Informe 1: Preparación de colorantes para colorear láminas de

citología cervicovaginal

La coloración de Papanicolaou es un método basado en la diferenciación de color

de los componentes celulares, se aplica a los diversos tipos celulares para la
tipificación celular y diagnóstico de cambios malignos. Los núcleos son coloreados
con la hematoxilina de Harris (coloración básica), el citoplasma con un colorante
de naturaleza alcohólica y policromática coloración de eosina (coloración ácida) y
la queratina citoplasmática, cuando está presente, se colorea con Orange G.

 Hematoxilina de Harris

Es un colorante ácido y tiene una estabilidad de 6-12 meses en el tejido.

Dentro de sus componentes tenemos:

1. Hematoxilina inactiva: el componente activo es la hemateína que se obtiene

de la oxidación (maduración) de la hematoxilina con óxido rojo o amarillo de
mercurio. Una vez que se da la coloración toma un color rojo vinoso,
tonalidad que toman los núcleos.
2. Sulfato de potasio y aluminio: (piedra alumbre o alumbre comercial)
mordiente; sin esta sustancia no daría color la hematoxilina, su color es
ámbar claro. Suministra las cargas positivas, que actúan como puentes
químicos para unirse a las cargas negativas de la hemateína y del ácido
fosfórico de las cadenas de DNA nuclear.
3. Ácido acetil glacial: diferenciador. Incrementa la precisión de la tinción
nuclear y estabiliza el colorante. Previene la oxidación.
4. Alcohol corriente al 96%: evita la contaminación con hongos.
5. Alcohol absoluto 100 %
6. Agua destilada
7. Óxido de mercurio (amarillo).

Preparación
 Hematoxilina ---------------------------------- 5.0 gr.

Alcohol absoluto ----------------------------- 50 mL.

Sulfato de potasio y amonio -------------- 100 gr.

Agua destilada ------------------------------- 1000 mL.

Oxido de mercurio -------------------------- 2.5 gr.

1. En un matraz de 2000 mL, colocar el agua destilada más el sulfato de

amonio y potasio. Disolverlo con ayuda del calor.
2. En otro matraz pequeño, disolver la hematoxilina con el alcohol a
temperatura ambiente.
3. Una vez disuelto el sulfato de potasio y amonio retírelo del fuego.
4. Mezclar ambas soluciones lentamente y colocarlas de nuevo al calor.
5. Cuando hierva, retirar el matraz y agregar el óxido de mercurio poco a
poco.
6. Cuando este disuelto, llevarlo otra vez al fuego hasta que hierva y tome un
color púrpura.

La hematoxilina se debe filtrar diariamente para eliminar el precipitado que

produce la hematoxilina, debido al óxido de mercurio que se agrega en su
preparación.

 Colorante EA
1. Eosina ácida: Es el colorante de fondo o contraste, en unión con el
colorante nuclear da tono rosa al citoplasma. Colorea el citoplasma de
células escamosas, nucléolos y eritrocitos.
2. Light Green: ácido. Da tono verde-azul a los citoplasmas de: células
intermedias, capa profunda, columnares, histiocitos, y leucocitos. La
competencia entre la eosina y el light green en las células, es la base de la
coloración diferencial del citoplasma.
3. Vesuvina: Determina o contrasta los colores verde-azul o rosa de los
citoplasmas. Puede reemplazarse por el Bismarck Brown.
 4. Ácido fosfontungstico: mordiente, une el light green con las proteínas de la
célula.
5. Carbonato de litio: diferenciador, se utiliza en solución acuosa saturada.
6. Alcohol corriente al 96 %
7. Agua destilada.

Preparación

 Orange G
1. Cristales de orange G.
2. Ácido fosfotúngstico.
3. Alcohol corriente al 96%.
4. Agua destilada.