TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MÉRIDA

“In Hoc Signo Vinces”

INGENIERÍA QUÍMICA

ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL.

DOCENTE: MARÌA DE LOURDES VARGAS Y VARGAS.

UNIDAD 3: CROMATOGRAFÍA.

TAREA 1: REALIZAR UNA INVESTIGACIÓN DEL TEMA

CROMATOGRAFÍA.

ALUMNA: RODRÍGUEZ GIL MARIANA GUADALUPE.

4Q
PERÍODO: ENERO / MAYO 2019

FECHA DE ENTREGA: VIERNES 17 DE MAYO DE 2019

OBJETIVO.

Este trabajo tiene como objetivo principal comprender el concepto de

cromatografía mediante la realización de una investigación que conste los
conceptos básicos, así como de una investigación de las principales técnicas
cromatográficas y sus fundamentos.

La cromatografía es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia y

que permite la separación, identificación y determinación de los componentes
químicos en mezclas complejas. Ningún otro método de separación es tan potente
y de aplicación tan general como la cromatografía.

Es una de las operaciones fundamentales de la química gracias a su versatilidad y

simplicidad para separar mezclas que no se pueden resolver por métodos
tradicionales como la destilación o la filtración, es gracias a las diferencias en
propiedades diferentes a la solubilidad o el punto de ebullición que esta técnica
logra segregar componentes con propiedades físicas o químicas muy similares, o,
que se presentan en cantidades mínimas.

Entonces, los métodos cromatográficos se basan en características tales como la

capacidad de adsorción, el peso molecular y la disposición para intercambiar
iones, además, también tiene como principio el colocar en contacto dos fases
mutuamente inmiscibles denominadas la fase estacionaria y la fase móvil.

En fundamento a las propiedades que utiliza la cromatografía hace que se pueda

clasificar en: cromatografía de adsorción, de reparto, de intercambio iónico, o, por
exclusión de tamaño, además, la cromatografía también se puede dividir según la
técnica empleada, por ejemplo: cromatografía en columna liquida, en papel, en
capa delgada o de gases; en todas ellas predominan alguno de los fenómenos
descritos y es debido al alto grado de repetición de dicho proceso a través de la
fase denominada estacionaria que los métodos cromatográficos son tan eficientes.
REALIZAR UN MAPA CONCEPTUAL DONDE SE DEFINAN LOS CONCEPTOS
BÁSICOS DE LA CROMATOGRAFÍA.
REALIZAR UN CUADRO SINÓPTICO SOBRE LAS PRINCIPALES TÉCNICAS
CROMATOGRÁFICAS Y DESCRIBIR SUS FUNDAMENTOS (FUNDAMENTOS
Y TIPOS).
INVESTIGAR LOS FUNDAMENTOS DE LA CROMATOGRAFÍA DE GASES,
INDICAR LAS PARTES DE UN CROMATÓGRAFO DE GASES Y LAS
FUNCIONES DE CADA UNA. MENCIONAR LAS PRINCIPALES
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA DE GASES.

Fundamento

En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la

cabeza de la columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo
de una fase móvil gaseosa.

La fase móvil en cromatografía de gases es un gas inerte, es decir, no

interacciona con las moléculas de analito, sólo las transporta a través de la
fase estacionaria.

La fase estacionaria en cromatografía de gases puede ser un sólido

(cromatografía gas-sólido), produciéndose entonces la retención de las
moléculas de analito por adsorción. Este tipo de cromatografía es poco
frecuente. Lo más habitual es que la fase estacionaria sea un líquido
(cromatografía gas-líquido). En este caso la fase móvil es un líquido no
volátil inmovilizado sobre la superficie de un sólido inerte. Se trata entonces
de una cromatografía de partición. Los Analitos se distribuyen entre las
fases móvil (gaseosa) y estacionaria (líquida).

Partes de un cromatógrafo de gases

Tenemos un gas que

buscamos analizar y separar
en sus componentes, este se
pasa por un aparato a una
temperatura fija, en este
aparato, el gas pasa por una
columna que contiene un
sólido, o en su defecto, un
sólido embebido en líquidos;
esto se llama Fase Fija y el
gas, se llama fase móvil.

La columna es muy larga, como de unos 2m y medio cm de espesor, este tubo

está lleno de polvo de cerámica, el cual está en forma de espiral metido en un
horno a unos 150ºC.
La separación se efectúa porque los diferentes componentes de la mezcla de
gases interactúan con la fase fija. Los que más sean afines a la fase fija, tardan
más en salir del tubo y los otros tardan menos. Con este principio, la separación
de los componentes.

Luego, a la salida pones un detector que analiza los gases y te informa que
componente sale primero y cuál después, a medida que sale se van quemando y
por la cantidad de calor sabemos la cantidad y por el tiempo en que salen la
sustancia que es y la concentración de cada componente.

 Gas portador

El gas portador cumple básicamente dos propósitos: Transportar los componentes

de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe
reunir ciertas condiciones:

 Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la
fase estacionaria)
 Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa
 Fácilmente disponible y puro
 Económico
 Adecuado al detector a utilizar

El gas portador debe ser un gas inerte, para impedir su reacción con el analito o la
columna. Generalmente se emplean gases como el helio, argón, nitrógeno,
hidrógeno o dióxido de carbono, y la elección de este gas en ocasiones depende
del tipo de detector empleado.

 Sistema de inyección de muestra

La inyección de muestra es un apartado crítico, ya que se debe inyectar una

cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tapón de vapor")
que sea rápida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto
se da con cantidades elevadas de analito.

El método más utilizado emplea una microjeringa (de capacidades de varios

microlitros) para introducir el analito en una cámara de vaporización instantánea.
Esta cámara está a 50 °C por encima del punto de ebullición del componente
menos volátil, y está sellada por una junta de goma de silicona septa o septum.
  Horno y Columna

El siguiente componente del cromatógrafo es el horno, que es un recinto donde

está la columna, la cual está conectada por un extremo al sistema de inyección y
por otro al detector.

La columna es el elemento principal del cromatógrafo pues se trata de un tubo de

acero o sílice fundida en cuyo interior está la fase estacionaria. Los componentes
de la muestra arrastrados por el gas portador son más o menos retenidos por la
misma y en consecuencia se separan unos de otros. El tiempo de retención de un
compuesto en cromatografía de gases va a depender, por una parte, de su
naturaleza, es decir, de su estructura, composición química y volatilidad, y por
otra, de las características del sistema cromatográfica, como tipo de fase
estacionaria, longitud de la columna y Tª de la separación.

Se emplean actualmente cientos de tipos diferentes de fases estacionarias, si bien

las podemos agrupar en tres variantes:

 Fases estacionarias sólidas

 Fases estacionarias líquidas, y
 Fases estacionarias ligadas

Estas últimas, basadas en una estructura de silicona, son las más empleadas. Hay
muchas variedades de diferentes polaridades que nos permiten elegir la fase más
adecuada para una muestra concreta.

 Detector

La salida de la columna está conectada al detector, cuya misión es la de generar

una pequeña señal eléctrica cuando pase un analito por él. Dicha señal,
proporcional a la cantidad de analito, es amplificada y enviada a un registro, donde
es representada en función del tiempo transcurrido desde la inyección de la
muestra, dando lugar a un cromatograma. También puede el detector enviar su
señal a un ordenador donde es almacenada y procesada adecuadamente.

Aplicaciones

En las industrias se enfoca principalmente a evaluar la pureza de los reactantes y

productos de reacción o bien a monitorear la secuencia de la reacción, para los
fabricantes de reactivos químicos su aplicación para la determinación de la pureza
es lo más importante.

En la industria del petróleo juega una función primordial, por medio de la

cromatografía se pueden analizar los constituyentes de las gasolinas, las mezclas
de gases de refinería, gases de combustión, etc.
En la investigación es un auxiliar indispensable para diversas técnicas de
evaluación, entre las principales están los estudios cinéticos, análisis de adsorción
a temperatura programada, determinación de áreas específicas por adsorción de
gas y determinación de isotermas de adsorción.

En el campo también pueden ser aplicados, principalmente en estudios de

contaminantes del agua: insecticidas en agua, pesticidas en aguas de lagos,
lagunas, ríos; desechos industriales descargados en ríos o lagunas.

INVESTIGAR LOS FUNDAMENTOS DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE

ALTA RESOLUCIÓN, INDICAR LAS PARTES DE UN CROMATÓGRAFO DE
ALTA RESOLUCIÓN Y LAS FUNCIONES DE CADA UNA. MENCIONAR LAS
PRINCIPALES APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
RESOLUCIÓN.

Fundamento

La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los

componentes de una mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar
(columna) y una fase móvil. La fase estacionaria es sílice que se ha tratado con
RMe2SiCl. La fase móvil actúa de portador de la muestra. La muestra en solución
es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la solución emigran de
acuerdo con las interacciones no-covalentes de los compuestos con la columna.
Estas interacciones químicas, determinan la separación de los contenidos en la
muestra. La utilización de los diferentes detectores dependerá de la naturaleza de
los compuestos a determinar.

Partes de un cromatógrafo de alta resolución

Un cromatógrafo de
líquidos consta de una
serie de elementos
indispensables,
normalmente constituyendo
módulos con funciones
bien definidas. La
circulación de fase móvil
entre los distintos módulos
se hace a través de
conductos tubulares.
Deben emplearse siempre
diámetros de tubo muy pequeños a fin de reducir el efecto del
ensanchamiento de banda extracolumnar.
  Sistema de suministro de fase móvil

Todos los equipos de HPLC incluyen un sistema de bombeo de fase móvil

de alta presión para forzar el paso de la fase móvil a través de la
columna, cuyo relleno muy compacto, es responsable de una importante
sobrepresión. Los requisitos del sistema de bombeo en HPLC son muy
rigurosos ya que en algunos detectores las fluctuaciones en el flujo de fase
móvil dan lugar a fluctuaciones de la señal, produciendo un ruido de fondo
que impide la observación de señales débiles. En HPLC es deseable que
el control y la reproducibilidad del caudal de fase móvil sean mejores que
el 0.5%. Existen diferentes tipos de bombas de alta presión con distintas
características, ventajas e inconvenientes. Las más frecuentes son bombas
de pistón. En HPLC, para una fase estacionaria concreta, la naturaleza de
la fase móvil es el factor clave en la separación.

 Sistema de inyección de muestra

La inyección de un volumen preciso de muestra debe hacerse a la entrada

de la columna en un corto período de tiempo para perturbar lo menos
posible el régimen de circulación de fase móvil establecido en la columna y
el detector. Además, los volúmenes empleados son pequeños, unos pocos
microlitros, lo que se traduce en muchos casos en que el factor limitante
de la reproducibilidad del método es la reproducibilidad con que puede
introducirse la muestra en la columna. El sistema más utilizado son válvulas
rotatorias de alta presión de varias vías manuales o automatizadas. Estas
válvulas posen dos posiciones. En la posición de llenado la bomba y la
columna están comunicadas y la muestra se introduce a presión atmosférica
con ayuda de una jeringa en un pequeño depósito de forma tubular (bucle).
El bucle puede escogerse de diferente volumen (5-500 μL). En la posición
de inyección gracias a la rotación de la válvula la muestra es arrastrada
por el flujo de la fase móvil e introducida en la columna.

 Columna cromatográfica

Las columnas de HPLC son tubos rectos de acero que miden entre 3 y 30
cm de longitud. Su diámetro entre 2 y 5 mm. La fase estacionaria se
mantiene entre dos discos porosos situados en los extremos de la columna.

En HPLC no suele ser necesario un control estricto de la temperatura de

la colunma, aunque si resulta aconsejable controlarla en un intervalo de
unos pocas décimas de grado para obtener resultados más reproducibles.
  Detector

Un detector ideal en HPLC debe ser sensible a pequeñas concentraciones

de analito, dar una respuesta lineal amplia, tener poco ruido de fondo y ser
estable en el tiempo que dura el cromatograma. Además, en caso de que
se utilice gradiente debe ser insensible a los cambios de composición de la
fase móvil. Es también importante que la celda de flujo del detector tenga
un volumen mínimo para no provocar ensanchamiento de las bandas. La
mayoría de los detectores empleados responden a alguna propiedad
característica de los compuestos a analizar aunque existen también
detectores que responden a la variación de una propiedad de la fase móvil
debido a la presencia de solutos.

Aplicaciones

 Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos

 Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos
 Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes,
aflatoxinas, aditivos
 Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos,
propulsores, colorantes
 Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
 Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcóticos
 Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina,
estrógenos.
 Separación y purificación de metabolitos
 Separación y purificación de los metabolitos de las drogas procedentes de
muestras de orina
 Purificación y separación de enantiómeros
 Purificación de compuestos naturales
 Purificación y caracterización de enzimas y proteínas

EXPLICAR EL FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y

SUS APLICACIONES.

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
pequeño espesor constante a lo largo de la
placa. El eluyente ascenderá, por
capilaridad, por la placa y arrastrará los
componentes a lo largo de ésta produciendo
"manchas" de los componentes.
En la cromatografía en capa fina (CCF), el grado de elución de las sustancias
depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado.

Fundamento

La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una capa, uniforme,

de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los
requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo
que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de
adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es
preciso también poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa
para activarlas.

La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase

estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos
polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen
con mayor velocidad serán los menos polares.

Aplicaciones

La cromatografía de capa fina es un método muy útil, rápido y barato que se

puede utilizar principalmente para:

 Industria farmacéutica: Separación y cuantificación de ingredientes activos.

 Industria de alimentos: Cuantificación de edulcorantes, preservantes y
vitaminas.
 Materias primas: Cuantificación de pureza.
 Otras aplicaciones:
 Separación de componentes en muestras botánicas, de productos
naturales y bioquímicas.
 Identificación de una sustancia conocida en una mezcla por comparación
con un patrón.
 Determinar el grado de pureza de un compuesto. Por ejemplo, se puede
determinar la efectividad de una etapa de purificación.

HACER EL RESUMEN DEL ARTÍCULO CIENTÍFICO, HACIENDO ÉNFASIS EN

LAS CONDICIONES CROMATOGRÁFICAS.

Introducción. Un método sencillo y atractivo por su alta eficiencia y fácil manejo

para la eliminación de efluentes en fase acuosa que contienen fenol o sus
derivados, es la adsorción. Con la finalidad de contar con una metodología que
permita realizar el seguimiento de los procesos de fotodegradación de fenoles
cuando son adsorbidos por nanopartículas de magnetita (NP) modificadas con
arcilla y sustancias bioorgánicas solubles (BOS), tuvo como objetivo la aplicación
de la cromatografía líquida de alta performance (HPLC) a este tipo de sistemas
acuosos.

Materiales y métodos. De cada nanomaterial se preparó una suspensión stock

(2g/L) por agregado de las mismas al medio acuoso con agitación constante y se
diluyeron a una concentración de 0,5g/L en solución de fenol 50μM las que se
colocaron en un agitador a vaivén a una velocidad de 200 golpes/min. asegurando
el buen contacto entre contaminante (fenol) y material adsorbente. Para seguir la
cinética de la adsorción se tomaron muestras del sobrenadante a tiempos
determinados hasta un máximo de 300 horas.

Resultados. Se trabajó con una columna en fase reversa por la reproducibilidad de

las separaciones y como parámetro variable emplear cambios en la fase móvil. La
composición de la fase móvil se ajustó para optimizar su polaridad en relación a la
del fenol. Se realizaron corridas con dos solventes de alta polaridad, metanol y
acetonitrilo. En ambos casos se probaron mezclas con agua hasta encontrar
aquella composición que brindó un poder de elución lo suficientemente fuerte que
permitiera obtener picos bien definidos sin la aparición de colas que dificulten la
cuantificación. Las corridas fueron isotérmicas.

La mejor resolución con la que se obtuvieron cromatogramas con picos bien

definidos y con mayor sensibilidad para el fenol en un tiempo de corrida adecuado,
se logró utilizando las siguientes condiciones:

 volumen de inyección 20 µl
 fase Móvil:
o solución isocrática de Agua–Acetonitrilo;
o velocidad de flujo de 1,0 ml/min;
 fase Estacionaria: en el relleno de esta columna los ligandos octadecil silano
están unidos a la superficie de sílice, dando lugar a una fase muy hidrofóbica de
gran selectividad para metileno. El endcapping no polar elimina, prácticamente,
las interacciones con los silanoles.
 longitud de onda del detector: 270 nm

Del mismo modo, se procedió con los extractos de las distintas suspensiones a
distintos tiempos de contacto nanopartícula-fenol. Las nanopartículas se
separaron previamente con la ayuda de un imán de neodimio. Para
acondicionarlas para la corrida cromatográfica las muestras se filtraron por
membranas millipore de 0,45 μm de poro.
Conclusión. No se observaron interferencias en las corridas, obteniendo
cromatogramas similares a los de la curva de calibración con idéntico tiempo de
retención para el fenol no adsorbido por las nanopartículas.

Por ello, se pudo establecer que la cromatografía en las condiciones que se

seleccionaron como óptimas, resultó adecuada para la cuantificación del fenol
remanente en las suspensiones en que se emplearon los distintos nanomateriales
como material adsorbente.

EXPLICAR EL MODELO DE LOS PLATOS TEÓRICOS Y QUE APLICACIÓN

TIENE.

Para realizar una separación

cromatográfica óptima, debe evitarse
el ensanchamiento de las bandas
debido a la dispersión, cuanto más
anchas sean las bandas, menor
número de ellas podrán ser resueltas
en un espacio de tiempo dado.

Se basa en considerar que la columna cromatográfica es como si estuviera

constituida por numerosas, pero discretas capas estrechas, denominadas platos
teóricos, en términos análogos a lo que ocurre en la teoría de la destilación
fraccionada o de la extracción en contracorriente. Se considera que en cada plato
se establece un equilibrio del componente entre la fase móvil y la fase
estacionaria, y el desplazamiento del analito a través de la columna se trata como
una transferencia de la fase móvil desde un plato al siguiente. La eficacia de la
columna aumenta al hacerlo el número de estas transferencias, esto es, al
aumentar el número de platos teóricos.

El cálculo del número de platos cuando los picos son asimétricos es más
complicado que cuando son simétricos. La teoría de platos explica
satisfactoriamente la forma de los picos cromatográficos, si bien, falla al intentar
justificar el ensanchamiento de los mismos. Por otra parte, se basa en unas
supuestas condiciones de equilibrio que, en realidad no se alcanzan, debido al
movimiento continuo de la fase móvil.
CONCLUSIÓN.

En conclusión podemos decir que la cromatografía es una técnica de separación

por medio de la retención selectiva, que permite la identificación y cuantificación
de Analitos, está compuesta por dos fases: la fase estacionaria que puede ser
solida o liquida y la fase móvil la cual puede ser un líquido o un gas.

Dicha técnica tiene diversas clasificaciones como por ejemplo en la forma de

realización, según el proceso o según la fase estacionaria o móvil que se use.

Entre las técnicas de cromatografía más utilizadas se encuentran: la cromatografía

de gases y la cromatografía liquida HPLC.

En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la

cabeza de la columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo
de una fase móvil gaseosa.

La fase móvil en cromatografía de gases es un gas inerte, es decir, no

interacciona con las moléculas de analito, sólo las transporta a través de la
fase estacionaria.

Mientras que en la cromatografía liquida la fase móvil es un líquido que fluye a

través de una columna que contiene a la fase estacionaria. La cromatografía
líquida se lleva a cabo en una columna de vidrio. Después se coloca la muestra
por la parte superior y se hace fluir la fase móvil a través de la columna por efecto
de la gravedad.

Como ya se mencionó a lo largo de este trabajo, la cromatografía es básicamente

un método de separación, tal vez el más potente de que se puede disponer en un
laboratorio, es por eso que como futuros ingenieros químicos nos es de
importancia el conocer cómo funcionan estos equipos de separación para un
futuro uso cuando ya ejerzamos nuestra carrera.

También es importante el que tengamos en cuenta que la cromatografía a efectos

analíticos, resulta ser una técnica ciega. Así que, los métodos cromatograficos, por
si mismos, pueden informar, en el mejor de los casos del número de compuestos
químicos que se encuentran presentes en una mezcla, pero nunca de
proporcionar información de su naturaleza.

A pesar de esta limitación las técnicas cromatograficas, el tiempo de retención de

los compuestos, eran constantes para un sistema cromatográfico dado, por lo que
podían ser utilizados de una forma cualitativa y cuantitativa en cuanto a la
identificación de los compuestos.
BIBLIOGRAFÍA.

Cromatografía en capa fina. (s.f.). Recuperado el 11 de 05 de 2019, de

http://organica1.org/1311/1311_6.pdf
Miranda, A., & Martín, O. (s.f.). Cromatografía líquida (HPLC). Recuperado
el 11 de 05 de 2019, de http://www.ucm.es/data/cont/docs/650-2013-12-02-
gases%20l%C3%ADquidos.pdf
Olgin Pérez, L., & Rodriguez Magadán, H. (8 de Junio de 2004). Métodos
de biotecnologia. Recuperado el 11 de 05 de 2019, de Universida
Autónoma de México:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_gases.pdf
Química analítica instrumental II. (Diciembre de 2007). Recuperado el 11 de
05 de 2019, de Universidad Nacional Autónoma de México:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
Cromatografía de gases. (s.f.). Recuperado el 11 de 05 de 2019, de
https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8247/4/T3gascromat.pdf
Cromatografía de líquidos de alta resolución. (s.f.). Recuperado el 11 de 05
de 2019, de
https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8248/4/T4cromatliquid.pdf
Universidad de alicante. (s.f.). Recuperado el 11 de 05 de 2019, de
Servicios técnicos de investigación: https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-
cientifica/unidad-deanalisis/cromatografia-de-gases.html