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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS


UNIDAD DE APRENDIZAJE: VIROLOGÍA

Detección molecular del virus papiloma humano de alto


riesgo (VPH-AR) en muestras cervicales

Producto Integrador de Aprendizaje

Nombre: Lizbeth Abigail Reyes Alanis 1733005

Docente: Dr. Juan Francisco Contreras Cordero

Grupo: 274 – Químico Bacteriólogo Parasitólogo

Ciudad Universitaria, Noviembre de 2019


Introducción

El virus del papiloma humano (VPH) hace referencia a un grupo de virus que se denominan
como papilomavirus y se ubican en la familia Papillomaviridae. Desde el punto de vista
clínico, los papilomavirus humanos que infectan la mucosa del tracto genital (los cuales están
ubicados en el género Alphapapilomavirus) se dividen en dos grupos: los de bajo riesgo, que
se asocian principalmente con verrugas genitales benignas, y los de alto riesgo, que presentan
un alto potencial oncogénico y son los agentes etiológicos del cáncer cervicouterino. El virus
del papiloma humano (VPH) es la infección de transmisión sexual más común en la
actualidad, toda persona puede contraer el virus al tener relaciones sexuales orales, vaginales
o anales sin protección con una persona que tenga el virus, y no se trasmite por los fluidos
como el semen o la sangre. La mayoría de las veces la infección no presenta sintomatología
por lo tanto la persona no es consciente de que es portadora del virus. El riesgo de infectarse
aumenta por el inicio de relaciones sexuales a temprana edad o un miembro de la pareja ha
tenido parejas sexuales múltiples, así como no usar preservativo. Debido a su manera de
contagio es que es importante portar información sobre el VPH a los adolescentes y como
tener una vida sexual sana con los cuidados debidos La prevalencia del VPH en la población
femenina general se sitúa entre el 10-15% a partir de los 30-35 años a nivel mundial, con
importantes diferencias entre países otro aspecto a evaluar es que las tasas de VPH son más
altas en la población adolescente con una prevalencia acumulada de hasta el 82% (Brown,
D., et al, 2005).

El VPH son virus pequeños, no envueltos con genoma de ADN de doble cadena por lo tanto
pertenecen al grupo I de la clasificación de Baltimore. Las partículas del VPH son
icosaédricas. La cápside está constituida por 72 capsómeros de la proteína más abundante
(L1) y otra proteína presente en la cápside es la L2, mientras que dentro de la cápside se ubica
el genoma viral. El genoma de los papilomavirus se encuentra asociado con proteínas del
hospedero, las histonas H2a, H2b, H3 y H4. Su genoma fue dividido en tres regiones: región
larga de control (LCR); una región que incluye genes de expresión temprana, da origen a
proteínas no estructurales (E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7) y una región que contiene los genes
de expresión tardía, que da origen a sus dos proteínas estructurales (L1, L2).
Para la detención y prevención del cáncer cervicouterino se aplica el sistema Cobas 4800,
automatizado de PCR a tiempo real, el cual detecta separadamente los genotipos 16 y 18, al
igual que otros 12 genotipos de alto riesgo (AR-VPH).

Antecedentes

1. Virus del papiloma humano (VPH) hace referencia a un grupo de virus que se
encuentra a su vez en un grupo mayor denominado comúnmente papilomavirus, y
que se ubica taxonómicamente en la familia Papillomaviridae (Santos-López, et al,
2015)
2. El VPH es un virus relativamente pequeño compuesto por un genoma de ADN de
doble cadena circular de aproximadamente 8000 pares de bases, que contiene un
promedio de ocho MAL, divididos en tres regiones. La primera es una larga región
de control (LCR), la cual tiene la función reguladora de la transcripción de los genes
virales E6 y E7. La segunda es una región temprana (E), que consiste en seis MAL
(E1, E2, E4, E5, E6 y E7), los que codifican para proteínas no estructurales implicadas
en la replicación y oncogénesis, la tercera es la región tardía (L) la cual codifica las
proteínas estructurales L1 y L2 (Prabhu, et al, 2013)
3. La asociación entre verrugas humanas y el virus del papiloma humano se registró
desde principios de los años 20 (Kreimer, et al, 2005).
4. En la década de 1970 se propuso que un virus podría ser el agente etiológico del
cáncer cervical en humanos. Y en la década de 1980 su grupo demostró con un
análisis de Souther blot la presencia de ADN de dos tipos de virus de papiloma en
biopsias de cáncer cervical, nuevos por aquel entonces: los virus de tipo 16 y los de
tipo 18 (Zur Hausen, 2009).
5. El virus del papiloma humano (VPH) es una causa muy importante de morbilidad y
mortalidad, y su adquisición está asociada a la actividad sexual (Castro, 2006).
6. Los tipos VPH 16 y 18 son los responsables de aproximadamente el 70% de los
cánceres de cervix, vagina y ano, y entre el 30-40% de los cánceres de vulva, pene y
orofaringe (Cates, 1999).
7. La presencia de verrugas genitales y papilomatosis respiratorias recurrentes son
causadas por los tipos VPH 6 y 11 (Bosch, et al, 2006).
8. Estudios epidemiológicos sugieren que el 75% de la población sexualmente activa
llega a estar infectada en algún momento de su vida (Koutsky, 1997).
9. En las edades más jóvenes, las tasas de VPH son más elevadas, la mayoría de estas
infecciones desaparecerán espontáneamente sin secuelas durante el primero o
segundo año (Cuzick, 2003).
10. Diversos estudios han propuesto que la infección por el virus del papiloma humano
(VPH) es una de las infecciones de transmisión sexual (ITS) más frecuentes y
actualmente se considera a ese virus un agente causal necesario para el cáncer cervical
(CC). De más de 200 genotipos de VPH descubiertos, 12 de ellos representan más de
95% de tipos virales asociados a CC (Muñoz, et al, 1993).
11. En México, el cáncer cervical es el segundo tumor maligno por el cual fallecen las
mujeres (10.4 %); así, con una población femenina estimada para el 2012 de 60
millones, 6240 mujeres mueren anualmente por esta enfermedad (Insinga RP, et al,
2008).
12. Para las infecciones del cérvix se cree necesaria la relación sexual, pero el VPH puede
infectar otros lugares como los genitales externos. También el HPV puede trasmitirse
por los dedos o juguetes sexuales, y se ha detectado en mujeres que nunca han tenido
coito con un hombre (Moscicki, 2005).
13. En referencia a la edad de inicio de la vida sexual, algunos estudios indican mayor
riesgo de infección por VPH en quienes iniciaron relaciones sexuales a edades
tempranas. Mayor riesgo en quienes iniciaron su vida sexual activa antes de los 17
años (Eppel, et al, 2000).
14. En los últimos años, distintos estudios aleatorizados han analizado la capacidad de la
determinación de secuencias genómicas del VPH-AR para detectar lesiones
premalignas de alto grado en comparación con la citología (Nam, 2010).
15. El test Cobas 4800 es aprobado por la FDA como prueba única para el cribado de
cáncer cervicouterino, siendo un método automatizado que informa si la muestra es
positiva o negativa para VPH-AR y, en el caso de tener un resultado positivo, indica
si está presente el VPH 16, VPH 18 u otro VPH-AR (Herraez-Hernandez, 2013)
Hipótesis

El sistema Cobas 4800 HPV Test detecta los VPH-AR, donde la infección se presenta en
mujeres menores de 30 años de edad. La infección decrece con la edad.

Objetivos

 Evaluar la detección de genotipos de VPH con cobas 4800, en específico los


genotipos 16 y 18
 Frecuencia de detección de VPH de alto riesgo (AR)
 Registrar la relación que tiene el VPH con el cáncer cervical en mujeres

Materiales y métodos

Se realizó un estudio con 169 muestras de mujeres consultadas en el Instituto del Seguro
Social (IMSS) de células exfoliadas recolectadas usando un cepillo citológico para
endocervix. Al tomar la muestra, se gira el cepillo varias veces en el vial que contiene el
medio para la Recolección de Células Cobas PCR. Dicho medio permite conservar las
muestras por un periodo que oscila entre los 6 meses a temperaturas en el rango de 2-30°C.

La detección del VPH se realizó con el sistema Cobas 4800 HPV Test, que consiste en un
ensayo cualitativo en tiempo real automatizado que permitió la detección individual de los
VPH-16 y VPH-18 y de otros 10 genotipos de alto riesgo (31, 33, 35,39, 45, 51, 52, 56, 58,
59, 66 y 68). Dicho sistema integra por el Cobas x 480, con el que se practica la extracción
y purificación simultánea de ADN del VPH y ADN celular a partir de las muestras cervicales
sin algún tratamiento anteriormente; y el Cobas z 480, con el cual se realizara la detección
del ADN de los VPH-AR mediante la amplificación de una secuencia de 200 pares de bases
de la región L1 del genoma del VPH y del gen de la β-globina humana mediante la
amplificación de una secuencia de 330 pares de bases usada como control interno para
validación del proceso. Sondas TaqMan, marca con cuatro diferentes fluróforos, utilizados
para la detección de los productos amplificados durante la PCR y los resultados serán
interpretados por el software como “negativo”, “VPH-16”, “VPH-18”, “otros VPH-AR” o la
combinación de los tres últimos.
Resultados

Se incluyeron 169 muestras de mujeres pacientes del IMSS, entre enero y junio de 2019, las
cuales accedieron a participar en el estudio. Las pacientes tenían una edad promedio de 38±11
años, identificando que el 56% tenía entre 30-50 años. El inicio de las relaciones sexuales de
dichas pacientes fue a los 17±3 años. En promedio, el número de parejas sexuales fue de 2
(mínimo 1-maximo 6). El promedio de las pacientes que consumían anticonceptivos fue de
17,8%, y se declaró fumadora el 6,7% de ellas.

Teniendo diversos datos, se pudo observar que el 15,8% (27/169) de las mujeres evaluadas
fueron positivas para VPH-AR, observando que la infección va decayendo con la edad, el
mayor número de casos se presenta en el grupo de mujeres menores de 30 años.

Infecciones múltiples fueron detectadas en el 2% (4/169) de las muestras analizadas y en el


15% (4/27) de los casos positivos de VPH.AR. El VPH-16 fue encontrado en todos los grupos
de edades y represento el 22% (6/27) de los casos excluyendo las co-infecciones con otros
VPH-AR. El VPH-18 se presentó junto con otros VPH-AR únicamente, representando el
7,4% (2/27).
Discusión

Ser reporto entre las mujeres estudiadas una frecuencia de infección por VPH-AR del 16,0%,
valor similar descrito en otros países latinoamericanos como Costa Rica, 16%; Colombia
14,8% y Chile 15,8%, obtenido en pacientes sin historia previa de citología anormal (Bruni,
et al, 2010). En el grupo de mujeres menores de 30 años se encontró el mayor número de
casos y fue descendiendo con la edad, concurriendo con lo registrado en América Latina que
se caracteriza por un pico antes de los 25 años, representando infecciones recientes. Sin
embargo, no se presentó un segundo pico en mujeres mayores de 50 años, como se ha
observado en otros estudios, lo que se podría adjudicar al comportamiento sexual de las
mujeres o sus parejas (Almonte, et al, 2010). En mujeres jóvenes, menores de 30 años, la
infección por VPH, incluyendo los VPH-AR se erradica en más del 80% de los casos. Se ha
confirmado que el cáncer cervical invasivo por VPH-16 y VPH-18 se presenta en mujeres
jóvenes (Mateos, et al, 2011). Debido que la utilización de una prueba de detección de ADN
de VPH-AR que logre identificar por separado los genotipos 16 y 18 podría identificar grupos
de mujeres con mayor riego a desarrollar lesiones y cáncer de cuello uterino, para llevar un
seguimiento riguroso. El sistema Cobas 4800 HPV Test utilizado en este estudio presenta la
ventaja principal de identificar separadamente estos genotipos, además de otras como la
facilidad del flujo de trabajo del laboratorio, la automatización de la prueba, la inclusión de
un elevado número de muestras y la ausencia de reactividad cruzada con genotipos no
carcinogénicos. Es una de las metodologías de elección actualmente para los programas de
tamizaje del cáncer cérvico-uterino (OPS, OMS, 2010).

Conclusiones

Se estudió un total de 169 muestras cervicales de pacientes que concurrieron al Instituto


Mexicano de Seguro Social (IMSS), se utilizó el sistema Cobas 4800 HPV Test, donde se
obtuvo una frecuencia de infección por VPH-AR del 16%, el mayor número de casos
apareció en mujeres menores de 30 años. El VPH-16 se detectó en todos los grupos de edades.
Se evidencia la necesidad de aumentar el número de pacientes estudiadas para obtener un
valor con más precisión. La finalidad de este estudio mostrar que la prevención y control del
cáncer cérvico-uterino es una prioridad de salud pública por su alta incidencia y mortalidad.
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