UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FORMULARIO DE GUÍAS PRÁCTICAS DE APLICACIÓN Y

EXPERIMENTACIÓN DE LOS APRENDIZAJES

FACULTAD: CIENCIAS E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y CARRERA: Biotecnología

BIOTECNOLOGÍA
NIVEL: QUINTO UOC: Profesional ASIGNATURA: BIOLOGIA MOLECULAR
CICLO ACADÉMICO: SEPTIEMBRE 2019 - ENERO 2020

I. TEMA:
Extracción de ADN genómico de Escherichia coli.
II. OBJETIVO:
Extracción de ADN genómico de Escherichia co/i mediante el método casero CTAB/alcohol isopropílico/cloroformo.
III. MODALIDAD:
Presencial

IV. TIEMPO DE DURACIÓN:

Presenciales: 20
No Presenciales: 0
V. INSTRUCCIONES:
Grupo A
? Escuchar las indicaciones del ayudanle de laboratorio.
? Usar mandil, guantes y todos los equipos de protección personal.
? Registrar los resullados y observaciones de forma ordenada.
? El no cumplimiento de esta disposición le significará disminución del puntaje.

Grupo B
Realizar una revisión bibliográfica sobre el tema tratado en la práctica
VI. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:
? Medio de cultivo liquido LB: 1 O g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 1 O g de NaCI, aforar con agua destilada a un volume final de 1 L y luego autoclavar
? Buffer TE: 10m M Tris-HCI pH 8.0, 1m M EDTA pH 8.0
? Buffer de lisis: 93.4 mL TE buffer, 6 mL de SOS al 10%. 600 uL de proleinasa K (20 mg/mL)
VII. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
? Sembrar en medios liquides LB una cepa no patógena de Escherichia coli y mantenerla en incubación durante una noche compleJa. El medio se enturbiará.
? Centrigugar a 12000 rpm durante 10 min
? Descartar el sobrenadante
? Madir 600 uL del buffer de lisis y homogeneizar mediante vortex
? Madir 5 uL de ARNasa (1 mg/mL)
? Incubar a 37"C durante 2 horas
? Af\adir un volumen similar de fenal cloroformo y mezclar por inversión
? Centrifugar a 13200 rpm durante 5 min
? Tomar la tase acuosa (sobrenadante) teniendo cuidado de no lomar la interface proteica
? Repetir hasta que la proteína sea eliminada
? Transferir el sobrenadante a un nuevo tubo
? Madir 1 volumen similar de cloroformo y mezclar por inmersión
? Centrifugar a 13200 rpm durante 5 min y transferir el sobrenadante a un nuevo tubo
? Madir 2 volúmenes de etanol (100%) frío y mezclar por inversión
? Mantener a 20'C 30 minutos
? Centrifugar a 13200 rpm durante 15 min
? Descartar el sobrenadante
? Lavar con etanol al 70%
? Centrifugar para poder descartar el sobrenadante
? Dejar secar a temperatura ambiente o a 37"C
? Resuspender el ADN en 50 uL de buffer TE
? Almacenar a -20'C
VIII. RESULTADOS OBTENIDOS:
Explica los mecanismos de síntesis de ARN a partir de un molde de ADN y el procesamiento post-transcripcional del ARN en procariontes y eucariontes.

Grupo A
Discutir los valores obtenidos de la concentración y la calidad del ADN.
Discutir la función de cada uno de los componentes del buffer de extracción.

Grupo B
Entregar un ensayo sobre la revisión bibliográfica de 3 páginas con al menos 10 referencias bibliográficas
IX. CONCLUSIONES:
Grupo A
Elaborar conclusiones concisas en función del objelivo planteado y los resultados obtenidos.

Grupo B
Realizar una revisión bibliográfica que permita entender la práctica realizada

X. RECOMENDACIONES:
Grupo A

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Presentar las recomendaciones que considere necesarias en función de lo observado durante la práctica.

Grupo B
Utilizar bibliografía de artículos de revistas indexadas y/o libros de relevancia

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APRENDIZAJES

BIBLIOGRAFÍA

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VALIDACIÓN DE LAS GUÍAS DE PRÁCTICAS

Fecha de elaboración Sep 9 2019

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DOCENTE PLANIFICADOR UTA
Lic. DAVID ANDRES TERAN MERA

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Coordinador Unidad de Organización Curricular
Lic. Mg. DANAE FERNANDEZ RIVERO

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Coordinador de Carrera
Lic. LILIANA PAULINA LALALEO CORDOVA

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