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ENZIMAS

Proteínas especializadas en la catálisis de reacciones biológicas.


- Presentan alta especificidad, eficacia y precisión.
- Se han aislado cerca de 2000 enzimas diferentes y cerca de 200 han
sido cristalizadas.
- Manifiestan diferentes mecanismos de regulación.

Nomenclatura y Clasificación.

I.- Se designan con la terminación asa + sustrato. Pero con esto se cae en demasiados
errores , por lo que se requiere de otro sistema de clasificación.

II.- Nomenclatura numérica.


1.- Oxido-reductasas. 2.- Transferasas.
1.1 Actúan sobre CH-OH 2.1 Grupos de un átomo de carbono.
1.2 Actúan sobre C= O 2.2 Grupos aldehídicos o cetónicos.
1.3 Actúan sobre C = CH— 2.3 Grupos acilo.
1.4 Actúan sobre CH- NH2 2.4 Grupos glucosilo
1.5 Actúan sobre CH- NH— 2.5 Grupos fosfato.
1.6 Actúan sobre NAD y NADP 2.6 Grupos con azufre.

3.- Hidrolasas. 4.-Liasas (Adición a los dobles enlaces)


3.1 Esteres.
3.2 Enlaces glucosidicos. 4.1 C=C
3.4 Enlaces peptídicos.
3.5 Otros enlaces C-N 4.2 C=O
3.6 Anhídridos de ácido.
4.3 C=N—
5.- Isomerasas.
5.1 Racemasas
6.- Ligasas (Formación de enlaces con escisión del ATP)
6.1 C-O
6.2 C-S
6.3 C-N
6.4 C-C

Cofactores Enzimáticos.

La actividad de algunas enzimas depende solo de su estructura como proteína, otras


necesitan uno o más componentes no proteicos llamados cofactores. Estos cofactores
pueden ser un ion metálico, una molécula orgánica o ambos. Cuando este cofactor es una
molécula orgánica que no está unida covalentemente a la parte proteica se le llama
coenzima, o como un grupo prostético cuando si están unidos por éstos enlaces.

Holoenzima = Proteína + Cofactor


(Tiene actividad
enzimática)

Apoenzima = Proteína - (Sin el) cofactor


(Sin actividad
enzimática)

Metaloenzimas.

Son enzimas que precisan iones metálicos (Zn+2, Mg+2, Mn+2, Fe+2 +3, Cu+1 +2, K+, Na+, etc.)
como cofactores. En estos el ion metálico actúa:
1.- Centro catalítico primario
2.- Grupo puente para reunir el S y E formando un complejo de coordinación.
3.- Agente estabilizante de la conformación de la proteína enzimática en su forma
catalíticamente activa.
Ejemplos:
Zn+2 Cu +1 +2
Alcohol deshidrogenasa Tirosinasa
Anhidrasa carbónica Citocromo oxidasa
Carboxipeptidasa
Fe +2 +3
Mg+2 Citocromos
Fosfohidrolasas Peroxidasa o catalasa
Fosfotransferasas. Ferredoxina
Piruvato quinasa.
ATPasa de la memb. plasm. K+
Piruvato quinasa
Mn+2
Arginasa Na +
Fosfotransferasas ATPasa de la memb. plasm.

Coenzimas y grupos prostéticos.

Existen muchas y diferentes Coenzimas que contienen como parte de su estructura


vitaminas (substancias orgánicas que, en cantidades mínimas son vitales para la función
de todas las células). Dentro de las principales coenzimas tenemos a las siguientes:
NAD CoQ Lipoamida
NADP CoA CoCobamídicas
FAD Fosfato de piridoxal Biocitina
FMN Pirofosfato de tiamina CoTetrahidrofólica

Estas coenzimas actúan, por lo general, como transportadores intermediarios de


grupos funcionales, de átomos específicos o de electrones.
Si la coenzima se une covalentemente a la proteína, esta coenzima recibe el nombre
de grupo prostético. Si la coenzima está unida débilmente, actúa esencialmente como uno
de los substratos específicos de la enzima.
Características de las Enzimas.
A .- Disminuyen la energía de activación.
B .- Mediadoras de reacciones acopladas.
C .- Elevada especificidad
D .- Mecanismo de distorsión.
E .- Cinética característica.
F .- Inhibición enzimática.
F .- Mecanismos de regulación

A .- Energía de Activación. Las enzimas disminuyen selectivamente las energías de


activación de las reacciones químicas vitales.

Para que una molécula de reactivo o sustrato S, pueda llegar a transformarse en una
molécula de producto P, debe de poseer una energía mínima determinada para alcanzar el
estado de transición S………… P (Es un estado intermedio en el que los enlaces de S
están lo suficientemente distorsionados para que sea posible la conversión en P). A esta
cantidad de energía necesaria se le llama energía de activación.

Reacción No Enzimática Reacción Enzimática

La velocidad de reacción S---------- P pende del número de moléculas S que


alcanzan el estado de transición por unidad de tiempo.
B .- Las Enzimas como Mediadores de Reacciones Acopladas. Las reacciones pueden
liberar o requerir energía, pero se realizan en distintas partes de la célula o a diferente
tiempo, para lo cual requieren acoplarse, en lo cual intervienen las enzimas. Por ejemplo:

1.- A---B ----------------------- A+ B + Energía G (-)


2.- C+ D+ Energía -------------- C-----D G (+)

La energía de la reacción (1) puede ser suficiente para la reacción (2) pero como
ocurren en distintos lugares o tiempos de la célula se requiere de u acoplamiento
y/o transporte de energía gracias a las enzimas.

3.- A---B + X ------------------ A + B------X Forma activada con energía.

4.- B----X + Y ----------------- B + X---Y Se transfiere la energía aquí

5.- C + X----Y ------------------ C----X + Y : . Hay movilidad de la masa


y de la energía.
6.- C----X + C ----------------- C----D + X
: .
7.- Suma (A---B) + (C+D) ----------- (C-----D) + (A + B)

C .- Especificidad Enzimática.
Se dedujo la presencia de un complejo ES a partir de:
1.- La alta especificidad de la enzima.
2.- La forma de la curva de velocidad frente a la concentración de S
3.- El hecho de que frecuentemente los S protegen a las E de la inactivación
: .
En la reacción S---------------- P catalizada enzimáticamente , la enzima E y el
sustrato S deben combinarse durante la reacción : .

S +E ---------------ES --------------- EP ---------------E + P

Aunque la enzima participa en la secuencia de reacción, no se consume, por lo cual


un mol de enzima actúa sobre una gran cantidad de producto S-------- P

La elevada especificidad de las enzimas se explica por los siguientes dos modelos:

1.- Simil del Molde o Llave Cerradura. (Emil Fisher 1894)


“La enzima posee un sitio o región llamada sitio activo que es complementaria en
tamaño, forma y naturaleza química a la molécula del substrato”

2.- Enzima Flexible o del Ajuste Inducido (Koshland 1963)


“El sitio activo no necesita ser una cavidad geométrica rígida preexistente, sino una
disposición espacial precisa y específica de grupos R de aminoácidos que se
induce mediante el contacto con el substrato.”

El S se aproxima al sitio activo La unión del S induce Los análogos del substrato (inhibidores competitivos) se unen a la
la disposición apropiada enzima ayudados por el grupo C , pero los grupos catalíticos no
de los grupos catalíticos se disponen apropiadamente
A y B
El sitio activo de una enzima ocupa solamente una porción muy pequeña de la
molécula proteica, la cual debe ser grande para que los grupos activos tengan libertad
espacial para agruparse adecuadamente, estableciéndose por o tanto una diferente
estructura cuaternaria cuando esta se encuentra activa, diferente de la inactiva.

D.- Mecanismo de Distorsión. Modelo de la disociación por enzimas.


1.-Proximidad y orientación .- Los sitios activos de las enzimas están constituidos de
forma que alinean óptimamente los orbitales del sustrato y los grupos catalíticos. Hay una
orientación orbital, por lo que se restringe la libertad rotacional del sustrato (conformación
única).
2.- Inmovilización o anclaje del sustrato : . se forma un complejo E—S este se une
débilmente al sitio activo.
3.-Catálisis. Los enlaces que se forman entre E—S distorsionan por los grupos catalíticos
de la enzima, por lo que se llega al estado de transición activado.
4.- Formación de un complejo E—P.
5.- Liberación del producto y de la enzima.

Nota: Los modelos de condensación y transferencia son semejantes.


E.- Cinética enzimática.

Las reacciones químicas pueden clasificarse de dos maneras dependiendo de:

1.-El Número de Moléculas que deben de reaccionar para formar los productos de
reacción: Monomoleculares, bimoleculares, trimoleculares, etc.

2.-De acuerdo a su cinética se presentan diferentes ordenes de reacción:

Orden 0 .- Su velocidad es independiente de la concentración de cualquier reactivo,


catalizador, etc.
Primer Orden.- La velocidad es proporcional a la concentración de un reaccionante,
por ejemplo A ----------- B depende de la A
Segundo Orden.- La velocidad es proporcional al producto de la concentración de
los dos reaccionantes o a la segunda potencia de uno de los reaccionan-
tes, por ejemplo A + B ----------------- P ó 2 A ----------- P
Tercer Orden.- Son las más raras, su velocidad es proporcional al producto de tres
términos de concentración.
Ordenes de reacción mixtas.-

La velocidad de la reacción es influida por la concentración de los reaccionantes


bajo un conjunto de condiciones determinadas, por ejemplo al variar la temperatura, al
agregar un catalizador, el pH, la fuerza iónica, la concentración de los ligandos (sustratos,
productos, inhibidores, activadores, etc)

Cada enzima tiene un Número de Cambio que le es característico y que se define


como el número de moléculas de sustrato convertidas en producto por unidad de tiempo,
cuando la enzima queda completamente saturada por el sustrato.
Sistema Unireactivo Sencillo – Aproximación de Equilibrio Rápido.
(Henri, Michaelis y Menten)

La reacción más sencilla catalizada enzimaticamente implica 1 S que dé lugar a 1 P


por lo tanto:

K = constante catalítica de la reacción (Velocidad de la reacción)

El grado de reversibilidad depende del cambio de energía libre en la reacción, y


será independiente de las propiedades catalíticas de la enzima.

Las reacciones catalizadas enzimáticamente muestran una saturación con el


sustrato, lo que no se presenta en las reacciones no enzimaticas.

Efecto de la Concentración del Sustrato.

La concentración del sustrato determina la velocidad de la reacción y la frecuencia


de colisión E - - S , lo que varia enormemente al aumentar o disminuir esta concentración
de sustrato.
A una concentración baja, la velocidad inicial de
la reacción Vo es proporcional a la concen—
tración del sustrato, por lo tanto es una reacción
de primer orden.
Al aumentar la concentración de sustrato la ve-
locidad de la reacción disminuye y deja de ser
proporcional al la S , por lo que la reacción
es de orden mixto.
Al aumentar enormemente la S la velocidad de la reacción es independiente de la S y se aproxima a una velocidad constante, por lo que se torna de
orden 0 o se presenta el fenómeno de saturación de la enzima con sustrato (Toda la E esta en complejo ES).

Con esta gráfica se obtuvo la Constante de Michaelis:

Km = Concentración del sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad


de la velocidad máxima.
V max S
Vo = -----------------------
Km + S
Características de la Constante de Michaelis (Km):
1.-Se expresa en moles / lt.
2.-Es constante para una enzima en condiciones estrictamente especificadas.
3.-Una Km de menor valor indica mayor especificidad o afinidad de una
enzima por el sustrato.
4.-Su aplicación es válida solo cuando la S se está variando.
5.-Es útil para estimar la S necesaria para obtener la V max.
6.-Es la constante de disociación ES
7.-Si la S = Km, v= ½ V

Ecuación de Lineweaver - Burk o de la “Doble Recíproca”

Permite una determinación más exacta de la velocidad máxima (Vmax) y sirve


también para estudios acerca de la inhibición enzimática.

Representación de Eadie - Hoftee.

Dá los valores de Km y Vmax en forma sencilla.


Efecto de la Temperatura.
Dentro de cierto margen las reacciones enzimáticas se comportan como reacciones
químicas ordinarias, ya que su velocidad aumenta con la temperatura. Sin embargo se
alcanza un punto de inversión, ya que a temperaturas altas, la enzima se inactiva o
desnaturaliza por el calor ( > 60º y >>> 80-100ºC). Se presenta también una temperatura
óptima que se relaciona con la energía de activación. Las moléculas deben primero
absorber una cantidad de energía, solo entonces pueden reaccionar y convertirse en
productos. Las enzimas pueden ser liofilizadas sin alteraciones de consideración.

Efecto del pH.


Las ionizaciones del sustrato o del producto hacen que la constante de equilibrio
sea dependiente del pH y tanto la Km y la Vmax son función de la constante de equilibrio.
El pH puede desplazar la reacción enzimática a la derecha o a la izquierda
dependiendo si la reacción es de oxidación o de reducción, por ejemplo: NAD, FAD, CoQ,
oxidasas, reductasas, etc.
Si el sustrato tiene grupos ionizables, hay la posibilidad de que solo una de las
formas, la cargada o la no cargada sea atacada por la enzima. : .

Se explica porque la forma isoelectrica de la proteína es la


forma activa de la enzima. Aunque el centro activo debe de
poseer ionizados ciertos grupos.

F.- Inhibición Enzimática.

Los más potentes venenos de los organismos vivos ejercen su acción por inhibición
de determinadas enzimas, por ejemplo:
Cianuro Vs Citocromo oxidasa.
Arsénico Vs Enzimas en las que interviene el fosfato.
Di Aquil Halógeno P Vs Esterasas y enzimas proteolíticas.
(Gases nerviosos)

Los estudios de inhibición enzimática son un instrumento en el desarrollo de una


variedad de agentes quimioterapéuticos, por ejemplo los metales Vs microorganismos.

1.-Inhibición Competitiva.
Los inhibidores competitivos son substancias que tienen un fuerte parecido
estructural a los substratos naturales y compiten con estas substancias para unirse al
mismo sitio activo, cuando ambos, inhibidor (I) y sustrato (S) están juntos en presencia de
una enzima. Existen complejos ES y EI (Se consumen las moléculas de las enzimas
disponibles, la unión es reversible y hay conversión en producto, lo que se deduce al
analizar lo siguiente:

E + S + I ---------- ES + EI ---------- EP + EI ------- E + P

La velocidad depende de la I , de la S y de las afinidades relativas de I y S


por la enzima. En presencia de un inhibidor competitivo la Km aumenta y la Vmax es la
misma. Ejemplo Sulfas (I) y PABA (S) Ac. fólico (P)

Si las moléculas por el sitio activo,


se requiere mayor S para la -----
semisaturación. La Km es mucho
más grande cuando el sistema está
saturado y la Vmax permanece in-
variable como si no existiera inhi-
bidor.

2.- Inhibición No Competitiva.

Interactúan con las enzimas de varias maneras, reversible o irreversiblemente, en el


sitio activo o en otra parte, y puede por lo tanto no impedir la unión de la enzima al
sustrato, pero el complejo resultante es generalmente inactivo, y el efecto no puede ser
revertido por el simple aumento de la razón sustrato a inhibidor. Ejemplos: Cianuro, CO,
Azida, Mercurio, Plomo, Arsenicales, etc.

E + S + I ------------------ ESI

En este caso la Km se mantiene invariable, pero se modifica la Vmax.


La velocidad disminuye puesto que el sistema actuará
como si hubiera menos enzima., y esto será propor-
cional a la I , por lo que no puede ser vencida ---
aumentando la S .
La acción del inhibidor no puede ser anulada al aumentar
la concentración del sustrato, puesto que este no impide
la unión del inhibidor a la enzima.

G.- Regulación Enzimática.

1.- Regulación o inhibición de Feedback o Contrainhibición.

La enzima o una secuencia de reacciones es inhibida por el producto final:

A ---------- B ---------- C ---------- D ---------- E ---------- F ----------G

2.- Regulacion Alostérica.

Algunas enzimas poseen dos sitios activos, en una de ellas un sitio activo puede
afectar al otro de la misma molécula.
Características de las enzimas alostéricas.
a.- Poseen dos sitios activos.
b.- Tienen dos formas: T y R cuyo cambio depende del sustrato, por lo que su unión es
cooperativa.

Forma T Forma R
Baja afinidad por el Alta afinidad por el
sustrato. sustrato.

c.- Los inhibidores se unen a la forma T.


d.- Los activadores se unen a la forma R
e.- Los dos sitios activos pueden ser iguales por lo que se conocen como homotrópicos.
f.- Los dos sitios activos son diferentes por lo que se conocen como heteroptrópicos.
g.- Las gráficas obtenidas son diferentes (a las de Michaelis - Menten) en este caso son
sigmoidales.
h.- Las dos subunidades están en el mismo estado conformacional.

3.-Regulación por Zimógenos.

Existen enzimas que son sintetizadas inicialmente en forma inactiva y solo


posteriormente, cuando son excretadas, se convierten en su forma activa. Los precursores
inactivos se llaman zimógenos o proenzimas, por ejemplo:

Pepsinógeno = Pepsina
Tripsinógeno = Tripsina
Quimiotripsinógeno = Quimiotripsina
Procarboxipeptidasa = Carboxipeptidasa.

Para que haya conversión de éstos zimógenos se implica la modificación de su


nivel de estructura primario (Hay eliminación de diferentes aminoácidos que bloquean
aparentemente el sitio activo).
4.- Control Hormonal.

La lactosa sintetasa en las mujeres durante el embarazo se controla con diferentes


estímulos hormonales, por lo que se produce lactosa.

5.- Modificación Covalente.

La actividad enzimática puede ser controlada por la inserción covalente de un


pequeño grupo sobre la enzima.