Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Análisis Químico Clínico II
Nombre del docente: Q.F. Patricia Jiménez Granizo Mg.
Informe #9: Determinación de Colesterol
Nombre del estudiante: Heidy Yomira Toala Laje
Semestre: Noveno Grupo: 2 Paralelo: “C”
Objetivos de la práctica de laboratorio
 Determinar de forma cuantitativa la concentración de colesterol presente en suero, mediante un método
enzimático.
Instrucciones o consideraciones previas
El perfil lipídico es uno de los exámenes de laboratorio más requeridos. En general, se solicita para la pesquisa
inicial del riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular producto de una dislipidemia, o sea, un trastorno en
el metabolismo de lípidos.
También es útil para el seguimiento o control del paciente que se encuentra con una dieta o medicamentos para
disminuir el colesterol y, a su vez, el riesgo de enfermedad cardiovascular, incluye los siguientes analitos:
 Colesterol total
 HDL Colesterol
 LDL Colesterol
 Triglicéridos
A partir del perfil lipídico, se puede obtener un coeficiente denominado Índice Aterogénico que representa la
relación Colesterol total/HDL Colesterol. La determinación de colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnóstica
limitada. Sin embargo, su concentración varía de manera más o menos predecible en un gran número de condiciones
clínicas. Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formación de ateromas dado que las
complicaciones arterioscleróticas prevalecen en individuos hipercolesterolémicos.
Fundamento del método
Tanto el colesterol libre como el esterificado presentes en la muestra originan, según las reacciones acopladas
descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría:
esteres de colesterol lipasa
  colesterol  ácidosgrasos
colesterol  O2 CHOD
 colesten  3  ona  H 2O2
2H2O2  4 - aminofenazona  fenol POD
 quinona coloreada  4H2O
Condiciones de la reacción

Intervalo de referencia:
 El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los siguientes valores de
colesterol:
 Deseable: < 200 mg/dl
 Moderadamente alto: 200 – 239 mg/dl
 Elevado: ≥ 240 mg/dl
Reactivos de laboratorio
A. Reactivo
 Pipes 35 mmol/L
 Colato sódico 0,5 mmol/L
 Fenol 28 mmol/L
 Colesterol esterasa > 0,2 U/mL
 Colesterol oxidasa >0,1 U/mL
 Peroxidasa >0,8 U/mL
 4-aminoantipirina 0,5 mmol/L pH 7.0
S. Patrón de colesterol
 Colesterol 200 mg/Dl (5,18 mmol/L). Patrón primario acuoso.
Muestra
 Suero G 17/12
Materiales de laboratorio
 Pipeta automática de volumen variable (5-50 µl).
 Pipeta graduada de 10 mL.
 Tubos de ensayo (12 x 100 mm).
 Gradilla.
 3 Cubetas de caras paralelas (1 cm).
 Reloj cronómetro.
 Punta para pipeta color amarillo (2-200 µl).
 Probeta de 100 ml.
Equipos de laboratorio
 Espectrofotómetro UV-vis.
 Baño de agua a 37 ° C.

Espectrofotómetro UV-VIS. Baño maria

Marca Genesys 20 Marca Medinger
Modelo 4001/4 Modelo GDR
Catálogo 4001 Referencia 12-8-1MT
SN 3SGE113009 Temperatura 37°C
Voltaje 110V Código 4801119
Código 4804177

Actividades a desarrollar

Tubos Blanco Patrón Muestra

Patrón colesterol (S) ----------- 10 uL -----------
Muestra ----------- ------------- 10 ul
Reactivo A 1 ml 1 ml 1 ml
Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a
temperatura ambiente (16 – 25°C) o 5 minutos a 37°C.
Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra a 500 nm
frente al blanco. El color es estable al menos 2 horas.
Resultados obtenidos (Observaciones, cálculos, datos, ecuaciones, tablas, gráficos, figuras, fotos)

Muestra: Suero G 17/12

Concentración del standard: 200 mg/dl
Absorbancia del standard: 0.377
Absorbancia de la muestra: 0.315

Colesterol mg/dl = Concentración del standard x 200 mg/dL = 0.315 x 200 mg/dl = 167,10 mg/dL.
Absorbancia del standard 0.377

Descripción Resultado
Fecha 15/01/2020
Identificación de la muestra G 17/12
Hora inicio ensayo 8:36 am
Absorbancia del blanco 0.000
Concentración del estándar (mg/dl, umol/l) 200 mg/dL
Absorbancia del estándar 0.377
Absorbancia de la muestra 0.315
Concentración de la muestra (mg/dl, umol/l) 167,10 mg/dL.
Hora de finalización del ensayo 8:56 am
Analista Madelyne Rivera
Observaciones El valor de colesterol presente en la muestra se encuentra
dentro de los valores de referencia.

Imagen 1. Reactivo A y patrón de Imagen 2. Muestra empleada para

colesterol empleados para el análisis. determinar la concentración de colesterol.

Imagen 3. Tubo que contiene 10 ul de Imagen 4. Tubos colocados en baño

la muestra y 1 ml del reactivo A. maria por 5 minutos a 37°C.
Conclusiones
 Se determinó de forma cuantitativa la concentración de colesterol presente en la muestra (suero) mediante un
método enzimático, el cual el resultado obtenido indica que se encuentra dentro de los valores de referencia.
Recomendaciones
 Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
 Los reactivos son para uso diagnóstico “in vitro”.
 Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de química clínica.
 Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a las leyes ambientales vigentes.
 Los reactivos provistos son estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
 Suero, libre de hemólisis.
 Las muestras deben ser preferentemente frescas.
 Las muestras de suero pueden conservarse hasta 12 horas en refrigerador (2-10 °C).
 El nivel del agua en el baño no debe ser inferior a de los reactivos en los tubos.
 La reacción es lineal hasta 500 mg/dl. Para valores superiores, diluir ½ con el Blanco y repetir la lectura
multiplicando el resultado final por 2.
 Manipular con precaución los equipos.
 Medir correctamente las alícuotas indicadas.
 Rotular los tubos donde va a realizar las determinaciones.
 Durante el procedimiento leer cuidadosamente el inserto.
 Usar el equipo de protección adecuada.
Bibliografía
 Wiener Laboratorios S.A.I.C. Colestat enzimático. Wiener lab. Rosario-Argentina.