Aula Prática: Cultura de Tecidos Vegetais

 Objetivos:
Conhecer os fundamentos das técnicas de cultura de tecidos vegetais e suas aplicações.
Comparar o desenvolvimento de plantas in vitro e in vivo.

 Material vegetal:
Sementes de Arabidopsis, Brachypodium e Nicotiana.

 Materiais que serão utilizados:

Para cultivo in vivo:

- substrato comercial
- vermiculita
- copos de plástico de 100 mL
- tesoura
- pinça
- luva
- borrifador
- bandeja
- fita crepe

Para cultura de tecidos:

- tubos de ensaio contendo meio de cultura MS - Murashige & Skoog (1962), modificado
- estante para tubo de ensaio
- pipetas automáticas
- microtubos de 2 mL
- espátula
- álcool 70%
- álcool 100%
- hipoclorito de sódio 1-3%
- água destilada autoclavada
- água deionizada autoclavada
- béquer de 250 mL

 Procedimento:
Os alunos serão divididos em 3 grupos para a realização das atividades, sendo que cada
grupo ficará responsável pelo cultivo in vitro e in vivo de uma (01) espécie.
As sementes serão mantidas em sala de crescimento a temperatura de 22-24 °C e
fotoperíodo de 16/8 horas luz/escuro.

Cultivo in vivo:
1. Preparar o substrato na seguinte proporção: 3 partes de substrato comercial e 1 parte de
vermiculita;
2. Com o auxílio da tesoura, fazer os furos nos potes conforme instrução;
3. Identificar os potes com o nome da espécie;
4. Colocar a mistura substrato/vermiculita nos potes;
5. Borrifar água para deixar a mistura substrato/vermiculita úmida;
6. Com o auxílio da pinça, fazer três furos na mistura substrato/vermiculita em cada pote;
7. Colocar 1 semente em cada furo.

Cultura de tecidos:
1. Todo material deve ser manipulado no fluxo laminar;

2. Desinfestação das sementes:

Para Nicotiana e Arabidopsis: em microtubo de 2 mL contendo as sementes, adicionar
1 mL de álcool 70% e incubar sob agitação manual durante 10 minutos. Descartar com pipeta
a solução desinfetante e acrescentar 1 mL de etanol 100% e, em seguida, descartar com a pipeta.
Deixar o tubo aberto no fluxo para secar.

Para Brachypodium: em microtubo de 2 mL contendo as sementes adicionar 1 mL de

água deionizada e deixar as sementes embebidas por 2 horas. Descartar a água com pipeta e
acrescentar álcool 70% e, em seguida, descartar com a pipeta. Acrescentar 1 mL de solução de
hipoclorito de sódio 1-3% e incubar sob agitação manual durante 8 minutos. Descartar com
pipeta a solução desinfestante e enxaguar por 3 vezes com água destilada autoclavada.

3. Transferir as sementes para os tubos de ensaio (3 sementes por tubo).

4. Identificar os tubos de ensaio.