PRÁCTICA

EXTRACCIÓN DE ADN1

OBJETIVOS

1. El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder
extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura
fibrilar.
2. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el
ADN se encuentra replegado.

MATERIALES POR GRUPO

Hígado de pollo 50 cc Alcohol de 96
Varilla de vidrio 10 gramos de sal de mesa
Machacador con recipiente 10 cc de Jabón líquido para
plástico resistente. platos
2 Vasos de vidrio sin Arena fina (No tierra blanca)
etiquetas Trocito de tela para filtrar
2 jeringa (Ver fotografía 3)
1 Probeta ó recipiente con
marcas de volumen
(capacidad mínima de 50 cc)

TECNICA
1.1 Triturar medio hígado de pollo con un machacador y un recipiente. Añadir arena para
que al triturar se puedan romper las membranas de los hepatocitos y queden los núcleos
sueltos. (Ver fotografía 1)

Fotografía 1

1
Prácticas de laboratorio (Bioquímica II). Centro Universitario del Norte.
1.2. Añadir al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua. Remover hasta hacer una especie
de papilla o puré, con el objetivo de mantener los núcleos en solución. (Ver fotografía 2)

Fotografia 2

2.1 Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado
por romper. Esto se hace con el objetivo de tener una visualización clara en la solución
resultante (Ver fotografía 3)

Fotografía 3

2.2 Medir el volumen del filtrado con una probeta (si no cuenta con probeta puede utilizar
un Erlenmeyer o un vaso de precipitado) . Ver Fotografía 4
 FOTOGRAFÍA 4

3.1 Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M (5.84 g en 50 ml de agua). Con
esto conseguimos producir la extracción de fibras de cromatina de la membrana nuclear. El
principio es provocar la crenación del núcleo y por consiguiente la fuga de las fibras hacia
la solución resultante (NaCl 2M)

Fotografía 5

3.2 A continuación, se añade 1 centímetro cúbico de SDS. (Nota: Si no se dispone de este

producto puede sustituirse por un detergente liquido de vajillas, o similar.). La acción de
este detergente es formar un complejo con las 12 proteínas y separarlas del ADN. Así nos
quedará el ADN libre de las 12roteínas que tiene asociadas. (El jabón es lo suficientemente
electronegativo para poder atraer al grupo de las proteínas de las histonas mas no así a
las fibras de cromatina)

Fotografía 6

4.1 Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol de 96:. Hay que hacerlo
de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la
interface precipita el ADN. (Ver Fotografía 7). El principio radica en que el ADN tiene una
región polar y no polar, entonces debido a que se encuentra inmerso en dos soluciones
con diferente polaridad, tiene la capacidad de permanecer en la interface de ambas.

Fotografía 7
4.2 Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla
se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de
la agrupación de muchas fibras de ADN. (Ver fotografía 8). Por ultimo coloque las fibras
de ADN en la palma de su mano. ¿No le parece increíble?

Fotografía 8

Aspectos a calificar
Materiales
Trabajo en equipo
Resultados
Reporte (Resumen, discusión de resultados, conclusiones y cuestionario) no más de 5
páginas.

Cuestionario

1. ¿Por qué se eligió el hígado para extraer el ADN?

2. Se puede extraer el ADN de otros organismos por medio de esta técnica (SI/NO,
por qué?
3. En que formas se encontraba el ADN en la solución resultante (Eurocromatina,
heterocromatina, cromosomas condensados).
4. ¿También se extrajo fibras de ARN, por medio de la anterior técnica?
5. Investigue y resuma una metodología de un análisis de ADN para el diagnóstico de
una enfermedad.