FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO

DOCENTE: NADIA CATALINA ALFONSO VARGAS
MICOLOGIA I

PRÁCTICA N° 2
PREPARACIÓN Y EVALUACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS

 Interpretar el fundamento de los diferentes medios de cultivo usados en microbiología

 Efectuar la preparación de medios de cultivo empleados para el estudio de hongos
 Comprender la utilidad de los medios de cultivo en micología.
 Distinguir los principales tipos de medios de cultivo utilizados en el laboratorio de
micología.

INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo constituyen un procedimiento indispensable en el estudio y diagnóstico

de los microorganismos. Son ambientes artificiales, semejantes a su medio natural, elaborados
con los nutrientes apropiados para cada microorganismo y las condiciones ambientales
favorables de pH, presión osmótica, gases, humedad, etc.Los medios utilizados en micología
deben contener los nutrientes suficientes para asegurar el desarrollo y reproducción de los
hongos (carbono, nitrógeno, vitaminas, oligoelementos, etc.) y un pH ligeramente ácido (6 –
6.3) para facilitar su crecimiento e inhibir al mismo tiempo el desarrollo de otros
microorganismos. Se puede añadir antibióticos antibacterianos para inhibir el crecimiento de
bacterias saprofitas que suelen contaminar las muestras.

Los medios se pueden preparar a partir de sustancias naturales, como leche desnatada, o a
partir de productos comerciales deshidratados, que contienen los ingredientes en cantidades
exactas.

Los medios comerciales traen adherida el recipiente la etiqueta con las instrucciones de
preparación y la proporción del medio deshidratado que debe pesarse para un litro. Por lo
tanto, basándose en esta proporción se pueden hacer los cálculos necesarios para las
cantidades requeridas.

Los medios de cultivo se deben esterilizar en autoclave a 121ºC, 15 libras de presión, durante
15- 20 minutos, a excepción de algunos que contienen proteínas y polisacáridos, los cuales se
deben esterilizar por filtración o autoclave a 110ºC, 10 libras de presión por 10 minutos.

Es necesario realizarles un control de esterilidad, que consiste en llevar a la incubadora a 37ºC

por 24 horas, una caja de cada lote cuando hay menos de 100 cajas o 3 unidades si el lote es
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mayor, en los cuales no se debe obtener desarrollo microbiano, en el caso contrario, se debe
determinar la causa de la contaminación y estos medios no se podrán utilizar.

Clasificación de los medios de cultivo

Sólidos: usados con frecuencia para aislamiento de una gran variedad

de microorganismos presentes en un inoculo. Presentan en su
composición un agente solidificante el agar, también pueden contener
gelatina o albumina.
C O N S I S T E N C IA Semisólidos: contiene una pequeña cantidad de agar (5% o menos).
Líquidos: el medio líquido típico es el caldo nutritivo. No contiene
ningún agente solidificante.

Natural: en su composición solo aparecen sustancias orgánicas.

Sintético: en su composición aparecen sustancias químicas definidas.
ORIGEN
Semisintético: en su composición aparecen moléculas naturales y
químicas

Nutritivos: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los

microorganismos.
Enriquecidos: están compuestos de un medio base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes
como suplementos. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes
exigencias nutricionales.
COMPOSICIÓN Selectivos: la selectividad se consigue alterando las condiciones físicas
del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos
específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies cuyo
crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento
de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros.
Diferenciales: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre
varios géneros y especies de microorganismos por medio de las características
que se presentan en el medio de cultivo.

MATERIALES

 Cajas de Petri estériles  Balanza

 Erlenmeyers  Plancha de calentamiento

 Probetas  Agitadores magnéticos

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 Agua destilada

 Autoclave

 Cinta indicadora de autoclave

 Cinta de enmascarar

 Cámara de flujo laminar

 Papel aluminio o tapones de

algodones

 Papel vinipel

 Guantes resistentes al calor

 Papel para pesar *

 Cinta de enmascarar *

 Marcador de vidrio*

 Agar PDA

 Agar Saboraud
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*Material que debe ser traído por los estudiantes

METODOLOGIA

Procedimiento:

1. Pesar los reactivos necesarios para preparar 150 ml de AGAR PDA O AGAR SABOURAUD
(por grupo).

2. Con la probeta, medir 150 mL de agua destilada y añadirla al Erlenmeyer (rotulado con
el medio que se va a preparar) con la cantidad de medio requerido.

3. Poner el Erlenmeyer sobre la plancha de calentamiento con un agitador para que la

suspensión se mezcle homogéneamente.

4. Cuando la solución esté homogénea, retirarla de la plancha, sacar el agitador y tapar

con un pedazo de papel aluminio y cinta de enmascarar. MARCAR CON NOMBRE DEL
MEDIO PREPARADO, FECHA, GRUPO.

5. La autoclave estará prendida previamente. Con cuidado se introduce en el interior de la

autoclave el Erlenmeyer tapado, marcado y con la cinta control de esterilidad. Cerrar
siguiendo las indicaciones.

6. Una vez que empiece a salir vapor, coloca la válvula en la autoclave, para que la presión
comience a subir. Tiene que llegar hasta 15 lb/in2. A partir de este momento, deberás
tomar el tiempo de 15 a 20 minutos (según medio a preparar). Deberás tener cuidado de
que la presión de la autoclave, nunca rebase los 20 lb/in2, ni está por debajo de los 15
lb/in2.

7. Transcurridos el tiempo, se desconecta la autoclave. Cuando este en cero, comienza a

abrir la válvula para liberar el vapor y que la presión comience a bajar. La autoclave puede
abrirse únicamente cuando el manómetro marque cero. ¡Antes no ya que podría explotar!

8. El autoclave se abre (con ayuda de los guantes resistentes al calor) procurando que
nadie quede de frente hacía donde se destapa a la tapa, ya que saldrá mucho vapor
caliente que causa quemaduras.

9. Servir el medio en las cajas de Petri estériles siguiendo la técnica aséptica. Las cajas no
pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros o dentro de la cámara de
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flujo laminar. Las tapas no se tocan por dentro con los dedos, ni se sacan del área de
esterilidad.

10. Cuando ya se han solidificados, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo

de medio, grupo y fecha de elaboración. Hacer prueba de esterilidad y guardar en el
refrigerador para utilizar la siguiente práctica.

FLUJOGRAMAS

1. PREPARACIÓN MEDIOS DE CULTIVO

Por grupo preparar Realizar los cálculos

un medio de cultivo correspondientes teniendo en
cuenta el recipiente a utilizar

Leer instrucciones
de la casa comercial

Esterilizar en la autocalve
para posteriormente servir
en la cajas de Petri

Se realiza el cálculo Se realiza el cálculo

para 5 ml para 20 ml

En un Erlenmeyer colocar la
Tape los medios con
cantidad pesada y agregar el
tapones de algodón
volumen adecuado de agua
Caliente en ebullición junto con los destilada
agitadores proporcionalmente
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2. PRUEBA DE ESTERILIDAD

Lleve el 5% de los medios esterilizados a

la incubadora durante 24 horas a 37°c

Compruebe que el medio de

cultivo quedo bien esterilizado
al no obtener crecimiento
microbiano

3. SIEMBRA EN MEDIO DE CULTIVO

HONGOS FILAMENTOSOS LEVADURAS

Sembrar con asa recta por punción

en el centro de la caja un trozo de
micelio que preferiblemente
contenga también esporas
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PRE- LABORATORIO

1. Mencione las condiciones que debe reunir un medio de cultivo

2. Complete la información solicitada en la tabla 1.

Tabla 1. Clasificación, características y utilidad de algunos medios de cultivo empleados en

microbiología.

MEDIOS DE CULTIVO COMPONENTES ESPECIALES UTILIDAD MICROBIOLOGICA

Simple

Enriquecido

Diferencial

De prueba

Selectivo

3. Investigue la composición de los medios que se utilizaran en la práctica e

identifique las fuentes de carbono y nitrógeno de cada uno.
4. Realice un flujograma del procedimiento para realizar siembra de levaduras en
medios de cultivo.

POST- LABORATORIO

1. Se requiere para el laboratorio de micología I la preparación de los siguientes

medios de cultivo. Realice las correspondientes formulas.
 20 cajas de PDA
 500 ml de agar SABOURAUD
 15 cajas de PDA con cloranfenicol

BIBLIOGRAFIA

 Manual de Laboratorio para el Manejo de Hongos Entomopatógenos. Lima, Perú;

Centro Internacional de la Papa (CIP), Lima, Perú, 62 p. 2004
 Arango, M. Castañeda, E. 1995 Micosis Humanas: procedimientos Diagnósticos.
Corporación para investigaciones Biológicas, CIB. Medellín. 195p.
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