Práctica.

MÉTODOS
ESPECTROFOTOMÉTRICOS
CUANTITATIVOS (Determinación de
Cobre en una bebida alcohólica)

Universidad Nacional Autónoma de Mexico

Facultad de Química.

1700-05 Prof. Joaquín Preza de la Vega

Valencia Vázquez Alicia | Perez Linette

Objetivo.
 Determinar la concentración de Cu en una muestra de mezcal a través de la técnica de espectrometría de
absorción atómica por medio del método de estándar externo y el método de adiciones patrón.
 Determinar si el contenido de Cu se encuentra dentro de los valores permisible de acuerdo a la NOM-142-
SSA1-1995.

Introducción.
La técnica de espectrometría por absorción atómica es una técnica utilizada normalmente para analizar un metal a nivel de
trazas contenido en una muestra.
Este tipo de estudio solamente se puede realizar en fase gaseosa ya que los átomos y iones se encuentran bien separados
entre si, es por ello que el primer paso es la atomización; un proceso en el cual la muestra es volatilizada y se descompone
en un gas. La reproducibilidad y el rendimiento del paso de atomización determinan en gran medida la sensibilidad, la
precisión y exactitud del método.
La propiedad que se mide en este método es la absorción de la radiación, a una longitud de onda adecuada de los átomos
presentes en el camino óptico de tal modo que el procedimiento consta de una muestra en disolución introducida en
distintas fuentes caloríficas, posterior a la evaporación del disolvente, la llama proporciona suficiente energía para disociar
los enlaces químicos y liberar átomos metálicos en estado fundamental que absorben radiación electromagnética de una
longitud de onda característica en cada caso. La banda de longitud a la que absorbe cada elemento es estrecha y
prácticamente única.
Los átomos que no han sido excitados absorben luz y sus electrones en la última capa (capa de valencia) pasan al estado
excitado. Como resultado de esta absorción se produce una disminución de la intensidad de radiación inicial y la cantidad
de radiación absorbida a través de la llama (camino óptico) será proporcional a la concentración de átomos del elemento
presentes en la misma.

Diagrama de flujo.
Curva patrón.
Se pesaron 40 mg de CuSO 4*5H2O,
disueltos y llevados al aforo en 100 mL.
Disolución madre
Muestra de análisis.
Muestra 1
Se tomaron 10 mL de Mezcal comercial
llevados a 100 mL de aforo.
Disolución madre muesta 1
Muestra 2
Se tomaron 10 mL de Mezcal comercial
llevados a 100 mL de aforo.
Disolución madre muesta 2
Apartir de la disolución
madre se prepararon las
disoluciones de la tabla 1
Apartir de la disolución
madre muestra 1 se
prepararon las
disoluciones de la tabla 2
Apartir de la disolución
madre muestra 2 se
prepararon las
disoluciones de la tabla 3
A cada una de las disoluciones se
midió la absorbancia conforme
adiciones patrón a λ=324.75 cm-1
A cada una de las disoluciones se
midió la absorbancia conforme
adiciones patrón a λ=324.75 cm-1
A cada una de las disoluciones se
midió la absorbancia conforme
adiciones patrón a λ=324.75 cm-1

1
 Vol. Vol. Concentra Vol. Concentra
Tomado Tomado ción (M) Tomado ción (M)
de Concentra de de
disolución ción (M) disolución disolución
madre madre madre
(mL) Tabla 2. Concentración
Tabla 1. Concentración
(mL) de muestra
de disolución patrón 1 (mL)
0.5 0.02 0.5 0.02 0.5 0.02
1 0.0 1 0.0 1 0.0
2 0.08 2 0.08 2 0.08
3 0.12 3 0.12 3 0.12
4 0.16 4 0.16 4 0.16
5 0.2 5 0.2 5 0.2
7 0.28 7 0.28 7 0.28
10 0.4 10 0.4 10 0.4de muestra 2
Tabla 3. Concentración

Propiedades fisicoquímicas.
CuSO4*5H2O Sulfato de cobre pentahidratado.
Masa Molar: 249.456 g/mol
Temperatura de fusión: 110°C
Temperatura de inflamación: 649, 85 °C
Densidad relativa: 2.3 g/mL
Figura 1. Rombo de seguridad CuSO4*5H2O
Solubilidad en agua: 3.7 g en 100 mL

Cuestionario previo.
¿Qué es la absorción atómica?
La absorción atómica es el proceso que ocurre cuando átomos de un elemento en estado fundamental absorben energía
radiante a una longitud de onda específica. La cantidad de radiación absorbida aumenta al incrementar el número de
átomos del elemento presentes en el “camino óptico”, esto permite utilizar a la absorción atómica con fines cuantitativos.
Este método puede detectar cantidades tan bajas como 10-14gramos. La absorción de radiación por átomos libres
involucra una transición de estos átomos desde el altamente poblado estado basal hasta un estado electrónico excitado.
¿Cuáles son las partes importantes del Espectrofotómetro de Absorción atómica?
Fuente de radiación, Sistema nebulizador-atomizador, Monocromador, Detector,
¿Cuáles son las lámparas más comunes que se utilizan en la absorción atómica?
 Lámparas de cátodo hueco.  En el interior de la lámpara hay un cátodo cilíndrico de metal que contiene el
metal de excitación, y un ánodo. Cuando un alto voltaje se aplica a través del ánodo y el cátodo, los átomos de
metal en el cátodo se excitan y producen luz con una determinada longitud de onda. 
 Lásers de diodo. La espectrometría de absorción atómica también puede ser llevada a cabo mediante láser,
principalmente un láser de diodo, ya que sus propiedades son apropiadas para la espectrometría de absorción
láser.

¿Cuál es la importancia de trabajar por adiciones patrón y cuando se utiliza?

El método de adiciones patrón es un método de análisis cuantitativo, que a menudo se utiliza cuando la muestra de
interés tiene varios componentes que resultan en efectos de matriz, donde los componentes adicionales pueden reducir
o aumentar la señal de absorbancia del analito. Resulta en errores significativos en los resultados del análisis.

Adiciones patrón se usan para eliminar efectos de matriz de una medición, puesto que se asume que la matriz afecta a
todas las soluciones igual. Además, se utiliza para corregir la química fase separaciones realizadas en el proceso de
extracción.

¿Por qué se debe determinar Cu en mezcal?

En sus comienzos, el mezcal se destilaba de forma ancestral en recipientes de barro, con el inconveniente de su
fragilidad y que sólo podían destilarse 30 litros por cada proceso. Luego llegó la destilación en ollas de cobre, pequeños
tinacos de ese metal de aproximadamente 500 a 600 litros, acelerando el proceso de destilación y produciendo una
mayor cantidad de esta bebida.

2+
El cobre en su estado oxidado (Cu ) participa en reacciones en las que se producen radicales hidroxilo libres (OH),
2-
además del anión superóxido (O2 ) y el peróxido de hidrógeno (H2O2). Estas especies reactivas de oxígeno (ROS)

2
atacan a las biomembranas a través del proceso peroxidación lipídica, desestabilizan su estructura y afectan sus
funciones celulares. También pueden oxidar directamente a las proteínas y desnaturalizar el ADN y el ARN, lo que puede
provocar daños que contribuyen al desarrollo de diversas enfermedades como el cáncer, las enfermedades
neurodegenerativas y al envejecimiento celular.

Cálculos previos.
Se disuelven 0.4 g de Sulfato de cobre de los cuales 0.101803909 g son cobre y al llevar a aforo de 100 mL la
concentración de Cu en la disolución es de 1.01803909 mg/mL de disolución.
1mol Cu S O4∗5 H 2 O 1 mol Cu 63.549 g Cu
0.4 g CuS O4∗5 H 2 O x x x =0.101803909 g Cu
249. 68 g C uS O4∗5 H 2 O 1 mol C uS O4∗5 H 2 O 1 mol Cu
(1)
101. 803909 m g Cu
=1. 01803909 m g /mL Cu (2)
100 mL
(1 . 01803909mg/mL Cu)(0.5 mL)
=0.020360782 mg/mLCu
25 mL

Resultados.
Concentració
Concentración Absobancia
Muestra Absobancia Promedio Muestra n
(mg/L) Promedio
(mg/ L)
Blanco 0 0.125 Muestra 2   0.069
Estandar 1 0.02 0.001 Adición 1 0.02 0.079
Estandar 2 0.04 0.002 Adición 2 0.04 0.08
Estandar 3 0.08 0.004 Adición 3 0.08 0.083
Estandar 4 0.12 0.022 Adición 4 0.12 0.08
Estandar 5 0.16 0.008 Adición 5 0.16 0.09
Estandar 6 0.2 0.01 Adición 6 0.2 0.082
Estandar 7 0.28 0.015
Estandar 8 0.4 0.024 *Los valores en rojo fueron
Muestra 1   0.023 descartados para ajustar la
Adición 1 0.02 0.013 recta
Adición 2 0.04 0.015
Adición 3 0.08 0.018
Adición 4 0.12 0.021
Adición 5 0.16 0.024
Adición 6 0.2 0.03
Adición 7 0.26 0.04
Tabla 4. Resultados experimentales de Absorbancia a λ=324.75 cm-1

3
 Pendiente 5.9139E-05
Ordenada -0.00082628
al origen
0.03
0.02
0.09 r2 0.990145739
f(x)
f(x)==00x x++0.01
0.08 Concentrac 13.9719 ± 2.7176
0.03
0.02 R²R²==10.99
0.09 ión a mg/L
0.02 f(x) = 0 x − 0 Abs=0
Absorbancia
0.09 R² = 0.99
Absorbancia

0.02 Tabla 5. Parametros de la recta

0.08 correspondiente a grafico 1.
0.01
0.02 Gráfico 1. Curva de calibración de absorción
0.08
de Cu en función del volumen de solución
0.01
0.08 estándar.
0
0.01
0.08 15
0 5035 10055150 75
200 250
95 300
115 350135400 155
450
12 32 52 72 92 112 132 152
Concentración
Concentraciónmg/L)
mg/L Pendiente 7.7439E-05
Concentración mg/L Ordenada
0.011695122
al origen
Tabla 6. Parametros de la recta correspondiente a grafico 2. r2 0.998452396
Concentrac
ión de
1.4598425 ±
muestra 1
0.0991719 mg/L
a Abs=
0.023

Gráfico 2. Curva de calibración de absorción de Cu en función del volumen de muestra 1.

Pendiente 8E-05
Tabla 7. Parametros de la recta correspondiente a grafico 3. Ordenada
0.077
al origen
r2 0.994594595
Concentrac
ión de
muestra 2 1± 2.023 mg/L
a Abs=
0.069
Gráfico 3. Curva de calibración de absorción de Cu en función del volumen
de muestra 2.

Analisis de resultados.
Se determinaron los parámetros de la recta correspondientes en la disolución estandar, y las
muestras 1 y 2 utilizando las formulas:
Pendiente: Ordenada al origen:
Coeficiente de correlación:
n Σ xy −Σ x Σ y
m=
n Σ x 2−¿ ¿

Para la solución estandar se determinó la concentración a la que la absorbancia tiene un valor de 0 cm -1 sabiendo que :
b −0.0008262
x= = =13.971902 mg/ L
m 0.000059138
La incetidumbre se calcula considerando la incertidumbre asociada a la ordenada al origen y a la pendiente y con ello se
calcula la inertidumbre relativa de la concentración de la muestra:

4
Uc Sb Sm 0.002240 0.0000106
C b√
= (( ) ¿ ¿ 2)+((
m
) ¿ ¿ 2)= ((
−0.00082 √
)¿ ¿2)+((
0.0000591
)¿ ¿ 2)=2.71760 ¿ ¿ ¿ ¿
Uc= 0.19450513

X=-0.0139719 ± 0.03797014

Para la muestra 1 y la muestra 2 se determinó la concentración de cada una a la absorbancia medida. (Ejemplo de cálculo
para muestra 1) y la concentración se multiplica por 100 para considerar el factor de dilución.
Ec de la recta: Abs=b+mx 0.023=0.0116951+7.7439E-05

C=1.4598425 mg/L

Debido a que para el valor de concentración se toma en cuenta la incertidumbre de la medida de absorbancia (Sy), la
incertidumbre de la ordenada al origen (Sb) y la incertidumbre de la pendiente (Sm), la incertidumbre combinada queda
de la siguiente forma:
Se calcula la incertidumbre de los dos términos del numerador:
¿ √( Sy)2 +(Sb)2= √(0.0044384)2+(0.104699)2=0.099171933
Finalmente se calcula la incertidumbre relativa Uc/C
Uc Sm 2 Incertidumbre combinada 2 0.0010641 2 0.099171933 2
C
= (
m√) +(
Absorbancia
)= (
0.00007743 √
) +(
0.23
Concentración de la muestra = 1.4598425 ± 0.099171933 mg/L
) =0.099171933

Se realizó la determinación de cobre en mezcal a través de dos métodos distintos: curva de calibración y adición estándar.
El primero se realizó con disoluciones estándar de cobre, las cuales sólo contienen cobre en agua, sin embargo, la muestra
donde se desea analizar cobre no sólo contiene agua, sino una mezcla de diferentes compuestos presentes en el mezcal
como: etanol, azúcares, productos de la oxidación del alcohol como aldehídos y cetonas, etc.; por ello se realiza el método
de adición estándar, en el que a cada disolución estándar de cobre preparado se agrega un volumen igual de la muestra
problema en la que se encuentra el cobre (mezcal), de esta manera cada valor registrado de absorbancia ya cuenta con la
contribución de la muestra donde se encuentra el cobre a analizar, es decir, ya se toma en cuenta el efecto de la matriz.

Conclusiones.
De acuerdo con la NOM-142-SSA1-1995, que habla sobre bienes y servicios, bebidas alcoholicas y sus especificaciones
sanitarias. Las dos muestras comereciales evaluadas en este estudio se encuentran dentro del límite permitido de contenido
de Cu, siendo el límite máximo permitido por la norma sanitaria de 2.0 mg/L , la muestra 1 contiene 1.4598425 ±
0.099171933 mg/L y la muestra 2 1.0±2.0238619 mg/L.

Bibliografía.

 Harris Daniel C. “Análisis Químico Cuantitativo”, 2a edición. Editorial Reverte, España 2001. Paginas 376-398

 Miller James N., Miller Jane C. “Estadística y Quimiometria para Química Analítica”, 4a Paginas 40-67
 Skoog, D. Análisis de Instrumental. Cuarta edición, España 1994. Páginas 186-189, 257-259