Practica No.
3 Espectrofotometría
Introducción
La espectrofotometría es uno de los métodos de
análisis más usados, y se basa en la relación que
existe entre la absorción de luz por parte de un
compuesto y su concentración. Cuando se hace incidir
luz monocromática (de una sola longitud de onda)
sobre un medio homogéneo, una parte de la luz
incidente es absorbida por el medio y otra transmitida,
como consecuencia de la intensidad del rayo de luz
sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad
de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz
transmitido.
Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a
medir, la muestra puede estar en fase líquida, sólida o
gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del
espectro electromagnético, la muestra es
generalmente disuelta para formar una solución. Cada
sustancia tiene su propio espectro de absorción, el
cual es una curva que muestra la cantidad de energía
radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en
cada longitud de onda del espectro electromagnético,
es decir, a una determinada longitud de onda de la
energía radiante, cada sustancia absorbe una cantidad
de radiación que es distinta a la que absorbe otro
compuesto.
La espectrofotometría ultravioleta- visible utiliza haces
de radiación del espectro electromagnético, en el
rango UV de 180 a 380 nm, y en el de luz visible de
380 a 780 nm. La transmitancia y la absorbancia se
miden en un instrumento llamado espectrofotómetro, la
solución del analito se debe contener en algún
recipiente transparente, tubo o celda.
Denominamos espectro de una sustancia a la
representación de absorbancia (A) en función de
longitud de onda (λ). Para hacer las determinaciones
cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda
correspondiente a un máximo, pues el error de
medición es mínimo y la sensibilidad máxima. Para
verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe
realizar una curva de calibración; absorbancia (A) en
función de concentración (c), para lo que se preparan
soluciones de la sustancia de concentraciones
conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de
onda elegida.
La ley de Beer afirma que la cantidad de la luz
absorbida por un cuerpo depende de la concentración
en la solución. Según la ley de Beer, si hiciéramos que
un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad
de luz que saldría del otro lado seria mayor que si
repitiéramos lo mismo en un segundo vaso, ya que
este ultimo las ondas electromagnéticas chocan con un
mayor número de átomos o/y moléculas y son
absorbidas.
La ley de Lambert dice que la cantidad de luz
absorbida por un objeto depende de la distancia
recorrida por la luz. Si tenemos dos vasos con la
misma cantidad de agua y la misma concentración de
azúcar, pero el segundo tiene un diámetro mayor que
el otro. Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un
rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de
luz que saldría del otro seria mayor que si se repitiera
esto en el segundo vaso, pues las ondas
electromagnéticas chocan con un mayor número de
átomos y son absorbidas por estos, como se explica
en la ley de Beer.[ CITATION UAM14 \l 1033 ]
La ley de BOUGUER-LAMBERT-BEER también se
conoce como ley de Beer-Lambert-Bouguer y fue
descubierta de formas diferentes e independientes, en
primer lugar, por el matemático y astrónomo francés
Pierre Bouguer en 1729. Luego por el filósofo y
matemático alemán, Johann Heinrich Lambert en 1760
y, por último, el físico y matemático también alemán,
August Beer en el año 1852. Se puede decir que esta
ley se trata de un medio o método matemático, el cual
es utilizado para expresar de que modo la materia
absorbe la luz. En óptica (Rama de la física que se Una vez obtenida la gráfica se determina la función
encarga del estudio de la luz) la ley de Beer afirma que matemática que presenta dicha recta a través del
la totalidad de luz que emana de una muestra puede tratamiento estadístico de regresión de los mínimos
disminuir debido a tres fenómenos de la física, que cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la
serían los siguientes: concentración de un analito. La siguiente ecuación
matemática corresponde a dicha función:
1. El número de materiales de absorción en su
trayectoria, lo cual se denomina concentración A=m c + n
A: Absorbancia. n: Intercepto de la recta
2. Las distancias que la luz debe atravesar a través de
m: Pendiente de la recta y que corresponde al
las muestras. Denominamos a este fenómeno,
producto entre absortividad a de la muestra y el
distancia del trayecto óptico
espesor b de la cubeta.
3. Las probabilidades que hay de que el fotón de esa [ CITATION Bru15 \l 1033 ]
amplitud particular de onda pueda absorberse por el
Objetivo
material. Esto es la absorbancia o también coeficiente
Aprender el uso del espectrofotómetro para determinar
de extinción.
los espectros de absorción y curvas de calibración de
Curva de Calibración. dos sustancias coloridas.

Uno de los métodos más utilizados para determinar la Metodología

concentración de una muestra problema, es el método
Experimento 1. Determinación de los espectros de
de la curva de calibración. Esta curva de calibración es
absorción.
una gráfica que relaciona la concentración de al menos
cinco soluciones de estándar de concentraciones Se tomaron alícuotas de aproximadamente 3mL de

conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a K2Cr2O7 y KMnO4. Se colocaron en celdillas por

la longitud de onda máxima (λ Max) (figura 5) separado para medir la absorbancia de cada solución
desde 420 nm a 600 nm de 30 en 30. Se calibro cada
longitud de onda con la solución blanco de H2SO4. SE
registraron las absorbancias de cada longitud de onda.

Experimento 2. Preparación de curvas de calibración

para cada solución estándar.
Se tomaron alícuotas de K2Cr2O7 y KMnO4 además de
la muestra problema. Se prepararon soluciones K2Cr2O7 diluciones
estándares por separado, las diluciones fueron 1:2, 0.16
0.14
1:4, 1:8 y 1:16 de cada solución. SE utilizo como 0.12 f(x) = − 0.03 x + 0.17
R² = 0.91
diluyente el ácido sulfúrico. Se registraron las lecturas 0.1
0.08
de cada una. 0.06
0.04
Resultados 0.02
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4
Tabla 1. Tabla de espectro de absorción de K2Cr2O7 y KMnO4

λ Abs λ Abs Gráfica 2. Curva de calibración de diluciones de K2Cr2O7

λK2Cr2O7 KMnO4 Tabla 3. Molaridad de las muestras problema.

420 0.14 420 0.11
450 0.66 450 0.13 K2Cr2O7 KMnO4
480 0.29 480 0.41 4x10-4 M 1.6x10-3
510 0.5 510 0.91 2x10-4 M 8.0x10-4 M
1x10-4 M 4.0x10-4 M
540 -0.2 540 1.08
5x10-5 M 2.0x10-4 M
570 -0.3 570 0.63 2.5x10-5 M 1.0x10-4 M
600 -0.3 600 0.13

Max. absorción K2Cr2O7: 435 [0.73]

Max. absorción KMnO4: 525 [1.19]

Tabla 2. Diluciones de K2Cr2O7 y KMnO4 KMnO4.

Dilución Abs λ Dilución Abs λ 150 nm−372nm

K2Cr2O7 KMnO4
% error= x 100=148
150
1:2 0.15 435 1:2 0.54 525
1:4 0.09 435 1:4 0.26 525
250 nm−527 nm
1:8 0.08 435 1:8 0.12 525 % error= x 100=110.8
1:16 0.05 435 1:16 0.05 525 250

Discusión

KMnO4 diluciones En teoría la longitud de onda del Permanganato de

0.6 potasio se da en 526 nm y dio en 525 a 1.19 como
0.5 máximo de absorción. El Dicromato de potasio, su
0.4 f(x) = − 0.16 x + 0.65
R² = 0.92 longitud de onda es de 380 nm, pero en la practica el
0.3
0.2
máximo de absorción se dio en 435 nm a 0.73
0.1
En las diluciones, se tomó de cada muestra 3mL y se
0
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 le agregaron otros 3 mL de ácido sulfúrico y de la
siguiente se tomaron otros 3 mL y se le agregaron 3
Gráfica 1. Curva de calibración de diluciones de KMnO4.
mL de ácido sulfúrico, asa para diluir la concentración
de cada solución y poder medir la absorbancia en el
espectrofotómetro. En el Permanganato la longitud de
onda que se utilizo fue de 525 pues en esta fue su
punto máximo de absorbancia y en el Dicromato en la que se calibro mal con el blanco, que no sirva
longitud de onda 435. correctamente, que la muestra no se prepara
adecuadamente, exceso de algún reactivo, el pulso
Se dieron cuatro soluciones problema donde se debía
para la preparación, los materiales que se utilizaron, la
medir la longitud de onda, en la primera que era de
concentración de la muestra, entre otros. Esto
Permanganato debía dar una longitud de onda de 150
interfiere de gran forma que los resultados no serán
nm y la segunda de 250 nm, pero dio el doble siendo
precisos, al menos que se utilice algún
en la primera 372 nm y en la segunda 527 nm. Con un
espectrofotómetro más moderno que son precisos o
porcentaje de error de 148, esto es un gran porcentaje
sea una investigación más seria donde el error debe
de error lo que nos indica que hubo un error en la
ser lo más mínimo. En esta práctica solo se aprendió a
medición o en la preparación de la muestra al no tener
utilizar el espectrofotómetro y elaborar curvas de
el instrumental exacto.
calibración, que no salieron como se esperaba por
Conclusión alguna de las causas antes mencionada, aunque en el
caso del Dicromato de Potasio no se realizó de manera
Para que el resultado se vea afectado y no sea
correcta las diluciones, ni el barrido, por lo tanto, es
correcto, hay muchos factores que pueden intervenir
poco confiable los resultados que se presentan.
en ese aspecto. El que los espectrofotómetros no den
la lectura correcta de la absorbancia puede ser por el
ruido que pudiera tener la habitación que los contiene,
Bibliografía
Brunatti, C. e. (Agosto de 2015). UBA. Obtenido de Introduccion a la espectrofotometria de Absorcion Molecular:
materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf

staff, U. (2014). Quimica Analitica instrumental. Obtenido de Calibracion: www.uam.es/personal-

pdi/ciencias/lhh345a/InstrumentalLecc1.pdf