12/11/2017

Biologia Molecular

• Data de apresentações: 28/11

SEMINÁRIOS
 Todos do grupo devem apresentar;
 Tempo mínimo 10 minutos tempo máximo15.
• Não precisa entregar trabalho escrito.
TEMAS
• Monogênicos: (também chamado de Mendeliano). É causado por mudanças ou mutações que acontecem
na sucessão de DNA de um único gene.
Anemia falciforme
Distrofia miotônica
Distrofia muscular de Duchene

Doença de Huntington
Doença de Tay-Sachs
Fenilcetonúria

Hemofilia A
Hipercolesterolemia familiar
Talassemia
Síndrome de Marfan
• Multifatoriais: (também chamado de complexo ou poligênico). É causado por uma combinação de fatores
ambientais e mutações em genes múltiplos.
Alzheimer
Mal formações congênitas
Cardiopatias congênitas

Certos tipos de câncer

Diabetes mellitus

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Regulação da expressão gênica

• o custo (em termos de energia e recursos) para fazer

uma proteína?
• Para uma proteína de tamanho médio (300
aminoácidos):
• 1350 moléculas de ATP
• 1650 átomos de carbono
• 540 átomos de nitrogênio

• Escherichia coli tem:

– cerca de 4000 genes que codificam aproximadamente
2000 proteínas.
• Imaginem o custo se todas estas proteínas fossem
produzidas todo o tempo.

Regulação da expressão gênica

• O intuito da Regulação é evitar síntese

desnecessária de metabólitos, desperdício
energético, acúmulo intracelular de
metabólitos tóxicos.

• Interação entre DNA e Proteínas Reguladoras

= Regulam síntese de RNAm e Atividade de
enzimas específicas.

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Regulação da expressão gênica

Como o controle da expressão

gênica pode ser exercido?

Existem muitas etapas do DNA à proteína

Regulação da expressão gênica

• Temos que lembrar que em um organismo

multicelular a sequência de DNA não muda – mesma
sequência em todas as células.

1.Porque as células são diferentes e realizam funções

diferentes?

R= Diferentes tipos celulares sintetizam diferentes

conjuntos de proteínas.

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Regulação da expressão gênica

• Uma célula pode alterar a expressão de seus

genes em resposta a sinais externos: temperatura,
hormônios.

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Regulação da expressão gênica

• A expressão gênica pode ser regulada em

muitas etapas na via que vai do DNA para o
RNA até a proteína.

• Todos os passos que levam do DNA à

proteína podem, em princípio, ser regulados.

Regulação da expressão gênica

• Tipos de controle ou etapas que podem ser

reguladas - Uma célula pode controlar as
proteínas que produz:

1) Controle transcricional
2) Controle do processamento do RNA
3) Transporte de RNA e controle da localização
4) Controle traducional
5) Controle da degradação do RNAm
6) Controle da atividade proteica

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Regulação da expressão gênica

Regulação da
Expressão gênica em
Procariotos

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•Regulação em Procariotos

• Inicio da transcrição
– principal controle: Para a maioria dos genes o
controle transcricional é o mais importante

• Transcrição reprimida

• Transcrição ativada

OPERON

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•Regulação em Procariotos
Lembre-se que:
• A região promotora de um gene atrai a enzima RNA
polimerase e a orienta a fazer uma cópia de RNA do
gene (DNA)
• Promotores (tanto de genes procarióticos como
eucarióticos) são compostos de:
- Sítio de iniciação: onde a transcrição efetivamente
começa.
- Sequências regulatórias de DNA: aproximadamente 50
nucleotídeos a upstream do sítio de iniciação. Esta
região contém as sequências necessárias para a RNA
polimerase se ligar ao promotor.

•Regulação em Procariotos

• Sequências regulatórias podem ser curtas = 10 pb

- computador gênico das bactérias

• Longas: algumas de eucariotos – mais de 10.000

pb - microprocessadores moleculares

• As sequências regulatórias não funcionam por si,

estas precisam de proteínas regulatórias do gene.

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•Regulação em Procariotos

Em bactérias, muitos genes estão em

complexos chamados OPERONS, e nestes
complexos normalmente existe uma proteína
repressora e uma ativadora da transcrição de
vários genes que, atuando em "parceria",
determinam certas características.

•Regulação em Procariotos

• Os Operons podem ser induzíveis:

transcrições são induzíveis pelo substrato.
Ex: operons para lactose, galactose e
arabinose.

• Ou reprimíveis:reguladas pelo produto por

co-repressão ou atenuação. Ex: triptofano

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Operon lac – E.coli

Glicídio
no leite

METABOLISMO E ABSORÇÃO DA
LACTOSE

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OPERON
• Promotor: a RNA polimerase se liga e inicia a
transcrição
• Operador: O possível repressor LAC pode se
ligar impedindo a ação da RNA polimerase
• Gene associados a sequencia regulatória
• CAP: proteína ativadora catabólica

OPERON LAC

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• AMPc (3´5´-adenosina-monofosfato-cíclico

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•Regulação em Procariotos
Operon lac
• Se a glicose estiver no meio de cultura da E. coli, ela
será preferencialmente usada como fonte de energia,
isto é, enzimas utilizadas no metabolismo dos outros
carboidratos serão pouco ou nada expressas. Este
efeito é chamado repressão por catabólito.

• Glicose reprime a expressão do operon lac – das 3

enzimas
• Ausência de lactose reprime a expressão do operon
lac
• Lactose induz a expressão do operon lac

Operon lac
• A transcrição do Operon lac também é influenciada pela
presença de glicose.
• A glicose é preferencialmente utilizada pela bactéria!!!

Processo chamado REPRESSÃO CATABÓLICA

OUTRA PROTEÍNA REGULATORIA – CAP

- A indução do operon lac requer tanto a presença de

lactose( o indutor) para inativar o repressor, quanto a
ausência de glicose para aumentar a concentração de
cAMP e permitir a ligação de CAP ao DNA.
- CAP é um regulador positivo que responde aos níneis de
glicose!!!!
- Repressor lac é um regulador negativo – que responde
aos níveis de lactose.

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a) Ausência de lactose e Operon lac

presença de glicose - não tem
transcrição!!!

b) Presença de lactose e
presença de glicose - baixa
transcrição!

c) Presença de lactose e
ausência de glicose - alta
transcrição!

Obs: Glicose é a energia fácil.

Se não tem glicose precisa
quebrar a lactose para
produzir glicose
Lactose = glicose +galactose

Operon lac
• Ausência de glicose - aumenta cAMP que liga-se com
CAP, ligando-se ao sítio de CAP, aumentando a
transcrição do operon lac.

• CAP-cAMP interagem com a RNA polimerase para

aumentar a taxa de transcrição.

• 3 regiões de ligação de proteínas:

1-Sitio CAP- liga uma proteína ativadora catabólica.
2-promotor lac- liga complexo RNA polimerase
3-operador lac- liga proteína repressora lac

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Operon TRP

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https://www.youtube.com/watch?v=9iQEHcyNl3k

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A síntese de um RNA mensageiro ocorre quando as

sequências reguladoras e o promotor do dado gene são
ativados por proteínas especiais: FATORES DE TRANSCRIÇÃO
(FDT)

 FDT BASAIS – NECESSARIOS PARA O PROMOTOR, SE

UNEM A SEQUENCIA TATA BOX PARA INÍCIO DA SÍNTESE
DE RNAm

Fatores de transcrição basais são mesmos para quase todos

genes-diz-se que são constitutivos.

 FDT ESPECÍFICOS - INTERAGEM COM O REGULADOR

DO GENE (AMPLIFICANDO OU INIBINDO A AÇÃO DO
REGULADOR-ATIVADORES OU REPRESSORES. são
facultativos.

FTB- basais ou gerais- ativam RNA pol II

FTE- específicos – num. De pol.- regula quantidade de RNAm a ser fabricada

Cada tipo de célula elabora uma seleção destes fatores. Alguns genes
podem possuir alguns reguladores em comum, mas nunca a mesma
combinação.

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Fatores de Transcrição
Os fatores gerais de transcrição são
responsáveis:
• Pelo posicionamento correto da RNA
polimerase no promotor.

• Ajudam na separação das fitas de DNA

para permitir o início da transcrição.

• Liberam a RNA polimerase do promotor

quando a transcrição se inicia.

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O enrolamento da cromatina influência a

atividade do gene

 Interfase - cromatina condensada

 Cromatina menos compactada é que tem DNA
transcricionalmente ativo

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Histonas e o enrolamento da cromatina

DNA deve estar desenrolado para dar acesso ao aparato da
transcrição e RNA pol., ao menos enquanto durar a
transcrição.

 Alguns fatores atuam nas histonas para desenrolar o DNA

O grau de enrolamento da cromatina é regulado pela

agregação ou remoção dos grupos acetila, metila ou fosfatos
nas caudas das histonas, que estão na porção externa dos
nucleossomos.

 ACETILAÇÃO/DESACETILAÇÃO
 A acetilação de algumas lisinas das histonas h3 e h4 diminui o
enrolamento da cromatina, favorecendo o acesso dos ftb ao
promotor do gene

 A desacetilação provoca o oposto- enrolamento da cromatina

 METILAÇÃO/DESMETILAÇÃO
 efeitos opostos da acetilação
 A agregação de grupos metila a uma das lisinas da histona H3
aumenta o enrolamento da cromatina (metilação), e a remoção
diminui (desmetinação)

 FOSFORILAÇÃO/DESFOSFORILAÇÃO
 Certas serinas e treoninas na cauda da histona H1 também
tem efeito oposto aos da acetilação.

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ACETILAÇÃO,
Diminuem enrolamento da
DESMETILAÇÃO, cromatina - propiciam a
atividade dos genes.
DESFOSFORILAÇÃO

DESACETILAÇÃO,
Aumentam o enrolamento
METILAÇÃO, da cromatina bloqueiam a
atividade genética.
FOSFORILAÇÃO

A metilação do DNA influência a atividade gênica

 Além das 4 bases (A,T,C,G), em alguns pontos o DNA possui

uma quinta base, a metilcitosina mC - possui um grupos metila (CH3).

 A metilação do DNA está restringida a citosinas seguidas por

Guaninas.

5’mC-G
3’G-mC

5’ mC G mC G....3’

Assim como a metilação das histonas,

 Existe estreita relação entre grau de metilação de genes e sua atividade
transcricional.

 Maior influencia onde ocorre metilação, no promotor pode anular a

atividade de um gene.

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Existem genes com regiões promotoras com alta proporção de CG (regiões

CG)

Numerosos genes inativos apresentam alto grau de metilação nos

dinucleotídeos CG

O gene pode estar metilado em um tipo celular e não em outro.

Ocorre herança das mC - metilase de manutenção somente após a

replicação.
Outros genes inativos perdem sua metilação ao se ativarem.
Pesquisas em diferenciação celular

Controles pós-transcricionais

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O transcrito primário de mRna

dos eucariontes é amplamente
processado. O RNA nascente
sofre uma série de alterações:

• Aquisição de revestimento
(cap) na sua extremidade 5’;

• Remoção exata de íntrons

(splicing);

Alguns mRNAs maduros

chegam a ser até dez vezes
menores em tamanho que seus
precursores.

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Importância do Capping 5’

a) Distingue mRNAs dos outros RNAs

b) Protege região 5´

c) Ajuda no transporte do mRNA para o

citoplasma

d) Importante durante tradução

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Cientistas calculam que mais de 60% dos

genes humanos apresentam splicing
alternativo, o que explicaria por que o
numero de tipos de proteínas humanas é
tão superior ao numero de genes.

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Próximas aulas
• 07/11- mutações
• 14/11- reparo

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