ELISA

Ag de CMV 3 cuartas partes del pozo la va llevar de Ag CMV

Polidino permite que ac se peguen ahí

Se coloca albumina que fija de una los acs luego se hace un lavado y se agrega leche descremada,
la enzima llenara espacios,

Muestras hay que diluirlas para evitar fenómeno de zona

Dilución 1/20 o 1/50 o 1/5 con buffer

Entre 450 y 550 lectura

Blanco y control negativo son bufferes

Control positivo debe traer lo mismo que estoy buscando en el paciente 1 ej Ag CMV el Ag se va a
pegar al Ac porque el ag tiene epitopes y el biotipo del ac son específicos,

Pozos ac CMV

Muestra de paciente 1

Muetra de paciente 2

Conjugado es un ac dirigido a lo que quiero agarrar en la muestra del paciente tendrá en su

idiotipo la manera de reconocer por ej CMV ese ac va con una enzima

Ese conjugado se coloca en todos los pozos

Enzimas son fosfatasa alcalina y peroxidasa porque se oegan fácilmente, permanecer ligadas
durante todo el tiempo de la reacción, su actividad enzimática no se deteriora

Después de haber encubado el Ac reconoce epitopes

Sustrato cromógeno si hay hidrolisis del sustrato con la enzima se va a activar el cromgeno, sino
había enzima el sustrato no tienen a donde ir, queda libre, no se activa cromógeno y no hay
producción de color, es directamente proporcional a la cant de ag que tenga en el control

Y paciente

Entre menos ag menos clor

Todas las reacciones enzimáticas son cineticas van a acuar en un tiempo limite 10 15 20 min y la
enzima actúa con sustrato que se coloque, de ahí para adelante color falso

Se coloca sln stock es ac sulfurico 1N

La lectura se hace en un espectrofotómetro

Leee intensidad de color en una absorbancia

Lectores vienen de diferente forma

Hay lectores

Blanco reactivo que va a quitarle lo cremoso a todas las reacciones 0.05

Control positivo 1.5

Control negativo 0.08

Pacientee 1 1.8

Paciente 2

Absorbancia de muestra/absorbancia de control positivo o calibrador *concentración de

calibrador o Control positivo

1.8/1.5*15=18

Valores inferiores a 10 son negativos y superiores a 10 son positivos

El 15 sale del inserto

Blanco quita ruido de fondo

Zona gris es el control da 10 ni son bien negativos ni bien positivos, da por calidad de la muestra

Uno de los objetivos de dilución de muestra es evadir lípidos prots que pueda falsear la muestra

Directa buscar ag de paciente

Indirecta ac

CAPTURA

Se coloca Ag DE RUBEOLA por especificidad se pega ac clase IgM que es un pentamer (sarampión)
no hay especifidad en paciente negativo

Ac IgM antirubeola no se hace blanco

Control positivo Muchos ac IgM ANTIRUBEOLA

Paciente positivo Muchos ac IgM ANTIRUBEOLA

Paciente negativo No tenia rubeola sino sarampión tiene anticuerpos IgM antisarampion no se va
a pegar

Ag rubeola

Conjugado es ac marcado con una enzima

Ac sulfurico parar reacción evitar que enzima de color

Entre mas fuerte el color mas positividad es la muestra

COMPETENCIA
Blnaco

Control positivo

Control negativo

Siempre se coloca primero la muestra del paciente