Por: Espíndola Rodríguez Nadine Heidi

Semestre: 2018-1
Fecha: 25 de octubre del 2017
 Erythronium sp. Tradescantia sp. Ornithogalum sp.

• Condiciones bajo las que se da la división celular

Haberlandt • Explotar la totipotencialidad celular
1898 (1902)
Tagetes erecta Nicotiana tabacum

John Muir 1953

 Nickell 1956

¡Turbio!

Explantes
Steward y de raíz de
Shantz 1956 Daucus
carota
Phaseolus
vulgaris
 Embrio-
génesis

Metabolitos Crecimiento
y diferen-
secundarios ciación

Organo-
Metabolismo
génesis
Métodos
microbio-
lógicos
Conjunto de células aisladas distribuidas en
medio de cultivo líquido en movimiento.
Bioquímica Ciclo celular

Nutrición Genética
 Procesos
bioquímicos
vitales

Compuestos
bioactivos
 Análogos sintéticos

Rutas biosintéticas
complejas

Amplia
variedad de
estructuras
Taxanos
Taxus brevifolia

Annona muricata

Acetogenina
 Cultivo de
Inóculo o callo células libres

• Cambios
morfológicos
y bioquímicos
• Etapas de
desarrollo

Prolifera como • Facilita el intercambio

una masa gaseoso
desorganizada. • Elimina polaridad por
gravedad
Masa amorfa de • Elimina gradientes de
células libremente nutrientes
dispuestas.
• Crecimiento lento • Independiente de variaciones
• Baja concentración de estacionales y geográficas
moléculas activas • Sistema definido de producción
• Plantas no domesticadas • Nuevos compuestos
• Sobreexplotación • Producción rápida
Material Frascos Campana de flujo Etanol

Reactivos
Equipo
Pinzas de disección laminar Fungicida
Bisturí Agitador orbital Hipoclorito de sodio
Mecheros Centrífuga Agua destilada
Matraces Erlenmeyer Baño ultrasónico estéril
Probetas Rotavapor Medio Gamborg
Tubos de ensayo Vórtex Incubadora
Pipetas Medio Woody Plant
Hexano
Metanol
Diclorometano
 Familia Género Especie Medio Autor y año
Piperaceae Piper P. sernuum MS Delgado-
Pimienta Paredes, et al.,
azteca 2013
Caprifoliaceae Valeriana V. pyramidalis MS Carrera, et al.,
Valeriana de 2015
Quito
Rubiaceae Uncaria U. tomentosa MS Sánchez-Calvo
Uña de gato y Alvarenga-
Venutolo, 2015
Apiaceae Daucus D. carota MS García, 2016
Zanahoria
Taxaceae Taxus T. globosa Gamborg (B5) Tapia, 2014
Tejo Woody Plant
Medium
Hypericaceae Hypericum H. perforatum MS/B5 Gadzovska, et
Hierba de San al., 2012
Juan
Micronutrientes Miligramos/litro
KI 0.75
Macronutrientes Miligramos/litro
H3BO3 3.0
(NH4)2SO4 134
MnSO4 - H2O 10.0
KNO3 25000
ZnSO4 - 7H2O 2.0
MgSO4 250
Na2MoO4 -2H2O 0.25
CaCl2 – H2O 150
CuSO4 - 5H2O 0.025
KH2PO4 0.15
CoCl2 - 6H2O 0.025
Na2 EDTA 37.3 Vitaminas Miligramos/litro
FeSO4 - 7H2O 27.8 Myo-inositol 134
FeSO4 - 7H2O 27.8 Ácido nicotínico 25000
Piridoxina 250
Hormonas Miligramos/litro
Tiamina HCl 150
Kinetina 0.1
2,4-D 0.1 - 10
 Vitaminas Miligramos/litro
H3BO3 6.2
Nutrimento Miligramos/litro
MnSO4 – 4H2O 22.3
NH4NO3 400
ZnSO4 – 7H2O 8.6
MgSO4 370
Na2MoO4 -2H2O 0.25
KH2PO4 170
CuSO4 – 5H2O 0.25
CaCl2 – 2H2O 96
K2SO4 556
Quelatos Miligramos/litro
KNO3 990
Na2 EDTA – H2O 37.2
FeSO4 – 7 H2O 27.8
Taxus globosa

Solución de
Lavados 3 lavados
Fungicida hipoclorito
con etanol con agua
por 1 de sodio al
al 70% por 5 destilada
minuto 0.5% por 5
minutos estéril
Acículas y minutos
tallos jóvenes
 Cultivo de callos
Sembrar
Subcultivo de friables de 10 g Mantener en
inóculos en
Cultivo durante callos en B5 con en matraces de agitador orbital
medio
2 meses a 25-27° 2,4-D, BAP, y 250 mL con 100 a 110 rpm a 25-
Gamborg (B5)
C en oscuridad GA3, cada 10 o mL de Woody 27°C durante 12
con sacarosa
12 días Plant Medium o 15 días
3% y fitagel 0.3%
(WPM)
 Extraer
Llevar a
Después de 12 sedimentos Concentrar a
sequedad las
Añadir 1-2 mL h a 25°C, con 1 mL de Centrifugar a 25°C al vacío y
Agitar con fracciones
de hexano por centrifugar MeOH:CH2Cl2 12000 rpm por fraccionar por
vórtex por 10 orgánicas para
cada 50 mg de 12000 rpm por (1:1) en baño 20 minutos, bipartición en 1
seg y volver a redisolverlas en
PS en tubos de 20 minutos, ultrasónico por tomar los mL de CH2Cl2
centrifugar 500 μL de
vidrio desechar los una hora a sobrenadantes más 1 mL de
MeOH para su
sobrenadantes temperatura H2O
HPLC
ambiente
 Agitar en
Agregar a las Concentrar Redisolver los
vórtex por 2
suspensiones los extractos residuos en
minutos y
el 25% de su orgánicos 500 μL de
llevar a baño
volumen de con el MeOH para
ultrasónico
CH2Cl2 rotavapor la HPLC
por una hora
 100 rpm 25-27°C

Subcultivo 7-10
días después
 • Fase 1 (0-6): ción progresiva
• TS1: 2.5 mg/L retraso • Fase 4 (25-26):
• TS2: 2.0 mg/L • Fase 2 (7-20): lineal
• TS3: 1.5 mg/L exponencial • Fase 5 (27):
• Fase 3 (21- estacionaria
24):desacelera
• Carrera, E., Peña, C., Jadán, M., 2015, Establecimiento de suspensiones celulares a partir de segmentos foliares de
Valeriana pyramidalis Kunth, ECUADOR ES CALIDAD: Reviste Científica Ecuatoriana, 2 (1): 54-60.
• Delgado-Paredes, G. E., Kato, M. J., Rojas-Idrogo, C., 2013, Suspensiones celulares y producción de metabolitos
secundarios en cultivos in vitro de Piper sp., Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas,
12 (3): 269-282.
• Gadzovska, S., Maury, S., Delaunay, A., Spasenoski, M., Hagege, D., Courtois, D., Joseph, C., 2012, The influence of
salicylic acid elicitation of shoots, callus, and cell suspension cultures on production of naphtodianthrones and
phenylpropanoids in Hypericum perforatum L., Plant Cell Tiss Organ Cult, 113 (113): 25-39.
• García, B. A., 2016, Inducción y cultivo de células en suspensión de Daucus carota, Universidad de La Laguna, España,
pp. 26.
• Hurtado, M. D. V., Merino, M. M. E., 1987, Cultivo de tejidos vegetales, Editorial Trillas, México, 232 pp.
• Muñoz, C. D. R., Cuca, S. L. E., 2016, Compuestos citotóxicos de origen vegetal y su relación con proteínas inhibidoras de
apoptosis (IAP), Revista Colombiana de Cancerología, 20 (3): 124-134.
• Rivas-Morales, C., Oranday-Cardenas, M. A., Verde-Star, M. J., 2016, Investigación en plantas de importancia médica,
Omniascience, España, pp. 436.
• Sánchez-Calvo, L., Alvarenga-Venutolo, S., 2015, Callogénesis y establecimiento del cultivo de células en suspensión de
Uncaria tomentosa (Willd.) D. C. (uña de gato), Tecnología en marcha, 28 (1): 106-120.
• Street, H. E., 1973, Plant tissue and cell culture, Volumen 11, Blackwell,
• E. U. A., pp. 507.
• Tapia, B. N. P., 2014, Producción de taxol y taxanos relacionados en cultivos de células en suspensión de Taxus globosa
(Schltdl), Tesis de doctorado, UAM, México, pp. 133.
• Xu, J., Ge, X., Dolan, M. C., 2011, Towards high-yield production of pharmaceutical proteins with plant cell suspension
cultures, Biotechnology Advances, 29: 278-299.
¡Gracias por su atención!