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GENERALIDADES
Segunda parte: Introducción al
Laboratorio
TEMA 1.- GENERALIDADES
2. MATERIAL DE VIDRIO
3. MATERIAL DE PLÁSTICO
5. LIMPIEZA DE MATERIAL
b. Otras medidas
a. Fuego
b. Recipientes a presión
c. Electricidad
d. Radiacciones
e. Carcinógenos
f. Material de vidrio
g. Agentes biológicos
h. Sustancias corrosivas
a. conmociones
b. asfixia
c. heridas
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1ªCFGS Salud Ambiental TEMA 1. GENERALIDADES
Segunda parte: Introducción al
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d. contusiones
e. quemaduras
f. intoxicaciones
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Segunda parte: Introducción al
Laboratorio
TEMA 1 GENERALIDADES
1) INTRODUCCIÓN
2) MATERIAL DE VIDRIO
2.2.) Matraces
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Segunda parte: Introducción al
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DILATA Y CAMBIA EL AFORO, CON LOOQUE DEJAN DE SER TAN
PRECISOS.
2.3.) Probetas.
2.4.) Buretas.
Las buretas son tubos largos graduados con una llave de paso en uno de sus
extremos, que se emplean para dispensar con gran exactitud volúmenes de
liquido en un contenedor.
2.5.) Pipetas.
Uso:
-Colocar el pulgar sobre el mando de pipeteado una vez colocada la
correspondiente punta desechable.
-Mantener siempre el aparato en posición vertical.
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-Oprimir el mando de pipeteado hasta el primer tope (embolada).
-Sumergir la punta unos pocos milímetros en la muestra.
-Soltar lentamente el mando de pipeteado.
-Tocar ligeramente la pared del recipiente con la punta.
-Limpiar el exterior de la punta sin tocar la abertura de la misma.
-Para expulsar la muestra, apoyar la punta de la pipeta en la pared del
recipiente, apretar el mando hasta el primer tope y mantenerlo así. A
continuación apretar hasta el segundo tope (sobreembolada) para vaciar
completamente la punta.
-Escurrir la punta de la pipeta contra la pared del recipiente.
-Para expulsar la punta, oprimir fuertemente hacia abajo el mando expulsor.
2.6.) Tubos
Recipientes cilíndricos que sirven para contener los reactivos reaccionantes. Hay de
varias clases: Tubos de ensayo
Tubos de centrífuga
Tubos acodados.
Etc.
2.7) Dispensadores
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2.14) Paralelas: Son el soporte de los portaobjetos. Se apoyan en los
cirstalizadores.
3.-MATERIAL DE PLÁSTICO
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4.1)Diluidores
4.5) Gradillas:
Son soportes para tubos. Suelen ser de madera o metálicos.
4.7) Centrifugas
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Son recipientes que contienen un líquido cuya temperatura puede ajustarse, los más
corrientes son de agua y se utilizan para incubaciones a menos de 100ºC. Suelen
disponer de un agitador mecánico para mantener igual temperatura en todo el
líquido. Tambien hay baños de aceites pesados, de arena etc.
4.9) Estufas
4.10)Hornos:
Es un aparato utilizado para la esterilización por calor seco. Los más
empleados son los hornos "Pasteur". Se trata de "armarios" de diferentes tamaños,
construidos de material aislante y
dotados de un elemento calefactor y
un termostato.
El procedimiento es el
siguiente:
- Introducir seco y limpio el
material a esterilizar, procurando que
no toque las paredes del horno.
- Fijar la temperatura de
esterilización y contar el tiempo una
vez alcanzada dicha temperatura. Hoy
día los hornos suelen disponer de un
programador de tiempo y temperatura y de un dispositivo avisador del final del
proceso.
- Una vez finalizado el tiempo de esterilización se esperará a que baje la
temperatura antes de sacar el material para evitar la ruptura del mismo por el
cambio brusco de temperatura.
Temperatura Tiempo
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180º C 30 minutos
170º C 60 minutos
160º C 120 minutos
El vapor cuando llega a un objeto que está más frío que él se condensa,
cediéndole su calor con lo que la temperatura de ese cuerpo aumenta rápidamente,
produciéndose la esterilización. Es muy importante no colocar el material a
esterilizar demasiado junto de forma que el vapor pueda circular libremente llegando
a todo él.
En el autoclave se trabaja con vapor saturado por lo que no debe existir aire
dentro de él; es necesario realizar el purgado o salida del aire. Actualmente la
mayoría de los autoclaves realizan el purgado automáticamente.
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* controles biológicos que son más eficaces: se trata de esporas que una
vez sometidas al proceso de esterilización se incuban, siendo correcta la
esterilización si no hay crecimiento. Se puede realizar un control biológico
"casero" simplemente incubando un medio de cultivo esterilizado en el
autoclave y comprobando el no crecimiento.
4.12) Balanzas
Dispositivos destinados a la medida de masas. Hay distintos tipos
(granatarios, de precisión..)
4.13) Agitadores:
Son dispositivos con una base imantada que nos van a permitir mediante un
imán auxiliar la agitación de disoluciones y suspensiones. Pueden llevar además
una fuente de calor de forma que se calienta a la temperatura deseada el líquido
que se agita
4.14) Mecheros:
El que se suele utilizar es el mechero Bunsen que consta de un pie sobre el
que descansa un tubo por el que sale el gas. En la parte inferior
lleva además un orificio para la entrada de aire de modo que se
regule la calidad de la llama. Sirve para calentar soluciones,
suspensiones,... pero su principal aplicación en el laboratorio de
Microbiología es el flameado, siendo éste un método de
esterilización que consiste en someter a la llama de un mechero
el material que se vaya a utilizar. La mejor llama para este fin es
la azul. Se utiliza para esterilizar asas e hilos de inoculación
metálicos, espátulas, bocas de tubos y matraces, etc.. Presenta
dos inconvenientes fundamentalmente:
- Al retirar el objeto de la llama se puede volver a
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contaminar fácilmente y el material sufre mucho.
4.15) Microscopio:
Instrumento óptico que sirve para observar de cerca objetos muy pequeños
ya que amplifica las imágenes extraordinariamente.
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-Material potencialmente infeccioso : antes de proceder a su limpieza se
esterilizará o desinfectará.
Se limpiará igual que el de vidrio, no obstante hay que tener en cuenta que
puede ser atacado por disolventes orgánicos y mezcla sulfocrómica, por lo que no
los utilizaremos.
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* Portaobjetos y cubreobjetos utilizados:
- introducirlos en una mezcla de agua, jabón y lejía. Mantenerlos aquí al
menos de 15 a 30 minutos. Lavarlos con esponja, no usar estropajo, y enjuagado
con agua.
Tras la limpieza y una vez secos. los desen grasaremos con una mezcla
alcohol etílico-éter etílico 1: 1 y los guardaremos en un recipiente de cierre
hermético con alcohol etílico, para evitar que se engrasen.
* Pipetas contaminadas:
* Material con boca estrecha: se tapan las bocas con algodón graso y se
envuelve este tapón en papel de aluminio.
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1ªCFGS Salud Ambiental TEMA 1. GENERALIDADES
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Hay que insistir en la importancia de la limpieza del material. Puede significar
una fuente de error en técnicas que deberán ser repetidas suponiendo ello un
despilfarro de dinero, tiempo y el peligro que puede resultar para el enfermo.
* Una vez limpio se debe aclarar varias veces con agua corriente acabando
con un último aclarado de agua destilada. A continuación se lleva a la estufa
para secado.
Deben manejarse con cuidado, procurando que no caigan sobre ellos los
productos que se están usando. Es importante conservarlos en buenas condiciones
porque de ello depende no solo su duración, sino también la fiabilidad de medida.
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1ªCFGS Salud Ambiental TEMA 1. GENERALIDADES
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a.- INSTALACIONES:
Los desagües deben disponer de sifón
Es conveniente que existan al menos dos salidas.
Las redes generales (agua, luz…) deben contar con los sistemas de
protección adecuados.
Debe haber buena ventilación
Se debe disponer de sistemas de lavado de ojos y ducha.
b.- ZONA DE EMERGENCIA:
Debe existir una zona de emergencia que pueda albergar a todo el
personal del laboratorio
En esta zona estarán localizados los sistemas de alarma, líneas
generales, botiquín, extintores y elementos de protección personal.
c.- PERSONAL:
Cada laboratorio deberá elaborar sus propias normas de seguridad en
función de sus riesgos, y debe asignar funciones concretas en caso de
emergencia o accidente.
Es obligatorio hacer una reunión periódica con el comité de salud
laboral destinada a la formación sobre prevención de accidentes.
d.- INCENDIOS:
El riesgo de incendio en el laboratorio es alto. Se deberán evitar las
altas temperaturas y se evitarán descargas eléctricas por medio de la
conexión a tierra.
El laboratorio debe contar con suficientes extintores a mano, que
deben estar en lugares de paso.
Para material sólido se utilizarán extintores de polvo o de agua
Para productos líquidos los extintores serán de polvo (no debiendo
utilizar agua)
Para fuego producido por gases o vapores los extintores deben ser de
polvo (no pudiendo utilizar agua)
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f.- NORMAS BÁSICAS EN EL LABORATORIO:
La limpieza del instrumental y utensilios se realizará en horas de
trabajo, para que exista una cierta colaboración del personal.
No se debe comer ni almacenar alimentos en el laboratorio
El personal debe observar orden y limpieza en el trabajo diario
La práctica del lavado de manos debe ser frecuente para eliminar
sustancias tóxicas.
Todos los recipientes deberán estar correctamente etiquitados e
identificados.
Nunca se debe probar ni oler ningún producto
g.- PREVENCIÓN CONTRA LA CONTAMINACIÓN RADIACTIVA:
Se debe mantener una vigilancia especial para evitar la contaminación
del ambiente.
Para proteger al personal se deben usar pantallas que varias con la
clase de radiacción que se emplee.
Se utilizarán guantes, mascarilla y vestuario para solo este trabajo.
El trabajo se realizará en zonas concretas y señaladas.
Además se tendrá especial cuidado con los vertidos que tienen material
radiactivo.
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Es fundamental, por tanto, el empleo de una técnica cuidadosa para evitar
la formación de aerosoles:
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Hay que indicar que para aquellos procedimientos que generen aerosoles
infecciosos es fundamental para la seguridad del laboratorio el empleo de
"gabinetes de seguridad biológica".
OTRAS MEDIDAS
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Como ya hemos dicho, la puerta del laboratorio debe permanecer
cerrada para evitar la circulación de aire contaminado a áreas limpias,
excepto para la entrada y salida del personal del laboratorio. No debe
permitirse la entrada, salvo por motivo justificado, a personas ajenas al
laboratorio y, menos aún, a los niños.
Los objetos y ropas personales deben guardarse fuera del laboratorio.
Usar guantes siempre que se manipulen sueros o material
contaminante y para toda operación de limpieza. También siempre que
se tenga una herida reciente o antigua en las manos, aparte de
protegérsela con esparadrapo. No hemos de olvidar el lavado de
manos tras quitarnos los guantes.
Se debe utilizar siempre una bata de uso exclusivo. En caso de
contaminarse la bata, ésta debe cambiarse inmediatamente por una
limpia. La bata contaminada se debe lavar con lejía o bien esterilizarse
en el autoclave y lavarse antes de volver a usarse de nuevo. No se
debe salir del laboratorio con la bata puesta. Antes de salir de él, por el
motivo que sea, quitarse la bata y a continuación lavarse las manos
con un jabón antiséptico.
No tocar con las manos la boca, nariz, ojos, cara ni cabello para
impedir la autoinoculación.
Tener mucho cuidado al agitar, al manejar tubos y matraces,
procurando que no haya salpicaduras y que no se mojen los tapones.
Si se derrama material contaminante, limpiarlo con solución de lejía al
1:5 de la siguiente manera: cubrir con papel de filtro y se deja 30 min;
luego limpiar. Se usarán guantes.
Al terminar la jornada de trabajo, limpiar las superficies de trabajo con
solución de lejía y detergente. La limpieza y desinfección de las
superficies de trabajo, reducen las posibilidades de infección.
Limpiar regularmente con un desinfectante las superficies externas del
resto del equipo del laboratorio (centrífugas, estufas, lámparas de
mesa,.).
En el laboratorio de Microbiología es especialmente importante
mantener las manos siempre cuidadas y protegidas en caso de
heridas, así como evitar pinchazos con agujas o material de vidrio roto.
En este sentido es conveniente volver a indicar que el material de
vidrio roto se debe proteger antes de tirarlo para evitar cortes.
Después de usar jeringas desechables, no intentar poner de nuevo el
capuchón plástico. Tirarlas a un frasco o contenedor especial que se
cerrará y esterilizará a diario.
En Microbiología está terminantemente prohibido pipetear con la boca.
Existen dispositivos mecánicos que se adaptan a las pipetas
Las placas de Petri deben abrirse con cuidado después de la
incubación. El agua de condensación puede contaminarse y originar
riesgo en la apertura de ellas.
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No dejar destapados los envase ni las placas de cultivo.
Antes de salir del laboratorio, asegurarse de que los grifos y las
bombonas de gas estén cerrados y todo el aparataje, cuyo
funcionamiento no se precise, apagado. Esto es especialmente
importantes en pequeños laboratorios donde acabada la jornada de
trabajo no volverá nadie hasta el día siguiente.
Todo el personal debe realizar un escrupulosos lavado de manos con
agua y una solución antiséptica después de haber manipulado material
infeccioso y antes de salir del área de trabajo y al finalizar el trabajo de
forma especial, insistiendo en los espacios interdigitales e incluyendo
un cepillado de uñas, .
Material desechable contaminado: se esterilizará antes de tirarlo. Esto
incluye las muestras clínicas no usadas así como los medios de cultivo
que han sido inoculados, independientemente de que hubiera existido
desarrollo o no.
Material no desechable que contenga medios de cultivo inoculados: se
esterilizará también antes de proceder a su limpieza.
3.1Fuego:
El riesgo de incendio en el laboratorio es muy alto. Entre los agentes
fácilmente inflamables estan:
Disolventes inflamables como éter etílico, éter de petróleo,
hidrocaruros
Gases inflamables: butano, propano,hidrógeno, oxígeno, acetileno,
oxido nitroso…la mayoría de ellos forman mezclas explosivas con
el aire
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Segunda parte: Introducción al
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3.3 Electricidad:
determinada cantidad de corriente eléctrica puede ser suficiente
para producir la muerte en el cuerpo humano (25 miliamperios de
corriente continua u 80 miliamperios de corriente alterna).
Sobrecarga: es muy común en os laboratorios enchufar varios
equipos en un solo enchufe que e sobrecarga, se calienta y puede
causar un incendio
Conexión a tierra: Las conexiones a tierra de los equipos deben
tener la mínima resistencia y estar en perfecto estado.
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3.7 Agentes biológicos
Existe el peligro de contaminación biológica siempre que se
manipulan muestras contaminadas.
Los accidentes de laboratorio deben ser tratados lo antes posible para evitar
mayores complicaciones.
BOTIQUÍN.
Los botoquines deberán estar siempre con todo lo necesario
(existen listas con todo lo que debe llevar un botiquín) y se
colocarán en lugar visible y de fácil acceso.
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P= M. g
Donde P es el peso, M la masa, y g la aceleración de la gravedad.
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2.- BALANZA CONVENCIONAL.
2.1.- Descripción:
Unido a la cruz se encuentra el índice o fiel; que es una aguja que se mueve
sobre una escala graduada y marca el valor de oscilación al cargar la balanza.
Además la balanza lleva también unos tornillos móviles que permiten variar el centro
de gravedad de la balanza y el peso de los platillos; son los denominados
dispositivos de nivelación (realizar un dibujo de la balanza)
MI =M 2
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3.- CONDICIONES QUE DEBE CUMPLIR UNA BALANZA (propiedades).
3.1.- Exactitud.
Será tanto más exacta cuanto el valor medido por ella, más se aproxime al
valor verdadero.
3.2.- Sensibilidad.
Es el peso más pequeño que podemos medir con el aparato.
3.4.- Precisión
Se refiere al grado en que varias medidas individuales concuerdan entre sí.
El que las medidas sean precisas (si realizamos una medida n veces la
variación del valor obtenido es mínima) no garantiza que sean exactas.
Por ejemplo si utilizamos una balanza mal calibrada, los datos pueden ser
precisos pero inexactas. Se dice entonces que estamos cometiendo un error
sistemático.
Sin embargo si obtenemos datos con una exactitud alta, entonces también
tendremos una buena precisión
Según su construcción:
Balanzas mecánicas:
Balanzas granatario.
Balanza de tres vigas.
Balanza mecánica analítica.
Balanza de Mohr- Wesphal.
Balanzas Electrónicas.
Balanzas Granatario:
Su diseño es similar al anteriormente descrito para la balanza
convencional.
Para efectuar pesadas en este tipo de balanza basta con poner el
material a pesar en uno de los platos y a continuación equilibrar añadiendo las
pesas necesarias.
Los granatarios más utilizados en el laboratorio tienen las siguientes
características:
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a cero cuando todos los pesos gravan sobre el plato y permanece equilibrada
por el amortiguador de aire y los contrapesos.
Al poner el objeto sobre el plato su peso se obtiene descargando la
balanza por medio de mandos enumerados situados en el exterior de la misma,
que dan directamente la lectura del peso. Este tipo de balanzas tienen una
capacidad de carga de 200 gramos y una sensibilidad de 0,0001 gramos.
Balanza Electrónica:
Es una balanza de platillo único que utiliza una fuente electrornagnética
para contrapesar la carga colocada en el platillo. Actualmente, debido a su fácil
manejo, han desplazado a las balanzas mecánicas del laboratorio. En la
práctica el pesaje consiste en depositar los objetos a pesar sobre el plato y leer
por la pantalla o display el resultado.
Si para pesar una sustancia u objeto tenemos que hacer uso de un
envase que la contenga, pero no necesitamos conocer el peso del mismo,
podemos tararlo poniéndolo en el platillo y pulsando la tecla de tara, el display
se pondrá a cero. La sustancia puede ser ya pesada introduciéndola en el
envase.
Entre las reglas a tener en cuenta para una correcta utilización de una
balanza, se encuentran las siguientes:
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UNIDADES FISICAS:
1. Porcentaje o %
a. % en peso
b. % en volumen
c. % peso volumen
2. ppm (partes por millón)
UNIDADES QUIMICAS:
1. Molaridad
2. Normalidad
3. Molalidad
gramos de soluto
% en peso = ----------------------------------- x 100
gramos de disolución
ml de soluto
% en volumen = ----------------------------- x 100
ml de disolución
gramos de soluto
% peso volumen = ----------------------------- x 100
ml de disolución
gramos de soluto
ppm = ------------------------------------------------------
1.000.000 de gramos de disolución
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gramos de soluto
Nº de equivalentes gramo de soluto = ------------------------------
Peso equivalente
Peso molecular
Peso equivalente = ---------------------------------------------------
Valencia de transferencia electrónica
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B.- DILUCIONES
Diluir una disolución es aumentar la cantidad de disolvente sin aumentar
la cantidad de soluto. Con lo cual aumentará el volumen de disolución a la vez
que disminuye la concentración de la misma.
Sabemos que:
Esta expresión sirve para poder preparar una disolución diluida a partir
de otra más concentrada.
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ACIDOS BASES
Tienen sabor agrio (limón, Tienen sabor caustico ( lejía,
vinagre, vino) detergente, amoniaco)
En disolución acuosa En disolución acuosa
enrojecen el papel de azulean el papel de tornasol
tornasol
Decoloran la fenolftaleína Enrojecen la disolución
enrojecida por las bases alcohólica de fenolftaleína
Producen efervescencia con Producen una sensación
el carbonato de calcio jabonosa al tacto
Reaccionan con algunos Tienen sabor a lejía
metales disolviéndolos (
zinc, hierro….)
Neutralizan la acción de las Neutralizan la acción de los
bases acidos
En disolución acuosa dejan En disolución acuosa dejan
pasar la corriente eléctrica y pasar la corriente eléctrica y
experimentan experimentan
descomposición química. descomposición química.
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C- VOLUMETRIAS DE NEUTRALIZACIÓN o
VOLUMETRIAS ACIDO – BASE
Va x Na = Vb x Nb
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TERMINOS EMPLEADOS:
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atravesar una sustancia absorbente, con la concentración de aquella.
Log lo / I = K c
Io = Intensidad de la radiación incidente
I = Intensidad de la radiación emergente
K = Cte que depende del espesor de a muestra y de a absorvilividad.
C = Concentración de la sustancia absorbente.
Log lo/ I = a . b . c
La concentración de la sustancia absorbente es directamente proporcional al
logaritmo del cociente de la radiación incidente y la transmitida.
ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA.
En la practica el espectrofotómetro no mide I e lo sino que mide Absorbancia y
Transmitancia.
∎ Absorbancia = Cantidad de luz que absorbe la muestra.
∎ Transmitancia = Cantidad de luz que atraviesa la muestra.
A = log lo / I A = log 1 / T = - log T
T = I / lo - log T = A = a b c
Para que se cumpla la ley de Lambert es necesario una serie de requisitos
como son:
La radiación incidente debe ser monocromática
Las sustancias absorbentes deben actuar de forma independiente entre si.
La concentración debe encontrarse entre unos limites (limite de linealidad)
3.- ESPECTROFOTOMETRO
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perpendicularmente sobre el filtro una parte de la radiación atraviesa la primera
lamina metálica y otra parte de la radiación es reflejada. Al llegar a la segunda
lamina metálica se produce el mismo fenómeno siendo el resultado final que la
luz sale al exterior es de una sola longitud de onda.
-Filtros Monocromadores. Es un sistema que descompone la luz policromática
en las longitudes de onda que las integran, las separa y permiten seleccionar la
longitud de onda deseada. Un monocromador esta formado por:
Rendija de entrada. Por la que penetra la radiacion policromática.
Colimador que es una lento o espejos
Dispersor. Que es un prisma que desdobla la radiación en sus
longitudes de onda correspondientes
Una lente de enfoque
Una rendija de salida
DE HAZ SIMPLE:
DE HAZ DOBLE:
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5.- APLICACIONES DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA
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1.- INTRODUCCIÓN
2.- PROCEDIMIENTO
Fundamento
Consiste en realizar diferentes disoluciones de la sustancia que vamos a
analizar. En nuestro caso, partiremos de una disolución madre de
concentración conocida, a partir de la cual realizaremos distintas diluciones.
La sustancia de trabajo será el permanganato potásico(MnO4 K).
Material necesario
-Espectrofotómetro a 525 nm.
-Cubetas desechables.
-Pipetas.
-Matraz aforado de 100 ml.
-Tubos de ensayo.
Reactivos
Permanganato potásico
Agua destilada
3.- TECNICA
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La curva de calibración debe tener una zona recta que cumple la Ley de
Lambert-Beer. En esta zona debe estar incluida la concentración de la
muestra problema. En el caso de tener una concentración mayor, debemos
diluir la muestra hasta que su absorbancia pueda ser extrapolada. La
concentración así obtenida deberá ser multiplicada por el factor de dilución
para obtener el dato de concentración real de la muestra.
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