Programa Educativo

MEDICO CIRUJANO

Biología molecular
PRÁCTICA 13. PROTEINAS TOTALES SERICAS

Docente
Q.F.B ALMA DELIA ROBLES MARTÍNEZ

Alumna
HANNIA ROCIO GONZÁLEZ QUIROZ

Mesa 3

Grupo 2B

Laboratorio D4

Periodo
ENERO-MAYO 2019
 PRÁCTICA 13. PROTEINAS TOTALES
SÉRICAS
COMPETENCIA
El alumno determinará mediante método espectrofotométrico la concentración plasmática de las
proteínas totales presentes en el plasma, reconociendo cada una de ellas y la función en el organismo.

INTRODUCCIÓN
La sangre es un tejido que circula dentro de un sistema virtualmente cerrado, el de los vasos
sanguíneos. La sangre compuesta por elementos sólidos, eritrocitos, leucocitos, y plaquetas,
suspendidos en un medio líquido, el plasma. El plasma consiste en agua, electrolitos, metabolitos,
nutrientes, proteínas y hormonas.
Una vez que la sangre se ha coagulado, la fase líquida remanente se denomina suero, este carece de
factores de la coagulación, que normalmente están presentes en el plasma, pero qué ha sido
consumido durante el proceso de coagulación. El estudio de las proteínas se utiliza para el seguimiento
de las enfermedades y no para diagnóstico o muy rara vez. Por eso es importante tener el valor normal
del paciente y ver qué pasa cuando entra en estado de enfermedad.
En la actualidad se ha aislado y caracterizado alrededor de 100 proteínas, sin embargo, las funciones
de una gran parte de ella permanecen aún desconocida. Las proteínas purificadas difieren en su
movilidad electroforética y peso molecular, también son muy diferentes por su composición química;
algunas contienen lípidos (lipoproteína), otros metales (transferrina, ceruloplasmina). La mayoría son
glicoproteínas, presentando en algunos casos variaciones genéticas.
El método más común para analizar las proteínas plasmáticas es la electroforesis, (la migración de
proteínas por acción de un campo eléctrico), existen diversos tipos de esta y cada una usa un medio de
transporte diferente. Su uso permite, después de teñir la resolución de 5 bandas de proteínas
plasmáticas. Designadas albúminas, α1, α2, β y γ. Estas últimas 4 son globulinas. Ilustración 1.

FUNDAMENTO
Ilustración 1. Electroforesis de proteínas plasmáticas.
 En el plasma se encuentra la presidencia de proteínas que cumplen funciones fundamentales para el
funcionamiento del cuerpo. Estas, las llamadas comúnmente proteínas plasmáticas son las que
conforman la mayor parte de los compuestos sólidos que conforman el plasma siendo la
concentración en el plasma de alrededor de 7 gramos por cada 100 ml. A continuación, se menciona
brevemente las proteínas séricas:

PROTEÍNA FUSIÓN ALTERACIÓN

Es la más abundante del plasma, representa el 50% Aumento
de las mismas. Transporta numerosas sustancias  En deshidratación
(aminoácidos, ácidos grasos, enzimas, drogas, Disminución
hormonas tiroideas y productos tóxicos). También  Enfermedad renal
es responsable del control del equilibrio de líquidos  Enfermedad hepática
ALBÚMINA entre los compartimientos intravascular y  Infección crónica
extravascular del organismo, manteniendo la  Neoplasias
presión coloidosmótica del plasma (la presión  Hemorragias
osmótica del plasma en la suma de 2 presiones: la  Inanición
oncótica y la hidrostática que es la presión del  Desnutrición
agua).
Aumento
Neutraliza las enzimas proteolíticas tripsinas  En reacciones inflamatorias
Α-1-ANTITRIPSINA (derivadas de leucocitos, del pulmón, páncreas y Disminución
otros órganos) y plasmina  Enfermedades pulmonares
(enfisema)
Aumento
 Hiperlipidemia
Α-1-LIPOPROTEÍNAS Transporta el colesterol y vitaminas liposolubles
Disminución
 Enfermedad hepática
Compuestos formados por proteínas y
polisacáridos que se encuentran en tejidos y
Α-1-GLICOPROTEÍNA
secreciones mucosas. Cumplen gran variedad de
funciones
Conocida como factor II, requerida para la vía de la Disminución
PROTROMBINA coagulación sanguínea, donde se convierte en  En enfermedades hepáticas
trombina por el factor V
Aumento
 Embarazo
PROTEÍNA FIJADORA  Anticonceptivos orales
DE HORMONAS Transporta las hormonas tiroideas por la sangre Disminución
TIROIDEAS  Nefrosis
 Tratamiento con
metiltestosterona
Α-2 MACROGLOBULINA Inhibe proteasas, como la tripsina, plasmina y las Aumento
calicreínas  Síndrome nefrótico
 Enfisema
 Diabetes
 Síndrome de Down
  Embarazo
Disminución
 Artritis reumatoide
 Mieloma
Aumento
 Inflamación
 Neoplasia
Proteína fijadora de hemoglobina. Los complejos
 Infarto de miocardio
haptoglobina-hemoglobina conservan los
HAPTOGLOBINA  Enfermedad de Hodking
depósitos de hierro del organismo para su
Disminución
reutilización
 Enfermedad hepática
 Anemia hemolítica y
megaloblástica
Aumento
 Embarazo
Proteína sérica fijadora de cobre (el cobre libre es  Anticonceptivos orales
CERULOPLASMINA
tóxico) Disminución
 Enfermedad de Wilson
(enfermedad congénita)
Aumento
 Hiperlipidemia
Α-2-LIPOPROTEÍNA Transporta lípidos
Disminución
 Enfermedad hepática
Aumento:
 Anemia
 Hipoxia
ERITROPOYETINA Hormona esencial para la eritropoyesis normal
Disminución
 Enfermedad renal
 Enfermedad autoinmune
Aumento
 Anemias ferropénicas
En una glicoproteína transportadora de hierro,
Disminución
TRANSFERRINA sintetizada y metaboliza principalmente en los
 Enfermedad hepática
hepatocitos
 Nefrosis
 Neoplasias
Aumento
 Nefrosis
Β-LIPOPROTEÍNA Transporta colesterol, fosfolípidos y hormonas  Hiperlipidemias
Disminución
 Inanición
Disminución
Son componentes de la vía del complemento  Etapas activas de
C3 Y C4 (sistema complejo formado por 9 proteínas séricas enfermedades inmunes
que actúan en las reacciones inflamatorias) (Lupus, diabetes tipo 1,
anemia hemolítica)
INACTIVADORES Proteína sérica específica transportadora de hemo Aumento
 Inflamación
  Neoplasia
 Infarto de miocardio
 Enfermedad de Hodgkin
Disminución
 Enfermedad hepática
 Anemia hemolítica y
megaloblástica
Aumento
 Hipogammaglobulinemia
 Enfermedad hepática
 Infecciones crónicas
Se conocen hasta el presente 5 clases:  Lupus sistémico
 IgG  Mieloma múltiple
INMUNOGLOBULINA  IgA  Linfoma
S  IgM Disminución
 IgD  Edad avanzada
 IgE  Leucemia linfocítica crónica
 Enfermedad de cadenas
livianas
 αgammaglobulinemias
 Hipogammaglobulinemia
Transporta vitamina A, proteína ligada al retinol, T3
y T4. La proteína de transtiretina es producida en el
TRANSTIRETINA
hígado, y es una mutación de esta proteína la que
causa la amiloidosis familiar
Glicoproteína sintetizada en el hígado, que ejerce
poca influencia sobre el patrón normal de
Disminución
electroforesis debido a una baja concentración.
 En los ingresos energéticos
Tiene una vida media corta sensible de algunos
PREALBÚMINA restringidos, enfermedades
cambias que afectan su síntesis y catabolismo. Es la
hepatobiliares,
transportadora de aproximadamente un tercio de
 Inflamación aguda
la hormona tiroidea activa. Su concentración
normal es de 17 a 42 mg/dl

 Síntesis y desarrollo de las proteínas plasmáticas

La gran mayoría de las globulinas y la albúmina tiene su proceso de síntesis en el hígado, siendo la Ig
las que se sintetizan dentro de las células plasmáticas. Dentro de las tantas funciones que cumplen las
proteínas plasmáticas hay una en particular en la que nos detendremos a detallar que es la de control
de la volemia, esta función hace referencia a un factor que actúa como regulador del intercambio de
líquidos entre los espacios intersticiales y la sangre, se debe esto a que la presión oncótica de las
proteínas plasmáticas atrae el agua a los capilares, entonces la presión en la sangre tiene la
tendencia a expulsar el líquido.
En los extremos del capilar la presión oncótica es superior a la presión hidrostática lo que garantiza que
el líquido vuelva a los torrentes sanguíneos. Un dato muy relevante es que la mayor responsabilidad de
la presión oncótica del plasma en la albúmina siendo en un 70% responsable de esta prisión presión.
En el desarrollo de las proteínas plasmáticas un elemento muy importante, es la ceruloplasmina,
perteneciente a la familia de las multicuproooxidasas. La síntesis se realiza de ella en forma principal
en la zona del hígado, aunque también es producida por otro tipo de células como los monocitos,
astrocitos, etc.
La forma que posee es la de una cadena polipeptídica sencilla y la forma de secreción que tiene es la de
un α2-glicoproteína a un nivel plasmático. Desde su punto de vista estructural la característica más
destacada, es que tiene una unión triple para el cobre y sí abordamos desde el punto de vista de las
funciones se destaca por efectuar un mecanismo de catalizacion sobre la reducción de una molécula de
oxígeno para lograr formar una molécula de agua.

PRUEBA DE LABORATORIO
Se mide en un suero como parte de casi todos los análisis de química sanguínea. Su Rango de
referencia en el que se encuentra en la Tabla 1. Su función es mantener la presión osmótica coloidal
del plasma. Está presión evita las pérdidas de los líquidos hacia los tejidos. El contenido en proteínas
totales del suelo depende del estado nutricional, funcionamiento hepático, funcionamiento renal,
errores metabólicos y afecciones como múltiple.
Tabla 1. Valores de referencia

CONCENTRACIÓ
N
Plasma 6.4 – 8.2 g/dl
Orina < 150 mg/ 24 h

PROCEDIMIENTO
MÉTODO COLORIMÉTRICO: BIURET
PRINCIPIO: Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los
enlaces peptídicos en medio básico 1Cu2+ se compleja con 4 NH. La intensidad de coloración es
directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante
específica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo
se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo, en
suero).
1. Se extrae la muerta la muestra de sangre contenida en un tubo rojo o amarillo
2. Preparar los siguientes tubos de ensaye como se muestra en la tabla; recordemos que es un
método espectrofotométrico
 BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA
Agua destilada 0.02 ml --- ---
Reactivo estándar --- 0.02 ml ---
Muestra problema --- --- 0.02 ml
Reactivo (2ml) 1 ml 1 ml 1 ml

3. Homogeniza las soluciones

4. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente
5. Leer a 546 nanómetros de longitud de onda
6. Efectuar cálculos para determinar la concentración de la muestra
7. Efectuar conclusiones

RESULTADOS
Cuando la medición se lleva a cabo a Hg 546nm, la concentración de proteína totales puede ser
calculada de la siguiente manera:
Absorbanciade la muestra
Concentración de Pot .Tot .= ×Concentración del patrón
Absorbancia del patrón
0.398 gr
Concentración de Pot .Tot .= ×5.89
0.316 dl
gr
Concentración Pot . Tot .=7.41
dl

REPORTE
1. Contesta correctamente las siguientes preguntas

a) ¿Cuáles son las funciones de las proteínas plasmáticas (albumina, globulina y

fibrinógeno)? R= Mantienen la presión osmótica del plasma, transporte de moléculas
(iones, hormonas, nutrientes), coagulación, respuesta inmune. Sintetizadas
mayoritariamente en el hígado.

b) Explica la reacción A/G e indique la utilidad diagnostica de dicho parámetro

R= Es una expresión de la relación albúmina a globulinas en sangre u orina. Se usa para
expresar los cambios de las proteínas de la enfermedad y se calcula dividiendo la
concentración de albúmina entre la concentración de globulinas. Antes del advenimiento
de las técnicas de electroforesis e inmunoforesis, la proporción A/G fue el mejor
indicador disponible para apreciar la relación entre los componentes de las proteínas
séricas, que para un individuo cualquier es constante.
 En varios estados patológicos hay una relación constante entre el aumento de las
globulinas y la reducción de las concentraciones de albúmina, por ejemplo:
• Cirrosis
• Nefrosis
• Infecciones agudas
• Neumonía
• Fiebre reumática

c) Menciona patologías asociadas a Hiperproteinemia

R=
 Neoplasias (mieloma de células plasmáticas)
 Síndrome de Hiperviscosidad
 Linfoma
 Leucemia linfocítica
 Macroglobulinemia primaria
 Infecciones bacterianas crónicas y presencia de parásitos (Demodex, dirofilaria)
 Inmunización

d) Menciona patologías asociadas con Hipoproteinemia

R=
 Shock hipovolémico
 Nefropatías con proteinuria crónica
 Enteropatías con pérdida proteica
 Enfermedades hepáticas
 Hepatitis

CONCLUSIÓN
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo,
esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma
de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. En el plasma, las proteínas
contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante, transportan sustancias relativamente
insolubles y actúan en la inactivación de compuestos tóxicos y en la defensa contra agentes invasores.
La importancia de la determinación de proteínas totales, radica en la utilidad para el monitoreo de
cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad. En condiciones patológicas como pérdidas
renales, desnutrición, infecciones prolongadas; suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en
otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentración de diversos orígenes,
(deshidratación) se observan hiperproteinemias.

EVIDENCIAS
Bibliografía
Biología Molecuar. (s.f.). Obtenido de Manual de Prácticas de Laboratorio:
file:///C:/Users/rocio/Documents/2DO%20SEM%20MED/BIOMOL/PRACTICAS/MANUAL%20DE%20LAB
%20Biologia%20molecular%202018.pdf

Sánchez, W. (09 de Diciembre de 2008). Scribd. Obtenido de Relación Albumina-globuluna:

https://es.scribd.com/doc/8740308/Qc-Relacion-Albumina-globulina

Thompson, L. (2011). Bioquímica II. Obtenido de Proteínas plasmáticas: http://enzimologia.fcien.edu.uy/BQII

%202011/Prote%C3%ADnas%20plasm%C3%A1ticas.pdf