15/02/2016

ESPECTROFOTOMETRÍA
VISIBLE

INTRODUCCIÓN
La determinación estructural de una sustancia orgánica siempre comenzará con la
síntesis o aislamiento de “un producto puro”.

Cristalización, Destilación en sus distintas modalidades: simple, fraccionada, a vacío,

con arrastre de vapor, Sublimación, Extracción, Cromatografía, Electroforesis, etc.

CARACTERIZACIÓN FÍSICA CARACTERIZACIÓN QUÍMICA

Propiedades organolépticas: olor, color. Análisis elemental cualitativo y
Punto de fusión (si el producto es sólido) cuantitativo.
Punto de congelación Clasificación por solubilidad
Punto de ebullición si es líquido Determinación de acidez o
Densidad basicidad.
Peso Molecular Identificación de grupos
Índice de refracción funcionales.
Rotación óptica (si el producto es de origen Preparación de derivados.
natural)
Etc..

Consulta Bibliográfica
Técnicas espectroscópicas

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INTRODUCCIÓN
La luz es de doble naturaleza CORPUSCULAR Y ONDULATORIA. De acuerdo con su
carácter ondulatorio la luz se comporta como una onda (Es reflejada, difractada,
tansmitida, Etc).

Es electromagnética y sus vectores son perpendiculares entre si

INTRODUCCIÓN
Cada radiación luminosa esta caracterizada por una frecuencia (ν) que no
depende del medio en el cual se transmite y una longitud de onda (λ) que si
depende de el.

ν = c/λ

La frecuencia se mide en Hertz = seg-1 y depende de la fuente productora de la

Radiación.

Un rayo de luz puede estar formado por una sola longitud de onda o por un
conjunto de ellas el primero se llama monocromático y el segundo
policromatico.

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ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
Esta constituido por todas las longitudes de onda descubiertas y se encuentra dividido
en varias regiones o rangos de longitudes de onda.

La energia asociada una onda es E= h . ν

ESPECTROFOTOMETRÍA
Radiación Efecto
Rayos X y cósmicos Ionizaciones de las moléculas
UV-Visible Transiciones electrónicas entre los orbítales
atómicos y moleculares
Infrarrojo Deformación de los enlaces químicos

Microondas Rotaciones de los enlaces químicos

Radiofrecuencias Transiciones de spín electrónico o nuclear en los
átomos de la molécula.

Cuando la radiación incide sobre una sustancia no toda ella se ve afectada por la misma;
al átomo o conjunto de átomos que absorben radiación se le denomina cromóforo y en
cada técnica espectroscópica será distinto dentro de una misma molécula. En las
moléculas existen también átomos o grupos de átomos que no absorben radiación, pero
hacen que se modifique alguna de las características de la absorción del cromóforo, se
denominan a tales grupos auxocromos.

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ESPECTROFOTOMETRÍA
TÉCNICA INFORMACIÓN OBTENIDA
ESPECTROSCÓPICA
Rayos X Estructura total de la molécula incluida la
estereoquímica de la misma a partir de las
posiciones relativas de los átomos.
Ultravioleta-Visible Existencia de cromóforos y/o conjugación en la
molécula a partir de las absorciones observadas.

Infrarrojo Grupos funcionales a partir de las absorciones

observadas.
Espectrometría de masas Formula molecular y subestructuras a partir de los
(*) iones observados.
Resonancia magnética Grupos funcionales, subestructuras,
nuclear conectividades, estereoquímica, etc… a partir de
datos de desplazamiento químico, áreas de los
picos y constantes de acoplamiento observadas.
(*) No es una técnica espectroscópica en el sentido que estamos viendo pues no existe
irradiación electromagnética de la sustancia y no se produce absorción de dicha radiación.

ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE
El rango de radiaciones con longitudes de onda entre 400 y 700nm conforma el
denominado rango visible humano

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ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE
Color de Color absorbido λ nm
la
solución
Violeta Verde – amarillo 570 – 580

Azul Amarillo – naranja 570 – 600

Verde Naranja – rojo – 600 – 800 / 380- 450

violeta
Amarillo Azul 450 – 470

Naranja Azul verdoso 460 – 480

Rojo Verde 490 - 590

Parte del espectro visible es absorbido y otra parte reflejado (color

complementario). Las soluciones coloreadas absorben las radiaciones del
color complementario al de ellas.

Colores complementarios:
Absorción a 420-430 nm: se ve amarillo
Absorción a 500-520 nm: se ve rojo.
Absorción total: se ve negro
Reflexión total: se ve blanco

LEYES QUE RIGEN LA ABSORCIÓN DE

RADIACIONES ELECTROMAGNÉTICAS
La absorción de luz por una solución depende de la potencia de la radiación incidente (P0).
A mayor potencia incidente mayor será la potencia transmitida (Pt).
La relación entre la potencia transmitida y la incidente se denomina transmitancia
(T).

T = Pt / Po ó %T= Pt / Po x 100

La transmitancia se expresa con relación a 1 o a 100. Se ha definido una variable

de mucha utilidad que se denomina Absorbancia (A).

A= 2 – log %T

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LEYES QUE RIGEN LA ABSORCIÓN DE

RADIACIONES ELECTROMAGNÉTICAS
LEY DE BOURGUER-LAMBERT- BEER

Para la absorción de radiaciones monocromáticas:

A= ε x b x C

La absorbancia (A) de un medio homogéneo, a longitud de onda de máxima

absorción constante, es proporcional al paso de luz a través del medio (b) y a la
concentración de este (C).

La constante ε Absortividad molar, también se nombra como extinción molar y es

dependiente de la naturaleza de la sustancia y cambia con la longitud de onda.
siendo C la concentración del soluto en moles / litro de solución, ε una constante
denominada coeficiente de absortividad molar cuyas unidades son: cm -1 litro / mol y
b en cm, se llega, entoncés, a que la absorbancia es adimensional.

LEYES QUE RIGEN LA ABSORCIÓN DE

RADIACIONES ELECTROMAGNÉTICAS
El registro de la variación del coeficiente de absortividad molar ε , o de la absorbancia A,
o de la transmitancia T, en función de la longitud de onda da origen a lo que se
denomina " espectro " o curva espectral de una sustancia química e indica las
características de absorción de dicha sustancia con relación a la longitud de onda. En
muchas ocasiones la curva espectral se presenta como Absorbancia vs longitud de onda y
el espectro se denomina espectro de absorción, o en función de la transmitancia,
denominándose el espectro, espectro de transmisión.

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LEYES QUE RIGEN LA ABSORCIÓN DE

RADIACIONES ELECTROMAGNÉTICAS
Ejercicio 1.

Una solución de Ni(NO3)2 de 1000ppm en Ni presenta una transmitancia del 20%

en una celda de 1cm al leerse a 395nm

a. Que absorbancia presentara esta misma solución en una celda de 2cm.

b. Cual será el %T para esta solución en una celda de 0,5cm a 395nm

Ejercicio 2.

Una solución de 50mg de una sustancia X en 200ml presenta una transmitancia

de 40% en una celda de 2cm a 300nm.

a. Encuentre la absortividad especifica de X a esa longitud de onda

b. Determine la absortividad molar de X si su peso molecular es de 250g/mol

LEYES QUE RIGEN LA ABSORCIÓN DE

RADIACIONES ELECTROMAGNÉTICAS
Ejercicio 3.
Convertir en absorbancia las siguientes transmitancias:
0,42%, 50%, 36,8%, 0,8%, 10%

Ejercicio 4.
Convertir en transmitancias las siguientes absorbancias:
0,434, 0,76, 2,0, 0,1, 0,40, 0,00

Ejercicio 5.
Una solución de un colorante tiene transmitancia de 40% en una celda de 1cm, cual
será su transmitancia en una celda de 1,5cm y cual su absorbancia en otra de 2cm a la
misma longitud de onda.

Ejercicio 6.
Una solución de 20mg% de un compuesto orgánico de peso molecular 150g/mol
presenta una transmitancia de 12% en una celda de 0,5cm. Calcular: La absortividad
especifica de la sustancia, la absortividad molar, la concentración para que en una
celda de 1cm la absorbancia sea 0,434.

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LEYES QUE RIGEN LA ABSORCIÓN DE

RADIACIONES ELECTROMAGNÉTICAS
Ejercicio 7.
Una solución de 6000 ppm de ion cobalto tiene una transmitancia de 38% a 510nm en una
celda de 1 cm. A) Cual es su absorbancia en una celda de 2 cm, b) para que en la celda de 2
cm la absorbancia sea la misma original, cual debe ser la concentración. c) cual es la
concentracion para que en la celda de 2cm se obtenga la misma transmitancia inicial.

Ejercicio 8.
Calcule la absortividad especifica y molar del cobalto. Utilice los datos del problema
anterior.

INSTRUMENTACIÓN

El colorímetro es un aparato en los que la longitud de onda se selecciona por

medio de filtros ópticos que son insertados en este.
En el espectrofotómetro la longitud de onda es seleccionada mediante dispositivos
monocromadores los cuales están integrados a la máquina.

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INSTRUMENTACIÓN
FUENTE DE EXCITACIÓN O LÁMPARAS:

Su función es emitir el rayo de luz policromatica que después de pasar por el

monocromador va a hacerse incidir en la muestra.

INSTRUMENTACIÓN
MONOCROMADOR:
Permite que los rayos policromaticos puedan ser separados en rayos
monocromáticos. Están constituidos por lentes, espejos, rejillas de difracción y/o
prismas y rendijas.

Prisma de dispersión Rejilla de difracción

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INSTRUMENTACIÓN
COMPARTIMIENTO DE MUESTRAS:
Es el lugar donde se coloca la celda recipiente que contiene la muestra. Las celda
se construyen en material transparente a las radiaciones que pasan por la
muestra.

UV: Celdas de cuarzo

VIS: Celdas de vidrio, cuarzo o plástico incoloro
IR: NaCl, KBr, CsI

INSTRUMENTACIÓN
DETECTOR:
Es el dispositivo que recibe la radiación y produce una señal. Para que una
radiación sea detectada se necesita que sea absorbida por el material
fotosensible del detector. Debe ser sensible, producir una respuesta lineal,
tener tiempo de respuesta corto, ser estable.

Fototubo:

Oxidos de metal alcalino

(material sensible)
200-1000nm UV, VIS, NIR

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INSTRUMENTACIÓN

Spectronic 20D

Spectronic 20

Spectronic Genesys

INSTRUMENTACIÓN

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INSTRUMENTACIÓN
Instrucciones de Funcionamiento:

1. Prender el aparato (A)10 minutos antes de utilizarse, se activará la luz roja de

encendido (B).
2. Seleccionar la longitud de onda con el botón (C).
3. Ajuste (con A) a 0% de transmitancia, con la tapa cerrada y sin muestra.
4. Insertar la cubeta con el blanco en su sección (D).

D
C

INSTRUMENTACIÓN
Instrucciones de Funcionamiento:

5. Ajustar (con E) a 100% transmitancia (0 absorbancia)

6. Retirar el blanco de la cubeta, agregarle la muestra problema, e insertar en su
espacio, bajar la tapa.
7. La aguja (D) del lector se deslizará sobre la escala (F) , se lee en % de
transmitancia ó en unidades de absorbancia.

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ESTANDARIZACIÓN DE UN MÉTODO
ESPECTROFOTOMÉTRICO
Para determinar si una solución cumple con la ley de Beer lo primero que se debe hacer
es determinar la longitud de onda de máxima absorción. Para esto se lee la transmitancia
o la absorbancia que presenta la solución a diferentes longitudes de onda . Esto se hace a
concentración constante. Esto se denomina curva espectral.

A1/C1 = A2/C2
(Método del patrón)

Cx = f * Ax
(Método del factor)

F = 1/m
m= A2-A1/C2-C1
Habiendo conseguido la longitud de onda de máxima absorción se determina la
absorbancia que presentan las soluciones de diferentes concentraciones a esta
longitud de onda y se realiza una grafica de Absorbancia VS concentración. Si la grafica
resulta una línea recta; el sistema cumple con la ley de Beer – Bourguer –Lambert en
ese rango de concentraciones.

DETERMINACIÓN DEL RANGO OPTIMO DE

CONCENTRACIÓN

Un sistema cumple la ley de B.B.L solo en un determinado rango de

concentraciones. Este rango se puede calcular o determinar haciendo una curva
de absortancia (100- %T) VS Log C, que se denomina curva de Ringbom.

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DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE
Es posible el análisis de varias especies absorbentes presentes en una muestra sin llevar a
cabo separaciones previas de cada uno de los analitos, aprovechando el hecho de cada
sustancia posee características espectrales diferentes. En el análisis simultáneo se aplica
el principio de aditividad de las absorbancias o propiedad aditiva de la absorbancia:

La anterior ecuación, indica que la absorbancia total medida a una longitud de onda, es
igual a la suma de las absorbancias de los componentes individuales y, que el aporte de
cada componente a la absorbancia total es función del valor del coeficiente de
absortividad molar de cada especie absorbente (y de la concentración) para una longitud
de onda dada. Es decir, en un sistema con varias especies absorbentes de la misma
concentración si se mide la absorbancia a una longitud de onda determinada , la especie
que presentara una mayor contribución a la absorbancia total será la que presente mayor
valor del coeficiente de absortividad molar (ε λ ).

DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE

Para una mezcla con n componentes absorbentes es posible establecer la

concentración de ellos si se plantean, mínimo, n ecuaciones de aditividad para
n longitudes de onda. Para el caso de una solución que contiene dos especies
absorbentes a y b se escogerán como mínimo dos longitudes de onda, λ 1 y λ 2
para la medida de la absorbancia total de la mezcla y se plantearan las
ecuaciones :

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DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE
Cuando se lleva a cabo un análisis multicomponente o simultáneo se deben tener
en cuenta varias condiciones:

- Los componentes no deben presentar interacciones químicas entre sí ni con el

solvente, es decir, las absorbancias deben ser aditivas si cada especie en la mezcla
se comporta en forma independiente .

- Si los espectros de los componentes tienen una gran similitud el análisis será mas
difícil e inexacto.

- Generalmente se escogen longitudes de onda donde un componente presente

absorción alta mientras el otro componente, a dicha longitud de onda, presente
una absorción mínima o no absorba.

- No se deben tomar medidas de absorbancias muy bajas o muy altas puesto que
disminuye la exactitud del método.

DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE

Ejercicio 1.
Se midieron a las longitudes de onda que se dan a continuación los porcentajes de T
de soluciones coloreadas de las sustancias M y N por separado, cada una de ellas a
una concentración 5x10-4 M. También se midió una solución de una muestra
desconocida que contenía ambos compuestos. A partir de los siguientes datos, calcule
la concentración en mg/ml de M y N si sus pesos moleculares son 157 y 320
respectivamente.
%T λ = 530 nm %T λ = 690 nm
M 40 80
N 80 25
M+N 70 35

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DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE
Se calculan las absorbancias:

MUESTRA 530nm 690nm

%T Abs %T Abs
M 40 0,3979 80 0,0969
N 80 0,0969 25 0,6020
MEZCLA 70 0,1549 35 0,4559

Amezcla= EM x b x CM + EN x b x CN

Se calculan las absortividades molares para cada uno de los componentes a las
dos longitudes de onda:

AM530nm= EM530nm x b x CM

EM530nm = 0,3979 / 1cm x 5x10-4Mol/L

= 795.8mol-1cm-1L

DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE
530nm 690nm
M 795,88 193,8
N 193,8 1204,12

Amezcla= EM x b x CM + EN x b x CN

Se plantean las ecuaciones para las dos longitudes de onda:

0,154= 795,88 x 1 x CM + 193,8 x 1 x CN (530nm)

0,455= 193,8 x 1 x CM + 1204,12 x 1 x CN (690nm)

Se soluciona por igualación.

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DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE
Amezcla= EM x b x CM + EN x b x CN

Se plantean las ecuaciones para las dos longitudes de onda:

0,154 - 193,8 x CN /795,88 = CM

0,455 - 1204,12 x CN /193,8= CM

0,154 - 193,8 x CN /795,88 = 0,455 - 1204,12 x CN /193,8

193,8 (0,154 - 193,8 x CN ) = 795,88 (0,455 - 1204,12 x CN )

CN= 3,6 x 10-4 M CM= 1,05x10-4M

Comprobar la aditividad de absorbancias

DETERMINACIONES SIMULTÁNEAS O
ANÁLISIS MULTICOMPONENTE
Preparar soluciones de cada uno de los componentes a concentración conocida. Hacer
dilución de cada solución stock en caso de ser necesario.

Tomar curva espectral de cada dilución.

Encontrar la longitud de onda de máxima absorción λmax. Para cada componente (λmax A
y λmax B).

Preparar diluciones de cada stock de componentes cuyas concentraciones estén en el

rango optimo y leer el %transmitancia de las soluciones diluidas a λmax A y λmax B.

Preparar una mezcla de componente A y componente B de concentraciones conocidas

(stock) mezclando volúmenes conocidos de las soluciones stock A y stock B y llevando a
volumen final. Leer los % de transmitancia a las dos longitudes de onda λmax A y λmax B y
verificar la aditividad de absorbancias.

Leer los %de transmitancia de la solución problema (mezcla componente A y componente

B) a las dos longitudes de onda (λmax A y λmax B).

Calcular la concentración de los colorantes A y B en la solución problema.

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DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
El principal interés de la técnica espectrofotométrica para determinar la composición de
complejos reside en el hecho de que pueden efectuarse medidas sin perturbar los equilibrios
que se consideran.

MÉTODO DE LAS VARIACIONES CONTINUAS

Considérese que pueden formarse varios complejos,

M + L <—> ML
M + 2 L <—> ML2
……etc
pero que en ciertas condiciones predomina uno. Para determinar la estequiometria del
complejo predominante por el método de las variaciones continuas, el procedimiento a seguir
consiste en preparar mezclas de diferentes concentraciones de M y L, pero manteniendo
constante la concentración final (en la práctica, se preparan disoluciones del catión y del ligando
de concentraciones idénticas y se mezclan en distintas relaciones de volumen, pero de modo que
el volumen y el numero total de moles sea constante).

DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
MÉTODO DE LAS VARIACIONES CONTINUAS

La absorbancia de cada disolución se mide a una longitud de onda apropiada y se representa

gráficamente la absorbancia frente a la fracción molar de L. Se obtiene una gráfica donde la
absorbancia máxima se corresponde con la estequiometria del complejo predominante.

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DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
EJEMPLO

Se determinó la estequiometria de un complejo MnLn por el método de las variaciones

continuas, partiendo de disoluciones de M y de L 0.0100 M. Para esto se mezclaron los
volúmenes de cada una de ellas que se indican en la tabla, obteniendo los correspondientes
valores de absorbancia. Obtener la estequiometría del complejo MnLn .
ml de M ml de L ABS
10 0 0.000
9 1 0.130
8 2 0.261
7 3 0.399
6 4 0.530
5 5 0.660
4 6 0.799
3 7 0.750
2 8 0.500
1 9 0.252
0 10 0.000

DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
Calcular el No. de mmol de M y L
ml de M ml de L ABS mMOL M mMOL L mMOL TOTALES
10 0 0.000 0.100 0.000 0.1
9 1 0.130 0.090 0.010 0.1
8 2 0.261 0.080 0.020 0.1
7 3 0.399 0.070 0.030 0.1
6 4 0.530 0.060 0.040 0.1
5 5 0.660 0.050 0.050 0.1
4 6 0.799 0.040 0.060 0.1
3 7 0.750 0.030 0.070 0.1
2 8 0.500 0.020 0.080 0.1
1 9 0.252 0.010 0.090 0.1
0 10 0.000 0.000 0.100 0.1

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DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
Graficar

Absorbancia VS. mmol de M/mmol total Absorbancia VS. mmol de L/mmol total

0.4 0.6
0.4 + 0.6
= M2L3 0.6 + 0.4
= M2L3

DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
MÉTODO DE LA RELACIÓN MOLAR

Este método es similar al anterior, excepto que aquí se mantiene constante la concentración de
uno de los componentes (a menudo, el ión metálico) mientras que el otro se hace variar. Se
deber representar gráficamente la relación de moles del ligando y el metal VS la absorbancia.

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DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
EJEMPLO

Se determinó la estequiometria de un complejo MnLn por el método de relación molar,

partiendo de disoluciones de M y de L 0.0100 M. Para esto se añadieron los volúmenes de L
indicados en la tabla a 5.0 mL de la disolución de M, enrasando al mismo volumen en todos los
casos. Obtener la estequiometria del complejo MnLn .

mL M mL L ABS
5.000 0.000 0.000
5.000 1.000 0.080
5.000 2.000 0.181
5.000 3.000 0.269
5.000 4.000 0.360
5.000 5.000 0.447
5.000 6.000 0.540
5.000 7.000 0.628
5.000 8.000 0.720
5.000 12.000 0.900
5.000 14.000 0.900

DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
Calcular el No. de mmol de M y L

mL M mL L ABS mMOL M mMOL L

5.000 0.000 0.000 0.050 0.000
5.000 1.000 0.080 0.050 0.010
5.000 2.000 0.181 0.050 0.020
5.000 3.000 0.269 0.050 0.030
5.000 4.000 0.360 0.050 0.040
5.000 5.000 0.447 0.050 0.050
5.000 6.000 0.540 0.050 0.060
5.000 7.000 0.628 0.050 0.070
5.000 8.000 0.720 0.050 0.080
5.000 12.000 0.900 0.050 0.120
5.000 14.000 0.900 0.050 0.140

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DETERMINACIÓN DE LA ESTEQUIOMETRIA
DE COMPLEJOS
Graficar

Absorbancia VS. mmol de L/mmol M

2
1
= ML2

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