fácil, alzas térmicas
no cuantificadas a las que se agregan otras como diaforesis nocturnas,
pérdida progresiva de peso; sin embargo, uno de los aspectos más
importantes es que los síntomas generales de tuberculosis aparecen
gradualmente en semanas y hasta en meses.
▪ Los síntomas respiratorios pueden aparecer simultánea o posteriormente a
los generales. El más representativo es la tos que al comienzo es seca,
irritativa, y que se vuelve productiva con expectoración mucosa,

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mucopurulenta o purulenta. La expectoración sanguinolenta puede ser
variable, desde pequeñas manchas hasta una gran pérdida de sangre
rutilante de sabor metálico o salado (hemoptisis), también puede presentar
disnea, dolor torácico (se presenta cuando hay compromiso pleural)

2.5 Semiología
▪ Inspección: Belleza tísica, disnea, tórax simétrico
▪ Palpación: Expansibilidad y elasticidad disminuidos, vibraciones
vocales aumentadas.
▪ Percusión: Timpanismo
▪ Auscultación: Estertores crepitantes gruesos.
Sintomático Respiratorio (SR) es la persona que tiene tos y expectoración
por más de 15 días y que debe ser examinado con baciloscopía seriada de
esputo.

2.6 Formas de la tuberculosis


A. Desde el punto de vista de su localización, se clasifica en:
▪ Tuberculosis pulmonar: Es la localización más frecuente,
representando más del 80% de los casos de Tuberculosis en todas sus
formas, pudiendo ser BAAR (+) y BAAR (-). La tuberculosis pulmonar
BAAR (+), es la forma más contagiosa. Los casos de TB pulmonar
BAAR (-) pero cultivo positivo, son 10 veces menos contagiosos que los
BAAR (+).
▪ Tuberculosis extrapulmonar: Representa el 20% de los casos de
tuberculosis en todas sus formas. Afecta otros órganos fuera de los
pulmones, frecuentemente la pleura, los ganglios linfáticos, la columna
vertebral, las articulaciones, el tracto genitourinario, el sistema nervioso,
etc. El diagnóstico se torna difícil, por tanto, para su confirmación los

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pacientes deben ser referidos a centros de especialidad según el órgano
afectado. Los enfermos con TB extrapulmonar, sin componente
pulmonar, raramente diseminan la enfermedad, sin embargo la TB
laríngea es una de las más contagiosas.
B. Desde el punto de vista del tiempo de desarrollo:
▪ Tuberculosis primaria: Se desarrolla inmediatamente después de la
primoinfección. La primoinfeccion generalmente se da en la niñez y se
asienta en los pulmones produciendo inflamación del parénquima
pulmonar. Se caracteriza por la presencia del complejo de Gohn que
está formado por: Neumonitis, adenopatía hiliares y linfangitis. El
diagnostico solo es posible por medio de la radiografía, en que se
evidencia estas lesiones. Las lesiones son cerradas y paucibacilares.
Afecta lóbulos inferiores del pulmón.
▪ Tuberculosis secundaria: Se desarrolla a partir de bacilos de
reinfección o por reactivación de bacilos ubicados en sitios de
diseminación hematógena. Puede ser pulmonar o extrapulmonar.
Presenta en complejo de Ranke, que es el complejo de Gohn +
adenopatía periférica calcificada en región hiliar del pulmón.
C. Complicaciones: Hemoptisis, Neumotórax secundario, Insuficiencia
respiratoria, Bronquiectasias, Fibrosis Pulmonar localizada, Derrame
Pleural
2.7 Diagnostico
▪ Historia clínica: Antecedentes de contatos
▪ COMBE 1: Contacto intrafamiliar, intradomiciliarios
▪ COMBE 2: Contacto intrafamiliar, extradomiciliario
▪ COMBE 3: Contacto extrafamiliar, extradomiciliario

2.7.1 Baciloscopía:
La baciloscopía del esputo o flema es el método de diagnóstico más
fácil, barato y accesible. Permite identificar las fuentes de infección TBP

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(BAAR +). La baciloscopía es el examen microscópico directo de una
muestra de expectoración que ha sido extendida sobre una lámina de vidrio
y teñida mediante el método de Ziehl-Nielsen. Este método requiere una
cantidad importante de bacilos en el esputo para ser visualizados, debe
haber más de 10 000 bacilos/ml de esputo. Con este método se detectan
los microorganismos calificados como bacilos ácido alcohol resistente
(BAAR) y el laboratorio reporta según la siguiente calificación:

▪ Indicaciones para la obtención de la muestra de esputo: A todo


Sintomático Respiratorio se le debe realizar tres baciloscopías con
muestras representativas de expectoración.

2.7.2 Baciloscopia seriado


Tres muestras: 1ª: al momento de la consulta, 2ª: primera
expectoración de la mañana, 3ª: al momento de traer la segunda muestra
al centro médico.

2.7.3 Cultivo
El cultivo es el único método que asegura un diagnóstico de certeza
de tuberculosis y ofrece una mayor capacidad diagnóstica que la
baciloscopía pero tiene sus limitaciones por el costo y demora en los
resultados (aproximadamente 4 a 8 semanas). Indicaciones de cultivo:

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▪ Paciente con resultado de baciloscopía de 1 a 9 BAAR en una sola
lámina de las tres muestras examinadas.
▪ Sintomático Respiratorio con dos baciloscopías seriadas negativas,
tratado con antibióticos (no quinolonas) y sin mejoría clínica.
▪ Sintomático Respiratorio con dos baciloscopías seriadas negativas y Rx
de tórax sugestiva de patología tuberculosa.
▪ Sospecha de tuberculosis pulmonar infantil, obtener la muestra
mediante aspirado gástrico.
▪ Paciente contacto de caso TB MDR (solicitar adicionalmente prueba de
sensibilidad y resistencia).
▪ Pacientes con baciloscopía positiva al segundo y/o tercer mes de
tratamiento. Paciente con antecedente de tratamiento, fracasos,
recaídas, abandonos y casos crónicos.
▪ En sospecha de TB extrapulmonar.

2.7.4 Radiografía
Es un método complementario que no permite diagnosticar con
certeza una TB pulmonar. Otras patologías pueden presentar el mismo
patrón radiológico de la TB. Se puede evidenciar diferentes imágenes, que
tienen preferencia por los lóbulos superiores de ambos pulmones:
▪ Imágenes nodulares que son opacidades redondeadas de contornos
netos.
▪ Infiltrados difusos (imágenes irregulares)
▪ Cavernas, que son imágenes más evocadoras de la tuberculosis,
caracterizada por una hiperclaridad delimitada por una pared
relativamente gruesa.

2.7.5 Prueba de tuberculina (Derivado Proteico Purificado - PPD)


La prueba de la tuberculina pone de manifiesto un estado de
hipersensibilidad del organismo frente a las proteínas del bacilo

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tuberculoso, la mayoría de las veces, después de una infección producida
por el Mycobacterium tuberculosis. Consiste en la inoculación intradérmica
(técnica de Mantoux) de un derivado proteico purificado de cultivo de
bacilos tuberculosos, que se aplica en la cara dorsal de antebrazo
izquierdo, que da lugar a una reacción cutánea, debido a una reacción
inflamatoria con una importante infiltración celular de la dermis, lugar donde
es depositada la tuberculina. Se puede detectar mediante una induración
visible y palpable; pudiéndose acompañar de edema, eritema, necrosis y
linfadenitis regional. La lectura debe ser realizada a las 48 o 72 horas de la
inoculación, expresado en milímetros de induración. Una pápula mayor a
diez milímetros de diámetro es considerada positiva para la población
adulta; en cambio una pápula mayor a cinco milímetros es considerada
positiva para los niños menores de cinco años, representando un grupo de
alto riesgo de padecer tuberculosis. Una prueba positiva de PPD traduce
infección tuberculosa y no así enfermedad activa.

2.8 SISTEMA GENEXPERT (CEPHEID)

El ensayo Xpert MTB/RIF, es una plataforma de PCR en tiempo real


automatizada, integrada y semi – cuantitativa, que utiliza la plataforma
GeneXpert (Cepheid). Esta prueba identifica el Complejo Mycobacterium
tuberculosis y detecta las mutaciones más frecuentes en el gen rpoβ asociadas
a resistencia a rifampicina (RIF), directo de muestras de pacientes con
síntomas de tuberculosis, en menos de dos horas. La plataforma consiste en
un sistema cerrado de biología molecular que utiliza cartuchos desechables de
un solo uso que son independientes para el procesamiento de la prueba. Con
ello, se reduce al mínimo el riesgo de contaminación cruzada entre las muestras
y permite realizar un examen de biología molecular con bajos requerimientos
de bioseguridad e infraestructura.

Asignatura: Computación 14
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El cartucho del GeneXpert MTB/RIF funciona como un mini laboratorio
de biología molecular, en cuyo interior se realizan todos los pasos para realizar
la PCR en tiempo real: la liberación del ADN, la combinación con los reactivos,
la amplificación y la detección a través de fluorescencia liberada por sondas
específicas. Para ello, el cuerpo del cartucho se encuentra segmentado en
distintas cámaras, las que contienen todas las soluciones y reactivos
necesarios para la realización de la técnica. En el tubo de PCR ubicado en la
lengüeta del cartucho, ocurre la amplificación en tiempo real de la diana, es
decir, de distintos segmentos de la región RDR del gen rpoβ.

Las cinco sondas utilizadas en la prueba Xpert MTB/RIF contienen un


fluoróforo reportero que se encuentra apagado por acción del supresor. Cuando
estas sondas encuentran su diana, la unión de ambas libera al fluoróforo de la
proximidad del supresor con lo que se emite luz. El sistema óptico del equipo
detecta la luminiscencia y el software interpreta el resultado.

Entonces, cuando todas las sondas reconocen a su diana en la


secuencia de la RRDR significa que MTB está presente y no hay resistencia a
rifampicina (no hay zonas del gen mutadas). En caso de que exista alguna
mutación, algunas sondas no se unirán a su diana, pero otras sí lo harán, y esta
situación significa que MTB está presente en la muestra y que tiene una
resistencia genética a RIF. Finalmente, si ninguna de las sondas se une a su
diana, significa que no se detectan bacterias del complejo MTB. La elevada
especificidad de las sondas por sus dianas permite que Xpert MTB/RIF detecte
con una alta certeza la presencia de complejo MTB y la resistencia a RIF en
una muestra clínica. Los valores de sensibilidad dependen de la muestra
utilizada y de la cantidad de bacilos presentes. Respecto a la sensibilidad
analítica, se ha informado que el límite de detección del cartucho Xpert
MTB/RIF corresponde a 5 copias de genoma de M. tuberculosis, y a 131
UFC/mL en muestras de expectoración. En la actualidad se ha desarrollado una

Asignatura: Computación 15
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nueva prueba que se realiza en la misma plataforma del Xpert MTB/RIF y que
se denomina Xpert MTB/RIF Ultra. Esta prueba mejora la sensibilidad para el
diagnóstico de MTB logrando detectar hasta 16 UFC, y mejorando además la
precisión de la detección de la resistencia a rifampicina.

MUESTRA PARA GENEXPERT MTB/RIF


Tipo de muestra
El ensayo Xpert MTB/RIF puede emplearse para diagnosticar TB en
diversas muestras de origen pulmonar y extrapulmonar. Sin embargo, la
Organización Mundial de la Salud ha publicado un listado con las muestras
recomendadas para realizar el ensayo, que incluye los valores de sensibilidad
y especificidad para cada uno. En general, la prueba está recomendada para
todas las muestras pulmonares: expectoración espontánea e inducida,
contenidos gástricos y lavados broncoalveolares, con valores de sensibilidad y
especificidad globales de 88 y 99% respectivamente, cuando se utiliza como
prueba inicial en reemplazo de la baciloscopía. Para la resistencia a RIF se
reporta una sensibilidad de 95% y una especificidad de 98%. La sensibilidad es
muy alta para tuberculosis pulmonar en adultos que tienen una baciloscopía y
cultivo positivos (98%), pero para pacientes con baciloscopía negativa y cultivo
positivo, la sensibilidad es de 68%. Para los pacientes coinfectados con VIH se
ha reportado una sensibilidad de 79% y en los niños con tuberculosis pulmonar,
la sensibilidad alcanza el 65% para muestras de expectoración o de contenido
gástrico. Respecto a las muestras extra pulmonares, los valores de sensibilidad
y especificidad varían de acuerdo a la localización y cantidad de bacterias en
la muestra. En tejido o aspirado de ganglio la sensibilidad alcanza un 85%, para
líquido céfalorraquídeo (LCR), un 79,5% y menos de 50% para líquido pleural,
por lo que este último no está recomendado para el diagnóstico. Las muestras
de fluido ascítico, fluido pericárdico, orina, sangre y deposiciones no deben ser
procesadas mediante esta metodología. Se debe tener presente que cualquier
muestra con trazas de sangre o xantocromía pueden generar falsos negativos.

Asignatura: Computación 16
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Cantidad de muestra

La cantidad mínima para realizar la prueba Xpert MTB/RIF depende de


la naturaleza de la muestra (ver tabla 1).

Procedimiento para la obtención de la muestra

Muestras de origen pulmonar


Estas muestras provienen del árbol bronquial y pueden ser espontáneas
o inducidas. La expectoración o esputo obtenido de manera espontánea es
considerada la de mejor rendimiento (tanto para baciloscopía, cultivo y Xpert
MTB/RIF) y para obtenerla el paciente debe toser de acuerdo a lo indicado por
el personal a cargo en el contenedor recomendado. Tiene la gran ventaja de
que es económico y fácil de realizar, pero requiere de una buena educación del
paciente para obtener una muestra de calidad. Es responsabilidad del personal
de salud informar al paciente sobre la importancia de una expectoración de
calidad, que debe provenir de los pulmones y que la mucosidad de la nariz o
garganta y la saliva no son buenas muestras. Se le debe proveer al paciente
un recipiente plástico con tapa rosca y agua para que enjuague la cavidad bucal
previo a la recolección de la muestra (se debe evitar el uso de otro líquido para
el aseo inicial). Al momento de dar las indicaciones, es importante que el
personal de salud a cargo de la tarea siga las siguientes recomendaciones:
▪ Emplear lenguaje sencillo.

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▪ Entregar instrucciones de manera clara.
▪ Llenar adecuadamente el formulario de examen y rotular el
envase.

Se recomienda supervisar al paciente, de lo contrario existen altas


probabilidades de que se reciba una mala muestra. Una buena expectoración
debe ser mucopurulenta y espesa, sin embargo, se puede obtener también
muestras de consistencia más fluida y con trazas de sangre (hemoptisis). La de
menor calidad corresponde a las salivosas, las que de todas formas deben ser
procesadas.

La expectoración inducida está indicada en pacientes que no pueden


producir una muestra espontánea o en niños. Se induce la expectoración por
maniobras kinésicas o por nebulización laríngea. Considerar que puede producir
muestras acuosas y que requiere de equipo y personal especializado. Los
lavados y aspirados realizados en pacientes con incapacidad de expectorar no
están recomendados, ya que los anestésicos empleados en el procedimiento
disminuyen la viabilidad del bacilo y pueden producir un retardo en el desarrollo
o un cultivo falso negativo. En relación al contenido gástrico, éste tipo de
muestra se utiliza principalmente para el diagnóstico de tuberculosis infantil. El
procedimiento recupera esputo adherido en la garganta que ha sido tragado, no
obstante, además de ser incómodo para el paciente, requiere equipamiento y
debe ser realizado por profesionales capacitados específicamente.

Asignatura: Computación 18
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EL INFORME DE RESULTADOS DEL XPERT MTB/RIF
Plazos de respuesta
El examen de Xpert MTB/RIF tiene como principal ventaja que los
resultados se obtienen en menos de dos horas. Sin embargo, los plazos de
respuestas estarán muchas veces determinados por factores ajenos a la propia
técnica. Esto es especialmente relevante en un contexto donde los equipos
estarán ubicados en los laboratorios de referencia intermedios, por lo que los
procesos de solicitud, almacenamiento y transporte de las muestras, y
posteriormente la entrega de los resultados sigue siendo relevante para la
oportunidad diagnóstica. Los plazos que tienen los laboratorios que procesan
las muestras se exponen en la tabla 3.
Cabe destacar que uno de los objetivos del Xpert MTB/RIF es obtener
resultados rápidamente, por lo que en horarios no hábiles o cuando no se
disponga de profesionales que procesen el examen, no tiene sentido solicitar un
Xpert MTB/RIF para sospechas clínicas (urgencia u hospitalizados).

Interpretación de los resultados El Xpert MTB/RIF es un examen de PCR


semi cuantitativa, por lo que los resultados se expresarán de la siguiente
manera:

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▪ MTB no detectado. No se detecta ADN de MTB en la muestra
analizada. No descarta diagnóstico de tuberculosis. Se debe esperar
resultado de cultivo.
▪ MTB detectado, concentración muy baja, baja, media o alta.
Se detecta ADN de MTB en la muestra analizada. Indica iniciar
tratamiento. Con el Xpert MTB/RIF Ultra se agrega la categoría de
“trazas”.
▪ Inválido. Se debe repetir el examen con una nueva muestra.
En el caso de la resistencia a RIF, se informará de la siguiente manera:
- Resistencia a rifampicina detectada.
- Resistencia a rifampicina no detectada.
- Resistencia a rifampicina indeterminada.

Asignatura: Computación 20
Carrera: Medicina
Título: Sistema Genexpert en el Diagnostico de la Tuberculosis

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CONTENIDO DEL EQUIPO GINEXPERT
1. COMPUTADORA GENEXPERT INFINITY-48
2. EQUIPO GENEXPERT
3. LECTOR CODIGO DE BARRAS
4. CARTUCHOS GINEXPERT

Asignatura: Computación 21
Carrera: Medicina
Título: Sistema Genexpert en el Diagnostico de la Tuberculosis

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CAPITULO III - OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

Conocer el grado de utilidad del equipo GENEXPERT en el uso de diagnóstico de


Tuberculosis.

3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

❖ Conocer la utilidad del Sistema Genexpert en el diagnóstico de los pacientes


con Tuberculosis Multidrogo-resistente.
❖ Realizar meta-análisis con respecto al Sistema Genexpert con otros estudios
realizados.
❖ Conocer la utilidad de la informática en la medicina
❖ Reconocer la importancia de usar la tecnología informática en la utilidad
médica.

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Carrera: Medicina
Título: Sistema Genexpert en el Diagnostico de la Tuberculosis

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CAPITULO IV - METODOLOGIA

TIPO Y DISEÑO DE ESTUDIO


Se realizó un estudio de tipo descriptivo analítico, de cohorte, meta-análisis de
otros estudios del uso del sistema Genexpert en diferentes trabajos de investigación que
a continuación se indica:

4.1 ESTUDIO
ENSAYO XPERT MTB/RIF EN EL DIAGNÓSTICO DE TUBERCULOSIS
Patricio Vallejo v.*, Juan Carlos Rodríguez D.**, Andrea Searle M.*** y
Victorino Farga C

INTRUDUCCION
La tuberculosis (TB) sigue constituyendo un importante problema de salud
pública, tanto a nivel nacional como a nivel mundial. Se estima que 9 millones de
personas enfermaron de TB en el año 2013 y que 1,5 millones murieron a causa
de esta enfermedad. Por otra parte, la TB es la principal causa de muerte en
enfermos VIH positivos, ocasionando la cuarta parte de las muertes en estos
pacientes. La emergencia y diseminación de cepas de Mycobacterium
tuberculosis resistentes a diferentes drogas, representa actualmente un serio
problema para el control mundial de la TB, por lo que el diagnóstico temprano de
una TB activa y la detección precoz de cepas multi-resistentes (TB-MDR) es
esencial para interrumpir su trasmisión. Se estima que el año 2013, 480.000
personas desarrollaron a nivel mundial una TBMDR, definida como resistencia
simultánea a Rifampicina e Isoniacida y que sólo un 10% de ellas habría recibido
una terapia adecuada. Más de 170.000 de estos pacientes murieron por esta
causa el mismo año La principal limitación de los Programas de Control de la
Tuberculosis son las dificultades para hacer el diagnóstico temprano de la
enfermedad. Tradicionalmente, la baciloscopia ha sido el método inicial para el
diagnóstico de la TB por su simplicidad, rapidez de procesamiento y bajo costo.

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Sin embargo, su baja sensibilidad (45-80% de los casos positivos al cultivo),
justamente menor en los países de baja incidencia de TB como Chile, limita la
utilidad de esta técnica. Por otra parte, los cultivos son más sensibles, pero
requieren de técnicas más complejas, que demoran entre 30 y 60 días en
demostrar el desarrollo micobacteriano. Por eso, en los últimos decenios se han
desarrollado nuevos métodos de diagnóstico de la TB que intentan superar las
limitaciones de la baciloscopia y del cultivo. La empresa Cepheid, Inc. (Sunnyvale,
California, EE.UU.) desarrolló la técnica Xpert MTB/ RIF, que es un test
automatizado para el diagnóstico de tuberculosis basado en la detección de ácidos
nucleicos específicos del bacilo de Koch, con cartuchos, en cualquier muestra
orgánica. Simplifica la identificación de ADN micobacteriano, integrando y
automatizando los 3 procesos requeridos para pruebas moleculares basadas en
PCR: extracción, amplificación y detección. Reduce la complejidad de las pruebas
moleculares, el riesgo de contaminación cruzada y las limitaciones de
bioseguridad, detectando la presencia de M. tuberculosis directamente de una
muestra en menos de 2 h. Esta técnica tiene una muy buena sensibilidad y
especificidad1,2. Además, es capaz de identificar como blanco al gen rpoβ, que
codifica para la resistencia a la Rifampicina1 . Diagnosticar la resistencia a
Rifampicina (R) es muy importante, ya que más del 90% de los bacilos con
resistencia a este fármaco la tienen también a la Isoniacida y, por lo tanto, son
portadores de TB-MDR. Facilita la detección de resistencia a la R el hecho que
este fármaco tenga sólo un gen que codifica para la resistencia, a diferencia de la
Isoniacida (I), que tiene varios genes involucrados. En la literatura se señala que
la sensibilidad para detectar la resistencia a la R con este método es de 95%
aproximadamente, pero con una especificidad menor. El Grupo Asesor Técnico y
Estratégico sobre Tuberculosis (STAG-TB) que se reunió entre el 27 y el 29 de
septiembre de 2010, avaló las recomendaciones del Grupo de Expertos de la
Organización Mundial de la Salud y recomendó la amplia implementación del
Xpert MTB/RIF, negociando además con Cepheid un descuento en su costo para
los países en desarrollo. El Instituto Nacional del Tórax (INT) cuenta con esta

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tecnología desde hace dos años y está preparado para recibir diversas muestras
orgánicas de todo el país. El objetivo de este trabajo fue evaluar el rendimiento
diagnóstico del Xpert para el diagnóstico de TB en muestras respiratorias y no
respiratorias y, además, determinar la precisión de esta técnica para detectar la
resistencia a R en dichas muestras.

Material y Métodos
Se analizaron en forma retrospectiva las muestras respiratorias y no
respiratorias recibidas por el Laboratorio de Tuberculosis del INT entre abril de
2013 y diciembre de 2014. A todas ellas se les practicó baciloscopia, Xpert
MTB/RIF y cultivo de Koch. Las baciloscopías de expectoración fueron
examinadas por microscopía fluorescente, mediante la técnica de batido y tinción
con auramina-rodamina (Becton-Dickinson). Las muestras de expectoración que
resultaron positivas fueron reteñidas con tinción de Becton-Dickinson. Las
muestras de líquidos orgánicos (con volúmenes mayores a 3 mL) y de orina,
fueron centrifugadas a 3.000 g por 30 min y una gota del sedimento fue depositada
en un portaobjeto, secada a temperatura ambiente y fijada con metanol. Todas las
muestras que no correspondían a expectoración fueron teñidas con tinción de
Becton-Dickinson y leídas en un microscopio Olympus BX-405 . Las muestras
fueron procesadas con el kit Xpert MTB/RIF, mezclando 1 mL de la muestra y 2
ml de reactivo, los que fueron agitados manualmente 20 veces en 2
oportunidades, seguido de una incubación de 15 y 5 min respectivamente a
temperatura ambiente. Posteriormente, se tomaron 2 mL de la muestra así tratada
y se agregaron al cartucho Xpert MTB/RIF para ser cargadas en el equipo. Los
cultivos de Koch fueron realizados mediante el método de Petroff modificado y
sembrados en medio Lowenstein-Jensen (BectonDickinson). El análisis
estadístico se efectuó utilizando como gold estandard de la existencia de
tuberculosis en el cultivo positivo. La detección de resistencia a la Rifampicina se
confirmó también con los procedimientos fenotípicos clásicos, según el método de
las proporciones, en el Instituto de Salud Pública (ISP). Se calculó la sensibilidad

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(S) y especificidad (E), del Xpert para baciloscopías positivas y negativas en
muestras respiratorias y no respiratorias. También se estudiaron las muestras con
resistencia a la Rifampicina.
Resultados

Se analizó un total de 529 muestras. Previamente se descartaron 3


muestras en las que se detectó M. Avium complex. De las 529 muestras 384 (73%)
fueron respiratorias y 145 (27%) no respiratorias. De las 384 muestras
respiratorias, 89 fueron de expectoración, 74 de aspirado bronquial y 221 de
lavado bronco-alveolar, y de las 145 no respiratorias 55 fueron de líquido pleural,
48 de líquido cefalorraquídeo, 10 de orina y 32 de otros líquidos orgánicos. Un
total de 43 (8%) de las 529 muestras estudiadas fueron positivas para M.
tuberculosis (33 respiratorias y 10 no respiratorias). Se muestran los resultados
de las muestras respiratorias y las no respiratorias, con sus respectivas
sensibilidades y especificidades. El Xpert detectó 15 de 17 casos con baciloscopia
negativa y cultivo positivo, lo que le da una sensibilidad de 88,2% para las
muestras respiratorias con baciloscopia negativa. Se detectaron 12 muestras con
resistencia a la R, 8 respiratorias y 4 no respiratorias. De las 8 muestras
respiratorias con resistencia a la R según el test Xpert, 7 fueron resistentes según
el Instituto de Salud Pública (ISP) y uno resultó con cultivo negativo. De las 7
resistentes en el test Xpert, 6 correspondieron a 4 pacientes con TB-MDR. De las
4 muestras no respiratorias resistentes según el test Xpert , dos resultaron
sensibles por el método de las proporciones y dos tuvieron cultivo negativo.

Discusión El método más simple y económico para el diagnóstico de


tuberculosis sigue siendo hasta ahora la baciloscopía. El cultivo de Koch, aún con
medios líquidos más modernos, es todavía demasiado lento en sus resultados. La
biología molecular ha contribuido en forma muy importante, no sólo al diagnóstico
de la tuberculosis, sino también al estudio de la resistencia a las drogas y también
tiene gran utilidad con fines epidemiológicos, ya que hoy es posible discriminar
entre las diferentes cepas que afectan a los enfermos. El Xpert es un método

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basado en la biología molecular que detecta en menos de dos horas la presencia
de bacilos tuberculosos en diferentes fluidos orgánicos, con el agregado que
permite identificar la resistencia a R. Diferentes estudios han demostrado que esta
técnica tiene una buena sensibilidad y una mejor especificidad para ambos
objetivos.

En nuestra serie la sensibilidad para detectar en la expectoración o en


lavado bronco- alveolar el bacilo de Koch, fue de un 93,94%, utilizando el cultivo
como gold standard. En las muestras no respiratorias la sensibilidad en general
es menor, aunque entre nosotros fue de 100%.

Esto se puede explicar por el escaso número de muestras y por el sesgo


que tienen éstas, dado que todos los casos que se derivan a nuestra institución
tienen una alta sospecha de tuberculosis. Aún en los pacientes que tienen
baciloscopia negativa y sólo cultivo positivo, la sensibilidad fue de 88,2%, cifra que
concuerda con la reportada en la literatura, lo que confirma las bondades de la
técnica y permite iniciar una terapia antituberculosa precoz, sin tener que esperar
el resultado de los cultivos. Los enfermos inmunodeprimidos son un grupo
especial, en los cuales la confirmación del diagnóstico de TB es más urgente y por
tanto el Xpert puede ser más útil. Por otra parte, el Xpert tiene una alta
especificidad para el diagnóstico de tuberculosis, la que en nuestra serie fue de
95% en las muestras respiratorias y 94% en las no respiratorias, considerando
como gold standard la positividad del cultivo. Considerando el costo de este
examen, no debería ser indicado a todos los pacientes a quienes se les solicita
una baciloscopia, sino sólo en aquellos con sospecha fundada de tuberculosis en
los cuales las baciloscopias sean negativas. Dada su alta especificidad también
está indicado cuando se sospecha una micobacteria no tuberculosa. Así en
enfermos que tienen una baciloscopia positiva, si el Xpert es negativo, confirmaría
que se trata de otra micobacteria. Esto es particularmente útil en pacientes VIH
(+) y en portadores de bronquiectasias.Como es un método muy sensible no está

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indicado en enfermos que hayan tenido una tuberculosis, porque por ser una
técnica de PCR, cualquier residuo de DNA micobacteriano que haya quedado del
pasado será amplificado muchas veces y puede dar un resultado falso positivo.
En nuestra serie, 8 de los pacientes con test Xpert positivo y cultivo negativo eran
enfermos que habían sido antes tratados o estaban en tratamiento por TB. En los
otros 9 con examen falso positivo, no nos fue posible conocer sus antecedentes,
por tratarse de muestras externas derivadas al INT con datos incompletos. Otra
indicación importante de este examen es cuando se sospecha resistencia a la R,
dada la importancia de detectarla precozmente, porque orienta hacia el
diagnóstico de TB Multi-DrogoResistente (TB-MDR) o de TB ExtensamenteDrogo-
Resistente (TB-XDR), las que requieren de tratamientos muy diferentes. Sin
embargo, en Chile, por razones que no se conocen, se ha detectado un número
inusual de casos con monorresistencia a la R (el año 2014 hubo 15 casos de TB-
MDR y 8 casos de resistencia aislada a R). Por otra parte, es importante señalar
que en países como el nuestro, donde la resistencia a la R es menor al 1% en los
casos nuevos, un Xpert positivo requiere ser confirmado en el ISP, porque puede
ser un falso positivo. En nuestro estudio se detectó resistencia a R por el test Xpert
en 12 pacientes, pero sólo en 7 de ellos se confirmó en el ISP. Se estima que
cuando la prevalencia de la resistencia a la R es menor al 2% en una población,
un test positivo tiene 50% de posibilidades de ser un error de laboratorio, por lo
que antes de asumir el diagnóstico de TB-MDR por el test Xpert y cambiar el
esquema de tratamiento, debe esperarse la confirmación en el ISP por los
métodos convencionales. En resumen, podemos decir que el test Xpert es una
contribución muy importante para el diagnóstico de la TB, tanto en muestras de
origen respiratorio como en las de otros orígenes. Aunque entre nosotros la
resistencia a la R, no es un problema mayor, ésta técnica también nos entrega en
forma precoz información relevante.

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CAPÍTULO V - CONCLUSIONES

1. La tuberculosis (TB) en niños posee limitaciones en la confirmación


microbiológica. Por su naturaleza paucibacilar y la dificultad para obtener
muestras microbiológicas adecuadas, la positividad de cultivos es baja. En
adultos, la prueba Gene Xpert MTB/RIF® ha mostrado utilidad por su buen
rendimiento, rapidez de resultados y facilidad en su realización. La
Organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda el empleo de esta prueba
en niños, sin embargo, los datos de esta prueba en nuestro medio son
limitados. Estudio de cohorte retrospectivo para describir nuestra experiencia
con la prueba Gene Xpert MTB/RIF en menores de 15 años hospitalizados en
un centro de alta complejidad con sospecha de TB pulmonar.
Se revisaron 116 historias clínicas con resultados disponibles de Xpert
MTB/RIF en muestras respiratorias tomadas entre junio de 2012 y diciembre
de 2013. Se excluyeron 33 casos. Los 83 pacientes incluidos se clasificaron
como: TB confirmada 8 (10%), probable 16 (19%) y descartada 59 (71%)
según criterios de la OMS. El análisis estadístico se realizó en SPSS 20 y
EpiDat. Xpert MTB/RIF mostró para TB confirmada una sensibilidad del 50%,
especificidad 96% y valores predictivos positivos y negativos del 57,14 y
94,7%, respectivamente. Al evaluarla en el total de niños que ameritaron inicio
de tratamiento (TB confirmada y probable), la sensibilidad fue del 29% con
especificidad del 100%. Xpert MTB/RIF detectó una cepa resistente a
rifampicina.
Xpert MTB/RIF mostró ser útil para el diagnóstico de TB, con una
sensibilidad superior a la baciloscopia. Un resultado positivo puede definir el
inicio temprano de tratamiento en casos dudosos, confirma el diagnóstico y
permite conocer rápidamente si existe resistencia a rifampicina. Un resultado
negativo no descarta el diagnóstico ni debe impedir el inicio del tratamiento si
cumple con la sumatoria de los otros criterios recomendados por la OMS.

Asignatura: Computación 29
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2. Xpert MTB/RIF es un método automatizado basado en la reacción
de la polimerasa en cadena que permite en menos de dos horas detectar la
presencia de ADN de Mycobacterium tuberculosis y, además, informa la
susceptibilidad a la Rifampicina. Esta técnica, que está disponible en el
Instituto Nacional del Tórax (INT) desde hace dos años, tiene una buena
sensibilidad y una mejor especificidad en muestras respiratorias. En muestras
no respiratorias el rendimiento, aunque inferior, sigue siendo clínicamente útil.
Se analizaron 529 muestras enviadas al Laboratorio de Tuberculosis del INT,
comparándolas con el cultivo de Koch en medio sólido que es el “gold
standard”. El 73% (384) de las muestras fueron respiratorias y sólo 145 (27%)
no respiratorias (líquido pleural, orina y líquido cefalorraquídeo). Del total de
las muestras, 43 resultaron positivas para tuberculosis, de ellas, 33 eran de
origen respiratorio y 10 no respiratorio. Todos los pacientes que tenían
baciloscopias positivas fueron confirmados por el Xpert. De los 17 enfermos
con baciloscopias negativas y cultivos positivos, 15 fueron detectados con el
Xpert. De los 351 pacientes con cultivos negativos de las muestras
respiratorias, 17 resultaron positivos por el Xpert, pero 8 de éstos estaban en
tratamiento o habían tenido una tuberculosis anteriormente. En las muestras
no respiratorias, de 10 pacientes con cultivos positivos el Xpert detectó los 10,
demostrando también una excelente sensibilidad. En cuanto a la resistencia a
Rifampicina, cuando la prevalencia de ésta en una población es baja, como
ocurre en Chile, requiere confirmación por las técnicas estándar.

Asignatura: Computación 30
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BIBLIOGRAFIA

1. Organización Mundial de la Salud. Informe mundial sobre la tuberculosis


2013.

2. World Health Organization. Global tuberculosis report 2015

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5. Instituto Nacional de Salud, Sivigila. Boletín EpidemiológicoSemanal. Semana


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8.
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9.https://diprece.minsal.cl/wrdprss_minsal/wpcontent/uploads/2018/02/2018.01.23_M
ANUAL-XPERT.pdf

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