Universidad de la Amazonia

Facultad de Ciencias Básicas

Programa de Biología
Laboratorio de Química Analítica

PRACTICA Nº6

DETERMINACION DE ACIDO ASCORBICO EN FRUTAS POR TITULACIÓN CON 2,6-

DICLOROFENOLINDOFENOL

1. OBJETIVO

Determinar el contenido de acido ascórbico en una fruta expresado como mg acido ascórbico /100 ml jugo

2. FUNDAMENTO

Los métodos volumétricos para determinar ácido ascórbico libre se basan en su fuerte acción reductora sobre
agentes quiímicos como el yodo o sobre colorantes como el 2,6-diclorofenol-indofenol soódico.

El método recomendado por la AOAC para la determinacion de vitaminca C, conocido tambien como el
método de Tillmans; el cual se basa en la reducción del 2,6 diclorofenol-indofenol (cuya sal sódica es de color
rosa fuerte en medio ácido y azul en medio alcalino, neutro o débilmente aácido) por el ácida ascórbico,
pasando a la leucobase incolora. Tillmans titulaba en medio neutro, pero se encontró que en esas condiciones
una serie de cuerpos reductores, presentes en los productos naturales, interfieren en la titulación. Para hacer
más específico el método otros autores propusieron hacer las titulaciones en medio fuertemente ácido. Este
método se adapta a frutas y verduras con 3 a 20 mg de ácido ascórbico directamente reductor.

3. CONSULTA PREVIA

3.1 Escribir el nombre de cuatro métodos para determinar el contenido de vitamina c de un vegetal
3.2 Escribir la ruta metabólica que origina ácido ascórbico a partir de glucosa
3.3. Para carbohidratos, explicar los términos ácido, aldárico, aldónico y urónico
3.4. Escribir tres funciones del acido ascórbico, tanto en animales como vegetales
3.5. Cuál es el fundamento del método de 2,6-diclorofenolindofenol para determinar vitamina C
3.6. Porque la vitamina C es poco estable?

4. MATERIALES

Muestra: Guayaba pera

REACTIVOS (Para los 8 grupos) CANTIDAD

Acido Oxalico 0,15% 250 mls
2,6-Diclorofenolindofenol 500 mls
Acido acetico 5% 1000mls
Acido ascorbico (55mg en 50ml acido oxalico) 50mls

MATERIALES x GRUPO (Para 8 Grupos) CANTIDAD

 Vasos de precipitado x 250 mls 1
Vortex 1
Erlenmeyer por 250 mls 2
Bureta por 25 mls tornillo negro o azul 1
Probeta graduada x 100 mls 1
Pipeta graduada por 5 mls 1
Papel filtro 1
*Barra de agitacion 1
Balon afordo 5ml 1
Frasco lavador 1
Papel aluminio 1
*Plancha de agitacion 1

5. PREPARACION DE REACTIVOS

5.1. Preparacion del 2,6-Diclorofenolindofenol

Pesar 22 mg de 2,6-diclorofenolindofenol (DCFI) (color azul) y disolver cuidadosamente en agua destilada

recién hervida a 100 ml en balón aforado. Si es del caso filtrar y aforar. Usar barra agitación y plancha de
agitación. refrigerar y no almacenar más de siete días en recipiente oscuro.

5.2. Preparacion del acido ascorbico

Pesar 55 mg de acido ascórbico y disolver a 50 ml de solución con acido oxálico al 0.15%p/v

5.3. Preparacion de la muestra

Pesar 20 g pulpa fresca, triturar la muestra. Agregar 20 ml de acido oxálico 0.15%, Agitar, lavar el beaker con
10 ml de acido oxálico 0.15% y pasar al tubo de centrifuga. Usar la centrifuga para tubo de 100 ml. Del
sobrenadante tomar 10ml extracto, Agregar 10ml de acido acético al 5%, Agregar 50 ml de agua destilada,

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

6.1. Titulacion del acido ascorbico

Tomar 2 ml de solución patrón de acido ascórbico, agregar 10 ml acido acético al 5% y agregar 50 ml de agua
destilada en erlenmeyer de 250 ml. Agitar. (No se usa indicador). 3.4.5 Colocar en la bureta, la solución del
2,6-diclorofenolindofenol (color azul) y titular directamente hasta aparición de color rosado. Anotar volumen.
Repetir el procedimiento por triplicado.

6.2. Titulacion de la muestra problema

Poner la muestra previamente preparada en el erlenmyer. Colocar en la bureta, la solución del 2,6-
diclorofenolindofenol (color azul) y titular directamente hasta aparición de color rosado. Anotar volumen.
Repetir el procedimiento por triplicado.

6.3. Titulacion del blanco

Poner en el erlenmeyer 10 ml acido acético 10% y 50 ml agua destilada (Blanco). Colocar en la bureta, la
solución del 2,6-diclorofenolindofenol (color azul) y titular directamente hasta aparición de color rosado. Anotar
volumen. Repetir el procedimiento por triplicado.

7. RESULTADOS

Tabla 1. Datos para la cuantificación de acido ascórbico por 2,6-diclorofenolindofenol

ENSAYOS
1 2 3 4
H Peso de la pulpa (g)
E mg DCFIF/ml 110,8g/500ml
C ml DCFIF titulacion de patron de vitamina C
B ml DCFIF titulacion del blanco
D ml DCFIF titulacion de muestra
A mg vitamina C/ml 266,6mg/250ml
Color de la cascara (organoleptico)
G ml acido oxalico antes de licuar
F ml de acido oxalico despues de licuar
I ml vitamina C patron para titular

Calculo del contenido de vitamina C, usada en el ensayo:

mg VitaminaC /ml= A

Determinación del contenido de acido ascórbico por el método de 2,6-diclorofenol-indofenol (Hernández y

Pineda. 2003)

I ∗A
(D−B)∗ ( C−B )∗G ∗100
F
mg A . A /100 g pulpa=
H

8. CUESTIONARIO

Determinar el contenido de vitamina C en la muestra

Determine media y desviación estandar

Revisar los conceptos de precisión (desviación estándar) y exactitud (error) con base a los resultados
obtenidos. Revisar el porcentaje de error con base al valor teórico. Justificar el rechazo de algunos datos.
Comparar contra el valor teórico. Indicar el valor teórico de vitamina C teniendo en cuenta el método usado.
Revisar limitaciones de éste método.

Escribir el contenido de vitamina C expresado como mg vitamina c/100 g de muestra fresca (media ± d. e.)

9. BIBLIOGRAFIA
CONFERENCIAS PARA EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA BIOLOGIA Y FARMACIA. Universidad
Nacional de Colombia. Santafé de Bogotá, agosto 1993.
BOHINSKY, Robert. Bioquímica . 5 ed. Bogotá. Addison – Wesley Iberoamericana. 1991.
CHURCH, D. Fisiología y nutrición de los ruminates. España. Acriba, 1986.
LENINGHER, A.; NELSON, D. y COX, M. Principles of Biochemistry. 2ed. España. Omega, 1993.
MILLER, I. C. y MILLER, J. N. Estadística para química analítica. Addison wesley. 211 p.
CLAVIJO, D. Alfonso. Fundamentos de química analítica, equilibrio iónico y análisis químico. Universidad
Nacional de Colombia. 1009 p.
UNDERWOOD, A. L. y DAY, R. A. Química analítica cuantitativa. Prentice hall. 841 p.
DEVLIN, Robert, M. Fisiología vegetal. Omega. 517 p.
AZCON BIETO, J. y TALON, M. Fisiología y Bioquímica vegetal. Mc Graw Hill. 581 p.
GIL, M. Francisco. Elementos de fisiología vegetal. Relaciones hídricas. nutrición. mineral. transporte.
Metabolismo. Mundi prensa. 1147 p.
ROVALO. M. Magdalena y ROJAS, G. Manuel. fisiologia vegetal experimental. Prácticas de laboratorio.
Limusa. 269 p.

Hernández Vásquez, R. E., & Pineda Cornejo, R. C. (2003). Estudio comparativo de la cuantificación del ácido ascórbico,
vitamina c, en jugo de naranja utilizando el método de titulación yodométrica a microescala y yodométrica a
macroescala(Doctoral dissertation, Universidad de El Salvador).