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TOMA DE MUESTRAS BACTERIOLÓGICAS INSTRUCTIVO.
Toda la información diagnóstica que el laboratorio de microbiología puede proporcionar, depende de la

calidad de la muestra recibida. Por ello, una toma mal realizada, pobremente recogida o mal transportada
determinará un posible fallo en la recuperación de los agentes patógenos, que puede inducir a errores
diagnósticos, e incluso a un tratamiento inadecuado del enfermo. Este hecho es bien conocido por los
microbiólogos, no obstante la mayoría de las muestras son obtenidas por otros profesionales de la salud en
diversos servicios clínicos, por lo que es necesaria la educación continua de dicho personal sanitario, al que
hay que advertir del gasto útil y el error de los datos obtenidos a partir de un estudio realizado de forma
inadecuada.
El OBJETIVO de este trabajo es realizar una puesta al día de la toma, transporte y conservación de las
muestras microbiológicas reseñando el material necesario, la técnica de obtención, volumen, número y
transporte de cada una de ellas, según las distintas localizaciones y características especiales de aquellas o de
los microorganismos a investigar.
Normas básicas generales:

-Las muestras deben ser tomadas preferentemente por el personal del área y/o consultar a dicho personal
sobre la toma de muestra y condiciones adecuadas de muestra en el momento de recepción de la misma.
· Las muestras deben venir acompañadas de su respectiva hoja de pedido donde deben llenarse todos los
datos solicitados por el laboratorio. En todos los casos es imprescindible: 1) nombre completo, 2) edad, 3)
sexo, 4) servicio (piso, sala, cama) 5) tipo de muestra: urocultivo, exudado de herida quirúrgica de tórax, pus
de colección intrabdominal, etc. 6) consignar si el paciente recibió antibióticos en los últimos 7 días, si es así
anotar nombre del ATB, dosis y vías de administración.
· Los viales, tubos o frascos donde se colocan las muestras deben ser estériles con tapón hermético. Las
muestras se deben obtener antes de iniciar el tratamiento antibiótico o antiviral.
Cuando esto no es posible, se obtendrán justo antes de la administración de la dosis del antimicrobiano, o
tras 48 horas de finalizado el tratamiento. · Hay situaciones en que es conveniente la toma junto a la cama del
enfermo, como en hemocultivos y líquido cefalorraquídeo (LCR), pero en otras es imprescindible realizarla
en el propio laboratorio como en exudados genitales que requieren una observación en fresco al microscopio
y/o siembra.
· En líneas generales en todas las localizaciones es necesario que la toma se efectúe en el sitio exacto de la
lesión con las máximas condiciones de asepsia que eviten la contaminación con microbios exógenos, que la
muestra nunca se ponga en contacto con antisépticos o. desinfectantes, que la toma sea lo más precoz posible
y ”siempre se prefieran los productos purulentos recogidos por aspiración directa con jeringa o tejidos
sospechosos, a las muestras tomadas con hisopos o torundas con algodón.”
· Todas las situaciones no previstas en este manual deben ser consultadas con los especialistas en
Microbiología antes de tomar las muestras.
· En caso de no disponer de alguno de los sistemas de transporte recomendados consultar con la Sección
Microbiología que será la que deberá instrumentar las soluciones alternativas.
· Criterios de Rechazo de Solicitudes y/o Muestras: Si las solicitudes y/o las muestras no cumplen los
requisitos mínimos indispensables para su correcto procesamiento el laboratorio deberá aclarar las
discrepancias con el servicio que las envío, previo a su realización y en algunos casos será imposible su
procesamiento hasta tanto se envie la muestra correcta. Los siguientes son algunos ejemplos de ello:
Discrepancia entre la identificación del paciente que figura en la solicitud del exámen y la que figura en el
contenedor de la muestra. Acción: Hablar con el servicio que envío la muestra y no procesarla hasta que se
solucione la discrepancia. Para muestras únicas (LCR, materiales quirúrgicos) se procesará pero no se
enviará el informe.
No se indica en la solicitud de exámen el tipo de muestra a analizar y/o procedencia anatómica del mismo.
Acción: Llamar al servicio que lo envío. No se procesará hasta tanto se conozcan esos datos, imprescindibles
para la realización del estudio.
Muestra enviada en frasco no estéril o con conservantes (formol). Acción: Informar al servicio que lo envío y
solicitar nueva muestra.
Muestra enviada en envase o tubo con pérdida o derrame Acción: No procesar. Esterilizar la muestra y
solicitar una nueva.
Muestra inadecuada para realizar el estudio solicitado. Acción: No procesar. Informar al servicio que la
muestra es inadecuada y cual muestra deberá enviar.
Cultivo anaerobio solicitado en exudado faríngeo, expectoración, orina, secreciones vaginales, úlceras o
fístulas entre otras. Acción: Comunicarse con el servicio y explicar las razones.
Muestra en cantidad insuficiente para realizar los exámenes solicitados.
Acción: Solicitar muestra adicional, si no es posible establecer prioridades de procesamiento en acuerdo con
el médico tratante.
Muestras repetidas por más de una vez en el mismo día, excepto hemocultivos.
Acción: Procesar una sola muestra por día y comunicarse al servicio para que justifique el procesamiento de
las muestras restantes.
Muestra evidentemente contaminada.
Acción: Descartar la muestra y solicitar otra.
1 MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO
1.1 MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
1.1.1 EXUDADO FARINGEO

Se utiliza para el diagnóstico de faringitis estreptocóccica. Excepcionalmente se pueden requerir búsqueda de
otros patógenos (por ejemplo: Neisseria gonorrhoeae) consultar con el laboratorio.
A. MATERIAL NECESARIO.
- Baja lenguas (imprescindible).
- Hisopo de algodón con medio de transporte. (Stuart, Amies).
B. TÉCNICA.
Bajo visión directa, con la ayuda del bajalengua, se tocará con el hisopo en todas las partes con exudado,
membranas o inflamación. Se deben frotar las criptas tonsilares y la faringe posterior. En lo posible no tocar
la mucosa oral, lengua, úvula ni dientes.
C. NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
Basta con un hisopo.
D. TRANSPORTE Y CONSERVACION.
Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).
Si no es posible, conservar en heladera a 4ºC hasta 12 horas.
D. OBSERVACIONES.
Se investigará rutinariamente la presencia de Streptococcus beta-hemolítico del grupo A (S.pyogenes) y otros
grupos beta hemolíticos como C y G.
1.1.4 EXUDADO NASAL

Esta muestra solo se utiliza para buscar portadores de S.aureus o en el diagnóstico etiológico de
Impétigo. No es útil para el diagnóstico etiológico en casos de rinitis, rinosinusitis ni en casos de otitis media
ni cuadros respiratorios altos prolongados. Recordamos que alrededor del 30% de la población es portadora
de este microorganismo a nivel nasofaríngeo por lo cual su hallazgo no tiene habitualmente significancia
clínica salvo en situaciones especiales. En el personal de salud sólo se realizará la búsqueda de portadores en
el caso de brotes de infecciones en los que no se ha encontrado otra fuente de infección. Este tipo de
investigación se realizará en coordinación con el Comité de Infecciones Hospitalarias, quien determinará la
oportunidad de su realización.
- Hisopo de algodón con medio de transporte.
B. TÉCNICA.
Tomar muestra profunda de ambas fosas nasales con el mismo hisopo, previamente embebido en suero
fisiológico estéril.
Basta con un hisopo.
D. OBSERVACIONES.
Se deberá consignar en el boleto de pedido si hay lesiones o costras a nivel nasal. (Muy importante).
1.1.5 MUESTRAS DE OÍDO

1.1.5.1 CONDUCTO AUDITIVO EXTERNO
Solo se utiliza para conocer la etiología en caso de otitis externa. Suele tratarse de muestras de mala calidad
y en ningún caso resultan representativas de los microorganismos existentes en el oído medio.
A MATERIAL NECESARIO.
- Hisopos de algodón con medio de transporte.
- Suero fisiológico estéril.
B. TÉCNICA.
Primero limpiar posibles restos de pus o secreciones del conducto auditivo externo con hisopo
humedecido en suero fisiológico y descartar. Luego tomar muestra del oído indicado o de ambos
por separado frotando con nuevo hisopo contra las paredes.
Un hisopo para cada oído.
1.1.6 MUESTRAS OCULARES.

Por vecindad estas muestras se estudian con las del tracto respiratorio superior.
1.1.6.1 EXUDADO CONJUNTIVAL

Este tipo de muestras sirve para el diagnóstico de conjuntivitis de causa bacteriana. Estas son a menudo
unilaterales. De todas maneras se solicita que se haga la toma de muestra de ambos sacos conjuntivales por
separado, de manera de poder valorar la flora normal. Siempre que sea posible se realizará la toma de
muestra en el Laboratorio de Microbiología.
- Hisopos con medio de transporte.
B. TECNICA.
- Debe obtenerse la muestra antes de la instilación de los analgésicos locales, colirios o antibióticos.
- Con un hisopo mojado en suero fisiológico frotar sobre la conjuntiva tarsal inferior y el fórnix de afuera
hacia adentro.
- Para la investigación de Chlamydia trachomatis, everter el párpado y frotar con una torunda la superficie
conjuntival con hisopo provisto por el laboratorio para investigación de Chlamydias.

Deberá utlizarse un hisopo para cada ojo.
D. TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN.
El transporte deberá ser inmediato. Cuando no sea posible, se utilizarán hisopos con medio de transporte tipo
Stuart o Amies, que se mantendrán a temperatura ambiente. Para Chlamydia se utilizará un medio de
transporte específico que depende de cada laboratorio.
E. OBSERVACIONES.
Los cultivos de conjuntiva preoperatorios no son útiles. El número y tipo de microorganismos de la
conjuntiva normal varía diariamente, por lo que estas muestras no son válidas, excepto en el caso de signos
inflamatorios a nivel ocular.
2 SANGRE.
2.1 HEMOCULTIVOS.
· Frascos de hemocultivo proporcionados por el Laboratorio de Microbiología..
· Ligadura de goma.
· Jeringas y agujas de punción i/v.
· Gasas estériles.
· Guantes estériles.
· Alcohol etílico o isopropílico al 70%.
· Yodo povidona al 10%.
B. OBTENCION DE LA MUESTRA.
El procedimiento de extracción de sangre para la realización de hemocultivos se debe realizar cumpliendo las
máximas precauciones de asepsia.
1. Lavarse las manos.
2. Colocar ligadura y campo estéril.
3. Palpar la vena a puncionar.
4. Realizar antisepsia con alcohol 70% en una zona de piel de unos 10 cm de diámetro alrededor del sitio de
punción. Se comenzará por el centro y se irán haciendo círculos concéntricos hacia el exterior.
5. Repetir el procedimiento utilizando Yodo povidona al 10%.
6. Dejar actuar 1-2 minutos, esto es; hasta que se seque el antiséptico sobre la piel.
7. Mientras actúa el iodóforo, desinfectar el tapón de goma del frasco de hemocultivo con alcohol 70%.
8. Colocarse los guantes estériles.
9. Extraer la sangre sin tocar en ningún momento el campo desinfectado. Si fuera necesario palpar
nuevamente la vena se cambiará los guantes estériles y se realizará nueva antisepsia de piel.
10. Inyectar directamente la sangre en el frasco. No es necesario cambiar de aguja.
11. Mover los frascos para que la sangre y el medio de cultivo se mezclen.
12. Para frascos de sistemas automatizados, retirar las tirillas de las botellas y pegarlas en la hoja de pedido
correspondiente al paciente. En ningún caso se rotulará o pegará ningún tipo de etiqueta adhesiva sobre los
códigos de barras de las botellas.
C. VOLUMEN DE LA MUESTRA.
La cantidad de sangre a introducir en cada botella es de 10 ml en el caso de pacientes adultos.
En caso de neonatos y niños pequeños en que no se pueden obtener volúmenes grandes de sangre, es
suficiente una cantidad 1-5 ml por frasco. En estos casos se utilizan botellas de hemocultivo pediátrico.
D. NÚMERO DE MUESTRAS.
Dos hemocultivos por paciente, previos al tratamiento antimicrobiano. El intervalo de tiempo entre las
extracciones es suficiente con una hora, pero cuando exista una gran urgencia en iniciar el tratamiento, este
intervalo puede acortarse hasta 15 minutos o se pueden extraer dos muestras simultáneas de diferentes sitios
de punción. En caso de endocarditis subaguda se recomienda aumentar a tres frascos de hemocultivo
repartidos en 24 horas y en caso de que la primera serie sea negativa, obtener tres muestras más al día
siguiente. Si el paciente está recibiendo antibióticos puede ser necesario obtener otra serie de hemocultivos al
tercer día.
E. TRANSPORTE.
Deben enviarse en forma inmediata al laboratorio una vez finalizada la serie. Mientras, mantener a
temperatura ambiente. Nunca debe refrigerarse ni congelarse.
F. OBSERVACIONES.
· Cuando no se hallen venas accesibles puede realizarse la extracción de sangre arterial. No son adecuadas las
muestras extraídas a través de catéteres.
· En caso de sospecha de determinados microorganismos (Brucella spp, Leptospiras, Micobacterias, Hongos,
etc.) ponerse en contacto con el Laboratorio de Microbiología.
· En caso que el paciente esté recibiendo antibióticos realizar la toma previa a la administración de la dosis
de antimicrobiano.
· Si se evita conversar durante la toma de la muestra no es necesario colocarse tapabocas.
· En sala de inmunodeprimidos sí es aconsejable el uso de gorro y tapabocas.
2.2 CATÉTERES INTRAVASCULARES
El estudio de catéteres que se realiza en forma rutinaria a nivel del Laboratorio de Microbiología es la
técnica semicuantitativa de Maki. Esta técnica permite valorar la contaminación extraluminal del catéter,
principal mecanismo por el cual se contaminan los catéteres de corta permanencia y pueden llegar a ser el
origen de una bacteriemia.
- Guantes estériles.
- Gasas estériles.
- Pinzas y tijeras estériles.
- Recipiente estéril con tapa de rosca.
- Alcohol etílico o isopropílico al 70%.
- Yodo povidona al 10%
B. OBTENCIÓN DEL PRODUCTO.
- Desinfectar con alcohol al 70% una zona de piel de un 10 cm correspondiente a la zona de entrada del
catéter. Hacerlo en forma de círculos comenzando por el centro.
- Repetir la misma operación, pero con iodóforo, dejando que se seque.
- Retirar el catéter con la máxima asepsia.
- Ayudándonos de las pinzas y las tijeras estériles, cortar los 5 cm dístales del catéter que corresponden a la
porción intravascular.
- Introducir el segmento de catéter en un recipiente estéril correctamente identificado.
C. TAMAÑO DE LA MUESTRA.
5 cm de la porción más distal. Porciones mayores dificultan el procesamiento en el laboratorio.
D. TRANSPORTE.
La muestra deberá enviarse al laboratorio en un periodo inferior a 30 minutos. Cuando esto no sea posible
deberá conservarse a 2 a 8 ºC por 12 horas como máximo.
3 MUESTRAS DEL TRACTO URINARIO
Las muestras de orina se obtendrán asépticamente y se enviaran inmediatamente al laboratorio ( o n un plazo
máximo de 2 horas) o de lo contrario se conservarán en refrigeración de 2 a 8 ºC por un plazo máximo de 12
horas hasta su llegada al laboratorio, en donde se procesará dentro de los siguientes 60 minutos, para lo cual
se colocará en el cuaderno de registro primario la hora de procesamiento o siembra.
3.1 UROCULTIVO Orina obtenida por “Chorro medio”
- Paños húmedos (Gasas estériles húmedas).
- Jabón neutro.
- Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermética y estéril.
B. OBTENCIÓN DEL PRODUCTO.
La muestra idónea es la primera micción de la mañana, ya que permite la multiplicación de bacterias durante
la noche. Sin embargo se aceptaran las muestras cuya asepsia se realice en los servicios higiénicos del
laboratorio con los materiales (jabón, gasas) que se le proporcionan al paciente, con la explicación previa de
la forma de tomar la muestra.
3.1.1 TÉCNICA PARA MUJERES.
- Lavarse las manos cuidadosamente con agua y jabón, enjuagar con agua y secar con una toalla
limpia.
- Se separarán los labios mayores y menores, y los mantendrá separados en todo momento hasta que
se haya recogido la orina.
- Con un paño húmedo o gasa esteril enjabonado, se lava bien la vulva pasándola de delante hacia
atrás, se repetirá el proceso un total de 4 veces.
- Enjuagar cuidadosamente con agua para eliminar los restos de jabón.
- Se indicará a la paciente que orine desechando el primer chorro (20-25 primeros mililitros) tras lo
cual y sin interrumpir la micción, se recogerá el resto de la orina en el recipiente, el cual se cerrará
inmediatamente.
- El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva o ropa del paciente. Los dedos
no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior.
3.1.2 TÉCNICA PARA HOMBRES.

- Lavado de las manos con agua y jabón.
- Retraer completamente el prepucio, que se mantendrá así en todo momento, hasta que se haya
recogido la orina.
- Limpiar el glande con jabón neutro.
- Eliminar los restos de jabón enjuagándolo con agua.
- Se pedirá al paciente que orine desechando el primer chorro, los primeros 20-25 mililitros y sin
interrumpir la micción, recoger el resto de la orina en el recipiente estéril.
3.2 OBTENCIÓN DE ORINA PARA UROCULTIVO EN EL PACIENTE CON SONDA VESICAL

- Gasas.
- Alcohol 70º o Yodo povidona 10%.
- Jeringa o aguja estéril.
- Recipiente estéril.
B. OBTENCIÓN DE LA ORINA.
1. Si es posible realizar la toma inmediatamente luego del recambio de la sonda.
2. Pinzar la sonda a 10 cm del meato durante 1 a 2 dos horas como máximo.
3. Sin despinzar, desinfectar la sonda con Yodo povidona al 10 %, a 3-4 cm por encima de la pinza.
4. Extraer orina puncionando la sonda con jeringa y aguja.
5. Colocar la orina en frasco estéril.
3.3 PUNCIÓN SUPRAPÚBICA

Es un procedimiento médico.
Indicaciones. Evidencia clínica de infección urinaria con recuentos bajos o nulos, neonatos y lactantes y
urocultivos repetidos con dos o más bacterias.
La punción suprapúbica requiere un buen conocimiento de la técnica y de las precauciones que hay que
adoptar, con rigurosa asepsia, descartando problemas de hemostasia y con la vejiga palpable y previa
desinfección y anestesia local; se punciona ésta a 1,5 cm de la sínfisis pubiana, en la línea media, estando el
paciente en decúbito supino, con una jeringa de 10 ml y con aguja larga (calibre 19) se aspira el contenido
vesical. En caso de orina obtenida por punción suprapúbica se enviará al laboratorio lo antes posible. Colocar
la muestra en frasco estéril. Se debe indicar en la hoja de pedido la técnica empleada para su extracción (dato
importante a la hora de valorar el recuento de colonias).
C. VOLUMEN MÍNIMO DE LA MUESTRA.

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml.
D. TRANSPORTE.
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo máximo de dos horas. Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 2 a 8 ºC durante un tiempo máximo de 4 horas para entregar la muestra al laboratorio para su
procesamiento.
E. OBSERVACIONES.
Para la búsqueda de micobacterias, la orina se recoge por técnica de chorro medio, durante 5 días
consecutivos. En este caso el volumen de orina no debe ser inferior a 300 ml por muestra. Se elegirá
preferentemente la primera micción de la mañana.
4 LÍQUIDOS BIOLÓGICOS
4.1 LIQUIDO CEFALORRAQUÍDEO

4.1.1 LCR POR PUNCIÓN LUMBAR
Es un procedimiento médico
- Campos estériles.
- Gasas estériles.
- Yodo povidona al 10%.
-Jeringas de 5-10 ml.
-Agujas de punción IM.
-Trocares de punción lumbar de varios tamaños.
-Tubos cónicos limpios y estériles con tapón de rosca. Es necesario que estén totalmente limpios, no alcanza
con que estén sólo estériles pues la presencia de bacterias muertas por la esterilización puede inducir a
errores por tinciones falsamente positivas. No se deben usar tampoco frascos que hayan contenido
medicamentos como por ejemplo antibióticos aunque estén estériles, porque restos de medicación pueden
tener efecto antimicrobiano y negativizar los cultivos.
B. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA.
- Se obtendrá antes de instaurar cualquier terapéutica antibiótica.
- Quien realice la toma de la muestra deberá lavarse las manos previas al procedimiento, colocarse
sobretúnica y guantes estériles.
- Se localiza la zona elegida para la punción lumbar mediante palpación de los espacios intervertebrales una
vez colocado el paciente en la posición adecuada.
- Se desinfecta con alcohol al 70% una zona de uso 10 cm de diámetro en el área elegida, la aplicación del
desinfectante se hace de forma concéntrica del centro a la periferia.
- Se coloca campo estéril
- Se repite la operación con Yodo povidona que se deja secar durante un minuto.
- Realizar la punción entre los espacios intervertebrales L3-L4, L4-L5 o L5-S1, siguiendo las normas de la
más estricta asepsia.
- Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el líquido cefalorraquídeo que
se recogerá en tres tubos, sin conservantes, con tapón de rosca.
El primer tubo es el que debe enviarse para el estudio bioquímico, el segundo para el estudio microbiológico
y el tercero para investigación de células (este suele ser el más transparente aunque la punción haya sido
traumática). No obstante, el tubo más turbio se enviará a Microbiología.
C. VOLUMEN MÍNIMO.
- Para el estudio bacteriológico rutinario es suficiente 1 ml, aunque es preferible disponer de volúmenes
superiores.
- Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 ml adicionales más por cada uno de los estudios,
siendo deseable llegar a los 10 ml.
- Para estudio de virus se necesita por lo menos 1 ml más.
D. TRANSPORTE.
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio, pues alguno de los agentes etiológicos como S.
pneumoniae, pueden lisarse rápidamente a partir de una hora tras su recogida. Si no es posible se mantendrá
en estufa a 35-37ºC y una parte se incubará en un frasco de hemocultivo que se mantendrá en idénticas
condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio. Si no se dispone de estufas se mantendrá a temperatura
ambiente. Nunca deberá refrigerarse pues se puede afectar la viabilidad de N. meningitidis y H. influenzae.
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios. En caso de solicitar esta investigación se enviará en un
medio de transporte de líquidos para estudio de anaerobios o en frasco de hemocultivo anaerobios.
Las muestras para el estudio de virus se enviarán en hielo, si el envío se retrasa más de 24 horas, se deberá de
conservar a -70ºC. o -20 ºC.
E. OBSERVACIONES.
· Como la meningitis suele surgir por un proceso bacterémico se solicitarán simultáneamente hemocultivos,
pudiendo ser así mismo estudiadas las posibles lesiones metastásicas cutáneas.
· Es necesario que el médico señale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias habituales,
micobacterias, anaerobios, hongos o virus).
4.1.2 -LCR EN PACIENTES CON SHUNTS VENTRICULARES:

4.1.2.1 LCR obtenido de reservorio subcutáneo, Ommaya.
Esta toma debe ser consultada previamente con el especialista, neurocirujano a ver si es factible su
realización.
Hacer la toma del lugar de recolección del reservorio previa desinfección y antisepsia.
4.1.2.2 LCR obtenido del circuito de la derivación.

Si no es posible obtener LCR por punción del reservorio se obtendrá abriendo el circuito haciendo una buena
desinfección del sitio.
4.2 OTROS LÍQUIDOS BIOLÓGICOS: PERITONEAL, ASCITIS PERICÁRDICO, PLEURAL,
ARTICULAR
En este apartado trataremos de líquidos orgánicos, habitualmente estériles, salvo LCR. La toma de muestra,
para la obtención de estos líquidos, es un procedimiento médico que requiere de ciertos cuidados para
obtener una muestra adecuada para el examen microbiológico.
- Campos estériles.
- Gasas estériles.
- Jeringas y agujas estériles. No se deben utilizar jeringas heparinizadas, pues la heparina lleva conservantes
que pueden interferir la viabilidad de los microorganismos.
- Yodo povidona al 10%.
- Recipientes estériles con tapón de rosca.
- Recipientes estériles de boca ancha (ejemplo: .el frasco de urocultivo).
- Sistemas de transporte de líquidos para estudio de anaerobios.
- Frascos de hemocultivos.
B. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA.
Varía dependiendo del líquido corporal que se trate, pero siempre deberá seguirse una técnica rigurosamente
aséptica. La muestra se obtiene por punción y se coloca en recipientes adecuados para su envío al
laboratorio. Siempre que sea posible evitar el uso de hisopos.-
-Realizar antisepsia de piel con alcohol, haciendo círculos concéntricos desde el centro hacia la periferia en
una zona de unos 10 cm de diámetro.
- Repetir el paso anterior con Yodo povidona al 10%, dejando secar durante un minuto. En pacientes con
hipersensibilidad al yodo, realizar la desinfección con alcohol 70%, dos veces consecutivas.
- La toma se hace por punción percutánea (toracocentesis, paracentesis, punción pericárdica o punción
articular) de forma aséptica para evitar la contaminación por la flora cutánea o ambiental.
- Una vez realizada la toma se retira la yodo povidona de la piel con un apósito impregnado en alcohol al
70%.
- Más raramente se pueden realizar tomas de estas localizaciones en el transcurso de intervenciones
quirúrgicas. En esta circunstancia debe desaconsejarse el uso de hisopos, siendo preferible también la
aspiración; se utilizarán hisopos sólo si el contenido no puede ser aspirado.
C. VOLUMEN MÍNIMO.
Para el estudio bacteriano rutinario es suficiente de 1 a 10 ml. Cuando se requiera la investigación de
Mycobacterium spp. u hongos se enviará un volumen superior a 10 ml.
D. TRANSPORTE.
Si es necesario evitar la coagulación de algunos de estos líquidos se usará heparina sin conservantes; otros
anticoagulantes pueden tener acción antibacteriana.
Los recipientes idóneos son tubos estériles de tapón de rosca o de presión negativa sin conservantes.
Se llenarán hasta cerca del tapón, de esta forma pueden ser útiles para el estudio de anaerobios,
especialmente si la muestra es purulenta.
Los viales o tubos prerreducidos para el transporte de muestras para el estudio de anaerobios se emplearán en
aquellos casos en que se sospeche este tipo de microorganismos.
Frascos de Hemocultivos: Este es un sistema adicional a los anteriores. Está particularmente indicado cuando
el envío se puede retrasar o en los líquidos que pueden coagularse. Si se sospecha anaerobios emplear uno
adecuado para estas bacterias. Con su uso se ha incrementado el aislamiento bacteriano en peritonitis
espontáneas o en las asociadas a diálisis peritoneal ambulatoria crónica. También se recomienda como
transporte de líquidos articulares.
En ningún caso se aceptaran hisopos embebidos en el líquido.
Las muestras deben ser enviadas inmediatamente al laboratorio.
E. OBSERVACIONES.
Cuando se utilice una anestesia local, hay que cambiar de jeringa y aguja para hacer la extracción de la
muestra, ya que los anestésicos pueden inhibir el crecimiento bacteriano.
4.3 LÍQUIDO DE DIALISIS PERITONEAL CRÓNICA AMBULATORIA
- La muestra del líquido de diálisis peritoneal crónica ambulatoria debe ser la propia bolsa que lo contiene.
- La bolsa se enviara de inmediato al Laboratorio para su procesamiento o se conservará en la heladera hasta
12 horas.
5 PIEL Y TEJIDOS BLANDOS.

· El espécimen de elección en el caso de infecciones de piel y partes blandas depende del carácter de la lesión
y no de los microorganismos que se sospechen.
· Para las lesiones abiertas, se debe remover la flora y detritus superficial antes de recolectar la muestra de los
márgenes de avance de la lesión.
· En caso de lesiones secas o costrosas los cultivos no están recomendados salvo que presenten exudado.
· En el caso de abscesos cerrados la recolección se realizará con aguja y jeringa de la pared del mismo, previa
antisepsia de piel.
· En el caso de abscesos abiertos se debe decontaminar primero como en el caso de heridas abiertas.
· Las quemaduras se cultivan luego de una extensa limpieza y debridamiento. Se recomiendan cultivos de
biopsia ya que los cultivos superficiales pueden ser poco representativos de lo que sucede en la profundidad
del tejido.
5.1 HERIDAS SUPERFICIALES Y ABSCESOS ABIERTOS
- Suero fisiológico.
-Jeringa y aguja estériles.
-Recipientes estériles con tapa de rosca.
-Hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies.
B. TECNICA.
- Lavar con suero fisiológico estéril cuidadosamente la superficie de la herida para retirar la flora
colonizante.
- Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas.
- Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solución de Ringer lactato y aspirarlo nuevamente en la
jeringa.
- Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podrá efectuarse un frotis de los bordes de la herida
con un hisopo.
C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
Para muestras líquidas se intentara obtener 1-10 ml. En el resto de las ocasiones se enviará la máxima
cantidad posible.
El envío al laboratorio debe ser inmediato. Se utilizará para el envío tubos estériles con tapa rosca.
La jeringa de la extracción será evacuada en el recipiente en que se hará el envío. La práctica de colocar un
tapón de goma en la aguja (usando la jeringa como recipiente de transporte) debe descartarse por el riesgo
para el personal de sufrir un pinchazo con una aguja contaminada con líquidos orgánicos. No olvidar
identificar la muestra adecuadamente y si no puede procesarse antes de 2 horas usar medio de transporte.
E. OBSERVACIONES.
Las muestras recibidas en hisopo son de escasa rentabilidad y deben obtenerse sólo en circunstancias muy
excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por otros métodos.
Es importante especificar sitio anatómico de donde se realizó la toma de muestra.
5.2 ABSCESOS CERRADOS.
- Gasas estériles.
- Yodo Povidona al 10%.
- Jeringa estéril.
- Aguja IM.
- Medio de transporte para anaerobios.
B. TECNICA.
- Realizar antisepsia de la zona a puncionar con alcohol al 70%, de forma concéntrica comenzando por el
centro. Abarcar una zona de unos 10 cm.
- Repetir la operación con Yodo Povidona. En pacientes con hipersensibilidad al yodo, se utilizará alcohol 70
% dos veces consecutivas.
- Dejar secar al menos 1 minuto para que el antiséptico ejerza su acción.
- Realizar una punción-aspiración del absceso con jeringa y aguja, la muestra más útil es la obtenida contra la
pared del absceso y puncionando en el lado superior para evitar la fistulización espontánea.
- Traspasar la muestra a un contenedor estéril. Si se requiere búsqueda de anaerobios introducir en un medio
de transporte para anaerobios.
C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
Deberá enviarse un volumen de muestra entre 1-5 ml.
Las muestras deben enviarse al laboratorio tan pronto como sea posible. Hasta que esto suceda, mantener las
muestras y el medio de transporte a temperatura ambiente.
E.OBSERVACIONES.
Es muy importante especificar en la solicitud la localización del absceso con vistas a la interpretación de los
resultados. Si se carece de recipiente para transporte de muestra para anaerobios consultar al laboratorio.
5.3 HERIDA QUIRÚRGICA

La toma de muestra se realizará con técnica aséptica luego de limpieza de la zona con suero fisiológico para
eliminar la contaminación superficial. Se realizará por punción y se colocará la muestra en recipiente estéril
con tapa de rosca, si se sospecha presencia de anaerobios comunicarse con el laboratorio para solicitar medio
de transporte. Sí la muestra es obtenida con hisopo realizar primero la limpieza de la zona y luego embeber
en el pus el mismo.
5.4 QUEMADURAS
El tipo de toma de muestra es controvertido, pero los mejores resultados se han logrado con punch de tejido
de 3 o 4 mm para realizar cultivos cuantitativos. Se transportan en tubos con tapa rosca estériles.
Pueden hacerse tomas de exudado con hisopo haciendo las siguientes salvedades: solo se cultivaran para
búsqueda de aerobios, no se hará cuantificación y además el resultado obtenido puede no ser representativo
de la infección.
6 MUESTRAS DEL TRACTO GASTROINTESTINAL
6.1 MATERIAS FECALES

Esta muestra se utiliza para el diagnóstico etiológico de gastroenterocolitis aguda.
Excepcionalmente se puede utilizar para la búsqueda de portadores de Salmonella sp.
A.- MATERIAL NECESARIO
- Recipiente de boca ancha para recoger las heces, no es necesario que esté estéril, solo es preciso que esté
limpio. No contendrá restos de jabones, detergentes, desinfectantes o iones metálicos.
- Recipiente estéril de boca ancha y cierre hermético para enviar la muestra. (Ejemplo: frasco de
urocultivos). La muestra de heces para colocar en el frasco se recoge con espátula o bajalenguas.
- Medios de transporte para heces. Se emplean solo si el envío de la muestra se demora y se solicita en
laboratorio de Microbiología. Existen sistemas comerciales para bacterias. (Cary- Blair o solución de glicerol
tamponado)
B.- OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
- Solo se procesan materias líquidas o a lo sumo pastosas.
- Si son pastosas se toma una porción del recipiente donde hayan sido emitidas y se transfieren al sistema
elegido para el envío al laboratorio. Se seleccionan las partes con mucus, pus o sangre.
- En caso de heces líquidas puede utilizarse jeringa para aspirado del material fecal del recipiente en donde
ha sido emitido.
- No se procesarán las muestras de materias sólidas ni contaminadas con orina.
C.- VOLUMEN MINIMO
Heces pastosas: muestras del tamaño de una nuez son muy adecuadas pues permiten realizar la mayoría de
los estudios.
Heces líquidas entre 5 y 10 ml.
D.- TRANSPORTE
- Si la muestra no se envia en forma inmediata se debe refrigerar.
- Si se va a procesar en el plazo de 1 o 2 horas después de su emisión, no necesitan medio de transporte.
- En caso contrario se remiten las materias en un sistema de transporte para enteropatógenos.
Mientras tanto mantener refrigerada las muestras, para evitar el sobrecrecimiento de la flora normal que
puede enmascarar o destruir a los enteropatógenos. El frío puede afectar la viabilidad de Shigella spp.
- Para el estudio de toxinas de Clostridium difficile la muestra se puede mantener hasta 48 horas refrigerada a
4 º en la heladera.
- Es preferible enviar las muestras para estudio virológico sin medio de cultivo, pues este diluye las
partículas virales disminuyendo la sensibilidad. Si su envío se retrasa mucho utilizar medio de transporte y
recipientes colocados en hielo.
E.- OBSERVACIONES
- Las muestras para coprocultivo, deberán tomarse antes de la administración de antimicrobianos y
preferiblemente antes de tomar antidiarreicos.
- Indicar siempre el juicio diagnóstico de presunción y si el paciente es menor de un año.
- Solicitar las investigaciones especiales explícitamente (C. difficile, C. perfringens, S. aureus ,etc)
- En el caso de búsqueda de portadores de Salmonella, se deberá fundamentar adecuadamente el pedido y se
necesitan 3 muestras negativas para asegurar que el paciente no es portador.
- Muestras para investigación de enteroparásitos ver Sección Parasitología.
6.2 HISOPOS RECTALES

Para conocer la etiología en el caso de una gastroenteritis aguda se debe utilizar una muestra de materia
fecal. Los hisopos rectales solo se aceptarán en casos en que no se puedan obtener heces, por ejemplo en
neonatos o adultos debilitados, o internados en unidades de cuidados intensivos. Se ha demostrado eficaz en
el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae, Campilobacter spp, Shigella spp, C. difficile, virus del Herpes
simplex y en portadores anales de Streptococcus pyogenes. No es válido para la búsqueda de antígenos.
- Hisopos con medio de transporte
- Guantes.
B.- OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
- Para realizar la toma se introduce el hisopo sobrepasando el esfínter anal y se rota para hacer la toma de las
criptas anales, mantener allí durante 30 segundos para que se absorban los microorganismos y retirar.
- Una vez realizado se introduce en un medio de transporte.
C.- TRANSPORTE
Se envían en medio de transporte adecuado (Stuart, Cary-Blair, para anaerobios en el caso de C. difficile),
pues así se protege a las bacterias de la desecación y se envía rápidamente al laboratorio.
D. OBSERVACIONES
Son muestras inadecuadas:
Hisopos rectales secos.
Hisopos rectales sin medio de transporte.
Hisopos con heces cuando se busquen bacterias diferentes de enteropatógenos.
6.3 MUESTRAS DIGESTIVAS ALTAS

6.3.1 LAVADO GÁSTRICO
Muestra para investigación de BK preferentemente en niños.
MATERIAL NECESARIO
- Tubo de lavado gástrico
- Recipientes estériles de boca ancha, tubos con tapón de rosca.
TOMA DE MUESTRAS
- Lavado gástrico para estudio de micobacterias.
VOLUMEN MÍNIMO
- Todo lo que se recoge.
TRANSPORTE
- Envío rápido al laboratorio, de lo contrario refrigerar a 4ºC hasta 24 horas.
6.3.2 BIOPSIA GASTRICA-ANTRAL OBTENIDA POR ENDOSCOPIA

Se utiliza para la búsqueda de Helicobacter pylori, agente causal en casos de úlceras duodenales o gástricas.
- Fibrogastroscopio y material complementario.
- Tubos con suero fisiológico (1 ml) para pequeñas muestras.
- Formol para muestras a enviar a anatomía patológica.
B.- TOMA DE MUESTRAS
- Introducir el endoscopio y recoger muestras de biopsia de las lesiones sospechosas. .
- Es fundamental obtener varias muestras tanto de la base como de los cuatro cuadrantes del margen de la
úlcera, sin olvidar la biopsia de la mucosa antral.
- Las biopsias para estudio bacteriológico se colocan en tubo con suero fisiológico.
C.-TRANSPORTE
- Transporte inmediato al laboratorio
6.4 MUESTRAS DIGESTIVAS BAJAS

En este apartado se incluyen la biopsia rectal empleada para la detección de Entamoeba histolytica, el HSV y
Balantidium coli, y las muestras tomadas por sigmoidoscopia para la detección de E.histolytica,
micobacterias y colitis seudomembranosa por C. difficile y S. aureus.
A- MATERIAL NECESARIO
- Sigmoidoscopio, rectoscopio y material complementario.
- Pipetas.
- Tubos de tapón de rosca estériles con o sin solución salina.
- Tubo de trasporte para anaerobios.
B-TOMA DE MUESTRA
Biopsia rectal: emplear pinzas para tomar muestras de las lesiones o de la mucosa rectal posterior a unos 7-
10cm del esfinter anal.
Sigmoidoscopia: toma con pinzas o con pipeta, para la búsqueda de parásitos se realizan después de la
defecación normal o 2-3 horas después de una defecación conseguida con laxantes.
C-TRANSPORTE
- En tubo de tapón de rosca. Si la muestra es pequeña o se va a dilatar el envío se emplearán tubos con
solución salina para evitar la desecación.
- El envío debe ser inmediato y la conservación adecuada; si se sospecha C. difficile emplear medio para
transporte de anaerobios. Para la búsqueda de parásitos se envía inmediatamente al laboratorio, en su defecto
las muestras tomadas con pipeta se incluirán en fijador. (Ver Sección Parasitología)
7 TRACTO GENITAL
7.1 TRACTO GENITAL FEMENINO
7.1.1 EXUDADO VAGINAL

Esta muestra se utiliza para conocer la etiología en casos de vaginitis y vaginosis. Puede utilizarse para
búsqueda de portadoras de Streptococcus del grupo B en embarazadas. Los exudados vaginales se tomaran
en el Laboratorio de Microbiología. Se aceptarán muestras tomadas fuera del laboratorio en caso la paciente
se encuentre internada e imposibilitada de movilizarse en cuyo caso la muestra se recibirá como referida.
- Camilla ginecológica
- Especulo estéril
- Hisopos de alginato cálcico o Dracon, con medio de transporte.
- Tubo con 1 ml. de suero fisiológico y pipeta descartable.
Condiciones previas: La paciente no debe tomar antibióticos, ni utilizar soluciones antisépticas vaginales,
óvulos ni pomadas en los días previos a la recolección de la muestra. No debe mantener relaciones sexuales
48 hs antes de la toma de muestra.
B-TÉCNICA
-Con la paciente en posición ginecológica se introducirá un especulo “sin lubricante” (si fuera necesario
lubricar, utilizar solo agua tibia)
-Recoger la muestra, bajo visión directa, con un hisopo del fondo del saco vaginal posterior.
-Repetir la operación con un segundo hisopo.
-Recoger con la pipeta una muestra de fondo de saco y descargar en el tubo con suero fisiológico.
C- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN

Se obtendrán dos hisopos, uno destinado al estudio microscópico y otro al cultivo.
La muestra en suero fisiológico se destinará al examen en fresco para investigación de Trichomonas
vaginalis.
D- TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN
El envío de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible. Cuando la muestra no pueda procesarse
antes de 15 minutos deberán emplearse hisopos con medio de transporte tipo Stuart- Amies, que se
mantendrán a temperatura ambiente, o preferentemente, en estufa 35-37ºC hasta su procesamiento, que
deberá ser antes de 3-6 horas. El examen en fresco deberá observarse inmediatamente o de lo contrario
mantener en estufa a 37ºC por no más de 1 hora.
E- OBSERVACIONES
Cuando se sospeche la infección por Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Micoplasma hominis o
Ureaplasma urealtycum, deberá enviarse muestra endocervical.
7.1.2 EXUDADO ENDOCERVICAL

Esta muestra se utiliza para el diagnóstico etiológico en caso de cervicitis.
En el caso de muestras endocervicales para descarte de Clamidia, Micoplasma, la muestra debe ser tomada
preferentemente en el consultorio de Ginecología por el médico y/o obstetra, en el momento de la consulta, o
por personal entrenado con el uso de especulo, y se recibirá la muestra como referida.
- Camilla ginecológica.
- Especulo estéril.
- Torundas para limpieza.
- Hisopos de alginato cálcico o Dracon con medio de transporte tipo Stuart o Amies.
- Hisopos con medios de transporte específicos para Mycoplasma y/o Chlamydia.
B- TÉCNICA
Con la paciente en posición ginecológica introducir suavemente el especulo sin lubricar (o lubricado con
agua tibia).
Limpiar el exocérvix de secreciones vaginales, con una torunda seca.
Bajo visión directa comprimir cuidadosamente el cérvix con palas del espéculo y introducir un hisopo en el
canal endocervidal con un suave movimiento de rotación.
Repetir la operación con el segundo hisopo.
C-NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN
Deberán recogerse dos torundas, una destinada al examen microscópico y otra al cultivo. Para investigación
de Mycoplasma y Chlamydia se recogerá una tercera torunda con medio de transporte específico.
D-TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN
El envío de la muestra debe ser inmediato. Si no es así se compromete la viabilidad de Neisseria
gonorrhoeae.
E- OBSERVACIONES
Debe evitarse el uso de torundas de algodón ya que contienen ácidos grasos instaurados que pueden inhibir el
crecimiento de Neisseria gonorrhoeae.
7.1.3 EXUDADOS URETRALES
Se utiliza para el diagnóstico etiológico en casos de síndrome uretral aguda en la mujer después que se han
descartado otras causas. Las etiologías a investigar son N. gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis.
- Hisopos uretrales finos, con varilla de alambre no excesivamente flexible, de alginato cálcico o Dracon con
medio de transporte tipo Stuart o Amies.
- Gasas estériles.
B- TÉCNICA
Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas estériles.
Introducir el hisopo suavemente con un movimiento de rotación hasta penetrar unos 2 cm dentro de la uretra
(3-4 cm para la investigación de Chlamydia trachomatis) Repetir operación con un segundo hisopo.
Realizar frotis para el examen directo.
Cuando no haya suficiente exudado, puede estimularse mediante un masaje suave de la uretra contra la
sínfisis del pubis, a través de la vagina.
C-NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN

Deberán enviarse dos hisopos, uno para el examen directo y otro para el cultivo.
D- TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN.
Debe ser inmediato. Cuando no puedan procesarse las muestras inmediatamente, se utilizarán hisopos con
medio de transporte que se mantendrán a temperatura ambiente o preferentemente a 35-37º. Las muestras se
procesarán siempre que se pueda antes de las 3 horas, y como máximo en un plazo de 6-12 horas.
E-OBSERVACIONES
La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera micción de la mañana, si no es posible, se
deberá esperar al menos una hora tras la última micción para recogerla.
7.1.4 EXUDADOS RECTALES

A-MATERIAL NECESARIO
- Guantes
- Hisopos con medio de transporte (Stuart o Amies)
B-TÉCNICA
Introducir el hisopo suavemente a través del esfínter anal.
Rotar contra las criptas rectales, dejar 10-30 segundos para que se absorban los microorganismos y extraer.
Se intentará evitar el contacto con materia fecal.
Cuando el hisopo salga manchado de heces, deberá tomarse una nueva muestra.
C- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN.
Basta con un solo hisopo para cultivo, dado que la visión microscópica no es representativa.
El envío de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible. Cuando la muestra no pueda procesarse
antes de 15 minutos, deberán emplearse hisopos con medio de transporte. (Stuart o Amies), que se
mantendrán en estufa a 35-37ºC hasta su procesamiento.
E- OBSERVACIONES
Cuando se sospeche proctitis por Chlamydia trachomatis, las muestras deberán tomarse mediante visión
directa por anoscopía, buscando las lesiones ulcerosas o hipertróficas.
7.1.5 ENDOMETRIO
Se ha cuestionado ampliamente la utilidad de estas muestras para el diagnóstico de endometritis. Los
métodos no invasivos, como los hisopos a través del cervix, se contaminan sistemáticamente, obteniéndose
resultados similares en mujeres con endometritis y en mujeres sanas.
Se han descrito varios métodos intentando eliminar la contaminación cervical, como son la aspiración uterina
a través de un catéter de doble luz o de hisopos protegidos o tomando las muestras con hisopo o aspirando a
través de un catéter previa dilatación y decontaminación del cervix con yodo povidona al 10%. En cualquiera
de los casos, los resultados del cultivo de estas muestras deben interpretarse con cautela, teniendo siempre en
cuenta la posibilidad de una contaminación cervical.
Es recomendable sacar siempre hemocultivos, ya que se obtienen resultados positivos en un 30% de los
casos de endometritis.
No se deben enviar muestras de loquios para hacer diagnóstico de endometritis postparto ya que no son
representativas de lo que sucede en el tracto genital superior y solo brindan información del contenido
bacteriano vaginal
7.1.6 CULDOCENTESIS
Se precisa el material quirúrgico que requiera la muestra, contenedores estériles y si se desea la investigación
de anaerobios, un medio de transporte específico.
B- TÉCNICA
Aspiración a través del fondo de saco vaginal posterior con jeringa y aguja.
Se intentará obtener 1-5 ml de muestra.
D- TRANSPORTE Y CONSERVACION
La muestra se remitirá en un contenedor estéril o en la misma jeringa. Cuando se busquen anaerobios deberá
inyectarse una parte en medio de transporte específico.
E- OBSERVACIONES
El material obtenido por culdocentésis es representativo de los microorganismos existentes en las trompas.
7.1.7 TROMPAS Y OVARIOS
- El material quirúrgico que requiere la técnica
- Agujas y jeringas estériles.
- Contenedores estériles.
- Medio de transporte para anaerobios.
- Hisopos de alginato cálcico o cepillos de broncoscopía.
B- TÉCNICA
Beben obtenerse por laparotomía o laparoscopía.
La muestra se recogerá directamente en la luz de la trompa mediante hisopo o con un cepillo de
broncoscopía.
Cuando la trompa esté obstruida, se podrá recoger la muestra por punción aspirativa, introduciendo una parte
en un medio de transporte para anaerobios y enviando el resto en un recipiente estéril o en la jeringa de la
extracción.
C- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN
Se recogerá la máxima cantidad de muestra posible. En el caso de muestras líquidas se intentará obtener de
1-5 ml.
. Cuando no sea posible, emplear medios de transporte tipo Stuart-Amies o medios de transporte específico
para anaerobios que se mantendrán a temperatura ambiente o preferentemente a 35- 37ºC.
7.1.8 VULVA
- Hisopos.
- Alcohol etílico al 70%.
- Yodo Povidona al 10%.
- Jeringas y agujas estériles.
B-TÉCNICA
Realizar antisepsia de piel con alcohol 70% primero y luego yodo povidona. Para las superficies mucosas,
limpiar con agua estéril, no usar alcohol ni yodóforo.
Frotar con el hisopo sobre las lesiones y si hay abscesos aspirarlos con jeringa y aguja (Bartolinitis)
Deberá obtenerse la mayor cantidad de exudado posible. Cuando se trate de abscesos se intentará obtener al
menos 1 ml.
Si la muestra no puede enviarse de inmediato se usarán medios de transporte , en el caso de hisopos sirve el
medio de Stuart -Amies y para punciones de abscesos una parte se introducirá en un medio de transporte para
anaerobios.
7.1.9 GANGLIOS LINFÁTICOS INGUINALES

- Gasas estériles.
- Alcohol etílico al 70%.
- Povidona yodada al 10%.
- Jeringa y aguja o material quirúrgico.
- Contenedor estéril.
B- TÉCNICA
Desinfectar la piel con alcohol y luego povidona yodada, dejándola secar durante 1 minuto.
Realizar punción aspiración con jeringa y aguja o escisión quirúrgica del ganglio.. Enviar en la jeringa de
punción, o si se trata de una pieza quirúrgica, en un contenedor estéril sin “formol “.
La máxima cantidad de muestra que se pueda obtener.
La muestra debe llegar al laboratorio dentro de la hora siguiente a la extracción. En el caso de punciones
aspirativas debe realizarse de inmediato.
E- OBSERVACIONES
Es preferible obtener la muestra por punción aspiración de la adenopatía a través de la piel sana, que a partir
de los puntos de drenaje.
Debe avisarse al laboratorio la sospecha de infección por Haemophylus ducreyi para que las muestras sean
procesadas adecuadamente.
7.1.10 LÍQUIDO AMNIÓTICO

- Gasas estériles
- Alcohol etílico al 70%
- Povidona yodada al 10%
- Jeringa y agujas estériles.
- Contenedor estéril.
B- TÉCNICA
Punción aspiración con jeringa y aguja tras desinfección de la piel dos veces consecutivas, la primera con
alcohol y la segunda con povidona.
Se intentará obtener una muestra de 1-5 ml .
Deberá enviarse al laboratorio lo antes posible para su procesamiento.
E- OBSERVACIONES
Debe informarse de la existencia de rotura de membranas de más de 24 horas.
7.2 TRACTO GENITAL MASCULINO

7.2.1 EXUDADOS URETRALES
Se utiliza para confirmar el diagnóstico clínico de uretritis y valorar su etiología. No es adecuado si el
paciente no tiene corrimiento. La toma de muestra se debe realizar en el Laboratorio de Microbiología, de
preferencia en la mañana y con por lo menos 4 horas de retención urinaria.
- Hisopos finos, de alginato de calcio o Dacron con medio de transporte tipo Stuart-Amies.
- Gasas estériles.
- Asa de siembra de platino
- Portaobjetos.
- Suero fisiológico.
B- TÉCNICA
Cuando exista exudado franco puede recogerse con un hisopo o con un asa bacteriológica. Se le solicita al
paciente que retraiga el prepucio y lo mantenga así durante todo el procedimiento.
Si no hay corrimiento franco puede estimularse exprimiendo la uretra desde la raíz del pene. Cuando no se
obtenga exudado se introducirá un hisopo suavemente con un movimiento de rotación hasta penetrar unos 2
cm. en la uretra. Repetir la operación con un segundo hisopo.
Tomar con ansa bacteriológica una gota de secreción y colocar en un portaobjetos con una gota desuero
fisiológico para investigación de Trichomonas vaginalis (examen en fresco).
Deberán obtenerse dos hisopos, uno destinado al examen directo y otro al cultivo y la muestra para examen
en fresco.
Debe ser inmediato. Cuando no puedan procesarse las muestras antes de 15 minutos, se utilizarán hisopos
con medio de transporte Stuart-Amies que se mantendrán a temperatura ambiente o preferentemente en
estufa 35-37º. El examen en fresco deberá observarse de inmediato. Las muestras se procesarán siempre que
se pueda antes de 3 horas y como máximo en un plazo de 6-12 horas.
E- OBSERVACIONES
La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera micción de la mañana . Si esto es imposible,
esperar al menos una hora tras la última micción para recogerla. En algunos casos puede ser rentable realizar
la investigación de patógenos de transmisión sexual en la orina del primer chorro.
7.2.2 MUESTRAS PARA DIAGNÓSTICO DE PROSTATIS

En el caso de prostatitis aguda el diagnóstico etiológico se realiza a través del urocultivo y hemocultivos. Las
prostatitis crónicas pueden ser de etiología bacteriana o no, por lo cual se valorará mediante las pruebas
diagnósticas que se detallan a continuación.
Técnica de Meares Stamey, Se preparará el mismo material que para un urocultivo y cuatro contenedores
estériles que deberán ir identificados de la siguiente forma:
Frasco 1: Primera orina.
Frasco 2: Micción media premasaje.
Frasco 3: Masaje prostático.
Frasco 4: Orina post masaje.
B- TÉCNICA
- Retraer el prepucio y limpiar el meato y el glande igual que para el urocultivo.
- Pedir al paciente que orine, recogiendo los primeros 10 ml en el primer contenedor “F: 1”.
- Recoger los siguientes 10 ml en el segundo contenedor “ F: 2“. Esta porción corresponde a la “micción
media”.
- Interrumpir la micción antes de que se haya vaciado totalmente la vejiga.
- Hacer un masaje prostático y recoger el fluido en el tercer contenedor “ F:3” (masaje prostático).
- Si no se produce fluido, presionar la uretra en su totalidad 30 segundos. Tras el masaje, acabará saliendo
fluido prostático por el meato.
- Finalmente se pedirá al paciente que orine y se recogerán los 10 ml primeros de orina en un cuarto
recipiente “F: 4 “(orina postmasaje)
FRASCO 1: 10ml
FRASCO 2: 10 ml
FRASCO 3: Toda la muestra que se obtenga.
FRASCO 4: 10 ml
D- TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN:
Las muestras deberán procesarse antes de 1 hora. Para períodos más prolongados se deberán mantener en la
heladera a 4ºC hasta un máximo de 24 horas.
E- OBSERVACIONES
- Se realizarán cultivos cuantitativos. Cuando el número de bacterias del frasco 1 es mayor al del frasco 2 y
frasco 4 se considera que las bacterias son de origen uretral.
- Cuando el número de bacterias de los frascos 3 y 4, es por lo menos 10 veces superior al de los frascos 1 y
2 se atribuye a colonización prostática.
- Las muestras de semen no son adecuadas para cultivo, al estar sistemáticamente contaminadas y los
resultados obtenidos no son representativos de los microrganismos aislados en próstata.
- Dado lo engorroso que resulta la toma de estas muestras, en 1997 Nickel propuso la realización de un
método diagnóstico alternativo utilizando el cultivo cuantitativo y la observación microscópica de la orina
antes y después del masaje prostático. La sensibilidad y especificidad de este método se encuentra en el
entorno del 90%. En este caso se debe demostrar un aumento en el recuento de bacterias en la muestra post
masaje prostático para hacer el diagnóstico de prostatitis crónica bacteriana.
7.3 MUESTRAS PARA EL ESTUDIO DE CHLAMYDIAS Y MYCOPLASMAS UROGENITALES.

Para estas muestras deberán seguirse las directivas las directrices de cada laboratorio, ya que hisopos,
medios, transporte, etc. dependen de la técnica disponible en cada laboratorio.
7.3.1 MUESTRAS PARA INVESTIGACIÓN DE CHLAMYDIAS
Las muestras adecuadas no son las secreciones, ya que Chlamydia trachomatis sólo afecta células escamo-
columnares, como las células del epitelio de transición del cérvix. No son adecuadas muestras vaginales para
estas determinaciones.
- Especulo
- Hisopos aportados por el laboratorio de Microbiología.
B- TÉCNICA
La muestra se recogerá mediante frotado o raspado enérgico de la zona cervix, uretra, etc. siguiendo las
instrucciones específicas para cada localización.
Generalmente es suficiente con un hisopo destinado exclusivamente al diagnóstico de Chlamydia.
Las muestras que no puedan ser procesadas de inmediato consultar al laboratorio sobre transporte y
conservación más adecuada para la técnica en uso en ese momento.
7.3.2 MUESTRAS PARA INVESTIGACIÓN DE MYCOPLASMAS UROGENITALES
A-MATERIAL NECESARIO
- Hisopos (Pedir al laboratorio de Microbiología según técnica en uso)
B-TÉCNICA
Hisopado de la zona a investigar generalmente cervix o uretra femenina o masculina
C-NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN
Es suficiente con un hisopo destinado a este estudio.
Las muestras que no puedan ser procesadas de inmediato consultar al laboratorio sobre transporte y
conservación más adecuada para la técnica en uso en ese momento.
8 BIOPSIAS
- El material quirúrgico estéril que precise la técnica empleada para la obtención de las biopsias de distintas
localizaciones.
- Recipientes estériles con tapa de rosca.
- Suero salino estéril.
- Jeringas y agujas estériles.
- Sistemas de transporte para anaerobios.
B. TÉCNICA
Muestras sólidas: Se obtendrá un bloque de tejido por escisión quirúrgica procurando incluir las zonas más
afectadas, y cuando las lesiones estén bien delimitadas se intentará incluir también el borde activo de la
lesión.
Muestras líquidas: Se obtendrán por aspiración con jeringa y aguja siguiendo técnicas estrictamente
asépticas.
Muestras sólidas: Se recomienda obtener una pieza de al menos 1-5 cm³.
Muestras líquidas: 5-10 ml.
Las muestras sólidas se introducirán en un recipiente estéril con tapa de rosca, al que pueden añadirse unas
gotas de suero salino estéril para prevenir la desecación de las muestras de pequeño tamaño.
Cuando se disponga de ellos, las muestras se enviarán en bolsas, campanas o recipientes preparados para
mantener un ambiente de anaerobiosis.
Las muestras líquidas se introducirán en un vial con medio de transporte específico para anaerobios, que se
mantendrá a temperatura ambiente hasta su envío. Puede usarse un frasco para Hemocultivo.
El envío y procesamiento de estas muestras debe ser inmediato.
E. OBSERVACIONES.
Es muy importante no introducir las muestras en formol ni en otras sustancias que puedan inhibir el
crecimiento de microorganismos, ni utilizar recipientes de dudosa esterilidad. Usar solo suero fisiológico
estéril.
Dado que estas muestras suelen ser de extremada importancia, difícil obtención, con riesgos y molestias para
el paciente, y en muchas ocasiones son insustituibles, es recomendable que antes de iniciar el procedimiento
se establezca contacto con el Laboratorio de Microbiología para evitar posibles errores y orientar las
investigaciones posteriores con relación a las distintas sospechas clínicas.
9. MUESTRAS PARA ESTUDIO INMUNOLÓGICO DE LAS INFECCIONES BACTERIANAS

La respuesta del huésped a las infecciones bacterianas se estudia por diversas técnicas que detectan la
presencia de anticuerpos circulantes, de los diferentes tipos, según se trate de una infección aguda o crónica.
Aunque las técnicas son bien diferentes según el tipo de agente involucrado, complejidad y disponibilidad de
recursos del laboratorio que va a realizar la investigación, para la mayoría se requieren 10 cc de sangre sin
anticoagulante en tubo seco. Siempre es conveniente antes de extraer la sangre, preguntar en el laboratorio
acerca del agente que se quiere investigar, disponibilidad de reactivos, número de muestras. La mayoría de
las investigaciones serológicas se benefician de la extracción de dos muestras pareadas de sangre separadas
por 15-20 días.
10. MUESTRAS PARA INVESTIGACIÓN DE AGENTES INFECCIOSOS POR TÉCNICAS DE

BIOLOGÍA MOLECULAR
Prácticamente en todos los especímenes biológicos se pueden investigar agentes infecciosos por técnicas de
biología molecular mediante la detección de los ácidos nucleicos de los microorganismos o sus productos.
Como el número de técnicas disponibles es muy amplio y por ser muestras con requerimientos específicos en
cuanto a tipo de producto biológico a analizar, conservación ( cadena de frío) y transporte su realización,
debe ser coordinada previamente con el Laboratorio de Microbiología.
TOMA DE MUESTRAS PARA ESTUDIO PARASITOLÓGICO Y MICOLÓGICO
INTRODUCCIÓN.
Las enfermedades parasitarias contribuyen en forma importante a los problemas médicos, económicos y
sociales en el ámbito mundial; su trasmisión está condicionada con frecuencia por las condiciones sanitarias
y socio-culturales entres otras. Factores ambientales como altitud, clima, ríos, etc. desempeñan un rol
importante, estando los esfuerzos de control destinados a romper el ciclo vital del parásito en uno o varios
puntos del ciclo, ya sea eliminando un vector, asegurando el suministro de agua depurada o desarrollando
medios sanitarios para e la eliminación de excretas o destruyendo el reservorio de infección.
En este contexto, la incidencia de algunas enfermedades parasitarias endémicas a disminuído en algunas
partes del mundo, mientras que otras parasitosis se han convertido en un problema de salud pública; parásitos
emergentes como Toxoplasma gondii, Cryptosporidium parvum, Isospora belli, Microsporidium, entre otros;
que causan infecciones graves en pacientes inmunodeprimidos, representan un problema creciente.
Con relación a las enfermedades micóticas, se destaca que el interés por la micología médica ha sufrido un
cambio radical en la última década. La atención creciente por este grupo de agentes (hongos), ha sido
necesaria debido al incremento en la cifra de pacientes inmunodeprimidos, la pandemia de SIDA en especial,
ha derivado en una mayor atención hacia las micosis y ha creado conciencia en los médicos clínicos en lo
que respecta a este tema. A ello se suma el aumento de pacientes con tratamientos prolongados con
antibióticos de amplio espectro, corticosteroides, inmunosupresores, cirugía mayor, etc. En suma el avance
en la tecnología médica y el advenimiento de la infección por VIH, hacen que micosis como criptococosis,
histoplasmosis,
candidiasis, aspergilosis, no constituyen ya hallazgos raros y los agentes causales empiezan a encontrarse
cada vez con mayor frecuencia en los laboratorios. Es necesario que los médicos sean cada vez más
conscientes de los diversos síntomas y signos clínicos de las enfermedades micóticas y de las formas
adecuadas de recoger los especimenes y transportarlos al laboratorio.
Tanto para las parasitosis como para las micosis, el diagnóstico correcto requiere que el médico considere:
1) Que la sintomatología y signología clínica que presenta el paciente pueden ser causadas por un parásito o
un hongo.
2) Que se obtengan las muestras adecuadas en cantidad y calidad y se transporten al laboratorio en forma
correcta.
3) Que el laboratorio examine en forma competente los especímenes.
4) Que los resultados obtenidos por el laboratorio sean debidamente informados al médico tratante.
5) Que estos resultados sean interpretados en forma correcta. El diagnóstico de las enfermedades parasitarias
se establece en la mayoría de los casos por la demostración morfológica del parásito, de sus formas
evolutivas o estructuras parasitarias (examen
parasitológico) o por la respuesta inmune a ellos (estudios inmunológicos).
El diagnóstico de las enfermedades micóticas se establece con la demostración morfológica del hongo
(examen micológico directo) y el aislamiento e identificación del agente fúngico en los cultivos. También se
utilizan en el diagnóstico de las micosis estudios inmunológicos ya sea para detección de anticuerpos o
antígenos circulantes.
La eficacia con la cual cualquier paciente con una afección parasitaria o micótica potencial, es valorado y
tratado adecuadamente depende de un correcto diagnóstico de laboratorio, a su vez para que ello sea posible
es imprescindible que la muestra seleccionada para el estudio sea adecuada en cantidad y calidad, sea
transportada y procesada rapidamente en el laboratorio; solo de esta forma se evitarán costos inútiles y falsos
negativos que van en detrimento del diagnóstico.
OBJETIVOS
El objetivo de este trabajo es actualizar los conceptos, con relación a la toma, transporte y conservación de
las muestras para estudio parasitológico y micológico, haciendo hincapié en aquellas muestras con las que se
trabaja frecuentemente en la práctica clínica y en los puntos críticos que determinarán la calidad de la
muestra a estudiar y por ende el resultado que el laboratorio informará al médico solicitante.
MUESTRAS PARASITOLÓGICAS
Conceptos generales.
· Las muestras deben estar acompañadas de su respectiva solicitud, en la que deben constar todos los datos
solicitados por el laboratorio y los que el médico considere relevante para el estudio.
· El tipo de muestra recogida dependerá del parásito sospechado. El conocimiento del ciclo vital del parásito
ayuda a determinar el tipo, la cantidad y la frecuencia de las muestras necesarias para el diagnóstico.
· Los tubos, viales, frascos (vidrio o plástico) donde se recolecten las muestras deben estar limpios,
preferentemente estériles y con tapón hermético y correctamente rotulado con nombre del paciente, número
de registro, procedencia, y fecha, entre otros.
Tipos de muestras más usuales.
Las muestras solicitadas con mayor frecuencia para estudio parasitológico son:
· Materia fecal. (Examen coproparasitario).
· Muestra de margen anal. (Espátula adhesiva).
· Muestras macroscópicas de parásitos sobre todo entéricos (helmintos).
· Escamas de piel (para diagnóstico de sarna).
· Muestras macroscópicas de secreciones u otras con pseudoparásitos (para identificación).
1. MUESTRAS PARA ESTUDIO PARASITOLÓGICO

1.1. Muestras para estudio parasitológico de tracto gastrointestinal.
1.1.1. Materia fecal.
El examen parasitológico de heces conocido como examen coproparasitario, es un conjunto de técnicas
diagnósticas que constituyen la indicación metodológica para la identificación de la mayoría de las
enteroparasitosis causadas por protozoarios o helmintos. La indicación de un examen coproparasitario, debe
tener en cuenta las características del cuadro clínico que presenta el paciente, y debe atender al parásito que
se sospecha, teniendo como premisa que esta metodología es útil para protozoarios y helmintos, cuyas
formas evolutivas (trofozoítos, quistes, ooquistes, huevos, larvas, adultos) se emiten con las materias fecales.
Para obtener resultados satisfactorios de un examen coproparasitario, debe cumplir con los siguientes
requisitos:
1) Solicitud de Examen coproparasitario.
2) Preparación del paciente.
3) Muestra correctamente obtenida.
4) Muestra seriada (3 muestras mínimas de materia fecal).
1) En la solicitud del examen, siempre debe constar además de los datos filiatorios del paciente, los datos
clínicos (sintomatología, signología clínica relevante, diagnóstico clínico presuntivo), antecedentes
personales, familiares y ambientales a destacar.
Antecedentes personales de inmunodepresión, de viaje al extranjero (zonas endémicas de parasitosis exóticas
o de baja prevalencia para nuestro medio); antecedentes ambientales como vivienda sin agua potable,
saneamiento, etc.; antecedentes familiares de parasitosis (parasitosis de grupo o parasitosis con una fuente de
infección común para todos los integrantes), no deben obviarse en la solicitud, ya que tienen implicancias en
el procesamiento de la muestra.
Es importante saber si el paciente ha recibido antidiarreicos, antiparasitarios y/o antibióticos y en tal caso
cuales; se indicará el examen coproparasitario antes de iniciar tratamiento con cualquiera de los fármacos
mencionados, si es posible.
Todos estos datos pueden adaptar u orientar la secuencia de técnicas diagnósticas que ejecutará el
especialista en el laboratorio y son condición imprescindible para obtener resultados fidedignos.
2) Debe indicársele al paciente la realización de un régimen alimentario 48-72 hs. antes de realizarse el
estudio, libre de frutas, verduras y grasas, dado que preparaciones con abundantes residuos o grasas,
obstaculizan la visualización microscópica, pudiendo ser causa de falsos negativos.
3) Una muestra correcta de materia fecal para realizar un examen coproparasitario debe ser suficiente (mayor
de 50 grs.), debe ser emitida recientemente pudiéndose conservar en heladera hasta unas 8-12 horas, debe ser
enviada al laboratorio correctamente rotulada con nombre completo del paciente y fecha de emisión, en
frasco de vidrio o plástico transparente, limpio, seco y de boca ancha, con tapa de rosca. La muestra debe
recolectarse sin mezcla de orina, para evitar el deterioro de parásitos.
4) La muestra debe ser seriada, considerándose que muestras únicas solo permiten diagnósticos positivos en
60% de las materias fecales con parásitos; que tanto protozoarios como helmintos tienen ciclos de
eliminación de quistes y huevos, con períodos negativos.
Existen diferentes esquemas sobre la secuencia de recolección de materias fecales para realizar un examen
coproparasitario; algunos de los mas usados indican: 3 muestras en días alternos o 3 muestras separadas 1
semana entre sí, teniendo siempre presentes las premisas antes mencionadas para la colecta de la muestra.
A.- MATERIAL NECESARIO:
Frasco de vidrio o de plástico, limpio y seco, transparente, de boca ancha y con tapa de rosca. No se deben
utilizar recipientes con medios de transporte.
B.- TÉCNICA:
Si son formadas o pastosas se toma una porción del recipiente donde hayan sido emitidas, y se transfieren al
frasco que se enviará al laboratorio. En caso de que sean líquidas puede emplearse jeringa para pasar la
muestra al frasco de envío. Se descartarán muestras contaminadas con orina.
C.- VOLUMEN MÍNIMO:
Heces formadas o pastosas: tamaño de una nuez. Heces líquidas: 10-15 ml.
D.- TRANSPORTE:
Deben enviarse lo antes posible al laboratorio, de no ser así se podrán mantener refrigeradas a 4 ºC hasta 8-
12 hs, antes de ser procesadas. Nunca se guardarán en estufa o a temperatura ambiente hasta el envío.
1.1.2. Espátula adhesiva.

Como ya se mencionó, el examen coproparasitario es útil para aquellos parásitos, en los que alguna de sus
formas evolutivas se emite mezclada con las materias fecales. Esta consideración excluye a Enterobius
vermicularis (oxiuro), dadas las características biológicas del ciclo de este parásito, en el cual la hembra
realiza la oviposición en la margen anal; por lo que el diagnóstico se realiza buscando huevos mediante el
método de la espátula adhesiva o método de Graham.

Espátula adhesiva artesanal (baja lenguas con cinta engomada hacia afuera, en uno de los extremos, colocada
en el interior de un tubo de vidrio o plástico transparente) o espátula adhesiva comercial. Ambas deben ser
suministradas por el laboratorio.
B.- TÉCNICA:
Debe tomarse en la mañana cuando el paciente se despierta, sin previa higiene de la margen anal, se saca la
espátula adhesiva del recipiente que la contiene y se aplica 2 o 3 veces la zona engomada de la cinta
alrededor del ano. Se coloca la espátula en el recipiente, se guarda refrigerada a 4 ºC y se realiza la misma
operación durante 3 mañanas consecutivas.
C.- TRANSPORTE:
Debe enviarse lo antes posible al laboratorio, de no ser posible se mantendrá refrigerada a 4 ºC hasta 12
horas antes de ser procesada.
D.- MUESTRAS INADECUADAS:
No sirven espátulas contaminadas con heces, dado que no se puede realizar la lectura microscópica.
1.1.3. Muestras macroscópicas de parásitos entéricos.
Ocasionalmente el paciente, concurre a la consulta con ejemplares adultos de helmintos como Ascaris
lumbricoides, Enterobius vermicularis, proglótides de Taenia sp., encontrados en la margen anal. Dichas
muestras deberán remitirse al laboratorio para su identificación.
A.-MATERIAL NECESARIO:
Frasco de vidrio o de plástico trasparente, de boca ancha, con tapa de rosca. Suero fisiológico o alcohol.
B.- TÉCNICA:
La muestra debe colocarse en el recipiente seleccionado para dicho fin, cubierta con suero fisiológico o
alcohol.
C.- TRANSPORTE:
Si la muestra se coloca en suero fisiológico debe enviarse inmediatamente al laboratorio, de lo contrario se
optará por conservarla en alcohol, no debiéndose demorar el envío al laboratorio mas allá de 24 hs.
D.- MUESTRAS INADECUADAS: No deberán enviarse muestras sin el agregado de suero fisiológico
o alcohol o agua destilada, ya que la desecación del parásito puede dificultar la identificación.
1.1.4. Muestras macroscópicas con pseudoparásitos.
Es frecuente la eliminación de moldes mucosos u otras estructuras en materia fecal, que pueden ser
confundidas sobre todo con helmintos entéricos. En dichas situaciones el material se debe remitir al
laboratorio para su identificación.
A.-MATERIAL NECESARIO:
La muestra debe colocarse en un frasco de vidrio o de plástico trasparente, de boca ancha, con tapa de rosca,
cubierta con suero fisiológico o alcohol.
B.- TRANSPORTE:
Debe enviarse inmediatamente al laboratorio, de lo contrario se optará por conservarla a 4 ºC, no debiéndose
demorar el envío al laboratorio mas allá de 24hs.
1.1.5. Sondeo duodenal.

Esta muestra se utiliza fundamentalmente en el diagnóstico de algunas enteroparasitosis, fundamentalmente
giardiasis, cuando los coproparasitarios son negativos; también puede ser útil en el diagnóstico de
distomatosis, entre otras. No es sustituto del anterior, sino que es un examen complementario que se reserva
para situaciones clínicas particulares.
La técnica es de resorte del especialista. El aspirado se coloca en un tubo de vidrio plástico transparente,
limpio y seco. La cantidad de la muestra es de 2-5 ml y deberá transportarse inmediatamente al laboratorio
para su estudio. De no ser posible se podrá mantener refrigerada a 4 ºC no más de 2 a 4 horas. El estudio se
coordinará siempre con el laboratorio, de forma tal que se encuentre el parasitólogo en el momento de
analizar la muestra.
1.1.6. Aspirado de lesiones intestinales por rectosigmoidoscopía.

Cuando clínicamente se sospecha amibiasis y los coproparasitarios seriados son negativos, se puede realizar
una rectosigmoidoscopía, la que permitirá observar la presencia de lesiones en la mucosa y aspirar material
para estudio parasitológico e incluso biopsiar la zona afectada. La técnica es de resorte del especialista. El
material aspirado de las lesiones se colocará en tubo de vidrio o plástico, preferentemente estéril. La cantidad
mínima de la muestra a enviar debe se de 1-2 ml, se transportará inmediatamente al laboratorio. De no ser
posible se podrá mantener refrigerada a 4 ºC no mas de 2-4 horas. El estudio se coordinará siempre con el
laboratorio, de forma tal que se encuentre el parasitólogo en el momento de analizar la muestra.
1.1.7. Biopsias de intestino.

Las biopsias de intestino, pueden ayudar en el diagnóstico de algunas enteroparasitosis (giardiasis, amibiasis,
entre otras), sin embargo no se debe olvidar que estas técnicas invasivas, quedarán reservadas para
situaciones clínicas, en las que se hallan agotado todas las metodologías diagnósticas clásicas no invasivas.
La técnica biópsica es de resorte del especialista. La biopsia se colocará en tubo de vidrio estéril, con el
agregado de 1-2 ml de suero fisiológico estéril, en forma proporcional al tamaño de la muestra, para evitar la
desecación. Para el transporte y conservación se tendrán las mismas consideraciones mencionadas en los
ítem 1.1.5 y 1.1.6.
1.2. Muestra para estudio parasitológico de piel.

Este examen se solicita habitualmente para el diagnóstico de sarna o escabiosis. Es ideal que la toma de
muestra para este estudio se realice en el laboratorio, siendo el especialista (médico Parasitólogo o
especialista en Laboratorio Clínico) quien seleccione la zona mas representativa de la afección para realizar
la toma.

Cajas de Petri estéril o láminas de vidrio limpias y hoja de bisturí.
B.- TÉCNICA:
Se realizará intenso raspado de la piel, con hoja de bisturí en la zona afectada.
Se seleccionará preferentemente, las zonas en la que se observen micropápulas, trayectos, surcos o vesículas
perladas.
Si se observan lesiones en cara anterior de puño o espacios interdigitales de manos o región inguinal, se
seleccionarán estas zonas. Si la toma se realiza en el laboratorio las escamas de piel recolectadas se colocan
directamente en las laminas de vidrio, si las mismas deben ser transportadas se recolectarán en caja de Petri.
C.- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN:

Es recomendable la realización de varias láminas para aumentar las posibilidades diagnósticas.
D.- TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN:
Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio, debe enviarse dentro de las 24 horas, manteniéndose
a temperatura ambiente.
E.- OBSERVACIONES:
Se debe tener presente que el diagnóstico de sarna es clínico, epidemiológico y parasitológico y que este
último tiene un porcentaje de falsos negativos que oscila entre 40-60%.
1.3. Muestras para estudio parasitológico en sangre.

El examen parasitológico en sangre, se realiza habitualmente para el diagnóstico de algunas parasitosis
hemoresiduales como: enfermedad de Chagas, paludismo, filariasis, tripanosomiasis africana, entre otras.
Excepto la enfermedad de Chagas y el paludismo, las otras parasitosis mencionadas son exóticas para
nuestro medio; pero se debe tener presente que el aumento en la frecuencia de viajes a diversas partes del
mundo, con fines turísticos, laborales u otros, hacen, por ejemplo, que en los últimos años en nuestro país
aumentaran los casos de pacientes con paludismo, adquiriendo relevancia la realización de un diagnóstico
clínico y de laboratorio correcto de esta parasitosis que es propia de la región amazónica de nuestro país y de
otras áreas tropicales del mundo. Métodos habituales para diagnosticar parásitos en sangre, son el examen en
fresco de sangre y el estudio de películas de esta.
En relación a las películas de sangre, habitualmente se preparan 2 tipos: unas finas y otras gruesas.
Las preparaciones de películas finas, reciben el nombre de frotis y las gruesas reciben el nombre de gota
gruesa o gota espesa.
Para el diagnóstico se prefiere la gota gruesa ya que tiene 16 a 30 veces más sangre por campo de
microscopio que un frotis, por lo que aumenta las posibilidades de detectar infecciones leves y disminuye el
tiempo necesario para efectuar un examen fiable. En una gota gruesa bien preparada, se puede examinar
aproximadamente en 5 minutos la misma cantidad de sangre que se examina en 30 minutos en un frotis.
Sin embargo, si bien un parasitólogo experimentado puede determinar el parásito y la especie en una gota
gruesa, esta técnica no es la ideal para observar las características morfológicas de los parásitos. Estas
características morfológicas, particularmente la de los parásitos del paludismo o malaria, son mas precisas en
los frotis y muchas veces estas preparaciones se requieren para la identificación definitiva de la especie. Por
estas razones para los exámenes habituales se deben preparar tanto frotis como gotas gruesas.
1.3.1. Sangre en fresco.

Habitualmente para realizar un examen de sangre e fresco, la muestra debe obtenerse en el laboratorio; el
mismo consiste en la observación de una gota de sangre recién obtenida entre lámina y laminilla. Es útil para
la observación de tripanosomas y microfilarias (para esta última “parasitosis exótica” es recomendable
obtener las muestras durante la noche).
1.3.2. Frotis de sangre.

Láminas de vidrio limpias, aguja estéril, jeringa estéril, material para desinfección de piel (algodón –alcohol
70º).
B.- TÉCNICA:
La sangre para el examen, se puede obtener por punción digital, punción del lóbulo de la oreja o por
venoclisis. Si se emplea alcohol al 70% para desinfectar el punto de punción se esperará que este se evapore
completamente, antes de realizar la punción.
Se coloca una gota de sangre de 2 a 4 mm de diámetro, a 1 cm de uno de los extremos de un portaobjetos
limpio y sin polvo; se apoya sobre una mesa o superficie plana, sosteniéndolo firmemente. Se toma un
segundo portaobjetos, que se sostiene con el pulgar e índice de la mano hábil; este portaobjetos extensor se
aplica sobre la superficie del primero en ángulo de 35-45º y deslizándolo en retroceso desde la gota de
sangre, se extenderá con rapidez moderada, hasta que toda la sangre se haya extendido en una película de
mediano espesor. El espesor de la extensión se puede ajustar cambiando el ángulo del portaobjetos extensor o
la rapidez de extensión, o utilizando una gota mas grande o mas pequeña de sangre. En las extensiones de
espesor óptimo, los leucocitos no deben estar demasiado próximos y los hematíes pueden superponerse en
una parte de ellas, pero la distribución y separación de los hematíes son buenas hacia el extremo delgado.
El borde del portaobjetos extensor debe ser liso, de no ser así la extensión presentará flecos con abundantes
leucocitos.
El frotis debe secarse agitando rápidamente al aire. El secado lento da lugar a una contracción artificial de las
células.
El portaobjetos debe etiquetarse, marcando nombre del paciente, con lápiz en el extremo mas grueso de la
película de sangre.
Es recomendable la realización de 2 o 3 frotis como mínimo.
D.- TRANSPORTE:
Deben enviarse al laboratorio inmediatamente para realizar las coloraciones, de no ser posible se mantendrán
a temperatura ambiente, no mas 24 hs, ya que la sangre empieza a perder su afinidad por los colorantes entre
las 24-72 horas.
E.- MUESTRAS INADECUADAS:
En el caso de que la muestra de sangre se obtenga por venopunción, no debe usarse jeringas con
anticoagulantes. Los anticoagulantes pueden causar distorsión morfológica de los parásitos al interferir en la
tinción, sobre todo los estadíos de plasmodios, apareciendo poco coloreados o degenerados. Sin embargo no
alteran la morfología de microfilarias, ni de Trypanosomas..
No se debe cubrir toda la superficie del portaobjetos, una extensión buena comprende una porción mas
gruesa y otra mas delgada, con una transición entre ambas; su aspecto tiene que ser liso y nivelado, sin
ondulaciones, resaltes ni poros.
1.3.3. Gota gruesa.

Láminas de vidrio limpias, aguja estéril, jeringa estéril, material para desinfección de piel.
B.- TÉCNICA:
La sangre para el examen, se puede obtener por punción digital, punción del lóbulo de la oreja o por
venoclisis. Se debe colocar 2 o 3 gotas de sangre sobre el portaobjetos, dejando caer una encima de otra. Si la
muestra se obtiene por digitopunción se presionará el pulpejo dejando caer las gotas directamente sobre el
porta; si es por venopunción se dejará gotear directamente de la jeringa. Se deja secar a temperatura
ambiente.

Igual que para el frotis.
D.- TRANSPORTE:
Igual que para el frotis.
Una película gruesa, debe ser lo bastante delgada como para leer a su través un impreso; si es demasiado
gruesa, se puede desprender del portaobjetos. Las películas gruesas no debe secarse en estufas, o cerca de
mecheros, el exceso de temperatura puede fijar los eritrocitos y evitar la deshemoglobinización que
posteriormente se realizará en el laboratorio antes de teñir la lámina.
1.3.4. Muestra de sangre para microhematocrito.
Esta técnica se utiliza sobre todo en lactantes y niños pequeños, para el diagnóstico parasitológico de
enfermedad de Chagas. La misma permite la extracción de una cantidad pequeña de sangre, y aumenta las
posibilidades diagnósticas, ya que en este procedimiento mediante centrifugación, se concentran los
tripomastigotas de T.cruzi junto a los leucocitos, en la interfase eritrocitos-plasma, zona a partir de la cual se
preparan las láminas para observación.
Tubos pequeños o Ependorff con anticoagulantes (citrato, EDTA o heparina), aguja estéril, jeringa estéril,
material para desinfección de piel.
B.- TÉCNICA:
La sangre para el examen, se obtiene por venopunción. Se coloca inmediatamente en el tubo seleccionado.
Es suficiente con 1 a 2 ml de sangre.
D.-TRANSPORTE:
Debe trasladarse inmediatamente al laboratorio para su procesamiento; ya que el diagnóstico se hace
mediante la observación de las formas vivas de tripomastigotas de T.cruzi. De no ser posible, la extracción de
sangre deberá hacerse en el laboratorio.
No se procesarán muestras de sangre, que tengan mas de 2-3 horas de extraídas, ya que algunos de los
anticoagulantes mencionados alteran la viabilidad de los parásitos, en forma proporcional al tiempo de
exposición.
1.3.5. Muestras de sangre para centrifugación diferencial.
Esta técnica de uso poco frecuente, se utiliza para el diagnóstico parasitológico de la enfermedad de Chagas.
El fundamento de la misma es la concentración de los tripomastigotas de T.cruzi, luego de centrifugación de
la sangre a diferentes velocidades.
Tubos de 10 ml, con anticoagulantes (citrato, EDTA o heparina), aguja estéril, jeringa estéril, material para
desinfección de piel.
B.- TÉCNICA:
La sangre para el examen, se obtiene por venopunción. Se coloca inmediatamente en el tubo seleccionado.

5-8 ml de sangre.
D.-TRANSPORTE:
Igual que para el microhematocrito.
Igual que para el microhematocrito.
1.4. Muestra para estudio parasitológico en orina.
Las muestra de orina se puede utilizar para diagnóstico de trichomoniasis en el hombre y también es útil para
buscar huevos de Schistosoma haematobium y microfilarias.
Frasco de plástico o de vidrio de boca ancha, con tapa de rosca hermético, limpio, seco, preferentemente
estéril; jabón neutro.
B.- TÉCNICA:
La muestra mas representativa es la de la primera micción de la mañana.
Lavado de manos con agua y jabón, lavado de región genital retraer completamente el prepucio, que se
mantendrá así hasta terminar de recoger la muestra, lavar el glande con jabón neutro y enjuagar con
abundante agua; luego se depositará la orina en el recipiente.
5-10 ml de orina.
D.-TRANSPORTE:
Para la búsqueda de trichomoniasis, la orina a estudiar debe ser recién emitida, por lo cual se enviará la
muestra inmediatamente al laboratorio para su estudio, de no ser posible se realizará la toma en el
laboratorio. Para las otras parasitosis se puede mantener en heladera, hasta 12 hs.
No se procesarán muestras de orina que tengan mas de 1-2 hs de emitida, dado que el diagnóstico de
trichomoniasis se establece por la visualización de los trofozoítos en movimiento; en períodos de tiempo
mayores a los mencionados anteriormente, estos mueren no observándose las formas móviles.
1.5. Muestra para estudio parasitológico de exudado vaginal.
Se utiliza en el diagnóstico de trichomoniasis vaginal. Habitualmente la muestra de exudado vaginal para
estudio parasitológico, micológico y bacteriológico se realiza en el laboratorio, tomándose muestras para el
estudio de las diferentes agentes etiológicos involucrados.
A. PREPARACIÓN DEL PACIENTE:

Debe indicársele a la paciente que 24 horas antes, no debe utilizar óvulos, pomadas o soluciones antisépticas
vaginales; no mantener relaciones sexuales y para realizar el examen no debe estar menstruando.
B.- MATERIAL NECESARIO:
Camilla ginecológica, espéculo estéril, pipetas Pasteur de plástico descartables o de vidrio, estériles; tubos
vidrio con 1 ml de suero fisiológico estéril.
C.- TÉCNICA:
Con la paciente en posición ginecológica, se introducirá el especulo, se utilizará agua templada para lubricar
si es necesario.
Se recogerá la muestra aspirando con la pipeta, de la zona de mayor exudado o del fondo de saco vaginal
posterior. Se colocará la totalidad del exudado aspirado en el tubo con suero fisiológico.
D.- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN:
Es suficiente con 0.5 a 1ml de exudado.
E.-TRANSPORTE:
Debe trasladarse inmediatamente al laboratorio para su procesamiento; ya que el diagnóstico se hace
mediante la observación de los trofozoitos móviles de Trichomonas vaginalis. Se puede guardar en estufa a
37ºC no más de 1 hora.
F.- MUESTRAS INADECUADAS:
No son adecuadas las muestras de exudados en medios de transporte.
1.6. Muestra para estudio parasitológico de secreciones bronquiales.
En la expectoración se pueden observar larvas de diferentes helmintos (Ascaris lumbricoides, Srongyloides
stercoralis), membranas de un quiste hidático roto, ganchos o protoescólices de la hidátide, entre otros.
Frasco de plástico o de vidrio de boca ancha, con tapa de rosca hermética, limpio, seco, preferentemente
estéril.
B.- TÉCNICA:
La muestra a estudiar puede ser expectoración, aspirado traqueal o lavado bronquioloalveolar. Cualquiera de
ellas se colocará en el recipiente seleccionado y se enviará la laboratorio.
C.- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN: 2-5 ml.
D.-TRANSPORTE:
Se enviará inmediatamente al laboratorio, de no ser posible se puede mantener en heladera, hasta 12 horas.
E.- OBSERVACIONES:
Es frecuente el envío al laboratorio de moldes bronquiales mucosos, cuya morfología se confunde con
parásitos (sobre todo helmintos), se enviará en las condiciones antes mencionadas; si es necesario se puede
adicionar 1-2 ml de suero fisiológico para evitar desecación del material.
1.7. Biopsias para estudio parasitológico.

Las biopsias para este estudio, procederán de diferentes localizaciones anatómicas dependiendo de la
parasitosis que clínicamente se sospeche. Por ejemplo, en úlceras de córnea se podrán investigar la presencia
de amibas de vida libre como agente etiológico de dichas úlceras. Biopsias intestinales permiten el
diagnóstico de giardiasis, amibiasis, criptosporidiasis, isosporidiasis, en aquellos casos en los que no se
realizó el diagnóstico por las técnicas habituales; biopsias de ganglio pueden ayudar en el diagnóstico de
leishmaniasis; ocasionalmente biopsias de músculo en el diagnóstico de triquinosis o sarcoidosis; biopsias de
piel en el diagnóstico de leishmaniasis y amibiasis cutánea; entre otras.
Frente a cualquiera de estas parasitosis que se planteen, algunas frecuentes en nuestro medio y otras exóticas;
es importante tener presente que siempre se coordinará con el laboratorio de parasitología la oportunidad
para realizar la biopsia y las condiciones en las que debe enviarse la misma, en función de la parasitosis a
estudiar. Es recomendable que además del estudio parasitológico se realice estudio histológico del material
biópsico.
La mayoría de las biopsias para estudio parasitológico deben cumplir con las siguientes condiciones:
Frasco o tubo, de plástico o vidrio, con tapa, herméticamente cerrado, limpio, seco y estéril. Suero
fisiológico estéril. Materiales necesarios para la ejecución de la biopsia dependiendo de la localización
anatómica.
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista, en función de la localización anatómica de la misma. Una vez obtenida la
muestra se colocará en el recipiente seleccionado y se le agregará 1-2 cm de suero fisiológico, en función del
tamaño de la muestra (muestras pequeñas menor cantidad de suero y viceversa, respetando el rango antes
mencionado).
C.- NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN:
Es suficiente con una muestra de aproximadamente 05-1cm de diámetro. Biopsias de algunas localizaciones
como por Ej. córnea pueden ser de menor tamaño.
D.-TRANSPORTE:
Se enviará inmediatamente al laboratorio, de no ser posible se puede mantener en heladera, hasta 8-12 horas.
E.- OBSERVACIONES:
El exceso de suero fisiológico, hace que los tejidos se embeban en dicho líquido, dificultando el
procesamiento del material y lectura de las coloraciones. Las muestras sin el agregado de suero pueden
desecarse, impidiendo el procesamiento de las mismas. No se deben utilizar medios de transporte para
estudio parasitológico.
1.8. Muestras de fluidos biológicos para estudio parasitológico.
En líquidos orgánicos, habitualmente estériles, también se puede buscar la presencia de parásitos.
En humor acuoso, LCR, líquido peritoneal, pericárdico, articular etc. El líquido a estudiar estará en función
de la parasitosis que se sospeche. Por ejemplo en muestras de humor vítreo se puede investigar la presencia
de amebas, en líquido amniótico la presencia de T.gondii, entre otros. Sin embargo no son muestras
habituales para estudio parasitológico, ya que la mayoría de las parasitosis se diagnostican por el examen de
algunas de las muestras ya mencionadas o mediante estudios inmunológicos.
La realización de dicho examen siempre debe coordinarse con el laboratorio de parasitología.
Frasco o tubo, de plástico o vidrio, con tapa, herméticamente cerrado, limpio, seco y estéril.
B.- TÉCNICA:
Variará dependiendo del líquido corporal de que se trate, pero siempre se seguirá una técnica rigurosa de
asepsia de la zona a puncionar. La muestra se obtiene por punción y se coloca en el recipiente seleccionado.
5-8 ml de líquido.
D.-TRANSPORTE:
Debe trasladarse inmediatamente al laboratorio, se pueden mantener en heladera 2-4 h.
No son adecuadas las muestras de líquidos en medios de transportes, ni muestras de líquidos en hisopos.
1.9. Muestras para cultivo parasitológico.

Existen medios de cultivos diferenciales para algunas parasitosis. Esta metodología diagnóstica no se realiza
de rutina en los laboratorios de diagnóstico, sino que se utilizan sobre todo en laboratorios de investigación.
Se mencionan aquí dado que algunos de ellos están disponibles en nuestro medio y son de ayuda diagnóstica
en algunas situaciones clínicas en particular.
A modo de ejemplo se citan: medios como el NNN o LIT para el cultivo de T.cruzi, cultivos celulares para
T.gondii, cultivo celulares para G.lamblia; etc.
La muestra a enviar dependerá de la parasitosis y de la localización anatómica de la misma (sangre, líquido
amniótico, humor acuoso, biopsias, etc.).
La obtención, el transporte y conservación de estas muestras deberá coordinarse previamente con el
laboratorio parasitológico que realice los cultivos, ya que las condiciones de la muestra dependen del tipo de
cultivo con el que se trabaje.
1.10. Muestras para trepoinvestigación.

Esta técnica se utiliza en el diagnóstico de sífilis primaria o sífilis secundaria. Básicamente consiste en
recolectar secreciones a partir de la lesión (chancro sifilítico, placas mucosas, sifilides, etc.), mediante
raspado con hoja de bisturí; el material se coloca entre lámina y laminilla y se observa inmediatamente en
microscopio de campo oscuro; el diagnóstico se establece por la morfología y movilidad característica de
Treponema pallidum. Por las características propias de la técnica esta muestra se debe obtener en el
laboratorio de Microbiología, ya que no es posible transportar la misma porque los espiroquetes se mueren
rápidamente.
2. MUESTRAS PARA ESTUDIO INMUNOLÓGICO DE PARASITOSIS

La detección de anticuerpos circulantes, es una metodología de diagnóstico habitual en las afecciones
parasitarias, fundamentalmente en las parasitosis hemotesiduales. La muestra a estudiar para la mayoría de
ellas es suero.
De acuerdo a las características clínicas, antecedentes epidemiológicos, etc. Se solicitará la serología que se
considere pertinente; por ejemplo: serología para toxoplasmosis, serología para enfermedad de Chagas,
serología para toxocariasis, etc
Tubo de vidrio o plástico, con tapa de rosca hermético, limpio y seco.
B.- TÉCNICA:
Luego de realizar asepsia de la piel, se extrae sangre por venopunción.
5-10ml.
D.-TRANSPORTE:
Se enviará inmediatamente al laboratorio.
Para algunas parasitosis también se pueden detectar antígeno circulante en suero, LCR u otros fluidos
biológicos. En estos casos se debe coordinar previamente con el laboratorio de parasitología, tanto para
obtención de la muestra como para transporte y conservación
v MUESTRAS MICOLÓGICAS
La eficacia con la que se realice un diagnóstico micológico correcto está vinculada al grado de perfección
con el que se conjuguen algunas de las siguientes premisas.
El primer lugar, es el médico clínico (médico general, internista, infectólogo, hematólogo, dermatólogo entre
otros especialistas) quien sospecha la presencia de una micosis, por lo cual debe conocer los síntomas y
signos de la misma, para solicitar al laboratorio la realización de los estudios micológicos pertinentes.
Si el médico no establece un diagnóstico presuntivo de una micosis, o no logra obtener muestras adecuadas
en cantidad y calidad, o remite las muestras en contenedores inapropiados, o con el agregado de medios de
transporte o sustancias químicas no específicas para un estudio micológico, o envía la muestra horas/días
después de su obtención; el resultado de ello será la pérdida de la muestra o un falso negativo.
Por otro lado el rol del micólogo va a ser decisivo en el diagnóstico, dado que si éste deja de realizar la
observación directa de las muestras (con fresco y coloraciones), o no selecciona para el cultivo los medios
apropiados para el aislamiento de ciertas especies de hongos, sea por omisión o por no haber sido informado
de la impresión clínica del médico solicitante, la posibilidad de establecer un diagnóstico final correcto
puede perderse o quedar gravemente comprometida.
La micosis planteada, asi como el estudio micológico y la selección de la muestra a examinar, estará guiada
por la forma de presentación clínica.
Clásicamente según su localización anatómica, las micosis se pueden dividir en: superficiales,
dermohipodérmicas, profundas localizadas y sitémicas. Según el grado de patogenicidad del hongo se
pueden dividir en: micosis causadas por agentes oportunistas, por patógenos primarios con comportamiento
oportunista o por patógenos primarios. Actualmente no debe olvidarse que hongos que no se consideraban
patógenos o se encontraban limitado a un solo órgano pueden causar enfermedad diseminada en el
inmunodeprimnido. En este contexto se debe tener en cuenta que el aislamiento de algunos hongos en piel,
mucosas u otros sectores, puede no significar una afección localizada, sino que por el contrario ser la
manifestación de una micosis sistémica diseminada.
Conceptos generales.
· Las muestras deben estar acompañadas de su respectiva solicitud, en la que deben constar todos los datos
solicitados por el laboratorio y los que el médico considere relevante para el estudio.
· El tipo de muestra recogida dependerá de la micosis sospechada y de su localización anatómica.
· Los tubos, viales, frascos (vidrio o plástico) donde se recolecten las muestras deben ser estériles y con tapón
hermético y correctamente identificadas (ver conceptos generales en muestras parasitológicas).
Tipos de muestras más usuales.
Las muestras en las que se realiza estudio micológico con mayor frecuencia son:
· Escamas de piel.
· Uñas.
· Pelos.
· Exudados de lesiones mucosas.
· Exudados de heridas, nódulos subcutáneos, absceso subcutáneos, entre otros.
· Hemocultivos
· Lavado bronquioloalveolar.
· Expectoración.
· LCR y otros fluidos biológicos.
· Biopsias de órganos.
· Secreciones vaginales.
· Córnea.
3. MUESTRAS PARA ESTUDIO MICOLÓGICO.

3.1. Muestras para estudio de micosis superficiales.
Este examen se solicita habitualmente para el diagnóstico de micosis superficiales tales como:
dermatofitosis, candidiasis, pitiriasis versicolor, dermatitis seborreica, entre otras.
Las dermatofitosis corresponden al parasitismo de la piel y sus anexos causados por un grupo de hongos
queratinofílicos y queratinolíticos denominados dermatofitos.
Las candidiasis superficiales corresponden a las afecciones de piel y mucosas causadas por especies de
levaduras del género Candida.
La pitiriasis versicolor es una afección de la piel causada por levaduras del género Malassezia (clásicamentre
Malassezia furfur), que se caracteriza por la aparición de máculas hipo- hiperpigmentadas con descamación
furfurácea en dicho sector.
Es ideal que la toma de muestra para este estudio se realice en el laboratorio, siendo el especialista
(Parasitólogo o especialista en Laboratorio Clínico) quien selecciona la zona mas representativa de la
afección para realizar la toma.
3.1.1. Escamas de piel

Cajas de Petri estéril, hoja de bisturí.
B.- TÉCNICA:
Se realizará intenso raspado de la piel, con hoja de bisturí en la zona afectada. En lesiones topografiadas en
piel glabra (cara, cuello, brazos, piernas, pies, entre otros); se seleccionará preferentemente, las zonas en la
que se observen bordes sobreelevados eritematosos y descamantes, o en la periferia de las lesiones y en
aquellos casos en los que presenten ampollas se seccionará el techo de la misma. Las escamas de piel
recolectadas, se colocarán en cajas de Petri estériles.
Es recomendable la recolección de material suficiente para la realización de láminas para examen directo y
para un mínimo de 2 tubos de cultivo.
E.- OBSERVACIONES:
Se deberá tener en cuenta que la sensibilidad del estudio micológico está directamente relacionado con la
cantidad de material obtenido; por lo cual la muestra a estudiar debe ser abundante.
3.1.2. Uñas
Cajas de Petri estéril, bisturí de punta fina, pipetas Pasteur estériles, suero fisiológico, gasa, alcohol.
B.- TECNICA:
La toma de material se realizará colocando la punta del bisturí por debajo de la lámina ungueal y raspando
firmemente; tratando de llegar al límite entre la zona sana y la afectada visualizado clínicamente.
En los casos en los que el despagamiento de la lámina ungueal sea incipiente, se colocará unas gotas de suero
fisiológico con pipeta Pasteur por debajo de la uña con el fin de macerar dicha zona para luego de 5-10
minutos recolectar la muestra.
En las onixis en las que predomine la afectación de la lámina externa de la uña, se obtendrá la muestra
mediante raspado intenso de dicha zona.
Las mismas consideraciones que en el item 3.11.
E.- OBSERVACIONES:
En el caso de lesiones de uñas de pies, se puede realizar limpieza de la zona con una gasa estéril mojada en
alcohol blanco (no alcohol yodado), y realizar la toma luego del secado completo de la zona.
3.1.3. Cuero cabelludo

Cajas de Petri estéril, hojas de bisturí estéril y pinzas sin dientes, estériles.
B.- TÉCNICA:
Para realizar la toma de material en las tiñas de cuero cabelludo, se recolectarán escamas de la zona
alopécica, mediante raspado intenso con hoja de bisturí; luego se observarán los pelos que estén clínicamente
afectados y se extraerán los mismos utilizando las pinzas. En los casos en los que se observen exudados
purulentos, se realizará la recolección del mismo con ansa bacteriológica y se colocará en una lámina de
vidrio limpia, extendiendo suavemente el material evitando los acúmulos; luego se recolectará material con
jeringa estéril si es abundante o con hisopo estéril, sin medio de transporte.
Las mismas consideraciones que en el ítem anterior.
3.1.4. Lesiones mucosas
Láminas de vidrio limpias, hoja de bisturí, hisopo estéril, ansa bacteriológica (descartable o tradicional),
suero fisiológico.
B.- TÉCNICA:
Se realizará raspado de la zona afectada con hoja de bisturí, el material así obtenido se colocará sobre la
lámina de vidrio y se extenderá suavemente con movimientos concéntricos, se repetirá el procedimiento
hasta realizar unas 3-4 láminas promedio, éstas se destinarán para coloraciones; si el material es abundante se
colocará entre lámina y laminilla para observación en fresco, si es escaso se puede agregar una gota de suero
fisiológico para la realización del mismo. Por último se raspará enérgicamente con ansa bacteriológica estéril
y se cultivará en los medios adecuados.
En el caso de que la toma se realice fuera del laboratorio, o que no se cuente con alguno de los materiales
antes mencionados (medios de cultivos, ansas bacteriológicas, laminillas); se procederá de igual forma para
la obtención de láminas para coloraciones y luego se tomarán 2 hisopos estériles humedecidos con suero
fisiológico estéril, se pasará 2- 3 veces por la lesión; uno de ellos se destinará para cultivos y el otro para el
examen en fresco.
Es recomendable la realización de varias láminas para aumentar las posibilidades diagnósticas.
Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio, debe enviarse dentro de las 2-4 horas siguientes,
manteniéndose la muestra refrigerada a 4ºC en este lapso de tiempo.
E.- OBSERVACIONES:
La desecación de los hisopos impide el procesamiento de la muestra.
3.1.5. Heridas de piel.

Láminas de vidrio limpias, hoja de bisturí, hisopo estéril, ansa bacteriológica (descartable o tradicional),
suero fisiológico, jeringa estéril.
B.- TÉCNICA:
Si las lesiones presentan secreciones abundantes, se puede realizar aspirado con jeringa estéril y enviar
rápidamente al laboratorio (1-2 hs). De lo contrario se tomarán muestras raspando con hoja de bisturí
preferentemente en los bordes de la lesión para la realización de frotis para examen directo (ver técnica en
item. 3.1.4) y se tomarán muestras con hisopos para los cultivos.
Es recomendable la realización de varias láminas y 2-3 hisopos.
Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio, debe enviarse dentro de las 2-4 horas siguientes,
manteniéndose la muestra refrigerada a 4ºC en este lapso de tiempo.
E.- OBSERVACIONES:
ver observaciones de items. 3.1.1 y 3.1.4.
3.1.6. Secreciones vaginales.
Se utiliza para el diagnóstico de candidiasis vaginal. Ya se mencionó previamente que la muestra de exudado
vaginal para estudio micológico, parasitológico y bacteriológico se realiza en el laboratorio, tomándose
muestras para el estudio de los diferentes agentes etiológicos involucrados.
A.- PREPARACIÓN DEL PACIENTE:
ver exudado vaginal para estudio parasicológico (item. 1.5).
ver exudado vaginal para estudio parasitológico (item.1.5).
C.- TÉCNICA:
Con la paciente en posición ginecológica, se introducirá el espéculo, se utilizará agua templada para lubricar
si es necesario (no usar antisépticos u otros lubricantes).
Se recogerá la muestra aspirando con la pipeta, de la zona de mayor exudado o del fondo de saco vaginal
posterior. Se colocará la totalidad del exudado aspirado en el tubo con 1 ml suero fisiológico. Si se observan
lesiones en región vulvar se realizará raspado suave con hoja de bisturí, y se extenderá en una lámina con
movimientos circulares, además se tomará con ansa bacteriológica una muestra de la zona afectada y se
colocará en un tubo con 1 ml de suero fisiológico estéril.

Es suficiente con 1- 2 láminas para examen micológico directo y 0.5-1ml de exudado para examen
micológico en fresco y cultivos.
E.-TRANSPORTE:
Debe trasladarse inmediatamente al laboratorio para su procesamiento, o mantenerse refrigerada a 4ºC no
más de 1- 2 hs.
E.- OBSERVACIONES:
Si las muestras no se procesaran inmediatamente, se debe tomar por separado una toma para búsqueda de
Trichomonas vaginales y una toma para búsqueda de hongos, ya que la conservación de las mismas difiere,
requiriendo conservación en estufa o heladera respectivamente.
3.1.7. Secreciones balano- prepuciales.
A.- PREPARACIÓN DEL PACIENTE:
Ver exudado vaginal para estudio parasitológico (item. 1.5).
Hoja de bisturí estéril, hisopo estéril, suero fisiológico, láminas, asa bacteriológica.
C.- TÉCNICA:
Se realizará raspado suave con hoja de bisturí, y se extenderá en una lámina con movimientos circulares en
las zonas donde se observen lesiones. Con asa bacteriológica estéril se tomará una muestra de la zona
afectada mediante raspado intenso, se colocará en un tubo con 1 ml de suero fisiológico estéril.
Si las lesiones son exudativas se tomará también una muestra con hisopo estéril.
Es suficiente con 1- 2 láminas para examen micológico directo y 0.5-1 ml de exudado para examen
micológico en fresco y cultivos.
E.-TRANSPORTE:
más de 1- 2 hs.
3.1.8. Lesiones corneales.
Las lesiones traumáticas a nivel de córnea son relativamente frecuentes, en estas situaciones las queratitis
micóticas adquieren relevancia y por ende su diagnóstico correcto y oportuno, teniendo en cuenta que la
evolución de las mismas es rápidamente progresiva con compromiso de estructuras profundas. Los agentes
involucrados son levaduras y mohos muchos de los cuales son contaminates ambientales (por ej. Aspergillus,
Fusarium, Candida, Dematiáceas, entre otros).
Es ideal que la toma se realice en el laboratorio, la muestra la recolectará el oftalmólogo y el especialista de
Laboratorio realizará los frotis y cultivos en el momento.
Asas bacteriológicas descartables, láminas (portaobjetos), mechero bunssen, medios de cultivos.
B.- TÉCNICA:
Se visualizará la lesión corneal con una buena iluminación, y se raspará con el ansa bacteriológica
preferentemente sobre los bordes de la úlcera, se extenderá elmaterial en las láminas. Se procederá de la
misma forma para realizar los cultivos, los que se sembrarán al lado del mechero. Para la obtención de cada
una de las muestras se utilizará un ansa que se descartará.
Se requieren como mínimo 2 láminas para examen micológico directo y deben realizarse un mínimo de 3
cultivos en Sabouraud-Cloramfenicol.

No son adecuadas las muestras que se realizan con antibioticoterapia o antimicóticos previos y tampoco si se
utilizaron colirios anestésicos, ya que pueden inhibir el desarrollo del hongo.
3.1.9. Conducto auditivo externo.
Está indicado para la búsqueda de otitis externa de etiología micótica, los mohos del género Aspergillus son
los involucrados frecuentemente en esta entidad.
Asas bacteriológicas descartables, láminas (portaobjetos), hisopos estériles, suero fisiológico estéril.
B.- TÉCNICA:
Se visualiza con otoscopio el conducto auditivo externo y se realizan las tomas con ansa bacteriológica
mediante raspado intenso de la zona afectada, se coloca el material obtenido en láminas (portaobjetos) y se
recolecta material con hisopo en forma estéril para los cultivos.
Se requieren como mínimo 2 láminas para examen micológico directo y 2 hisopos para cultivos.
D.- OBSERVACIONES:
Si las secreciones son escasas o las lesiones se caracterizan por ser eczematoasas y secas, debe embeberse
previamente el hisopo en suero fisiológico estéril.
3.2. Muestras para estudio de micosis dermohipodérmicas.

En este grupo de micosis se encuentran esporotricosis, cromomicosis, feohifomicosis, entre otras.
Las lesiones por este grupo de micosis se caracterizan por su pleomorfirmo en la presentación clínica; se
pueden observar nódulos de tamaño pequeño o grande, único o múltiple, que se adhieren a la piel
supraadyacente, con presencia o ausencia de ulceración de piel, que deforman la región, entre otras
características.
Dependiendo de las características clínicas de la lesión, es como se seleccionará la muestra a estudiar.
Para el estudio de este grupo de micosis es fundamental que la muestra se tome en el laboratorio por el
especialista y la mayoría de las veces para establecer un diagnóstico certero es necesario tomar mas de una
muestra.
La muestra se podrá obtener por compresión intensa de bordes laterales de la lesión, sobre todo en aquellas
lesiones nodulares con pequeñas ulceraciones; o por punción con aguja y jeringa de los nódulos subcutáneos,
o por escarificación de la piel y compresión de la zona, o por raspado del subcutáneo, etc.
Es fundamental para el diagnóstico de estas micosis la obtención de muestras representativas (en calidad y
cantidad).
3.3. Muestras para estudio de micosis profundas.

En este grupo se encuentran gran cantidad de agentes micóticos que son capaces de causar enfermedad
profunda localizada o sistémica. Las muestras a estudiar son diversas dependiendo de la localización de la
micosis.
Si se sospecha una micosis profunda es importante que el médico examine cuidadosamente piel y mucosas
ya que alguna de estas micosis en su diseminación afecta este sector del organismo, siendo piel y mucosas
una zona de fácil acceso que puede establecer un diagnóstico precoz, evitando las obtención de muestras por
técnicas invasivas y lo mas importante permitiendo establecer un tratamiento específico en forma inmediata.
En todo paciente en quien se establezca un diagnóstico presuntivo de micosis profunda sistémica debe
estudiarse más de una muestra.
Por ejemplo si se obtiene LCR de un paciente que se sospecha una micosis, se debe enviar muestras de
esputo y sangre. No es excepcional el hallazgo de Cryptococcus neoformans en sangre, con examen directo y
cultivos negativos para LCR.
Además siempre debe interrogarse acerca de viajes a regiones endémicas para despistar micosis exóticas
para nuestro medio, como por ej: coccidiodomicomicosis.
En pacientes inmunodeprimidos pueden presentarse diversas infecciones micóticas oportunistas y
emergentes de localización profunda; las diferentes especies de Aspergillus, Fusarium, Zygomicetos,
levaduras del genero Candida y hongos del grupo de las Dematiáceas (hongos de pared color marrón-negro),
entre otros, así como bacterias filamentosas integrantes del grupo de los Actinomycetales; se encuentran
ampliamente distribuidas en la naturaleza, encontrándose como microorganismos ambientales de la flora
anemófila, o como flora normal de piel y mucosas. Por tanto para poder interpretar el rol de estos agentes
micóticos es fundamental que se seleccionen las muestras a estudiar en forma apropiada y que se tomen en
las condiciones adecuadas; no debiéndose olvidar que en estas situaciones es muy importante el encare en
conjunto del médico clínico con el especialista de laboratorio. Los médicos debemos permanecer alerta a
cerca de las afecciones fúngicas oportunistas en cualquier paciente con alteración de la respuesta inmune; en
estos pacientes los síntomas y signos habituales pueden quedar enmascarados por lo cual puede estar
indicado el estudio de secreciones, de lesiones de piel, etc., incluso en ausencia de signos característicos de
infección micótica.
3.3.1. Muestras del tracto respiratorio inferior.

3.3.1.1. Expectoración.
Se emplea sobre todo para el estudio de las siguientes micosis: histoplasmosis, paracoccidiodomicosis,
aspergilosis pulmonar, criptococosis. Tiene como desventaja que el aislamiento de hongos a partir de esta
muestra o la visualización de los mismos en el examen micológico directo tiene una baja sensibilidad
dependiendo del hongo en cuestión. Sin embargo es una muestra de fácil recolección, que si se obtiene
correctamente puede establecer el diagnóstico de algunas de las micosis antes mencionadas. De forma tal que
es correcto solicitar una muestra de expectoración para estudio micológico, antes de poner en práctica
técnicas invasivas para la obtención de secreciones; pero teniendo siempre como premisa que un resultado
negativo no invalida el diagnóstico y por tanto se debe seguir el algorritmo diagnóstico con el estudio de
otras muestras.
A. - MATERIAL NECESARIO:
Recipiente de boca ancha, con tapa de rosca, de cierre hermético, estéril.
B.- TÉCNICA:
Se indicará al paciente realizar higiene bucal con cepillado de dientes, en forma habitual al levantarse, luego
enjuagarse la boca con agua destilada o suero fisiológico y expectorar dentro del frasco. Se explicará al
paciente que el frasco se destapará solo en el momento de colocar la expectoración en su interior y se cerrará
rápidamente.
Es suficiente con 2-5 ml de secreciones.
D.-TRANSPORTE:
más de 4 - 6 hs.

Muestras que no han sido refrigeradas para su traslado o conservación antes el envío al laboratorio. Muestras
que contengan saliva mayoritariamente.
E.- OBSERVACIONES:
En casos de expectoración escasa se puede inducir el esputo realizando nebulizaciones con 5-10 ml de suero
fisiológico.
3.3.1.2. Lavado bronquioloalveolar.
Se emplea habitualmente para el estudio de las siguientes micosis: neumocistosis, histoplasmosis,
paracoccidiodomicosis, aspergilosis pulmonar, criptococosis. Es la técnica de elección para el diagnóstico de
neumocistosis, no siendo muestras representativas las de expectoración o esputo inducido.
Fibrobroncoscopio, alcohol, suero fisiológico, gasa y algodón estéril, recipiente estéril (de vidrio o plástico).
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista; existen diferentes técnicas de lavado bronquioloalveolar (ver LBA para
muestras bacteriológicas).
Es suficiente con 5-10 ml de secreciones.
D.-TRANSPORTE:
más de 4 - 6 hs.
Muestras que no han sido refrigeradas para su traslado o conservación antes el envío al laboratorio. Muestras
que contengan suero fisiológico mayoritariamente.
3.3.1.3. Biopsia de pulmón.
Se emplea habitualmente para el estudio de las siguientes micosis: neumocistosis histoplasmosis,
paracoccidiodomicosis, criptococosis, aspergilosis pulmonar y candidiasis pulmonar.
Esta muestra es la más representativa para el estudio de micosis en el parénquima pulmonar y en algunos
casos la única que permite establecer un diagnóstico certero como por ejemplo en el caso de las candidiasis
pulmonares.
Por ser una maniobra invasiva debe reservarse para aquellos casos en los que no se ha establecido un
diagnóstico con el estudio de las muestras antes mencionadas.
El material necesario para la ejecución de la biopsia y para conservación y transporte de la muestra tubo o
frasco pequeño de vidrio, estéril de cierre hermético y suero fisiológico estéril.
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista que la realiza; la misma puede ser transbrónquica con fibrobroncoscopía o a
cielo abierto mediante cirugía. La muestra obtenida se colocará en el recipiente en forma estéril y se le
agregará 1-2 ml de suero fisiológico estéril.
Es suficiente con una pieza de aproximadamente 0,5-1 cm de diámetro.
D.-TRANSPORTE:
más de 4 - 6 hs.
Son inadecuadas aquellas muestras que se envíen al laboratorio y se hayan desecado o no hayan sido
manejadas en condiciones correctas de asepsia. No se colocarán en formol u otras sustancias utilizadas
habitualmente para estudio histológico.
3.3.2. Muestras de líquidos biológicos.
3.3.2.1. LCR.
Se emplea habitualmente para el diagnóstico de criptococosis, pero también sirve para el estudio de otras
micosis que afecten el sistema nervioso central.
Algodón y gasas estériles, alcohol, yodofón u otro antiséptico, campos estériles, spinocath, tubo o frasco
pequeño de vidrio, estéril y de cierre hermético.
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista (ver descripción en LCR para estudio bacteriológico).
Es suficiente con 1-2 ml de LCR.
D.-TRANSPORTE:
más de 4 - 6 hs.
Muestras que no se han trasladado inmediatamente y han sido mantenidas a temperatura ambiente o en
estufa; muestras con medio de transporte.
3.3.2.2. Otros líquidos biológicos: líquido pleural, líquido

Peritoneal, humor acuoso, líquidos de drenaje, entre otros. Se emplea habitualmente para el diagnóstico de
las micosis sistémicas antes mencionadas, las mismas pueden estar afectando un parénquima o ser
diseminadas y el sector que se esté estudiando ser una expresión de dicha diseminación. También sirve para
el estudio de otros agentes micóticos emergentes que pueden afectar a pacientes inmunodeprimidos,
internados en Unidades de Cuidados Intensivos, entre otros.

Algodón y gasas estériles, alcohol, yodofón u otro antiséptico, campos estériles, aguja y jeringa para punción
(en función del sector anatómico a puncionar), tubo o frasco pequeño de vidrio, estéril y de cierre hermético.
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista. El el caso de los líquidos de drenaje, la muestra se debe recolectar en forma
estéril por punción del tubo de drenaje luego de la desinfección del mismo con alcohol.

Entre 1-5 ml dependiendo del líquido a estudiar, por ej. si es humor acuoso es suficiente con 1 ml, si es
líquido de drenaje es deseable 5 ml.
E.- TRANSPORTE:
Debe trasladarse inmediatamente al laboratorio para su procesamiento o mantenerse refrigerada a 4ºC no más
de 4 - 6 hs.

Muestras que no se han trasladado inmediatamente y han sido mantenidas a temperatura ambiente o en
estufa; muestras con medio de transporte.
3.3.3. Biopsias. Ganglio, hígado, médula ósea, riñón, cornea, piel, etc.
Estas muestras se utilizan fundamentalmente para el estudio de las micosis profundas localizadas o
sistémicas.
Frasco o tubo, de plástico o vidrio, con tapa, herméticamente cerrado, limpio y estéril. Suero fisiológico
estéril. Materiales necesarios para la ejecución de la biopsia dependiendo de la localización anatómica.
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista, en función de la localización anatómica de la misma. Una vez obtenida la
muestra se colocará en el recipiente seleccionado y se le agregará 1-2 cm de suero fisiológico, en función del
tamaño de la muestra (muestras pequeñas menor cantidad de suero y viceversa, respetando el rango antes
mencionado).
Es suficiente con una muestra de aproximadamente 05-1cm de diámetro. Biopsias de algunas localizaciones
como por Ej. córnea pueden ser de menor tamaño.
D.-TRANSPORTE:
Se enviará inmediatamente al laboratorio, de no ser posible se puede mantener en heladera, hasta 4-6 h.
E.- OBSERVACIONES:
El exceso de suero fisiológico, hace que los tejidos se embeban en dicho líquido, dificultando el
procesamiento del material y lectura de las coloraciones. Las muestras sin el agregado de suero pueden
desecarse, impidiendo el procesamiento de las mismas. No se deben utilizar medios de transporte. No se
deben conservar a temperatura ambiente o en estufa. No se colocarán en formol u otras sustancias utilizadas
habitualmente para estudio anatomopatológico.
3.3.4. Lesiones de piel.

Como se mencionara previamente las lesiones en piel y mucosas pueden ser una manifestación de una
micosis sistémica diseminada. En nuestro país esas lesiones son causadas por Histoplasma capsulatum,
Cryptococcus neoformans y Paracoccidiodies brasiliensis.
Las lesiones causadas por estas micosis se caracterizan por su pleomorfismo, pueden ser lesiones maculares,
maculo-papulares, vesiculosas, costrosas, ulceradas, entre otras. La muestra se tomará mediante
escarificación de la lesión en caso de que no esté ulcerada con compresión de los bordes laterales de la
misma, realizando improntas por aposición directamente sobre la lesión. En los casos que sean
microabscesos se escarificara y se toma el contenido del mismo para las muestras. En las lesiones costrosas
se extrae la costra y luego se comprime los bordes de la lesión. Las muestras de mucosa oral se toman por
raspado con hoja de bisturí, directamente de la lesión preferentemente de los bordes. Es fundamental que la
muestra de estas lesiones se tomen en el laboratorio por el especialista, donde se realizarán frotis para
coloraciones, examen en frescos y cultivos o en su defecto si el paciente está hospitalizado y no puede
desplazarse, deberá ser el especialista quien realice la toma para estudio micológico.
3.3.5. Hemocultivo para hongos.

Se emplea para el diagnóstico de las micosis profundas sistémicas antes mencionadas.
La técnica para obtención del hemocultivo es igual que para estudio bacteriológico. Los frascos para realizar
el hemocultivo se solicitarán al laboratorio. Se solicitará específicamente “estudio micológico en
hemocultivo”, en la boleta de pedido de estudio (ver sector hemocultivos para muestras bacteriológicas).
3.3.6. Mielocultivo para hongos.
Es útil en el estudio de micosis profundas sistémicas.
Jeringa y aguja estéril, algodón, alcohol, yodofón u otro antiséptico, xylocaína, tubo de vidrio o frasco
pequeño estéril de cierre hermético.
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista, quien también seleccionará el sitio anatómico de punción (esternón, cresta
ilíaca), una vez obtenida la muestra, se descarta la aguja y se coloca el material en el recipiente seleccionado.
Es suficiente con una muestra de aproximadamente 1 ml.
D.-TRANSPORTE:
Se encía inmediatamente al laboratorio, de no ser posible se puede mantener en heladera, hasta 2-4 hs.
E.- OBSERVACIONES:
No se deben utilizar medios de transporte. No se deben conservar a temperatura ambiente o en estufa. No se
colocarán en formol u otras sustancias utilizadas habitualmente para estudio anatomopatológico ni se
agregará suero fisiológico.
4. MUESTRAS PARA ESTUDIO INMUNOLÓGICO DE MICOSIS PROFUNDAS.
La detección de anticuerpos circulantes para el diagnóstico de micosis profundas es una metodología
habitual en el estudio de micosis profundas tales como: aspergilosis, histoplasmosis y
paracoccidiodomicosis.
La muestra a estudiar es suero y las técnicas mas frecuentemente utilizadas para la serología de micosis
profundas son las de precipitación en agar.
Se debe tener presente que este estudio serológico es útil en el diagnóstico de micosis profundas en pacientes
inmunocompetentes, perdiendo valor en pacientes inmunodeprimidos en quienes la serología es negativa;
adquiriendo relevancia entonces en este grupo de pacientes el examen micológico tradicional y la detección
de antígenos circulantes. Ver material, técnica, volumen y transporte en muestras para estudio inmunológico
de parásitos, item. 2. En algunas micosis adquiere valor la detección de antígeno circulante en LCR, suero u
otros fluidos biológicos.
Por frecuencia se menciona la criptococosis, el estudio que se realiza es “detección de antígeno circulante”,
la técnica que se utiliza es la aglutinación de partículas de látex y la muestra de elección a estudiar es LCR,
dada la mayor sensibilidad y especificidad de la técnica en esta muestra.
Material necesario para punción lumbar (ver punción lumbar para muestras bacteriológicas), tubo o frasco de
vidrio pequeño de vidrio estéril.
B.- TÉCNICA:
Es de resorte del especialista.
Es suficiente con una muestra de aproximadamente 1 ml de LCR.
D.-TRANSPORTE:
Se enviará inmediatamente al laboratorio, de no ser posible se puede mantener en heladera, hasta 2-4 horas.
E.- MUESTRAS INADECUDAS:
No son adecuadas muestras con medios de transporte. No se deben conservar a temperatura ambiente.
F.- OBSERVACIONES:
Está indicada la búsqueda de en circulante de Cryptococcus neoformas en LCR, en todo LCR con examen
micológico directo con tinta china negativo, en quien se plantee clínicamente la sospecha de criptococosis.
5. PROCESAMIENTO INICIAL, FINAL E INCUBACION DE LAS MUESTRAS:

A. UROCULTIVOS:
CULTIVO SEMICUANTITATIVO
El cultivo de orina sigue siendo la técnica imprescindible y de elección para el diagnóstico

de la infección del tracto urinario, no solo porque ayuda a documentar la infección sino
porque es necesario para identificar el microorganismo infectante (aspecto importante en los
episodios recurrentes y en el conocimiento de la epidemiología de la infección) y su
sensibilidad antibiótica (aspecto importante para la selección del tratamiento y para la
realización de guías de terapia empírica a partir de datos acumulados).
Material :
- Placa Agar CLED

-Paneles Micoscan
- Asas de siembras descartables, estériles de 0,001 mL.
- Incubadora de 35-37ºC
Método :
-La orina debe ser inoculada en placas para obtener un recuento semicuantitativo, para ello debe
ser bien homogeneizada (mover con suavidad para evitar la formación de espuma).
-La técnica de diseminación usada para la inoculación de las placas para recuentos
semicuantitativos, emplea asas de plástico descartables, calibradas para contener 0,001 mL de
orina. Para la obtención del volumen adecuado de orina es importante, introducir el asa
inmediatamente por debajo de la superficie líquida del envase que contiene la orina y moverla
verticalmente.
-Una vez tomada la muestra se lleva en todo su volumen a la superficie del Agar CLED ,
haciendo una estría a través del centro. El inóculo se disemina en ángulos rectos respecto a
la estría primaria.
-Los cultivos deben ser incubados a 35-37ºC en atmósfera aeróbica antes de ser interpretados.
-La mayoría de bacterias causantes de infección urinaria pueden ser puestas en evidencia por el
cultivo en 18-24 horas, en este contexto no tiene sentido prolongar la incubación más allá de las
24 horas. En casos muy determinados, como bacterias exigentes, deficientes o cultivo negativo
o cuando se documenta la presencia de bacterias en la tinción de Gram, podría ser necesario
extender el periodo de incubación a las 48 horas y realizar la siembra complementaria en Agar
Sangre.
Lectura de Cultivos.
- Las placas deben ser examinadas para su valoración después del tiempo adecuado de incubación.
- Cultivos sin crecimiento: Si las placas no presentaran crecimiento después 24 horas, considerar el
cultivo como negativo, excepto en orinas obtenidas por punción suprapúbica o cuando se haya
especificado cultivo de hongos o aparezcan colonias muy pequeñas, en los que se deberá extender la
reincubación a 24 horas adicionales.
- Cultivos con crecimiento: Es importante discriminar entre especies con capacidad uropatógena
(Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa y otros bacilos Gram negativos, Enterococcus spp,
Streptococcus beta hemolíticos, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, levaduras,
etc.) de aquellas especies que generalmente representan microbiotaurogenital o cutánea
(Lactobacillus spp, C. urealyticum, Streptococcus del grupo viridans distintos de Aerococcus
urinae, Bacillus spp y difteroides ,) que no se considerarán valorables.
Valorar los posibles tipos bacterianos presentes y realizar el recuento de colonias para cada una de
las posibles especies, para ello multiplicar el número de colonias por el factor de dilución empleado.
Valoración de los cultivos
Los criterios clásicos de interpretación descritos por Kass en los que se consideran
significativos recuentos de >105 ufc/mL se pueden aplicar a la mayoría de las muestras en las
que se solicita el cultivo. Sin embargo, en determinadas circunstancias se admite la existencia
de ITU con recuentos muy inferiores como son:
TABLA Nº1
CONDICION TIPO DE
RECUENTO ORGANISMOS PROCEDIMIENTO A SEGUIR
MUESTRA
≥ 10⁵ Orina por micción Cultivo puro Identificación y ATB
≥ 10⁵ Orina por micción Dos morfotipos Identificación y ATB

coloniales
Sintomatología positiva
≥ 10⁵ Orina por micción Más de dos Posible contaminación.
morfotipos
coloniales Reportar posible
contaminación y solicitar
nueva muestra.
10⁴ Orina por cateterización

Posible contaminación.
Dos morfotipos
Sintomatología positiva
coloniales
10⁴ Orina por cateterización Más de dos

Reportar posible
morfotipos
contaminación y solicitar
coloniales
nueva muestra.
10³ Orina por cateterización Identificación y ATB
10³ Hombre sintomático Cultivo puro Identificación y ATB
10² Punción suprapúbica Cultivo puro Identificación y ATB
Cualquier número de
10² Mujer sintomática Identificación y ATB
morfotipos
Cultivo puro de
bacilos Gram
negativos.
Los cultivos de crecimiento mixto en pacientes con ITU no complicada adquirida en la

comunidad, probablemente indican contaminación con microbiota fecal y se pueden informar
como “Flora mixta; posible contaminación sugerimos una recogida apropiada de la orina, con una
entrega a tiempo al laboratorio, si existe una indicación clínica”. Sin embargo, estos cultivos
mixtos en pacientes sondeados, hospitalizados o con edad superior a 65 años deben ser valorados
con cautela y en algunas ocasiones requieren contactar con el clínico para realizar una
correcta interpretación.
1. Microscopía por Tinción de Gram.
La tinción de Gram es uno de los métodos más rápidos, confiables y económicos para valorar la
bacteriuria a nivel de 105 ufc/mL. Se acepta que la presencia de uno o más microorganismos por
campo visualizados con objetivo de inmersión tiene una sensibilidad del 85-95% cuando se
5
correlaciona con un recuento de colonias de10 ufc/mL. La tinción de Gram también permite
evaluar la presencia de leucocitos. Una de sus mayores ventajas es que además suministra
información sobre la naturaleza del agente etiológico.
6.1. Material
-Pipetas estériles capaces de dispensar entre 10 y 25 µL
-Portaobjetos de vidrio
-Colorantes para tinción de Gram.
6.2. Método
-Homogenizar la orina con suavidad para evitar la formación de espuma.
-Depositar 20 µL de orina en el portaobjetos mediante pipeta estéril.
-Dejar secar
-Teñir por el método de Gram.
-Observar al microscopio con objetivo de inmersión (x100) al menos 20 campos.
6.3 Interpretación.
La observación de al menos 01 bacteria en un campo, se considera un resultado positivo.
6.4. Informe de resultados.

Si se visualizan bacterias, informar: “Presencia de bacilos o cocos Gram positivos o Gram
negativos”.
2. Identificación Bacteriana
Para una adecuada identificación de casos y su etiología, es responsabilidad del Laboratorio de

Microbiología la identificación del microorganismo causante de infección.
Identificación de Cocos Gram positivos: Staphylococcus y Enterococcus
1.- Staphylococcus:
- Lectura de Cultivos :
a) Morfología de las colonias en Agar CLED
Adicionalmente realizar una resiembra en Agar manitol, para determinar la capacidad

de las bacterias de fermentar el manitol. Las colonias de Staphylococcus aureus en agar
manitol normalmente son de borde entero, la mayoría de ellas presentan un pigmento
amarillo . Las colonias de Staphylococcus epidermidis son algo más pequeñas dependiendo
de las cepas, usualmente no se detecta pigmentos.
Las colonias de Staphylococcus saprophyticus son más grandes que S. epidermidis, son
lustrosas y de pigmento amarillo.
b) Coloración Gram
Si se observan cocos Gram positivos en racimos, realizar la prueba de la catalasa.
1
c) Prueba de la catalasa
Determina la presencia de la enzima catalasa, esta enzima descompone el peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno.
- Reactivo:
Peróxido de hidrógeno 3%
- Procedimiento:
1 • Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18 a 24 horas y

colocar sobre un portaobjetos limpio.
2 • Agregar una gota de H2O2 al 3% usando un gotero.
1 • Observar una inmediata efervescencia (formación de burbujas) lo que indica una
prueba positiva, de lo contrario se considera la prueba negativa.
2 • Desechar el portaobjetos colocándolo en un desinfectante.
- Controles:
1 Positivo: Staphylococcus aureus
Negativo: Streptococcus spp
NOTA: No invertir el orden del método porque pueden producirse resultados de falsos positivos.
Si son catalasa positivas primeramente determinar si el organismo es o no Staphylococcus
aureus, para ello se realiza la prueba de la coagulasa.
d) Prueba de la coagulasa
1 Se realiza para comprobar la facultad de la bacteria de coagular el plasma por acción de la

enzima coagulasa, la cual aumenta la velocidad de coagulación del plasma. El resultado final
es la formación de un coágulo de fibrina.
0 Prueba en tubo (detecta coagulasa libre y ligada).
- Reactivo:
Plasma de conejo deshidratado. (Reconstituir de acuerdo a las instrucciones del
fabricante).
- Controles:
Positivo: S. aureus.
Negativo: S. epidermidis o S. saprophyticus
- Prueba en tubo
 Transferir una colonia aislada del Agar CLEED o Agar manitol a 0,3 ml de plasma
reconstituido (en un tubo de vidrio estéril de 13 x 100).
 Girar el tubo suavemente para lograr la suspensión del organismo.
 No agitar.
 Incubar la mezcla a 35 – 37 °C (en baño maría de preferencia); observar si hay formación de
coágulo inclinando lentamente el tubo.
 Observar cuidadosamente si hay formación de coágulo inclinando lentamente el tubo (sin
agitar) en intervalos de 1 hora. Si el contenido del tubo en más de tres cuartas partes se
presenta como un grumo compacto es una prueba positiva.
 La mayoría de los S. aureus formarán coágulo en una hora.
 Si es negativa a las 4 horas, seguir incubando hasta el día siguiente a temperatura ambiente.
Esto es recomendado porque un pequeño número de cepas de S. aureus puede requerir más
de cuatro horas para la formación del coágulo. Considerar que Staphylococcus produce
fibrinolisina, la cual puede lisar el coágulo.
NOTA: El plasma humano no debe ser usado a menos que haya sido cuidadosamente
probado de no contener algún agente infeccioso, capacidad de coagulación e inhibidores.
e) Resistencia a la novobiocina
Esta prueba se realiza principalmente para distinguir S. saprophyticus de otras especies de
importancia clínica.
- Medios y reactivos:
1 • Paneles Microscam PC 42
2 • Diluyentes Microcam de 3 y 60 ml
3 • Escala 0,5 de McFarland.
4 • Incubadora a 35–37 °C.
5 • Dspensador de microscam
- Procedimiento
 A partir de colonias aisladas y cultivadas por 24 horas hacer una suspensión equivalente a
la escala 0.5 de Mc Farland.en el diluyente de 3 ml.
 Sacar 100 ul de la suspension y colocarlo en el 2do diluyente de 60 m,l
 Inocular con la ayuda de un dispensador en los paneles PC 42
 Dejar de 3 a 5 minutos a temperatura ambiente para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido.
 Colocar el aceite vegetal en los pocillos correspondientes una gotra o 50 ul, tapar.
 Incubar a 35 – 37° C toda la noche o 24 horas.
Lectura:
Leer los paneles utilizanco el sofwar LAB PRO
2.- Enterococos:
1
Los Enterococos pueden presentarse como células únicas, en pares o en cadenas
cortas.
- Lectura de cultivos en Agar CLED : Son colonias amarillas pequeñas ,
puntiformes,
- La resiembra en Agar Sangre , estas desarrollan colonias pequeñas

puntiformes blanquecinas.
a) Apariencia de las colonias
Usualmente son alfa hemolíticas o no hemolíticas en agar sangre de carnero 5%

aunque también puede haber especies beta hemolíticas como algunas cepas de E.
durans.
b) Coloración Gram
Si se observan cocos Gram positivos y se presentan solos, en pares o en cadenas cortas,

algunas veces cocobacilares.
c) Prueba de la catalasa
Seguir los procedimientos descritos en la identificación de Staphylococcus.
Enterococcus es catalasa negativo.
Nota: Algunas veces se produce una seudo catalasa y se puede observar una débil efervecencia.
Esto ocurre cuando E. faecalis desarrolla en medios que contienen sangre, en este caso
subcultivar la colonia en estudio en TSA o agar Mueller Hinton y repetir la prueba.
1
d) Prueba de la esculina en medio con bilis
Para determinar la facultad de un organismo de hidrolizar el glucósido esculina en esculetina y

glucosa, en presencia de bilis.
- Procedimiento:
1 a) Inocular el cultivo en estudio haciendo estrías sobre la superficie del pico de flauta o de
la placa agar bilis esculina.
2 b) Incubar a 35 – 37° C hasta 72 horas.
3 c) Se puede controlar periódicamente, y esperar hasta las 72 horas antes de informar como
negativo.
- Lectura:
Positivo: En tubo: Ennegrecimiento difuso en el agar inclinado
En placa: Se observa un halo negro o marrón alrededor de las colonias en la placa.
Negativo: No se produce ennegrecimiento del medio o ennegrecimiento de menos de la mitad
del tubo después de 72 horas de incubación.
- Controles:
Negativo: Staphylococcus aureus
Positivo: Enterococcus spp
e) Tolerancia al cloruro de sodio
Para determinar la facultad de un organismo de desarrollar en presencia de una

concentración de 6.5 % de cloruro de sodio.
- Procedimiento:
a) Inocular en el caldo TSB con cloruro de sodio un cultivo de 18 - 24 horas de incubación.
b) Incubar a 35 – 37° C por 24 horas.
c) Se puede controlar periódicamente, y esperar hasta las 72 horas antes de informar como
negativo.
- Lectura:
Positivo: Se observa desarrollo bacteriano

Negativo: No se observa crecimiento en el caldo
- Controles:
1 Negativo: Escherichia coli

2 Positivo: Enterococcus spp
1 f) Crecimiento en telurito de potasio
Es útil para la identificación de E. faecalis
- Procedimiento:
1 a) Sembrar la cepa en estudio en TSA con 0.04% de telurito de potasio.

2b) Incubar a 35 – 37° C. Si se observa desarrollo de colonias negras se identifica
como E. faecalis.
1
2
IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM NEGATIVOS FERMENTADORES
Lectura de cultivos en CLED.
1- En agar CLED E.coli son colonias grandes amarillas, las cepas de E. coli que son lactosa
negativas dan colonias incoloras .
2 Agar CLED son colonias mucoides de color variable que va del amarillo al blanco azulado.
- Proteus desarrollan colonias incoloras en Agar EMB y en Agar CLED son

translucidas de color azulado.
Las colonias con estas características son subcultivadas en medios diferenciales.
 Pruebas bioquímicas
1 a) Utilización de lactosa
2 b) Utilización de glucosa
3 c) Producción de gas de glucosa
4 d) Descarboxilación de lisina
5 e) Producción de ácido sulfhidrico
6 f) Utilización del citrato
7 g) Producción de ureasa
8 h) Prueba MR
9 i) Prueba VP
10 j) Motilidad
11 k) Producción de indol
- Procedimiento:
a) Identificar la colonia sospechosa en la placa de agar EMB.

b) Esterilizar al rojo vivo el asa de siembra recta en un mechero de Bunsen.
c) Enfriar el asa.
d) Obtener la colonia seleccionada con el asa recta, tratando de no tocar el fondo del medio
de cultivo ni otra colonia vecina.
e) Sembrar por estría en los medios diferenciales empezando por el agar citrato, urea (en la
superficie), TSI, LIA (introduciendo el asa por el centro hasta tocar el fondo del tubo,
retirar por el mismo trazo y sembrar en estría la parte inclinada), caldo para la prueba de
indol, MRVP.
f) Sembrar por puntura en el centro del agar movilidad (MIO) hasta una profundidad
aproximada de 1.5 cm.
g) Incubar a 35 – 37° C de 18 a 24 horas.
1 a) Agar TSI
En estos medios se determina la capacidad de la bacteria de utilizar la lactosa, glucosa y
sacarosa (en TSI), con producción o no de gas y la producción de ácido sulfhídrico.
- Lectura:
Es importante hacer la lectura entre las 18 - 24 horas para no obtener resultados erróneos.
La lectura se hace sobre la base de tres características: Utilización de hidratos de carbono,
producción de gas y producción de ácido sulfhídrico.
1 • Utilización de hidratos de carbono:

− Utilización de lactosa: Reacción ácida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura: (A).
− Utilización de glucosa: Reacción ácida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura: (A).
− No hay utilización del carbohidrato: Se puede observar una reacción alcalina (color
rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el medio no
inoculado) Abreviaturas: (K) o (N) respectivamente.
NOTA: Cuando el microorganismo también produce H2 S el precipitado negro puede

ocultar la acidez.
1 • Producción de gas de glucosa:

2 − Se considera positivo: Presencia de una sola burbuja de gas, burbujas en el
medio, división del medio, desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un área clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo.
− Se registra la lectura por medio de cruces (+).
3 • Producción de ácido sulfhídrico:

− Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o sólo en la parte superior.
− Se registra la lectura por medio de cruces (+).
- Controles:
Columna vertical Superficie inclinada

(fondo) (Pico de flauta)
* E. coli amarillo/ gas amarillo

(lactosa positivo)
* Shigella amarillo/sin gas rojo
* Salmonella paratyphi B amarillo/negro/con gas rojo

- Recomendaciones
Si se observa que no hay cambio de color en el tubo hasta las 24 horas seguir
incubando hasta las 48 horas. Si no se observa viraje de color y hay desarrollo, se trata
de una bacteria no fermentadora.
b) Agar Lisina Hierro
En este medio se determina simultáneamente la producción de lisina descarboxilasa y

de la formación de ácido sulfhídrico.
- Lectura:
Es importante hacer la lectura entre las 18 - 24 horas; si la lectura se realiza antes podemos
obtener resultados falsos positivos, así como falsos negativos si se lee después de las 24 horas.
Realizar la lectura en la columna y en la superficie inclinada y observar la formación de ácido
sulfhídrico el cual se evidencia por una coloración negra.
No incubar más del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinización en la superficie del
medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta.
- Controles:
Columna vertical Superficie inclinada

(fondo) (pico de flauta)
* E. coli amarillo violeta
* Proteus mirabilis amarillo y negro rojo-parduzco
* Morganella morganii amarillo rojo parduzco-violeta
c) Utilización de citrato
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de

carbono para su metabolismo.
- Procedimiento:
a) Incubar a 35 – 37°C 24 horas - 48 horas.

b) Ver el viraje de color.
- Resultados:
a) Prueba positiva: Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta, o presencia de
colonias en ausencia del color azul.
b) Prueba negativa: No se observa crecimiento ni cambio de color (verde).
- Controles:
Positivo: Enterobacter cloacae

Negativo: Escherichia coli
d) Hidrólisis de la urea (producción de ureasa)
Es útil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea, formando dos

moléculas de amoniaco por acción de la enzima ureasa.
- Procedimiento:
Realizar la lectura después de 18 horas - 24 horas de incubación observando el viraje de color.
- Resultados:
Prueba positiva: Color rojo rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar. Puede haber una
reacción positiva retardada después de 24 horas (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo).
Prueba negativa: No se produce cambio de color.
- Controles:
Positivo: Klebsiella pneumoniae
e) Rojo de metilo
Permite comprobar la capacidad del microorganismo para producir y mantener estables los
productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa determinando cualitativamente el
pH del medio.
- Procedimiento:
El caldo debe ser incubado a 35 – 37° C durante 48 a 72 horas.
Asépticamente retirar 2,5 ml de caldo a un tubo estéril.
Añadir directamente al caldo 5 gotas del reactivo rojo de metilo (indicador de pH).
Interpretar el resultado del viraje de color inmediatamente.
Si la lectura fuera negativa continuar la incubación para repetir la prueba.
NOTA: No debe realizarse la lectura antes de las 48 h de incubación para evitar resultados
erróneos.
El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del medio indica que la producción de
ácido es suficiente como para bajar el pH a 4,4 y es una prueba positiva. Un color naranja (pH 5
a 5,8) indica una prueba negativa.
- Resultados:
Prueba positiva: Color rojo
Prueba negativa: Color amarillo o naranja.
- Controles:
Control positivo: Escherichia coli
Control negativo: Klebsiella pneumoniae
1 f) Voges Proskauer
Es útil para determinar la capacidad de algunos microorganismos de degradar la glucosa
hasta acetilmetilcarbinol (acetoína) a través de un proceso de fermentación.
- Medios y reactivos:Medio MR VP
α naftol al 5 %
KOH al 40%.
- Procedimiento:
 Incubar por 24 - 48 horas a 35 – 37° C.
 Transferir 1 mL de caldo a un tubo de ensayo limpio. Añadir con una pipeta pasteur 0,6
mL de α naftol al 5 % y 0,2 mL de KOH al 40%.
 Agitar el tubo cuidadosamente (para exponerlo al oxígeno atmosférico) y dejarlo reposar
durante 10 á 15 minutos.
- Resultados:
Prueba positiva: Desarrollo de un color rojo - rosado en la superficie del medio.
Prueba negativa: Mantiene su color
- Controles: Control positivo: Klebsiella pneumoniae

Control negativo: Escherichia coli
g) Motilidad, Indol, Ornitina (Medio MIO)
Permite identificar a las Enterobacterias en base a su movilidad, actividad de ornitina

decarboxilasa y producción de indol a partir del aminoácido triptófano.
- Resultados:
1-Movilidad:
-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.

-Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
2-Ornitina decarboxilasa:
-Resultado positivo: color púrpura.

-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo.
3-Prueba del indol:
La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina.
-Resultado positivo: Formación de un anillo rojo en la superficie del medio al agregar el reactivo
revelador (kovacs).
-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
IDENTIFICACIÓN DE BACILO GRAM NEGATIVO NO FERMENTADOR
1.- Pseudomonas aeruginosa
Es fácilmente reconocida en medios de aislamiento primario por sus características:

- Morfología de la colonia
- Producción de pigmentos difusibles si están presentes.
- Olor característico
- Identificación:
* Morfología de las colonias:

Las colonias generalmente son planas, algo extendidas, bordes aserrados y tienen un brillo
metálico.
* Determinación de las características bioquímicas:

Para identificar la colonia sospechosa. Realizar las siguientes pruebas:
a) Utilización de lactosa.
b) Utilización de glucosa.
c) Prueba de oxidasa.
d) Utilización de citrato.
- Procedimiento:
a) Identificar la colonia sospechosa que se encuentra en la placa de agar Mc Conkey.
b) Esterilizar al rojo vivo el asa de siembra recta en un mechero de Bunsen.
c) Enfriar el asa.
d) Obtener la colonia seleccionada con el asa recta, tratando de no tocar el fondo del medio de
cultivo ni otra colonia vecina.
e) Sembrar por estría en los medios diferenciales empezando por el agar citrato, urea (en la
superficie), TSI, LIA (introduciendo el asa por el centro hasta tocar el fondo del tubo, retirar
por el mismo trazo y sembrar en estría la parte inclinada), caldo para la prueba de indol,
MRVP.
f) Sembrar por puntura en el centro del agar movilidad (MIO) hasta una profundidad
aproximada de 1.5 cm.
g) Incubar a 35 – 37° C de 18 a 24 horas.
- Lecturas:
a y b) Agar TSI
En estos medios se determina la capacidad de la bacteria de utilizar la lactosa, glucosa
y sacarosa (en TSI), con producción o no de gas y la producción de ácido sulfhídrico.
P. aeruginosa da un reacción: K/K o N/N y no hay producción de sulfuro de hidrógeno.
c) Prueba de la oxidasa
La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa
la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno molecular, el que a su vez actúa como
aceptor de electrones en la etapa terminal del sistema de transferencia de electrones. Con
esta prueba se determina la presencia de la enzima oxidasa.
- Reactivos:
Tira reactiva de oxidasa.
- Procedimiento:
Se trabaja a partir del crecimiento bacteriano en TSA o Mueller Hinton.
Con la ayuda de un mondadiente colocar una colonia sobre la tira reactiva y extenderla.
- Controles:
Positivo: P. aeruginosa
Negativo: E. coli
- Resultados:
Positivo: Viraje de color hacia el azul – violeta
Negativo: No hay viraje de color
Nota: El 99% de cepas de P. aeruginosa son oxidasa positivas.
d) Prueba de utilización de citrato
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de

carbono para su metabolismo.
- Procedimiento:
1 a) Incubar a 35 – 37°C 24 horas - 48 horas.

2 b) Ver el viraje de color.
- Resultados:
1 a) Prueba positiva: Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta, o

presencia de colonias en ausencia del color azul.
b) Prueba negativa: No se observa crecimiento ni cambio de color (verde).
- Controles:
Positivo: Pseuomonas aeruginosa

Nota: 95% de cepas de P. aeruginosa son positivas.

e) Producción de pigmentos
Después del período de incubación, realizar la lectura verificando la producción de algún
pigmento en el TSA o agar Mueller Hinton.
P. aeruginosa produce pigmentos: verdoso o azul verdoso brillante, rojo o marrón.
- Lectura:
Si no se observara pigmento dejar la placa incubando a temperatura ambiente y realizar la
lectura a las 48 horas.
3. Prueba de Susceptibilidad Antimicrobiana por el Método de Disco Difusión.
Las diferentes especies y cepas de un microorganismo tienen grados variables de susceptibilidad a

los antimicrobianos, además está susceptibilidad puede cambiar especialmente durante el
tratamiento. Es por eso que un proceso infeccioso es importante que el clínico conozca además de
la identidad del microorganismo, los antimicrobianos a los cuales es sensible para brindar un eficaz
tratamiento. Esta información la debe dar el microbiólogo haciendo un diagnostico preciso y
determinando la susceptibilidad del microorganismo a varios antimicrobianos.
Para determinar la susceptibilidad a los antimicrobianos de las diferentes especies y cepas de un
microorganismo se aplica el método de disco difusión.
4 .- INOCULACIÓN:
 Preparación del inóculo
Método directo de inoculación a partir de colonias aisladas

a. De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h, seleccionar
colonias aisladas y preparar una suspensión directa en solución salina o caldo.
b. La suspensión debe ser inmediatamente ajustada a la escala 0,5 de Mc. Farland.
 Inoculación de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo, sumergir un hisopo
estéril en la suspensión, rotar el hisopo varias veces presionando firmemente sobre la pared
interior del tubo por encima del nivel del líquido para remover el exceso de inóculo.
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton, estriando con el hisopo en tres
direcciones para asegurar una distribución uniforme del inóculo. Antes de colocar los discos
dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5 minutos para que cualquier exceso
de humedad superficial sea absorbido.
 APLICACIÓN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la ayuda de una
pinza estéril presionando suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto completo con
la superficie del agar.
Distribuir los discos uniformemente, de modo que estén a una distancia mínima de 25 mm uno
del otro (el diámetro de los discos según las normas de la Organización Mundial de la Salud
(OMS) debe ser de 6 mm). No deben colocarse más de 12 discos en una placa de 150 mm, ni
más de 6 en una placa de 100 mm de diámetro interno, para evitar la superposición de las zonas
de inhibición. Un disco no debe ser removido una vez que tomó contacto con la superficie del
agar debido a que algunos antibióticos se difunden rápidamente.
5.- INCUBACIÓN
Incubar lar placas en posición invertida a 35°C dentro de los 15 minutos posteriores a la
aplicación de los discos.
Después del tiempo recomendado de incubación (según el microorganismo) examinar cada placa
y medir los diámetros de los halos de inhibición alrededor de cada disco. En los casos de
Staphylococcus spp y Enterococcus spp el tiempo de incubación debe prolongarse por 24 horas
para una mejor detección de la resistencia a Oxacilina y Vancomicina, respectivamente.
6.- LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Medir los diámetros de las zonas de inhibición completa (incluyendo el diámetro del disco),
usando una regla. En los medios suplementados con sangre, las zonas son medidas en la parte
superior de la superficie del agar y retirando la tapa. Tener cuidado de no medir la zona de la
hemólisis sino la de inhibición del crecimiento.
Para Staphylococcus spp o Enterococcus spp, usar luz transmitida, manteniendo la placa arriba
de la luz para examinar un posible ligero crecimiento de cepas resistentes a Oxacilina/Meticilina
o Vancomicina dentro de los halos aparentes de inhibición. Cualquier desarrollo dentro de la
zona de inhibición es indicativo de resistencia a Meticilina (Oxacilina) o Vancomicina.
El punto final debe tomarse como el área que no muestra un crecimiento obvio, visible, que
puede ser detectado mediante observación visual, no incluyendo velo de crecimiento o colonias
muy pequeñas que puedan ser detectadas solo con mucha dificultad en el borde de la zona.
Algunos Proteus spp, debido a su gran movilidad, pueden presentar un velo de invasión o
“swarming” dentro de las zonas de inhibición de algunos antibióticos. En estos casos el velo del
swarming debe ser ignorado al momento de medir los halos de inhibición.
Cuando se prueban discos de Cotrimoxazol puede arrastrarse sustancias antagónicas que
producen un crecimiento con aspecto de niebla dentro de la zona del halo de inhibición, en estos
casos no considerar en la lectura un crecimiento del 20% o menos del desarrollo total.
Los diámetros de inhibición son interpretados basándose en las tablas Antibióticos y Diámetros
Críticos para los microorganismos que se describe a continuación.
ANTIBIOGRAMA PARA Staphylococcus spp
 MEDIO DE CULTIVO
Agar Mueller Hinton
 INÓCULO
Suspensión directa de la colonia en caldo Mueller Hinton o solución salina al 0.9 % a partir de
un cultivo en agar no selectivo de 18 – 24 h de incubación. Ajustar a la turbidez equivalente al
estándar 0,5 de la escala de Mc. Farland.
 CONDICIONES DE INCUBACIÓN
35 °C en aire atmosférico.
 TIEMPO DE INCUBACIÓN
16 – 18 horas. 24 horas para oxacilina y vancomicina.
Antibióticos y Diámetros Críticos para Staphylococcus spp.

CONTENIDO
ANTIMICROBIANO DEL DISCO DIAMETRO EN mm
R I S
PENICILINAS
Penicilina 10 unidades ≤28 ── ≥29
Oxacilina (S. Aureus) 1ug ≤10 11─12 ≥13
(Estafilococos coagulasa negativos) 1ug ≤17 ── ≥18
GLICOPEPTIDOS
Vancomicina 30 ug ── ── ≥15
AMINOGLUCOSIDOS
Gentamicina 10 ug ≤12 13─14 ≥15
FLUOROQUINOLONAS
Norfloxacina 10 ug ≤12 13─16 ≥17
Ciprofloxacina 5ug ≤15 16─20 ≥21
TETRACICLINA
Tetraciclina 30 ug ≤14 15─18 ≥19
MACROLIDOS
Eritromicina 15 ug ≤13 14─22 ≥23
LINCOSAMIDAS
Clindamicina 2 ug ≤14 15-20 ≥21
OTROS
Nitrofurantoína 300 ug ≤14 15-16 ≥17
Trimetoprim/sulfametoxazol 1.25/23.75 ug ≤10 11─15 ≥16
ANTIBIOGRAMA DE Enterococcus spp.
Agar Mueller Hinton
 INOCULO
Método del crecimiento o suspensión directa de la colonia.
16 – 18 horas. 24 horas para vancomicina.
Antibióticos y Diámetros Críticos para Enterococcus spp.

CONTENIDO
R I S
PENICILINAS
Ampicilina 10 ug ≤16 ── ≥17
GLICOPEPTIDOS
Vancomicina 30 ug ≤14 15─16 ≥17
AMINOGLUCOSIDOS
Gentamicina 120 ug 6 7─ 9 ≥10
Estreptomicina 300 ug 6 7─10 ≥10
FLUOROQUINOLONAS
Ciprofloxacina 5 ug ≤15 16─20 ≥21
TETRACICLINA
MACROLIDOS
OTROS
ANTIBIOGRAMA PARA Pseudomonas aeruginosa
Agar Mueller Hinton.
 INOCULO
Método del crecimiento o suspensión directa de la colonia. Ajustar a la turbidez equivalente
al estándar 0,5 de la escala de Mc. Farland.
16 – 18 horas.
Antibióticos y Diámetros Críticos para Pseudomonas aeruginosa

CONTENIDO
R I S
CEFALOSPORINAS
Ceftazidima 30 ug ≤14 15─17 ≥18
Cefepime 30 ug ≤14 15─17 ≥18
β LACTAMICO/INHIBIDOR DE BETALACTAMASA
Cefoperazona/sulbactam 75 ug/30 ug ≤15 16─20 ≥21
CARBAPENEMS
Imipenem 10 ug ≤13 14─15 ≥16
Meropenem 10 ug ≤13 14─15 ≥16
MONOBACTAMS
Aztreonam 30 ug ≤15 16─21 ≥22
AMINOGLUCOSIDO
Amikacina 30 ug ≤14 15─16 ≥17
QUINOLONAS
ANTIBIOGRAMA PARA Acinetobacter spp
Agar Mueller Hinton
 INOCULO
Método del crecimiento o suspensión directa de la colonia. Ajustar a la turbidez equivalente
16 – 18 horas.
Antibióticos y Diámetros Críticos para Acinetobacter spp

CONTENIDO
R I S
COMBINACIÓN DE β LACTAMICO/INHIBIDOR DE BETALACTAMASA
Ampicilina/Sulbactam 10/10 ug ≤11 12─14 ≥15
CEFALOSPORINAS
Ceftazidima 30 ug ≤14 15─17 ≥18
Ceftriaxona 30 ug ≤13 14─20 ≥21
Cefepime 30 ug ≤14 15─17 ≥18
CARBAPENEMS
Imipenem *1 10 ug ≤13 14─15 ≥16
Meropenem 10 ug ≤13 14─15 ≥16
MONOBACTAMS
Aztreonam 30 ug ≤15 16─21 ≥22
AMINOGLUCOSIDO
Amikacina 30 ug ≤14 15─16 ≥17
QUINOLONAS
TETRACICLINA
OTROS
Cloramfenicol 30 ug ≤12 13-17 ≥18
*1
Solo en caso de resistencia del Meropenem
ANTIBIOGRAMA PARA Enterobacteriaceae

Agar Mueller Hinton
 INOCULO
Método de crecimiento o suspensión directa de la colonia. Ajustar a la turbidez equivalente
16 – 18 horas.
Antibióticos y Diámetros Críticos para Enterobacterias

CONTENIDO
R I S
PENICILINAS
Ampicilina 10 ug ≤13 14─16 ≥17
CEFALOSPORINAS
Cefalotina 30 ug ≤14 15─17 ≥18
Cefuroxima 30 ug ≤14 15─22 ≥23
Ceftriaxona 30 ug ≤13 14─20 ≥21
β - LACTAMICO/INHIBIDOR DE BETALACTAMASA
Amoxicilina/Ácido clavulánico 20/10 ug ≤13 14─17 ≥18
MONOBACTAMS
Aztreonam 30 ug ≤15 16─21 ≥22
CARBAPENEMS
Meropenem 10 ug ≤13 14─15 ≥16
AMINOGLUCOSIDOS
Amikacina 30 ug ≤14 15─16 ≥17
QUINOLONAS
Acido nalidixico 30 ug ≤13 14─18 ≥19
OTROS
Test confirmatorio de la presencia de “betalactamasas de espectro extendido” (según el

Comité de Antibiograma de la Sociedad Francesa de Microbiología):
Este test requiere el uso de discos habituales de Amoxicilina/Acido Clavulánico (20/10 mg),
Ceftazidima (30 mg) y/o Cefotaxima (30 mg) y/o Aztreonam (30 mg) y/o Ceftriaxona, con los que
se realiza un test de disco difusión sin ninguna variante.
Los discos de Ceftazidima, Aztreonam, Cefotaxima y Ceftriaxona se disponen a 30 mm del disco de

Amoxicilina/Ácido Clavulánico (distancia de centro a centro de los discos).
Si una imagen de sinergia aparece entre el disco Amoxicilina/Ácido Clavulánico y los discos de
Ceftazidima y/o Aztreonam y/o Cefotaxima y/o Ceftriaxona, se considera el test como positivo.
Una vez detectadas las cepas productoras de estas “betalactamasas de espectro extendido” deben ser
reportadas como resistentes a todas las penicilinas, las cefalosporinas de todas las generaciones
(incluyendo los de cuarta generación) y el Aztreonam, cualquiera que sea el diámetro de los discos
de estos antibióticos.
ANTIBIOGRAMA DE Streptococcus spp
Agar Mueller Hinton con 5% sangre de carnero.
 INOCULO
Método del crecimiento o suspensión directa de la colonia.
35 °C 5% CO2
NOTA: No aplicar más de 9 discos en placas de 150 mm, ni más de 5 en placas de 100 mm.
Antibióticos y Diámetros Críticos para Streptococcus spp

CONTENIDO
R I S
PENICILINAS
Ampicilina 10 ug ── ── ≥24
Penicilina 10 unidades ── ── ≥24
CEFALOSPORINAS
Cefotaxima (beta hemolíticos) 30 ug ── ── ≥24
Cefotaxima (viridans) 30 ug ≤25 26─27 ≥28
Ceftriaxona (beta hemolíticos) 30 ug ── ── ≥24
Ceftriaxona (viridans) 30 ug ≥24 25─26 ≥27
Cefepime (beta hemolíticos) 30 ug ── ── ≥24
Cefepime (viridans) 30 ug ── 22─23 ≥24
GLICOPEPTIDOS
Vancomicina 30 ug ── ── ≥17
MACROLIDOS
LINCOSAMIDAS
Clindamicina 2 ug ≤15 16-18 ≥19
QUINOLONAS
Levofloxacina 5 ug ≤13 14─16 ≥17
OTROS
Cloramfenicol 30 ug ≤17 18-20 ≥21
7. EXAMEN COMPLETO DE ORINA
PRUEBA : EXAMEN COMPLETO DE ORINA
METODO: DIRECTO
REACTIVOS: TIRA REACTIVA DE ORINA DE 11 PARAMETROS
MARCA: SD STÁNDARD DIAGNOSTICS INC
MUESTRA: ORINA FRESCA
CONTROLES: COMPARACIÓN INTERLABORATORIAL QUINCENAL
CONTROL DE NITRITOS VS UROCULTIVOS POSITIVOS
CONTROL DE GLUCOSURIA versus GLICEMIAS
ORINA
1. ANALISIS MACROSCOPICO Y PRUEBAS FISICOQUIMICAS
1.1 Examen físico

a. Volumen de diuresis: Varía en función de la ingesta de líquidos y perdidas extrarenales
(transpiración y respiración). Aumenta con la ingesta de liquidos y si la temperatura ambiente es fría, y
disminuye si no se ingieren liquidos y si la temperatura ambiente es elevada. Poliuria es un aumento
de la diuresis, se produce en casos de diabetes mellitus mal controlada, fase poliúrica de la
insuficiencia renal aguda, hipercalcemia, etc. Oliguria es la disminución de eliminación de orina.
Aparece en situaciones de insuficiencia renal aguda, insuficiencia cardiaca, deshidratación por diarrea
o ausencia de ingesta.
b. Olor: La orina normal recién emitida no huele. En infecciones por microorgasnismos que degradan la
urea, la orina huele amoníaco. En los enfermos con cetoacidosis huele a acetona. Un olor dulzón
desagradable sugiere inflamación o focos supurativos urinarios.
c. Aspecto (color y turbidez): La orina normal tiene color amarillo. La intensidad es inversamente
proporcional a la concentración de solutos. La orina muy diluida es pálida y si esta concentrada
adquiere un color amarillo intenso. La orina con piuria suele ser turbia.
d. Densidad: La densidad urinaria indica la capacidad de concentración / dilución del riñon. En los
adultos sanos varía entre 1.002 y 1,035 g/mL.
e. Osmolalidad: Esta en relación directa con la densidad, por lo que una densidad de 1,032
corresponde una osmolalidad de 1.200 mOsm/Kg
1.2 Examen químico
pH urinario: El pH es el inverso del logaritmo de la concentración de iones hidrógeno. Valores

bajos indican acidez y valores altos alcalinidad. En adultos sanos oscila entre 4,5 y 8,0 normalmente
es ligero ácido. Disminuye en acidosis fisiológica (ayuno) y patológica, asi como si se sigue una dieta
rica en proteínas o si hay deshidratación o proliferación en la orina de bacterias poductoras de ácido.
Aumenta después de comidas, en situaciones de alcalosis y si hay colonización por gérmenes que
degradan la urea, como Proteus (olor amoniacal).
Proteínas: En condiciones normales el contenido en proteínas de la orina no rebasa los 150

mg/24 horas en el adulto. Cualitativamente se puede diferenciar los siguientes tipos de proteinuria:
- Microalbuminuria: es la presencia de entre 30 y 150 mg/24 horas de albúmina e indica unn aumento
de la presión de filración glomerular. Es un signo precoz de nefropatía diabética.
- Proteinuria selectiva: constituida de forma casi exclusiva por albúmina y otras proteínas de bajo peso
molecular, es de origen glomerular y es caracterisica de la glomerulopatía de cambios minimos: se
debe a la alteración de lñas caracteristias elctioquimicas de la emmbrana basal glomerular.
- Proteinuria no selectiva: el defecto de la membrana glomerular es ya morfológico y permite el paso
de proteínas de mayor peso molecular. Así, además de albumina, están presentes inmunogloulinas
y otras globulinas, es propia de muchas glomerulopatías.
Glucosa: La presencia de glucosa en orina es siempre anormal. La glucosuria se

debe casi siempre a hiperglucemia ya que el umbral de reabsorción tubular de glucosa se situa
entre 180 y 200 mg/dl de glucemia. La hiperglicemia indica el mal control de la diabetes mellitus o
un estado transitorio de resistencia a la insulina. La glucosuria renal se produce cuando la glicemia
es normal y se debe a alteración tuular primaria, ya sea congénita o secunadria a toxicidad tubular
Cuerpos cetónicos: Derivan del metabolismo lipidíco y son: ácido acetoacético, acetona
y ácido 3-hidroxibutírico. La cetonuria (presencia de cuerpos cetónicos en orina) se da un situación
de ayuno prolongado. En la deficiencia insulinica se produce un incremento del metabolismo de los
ácidos grasos, con formación final de cuerpos cetónicos que se eliminan por la orina. La cetonuria
en un diabético indica un control metabolico muy deficiente y es anuncio del coma cetoacidótico.
Bilirrubina y Urobilinógeno: Son los principales pigmentos biliares que pueden aparecer
en la orina. La bilirrubina es el producto final del metabolismo del hemo y el urobilinógeno es su
principal producto de degradación por las bacterías de la flora intestinal. Una pequeña parte del
urobilinógeno se reabsorbe y es eliminado por la orina en forma de urobilina.
Sangre: La orina normal contiene hasta 3 hematíes por mL, lo que equivale a menos de 5
hematíes por campo en el examen del sedimento. Si se supera este límite estamos ante una
hematuria, que puede ser microscópica si se aprecia en el examen del sedimento o macroscópica si
se aprecia a simple vista.
Nitritos: La presencia de nitritos en orina es signo de colonización o infección bacteriana. La

mayoria de los gérmenes gam positivos que suelen colonizar la orina reducen los nitratos a nitritos.
Leucocitos: La esterasa de los neutrófilos se detecta en orina mediante tiras reactivas que
ponen de manifiesto de foma indirecta pero sensible la existencia de piuria simpre que la
leucocituria supere el millón de células por minuto.
2. ANALISIS MICROSCOPICO DEL SEDIMENTO URINARIO
Cristales: Su presencia es habitual, su significado clínico escaso y su tipo depende el pH.
- Ácido úrico, abundante en sujetos con gota y sometidos a quimioterapia, aparece en orinas ácidas.
- Ácido oxálico, escasa trascendencia, aunque aumentan en las enfermeddad de Chron extensa y en
la intoxicación por glicoles.
- Fosfatos, carbonatos y urato, que aparecen en orinas alcalinas.
- Tirosina y leucina, propios de algunas aminoacidurias
Células: Los elementos formes que se suelen detectar son los siguientes:
 Hematíes, menos de 5 por campo.

 Leucocitos, máximo de 5 a 10 leucocitos por campo, que representan de 50 a 100 células/mm 3, por
encima de este límite se considera que existe piuria, que sugiere la posible presencia de infección.
 Células epiteliales tubulares, son poligonales y munonucledas, algo mayores que los leucocitos y no
suelen pasar 2 por campo, si hay más indican daño tubular renal
 Células epiteliales transicionales, redondas u ovales, con un núcleo cental muy escasas, aumentan
si hay inflamación o neoplasia o tras sondaje.
 Células epiteliales escamosas, tamaño grande, núcleo pequeño, procede de la vagina en las
mujeres o de la vejiga si hay metaplasia escamosa en ambos sexos.
Cilindros: Los cilindros son moldes que se origian por precipitación de la mucoproteína de
Tamm Horsfall en la porción disal de los túbulo contorneados y en lo colectores, esta precipitación
se ve facilitada si la orina está concentrada y el pH es ácido.
RECOMENDACIONES:
- La cantidad apropiada de orina es de 50 ml como mínimo.

- Es importante la higiene personal previa a la obtención de la orina ya que la orina puede contaminarse
con bacterias localizadas debajo del prepucio o de secreciones vaginales.
- Se prefiere la orina de la mañana.
- En caso de niños usar bolsas colectoras, las cuales son fijadas alrededor de los genitales. Se deberá
recolectar la orina en las bolsas colectoras antes de la hora, de lo contrario renovar la bolsa colectora.
- La orina debe corresponder a la mitad de la micción.
- Se debe trabajar con orina fresca o máximo 2 horas después de la recolección, si la prueba no se
puede realizar refrigerar la muestra inmediatamente y para realizar el análisis dejar que re-tome la
temperatura ambiental antes de usar la muestra.
- Es importante el uso de orina fresca para obtener resultados optimos para las pruebas de bilirruibina y
urobilinógeno, ya que estos son inestables cuando son expuestos a temperatura ambiental y la luz.
- Una exposición prolongada de la orina a temperatura ambiental puede resultar en una proliferación
microbiana con un cambio en el pH.
TECNICA:
DESCRIPCION MACROSCOPICA:
- Se debe registrar las siguientes caracteríticas: aspecto (turbia, ligeramente turbia, transparente, el color
amarillo, hemático).
USO DE LA TIRA REACTIVA:

- Recolectar orina fresca en un envase seco, limpio y homogenizar la muestra.
- Sumergir completamente las áreas con las pruebas de la tira reactiva brevemente y remover la tira
inmediatamente para evitar la disolución de los reactivos.
- Al momento de retirar la tira reactiva del frasco con la muestra, corra el borde de la tira contra el borde
del contenedor de orina para remover el exceso de orina. Mantener la tira en posición horizontal para
prevenir posible mezcla de químicos de areas de las pruebas adyacentes o contaminación de la mano
con orina.
- En el caso de realizar la lectura visualmente, leer el resultado comparando las áreas de las pruebas
de la tira con el inserto (cartilla de colores) anexado al frasco de tiras reactivas después de 60
segundos (en el caso de leucocitos 120 segundos). Descartar las tiras reactivas usadas según el
procedimiento del laboratorio clinico.
- La tira detectará: Sangre (RBC/uL), Bilirrubina (mg/dL), Urobilinógeno (mg/dL), Cetona (mg/dL),
Proteinas (mg/dL), Nitritos (mg/dL), Glucosa (mg/dL), pH, Densidad Leucocitos (WBC/uL), Ácido
Ascórbico (mg/dL).
SEDIMENTO URINARIO:
- Mezclar la orina.
- Verter la orina en un tubo 13 x 100 mm para centrifugar hasta llenar las ¾ partes de su capacidad.
- Centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos.
- Eliminar el sobrenadante de la orina centrifugada.
- Mezclar el sedimento que queda en el fondo del tubo hasta hacer una suspensión homogénea.
- Colocar una gota del sedimento sobre una lámina portaobjetos y cubrir con una laminilla cubreobjetos
de 20 x 20 mm.
- Examinar la orina con el microscopio usando objetivo de 40x y proceder a la lectura del sedimento
considerando los siguientes parámetros:
ELEMENTO CONSIDERACIONES
SE REPORTA EL NUMERO DE CELULAS POR
Leucocitos Recuento de 1 - 100 CAMPO
>100 x campo
Leucocitos
aglutinados 1+, 2+, 3+
Leucocitos
degenerados 1+, 2+, 3+
Hematíes Recuento del 1 - 100 CAMPO
>100 x campo
Células epiteliales Recuento de 1 - 100 CAMPO
Ausentes/ Escasas/ regular cantidad /
Gérmenes abundantes
Gérmenes (Col.Gram) 1+, 2+, 3+
Levaduras 1+, 2+, 3+
Cristales 1+, 2+, 3+
Cilindros Recuento de Cilindros EL NÚMERO DE CILINDROS POR CAMPO
Otros:
En caso de no observarse los elementos se colocará: NO SE OBSERVA
Otros elementos a reportar:

B. CULTIVO DE SECRECIONES
En todas las muestras de secreciones o exudados se procederá en primer lugar al examen directo de la
muestra y coloración Gram. Para observar la presencia de leucocitos, células epiteliales, parásitos, mohos o
levaduras y el grupo de bacterias presentes en la muestra.
El cultivo se realizara en agar Chocolate, agar sangre, agar Manitol, Agar Mac Conkey, Agar Sabouraud. Las
muestras serán incubadas a 37º C por 24 horas, en el caso del agar sangre y agar chocolate se incubaran en
microaerofilia obtenida con el método de la vela.
Se identifican dentro de los gérmenes aislados aquellos que sean patógenos según el origen de la muestra y
posteriormente se procederá la prueba de sensibilidad, empleando antimicrobianos según el grupo al que
pertenezca el germen aislado.
C. COPROCULTIVOS
La muestra de heces serán sembradas en Agar SS, Agar XLD, Agar Mac Conkey, Agar TCBS, Caldo
Selenito y Agua Peptonada, serán incubadas a 37º c por 24 horas. Las muestras de niños menores de 2 años
se realizara coloraciòn VAGO para Campylobacter. A partir del caldo selenito y agua peptonada se sembrara
en agar SS y TCBS respectivamente. A partir del agar SS y TCBS se identificaran gérmenes patógenos y a
partir del Agar Mac Conkey se determinara la flora coniforme presente y además se procederá a la
serotipificación de cepas de Echerichia coli patógenas. Los gérmenes patógenos aislados serán confirmados e
identificados con antisueros específicos y posteriormente se procederá a la prueba de sensibilidad.
D. HEMOCULTIVO
Las muestras de sangre son inoculadas en frascos estériles de hemocultivo con removedor de antibióticos,
BACTEC. Su detección microbiana se basa en la turbidez del medio.
Los cultivos se incuban a 35 – 37ºC y se observa diariamente durante la primera semana para detectar
turbidez en el frasco de cultivo; los hemocultivos son negativos luego de 7 días, siguen en observación hasta
por 10 días antes de informarse como negativos.
Si los hemocultivos son “visualmente positivos”, se debe tomar una muestra para coloración de Gram y
subcultivarse (resiembras).
En los subcultivos se procede de la siguiente manera:

- Retirar una gota (0.25 ml) del hemocultivo positivo con todas las precauciones de asepsia,
utilizando una jeringa de 1cc este inóculo de siembra.
- Sembrar en medios de agar sangre, y otros medios selectivos dependiendo de los resultados de la
coloración Gram.
- Las placas deben incubarse tanto bao condiciones aerobias.
- Una vez que se han aislado las colonias, debe determinarse la identificación del germen.
Principales gérmenes que pueden encontrarse en los cultivos sanguíneos: Estreptococcus, Pseudomonas,
Brucella, Proteus, Neisseria, Salmonella, Escherichia, haemophilus y Leptospira.
E. LIQUIDO CEFALORAQUIDEO
El LCR se centrifuga, se hace una extensión del sedimento que se colorea con Gram. y se observa con el
microscopio la presencia de bacterias. La muestra de LCR ha de cultivarse tan pronto como llegue al
laboratorio. Se siembra en agar sangre o agar chocolate y en medio con tioglicolato para anaerobios.
F. SECRECIONES GENITALES
En el hombre, los frotices de exudados uretrales coloreados con Gram. (Diplococos gramnegativos) son
sensibles y específicos para el diagnostico de la gonorrea. Cuando los frotices sean negativos deben
realizarse cultivos.
En las mujeres, los frotices de exudados vaginales teñidos con Gram No son suficientemente sensibles y
específicos y deben realizarse necesariamente para Neisseria gonorrhoeae.
El material recogido se siembra directamente en agar de Thayer-Martin y se coloca en ambiente enriquecido
en CO2.
G. MUESTRAS NASOFARINGEAS
Los cultivos nasofaringeos se utilizan fundamentalmente para detectar a los portadores de Neisseria
menigitidis y Streptococcus pyogenes. Los nasales para neumococos y Haemophilus y los faringeos para
estreptococos beta hemolíticos del grupo A. Se preparan con el hisopo extensiones que se colorean con la
técnica de Gram se siembra en agar-tripticasa soya con un 5 % de sangre de carnero más gentamicina y se
incuba a 35º C en atmósfera con un 10 % de CO2.
Observación: Revisar diagrama para la siembra “Medios de Cultivo a usar de acuerdo al tipo de espécimen a
analizar”
COLORACION GRAM
Primer paso de la coloración se prepara un Frotis:
PREPARACION
La preparación del frotis es algo distinta según que el material a estudiar provenga de un medio solidó o
liquido.
a. Si es a partir de un medio sólido:
- Depositar con el asa una gota de solución fisiológica en el centro de la lámina.
- Tocar con el asa estéril una porción de la colonia a estudiar.
- Suspender el material recogido en la gota de agua.
- Extender homogéneamente la suspensión con la misma asa mediante varios giros para que el frotis
quede delgado.
b. A partir de un medio liquido o material patológico
En estos casos no se necesita diluir el material a estudiar en agua, sino que se toma con el asa estéril un agota
del caldo de cultivo o material patológico y se coloca directamente sobre la lamina.
SECADO
Puede dejarse secar a temperatura ambiente (desecación espontánea) o para apresurar este paso pasar la
lámina varias veces y en forma rápida sobre el mechero, en la zona de aire caliente.
FIJACION
Con este paso se pretende obtener la muerte de los gérmenes, su adhesión a la lámina y la conservación de su
morfología.
También en este caso existen diferentes posibilidades:
a. fijación por el calor, la más usada en Bacteriología. Consiste en pasar en forma rápida la lámina con
la cara conteniendo el frotis mirando hacia arriba, tres veces por la parte más caliente de la llama del
mechero.
b. Fijación por sustancias químicas, como por ejemplo el alcohol metilico (metanol). Luego de preparar
el frotis de esta forma puede ser sometido previo enfriamiento a la coloración.
COLORACION
TECNICA DE GRAM
Se utilizan varios colorantes en pasos sucesivos a los que se les debe respetar su orden y tiempo de
aplicación para lograr resultados fiables.cada una de estas sustancias se coloca sobre la lamina ubicada en un
soporte en la bandeja y se deja actuar el tiempo indicado para cada una de ellas, luego de lo cual se vuelca la
sustancia y se arrastra el remanente con agua para continuar con la sustancia siguiente.
COLORANTE Cristal violeta 30”
MORDIENTE Lugol 30”
DECOLORANTE Alcohol-acetona 1-5”
COLORANTE DE CONTRASTE Safranina 30”
RESULTADOS
La técnica de Gram nos aporta múltiples datos como ya vimos por ejemplo, según el compartimiento frente a
estos colorantes las bacterias se clasifican en:
a. Gram. positivas, si se colorean de color violeta.
b. Gram. negativas, si se colorean de color rosado o rojo.
c. Gram. variable, si existen células teñidas de color violeta y rosado simultaneamente. Ello puede ser
debido a una mala técnica de tinción, a que las células son viejas a que se produjo un daño en su pared
celular o a que son por naturaleza Gram. variables.
d. Gram. neutrales, si no toman ningún colorante (ni el cristal violeta ni el de contraste).
Aparecen sin color en fondo rosado (Gram. negativo). Es el ejemplo de las microbacterias y hongos.
Nos permite además de definir las formas predominantes:
a. De la célula bacteriana, cocos, bacilos o filamentos.
b. De las terminaciones cóncavas, redondas, cónicas aplanadas.
c. De los lados paralelos, ovoides, cóncavos o irregulares.
d. Del eje celular, recto, curvo o en espiral.
e. Pleomorfico.
f. La agrupación adoptada por las bacterias, sobre todo cocos (aislados, en cadenas, en racimos, en tretadas,
etc.).
METODOS Y TECNICAS PARA IDENTIFICACION DE LA BACTERIA

Después del aislamiento de las colonias se debe proceder a la identificación de la bacteria que es la
asignación a un taxón según una clasificación dada. Esta consiste en la determinación de las características
fenotipicas y/o genotipicas y la comparación de estas características con los diferentes taxones de la
clasificación considerada. Las caracteristicas a determinar y su numero depende principalmente del tipo de
bacteria y del fin que se persigue en la identificación.
Para la identificación se debe seguir el siguiente esquema de trabajo:

1. Obtener un cultivo puro.
2. Realizar el examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración Gram. Para
determinar la forma y el Gram. del microorganismo. También es importante determinar la agrupación y
la presencia de esporas.
3. Realización de pruebas primarias con las cuales se puede determinar el genero, grupo de géneros o en
algún caso familia a la que pertenece un aislamiento. Las pruebas primarias son: Gram. morfología,
catalasa, oxidasa, fermentación de glucosa, esporas crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis y
movilidad.
4. Realización de prueba secundaria y terciaria a efecto de llagar especie. Estas dependeran del género o
familia determinado.
5. A los efectos de realizar identificaciones mas rápidas o cuando las pruebas bioquímicas no son
concluyentes, se recurre al uso de de antisueros específicos. En una primera identificación se usan sueros
polivalentes y para la caracterización serológica se usan sueros monovalentes dentro de cada tipo de
antígeno.
Existen en el comercio antisueros para caracterización de: Salmonella, Shigella, E. coli.
Existen una gran variedad de pruebas bioquímicas empleadas para la identificación, se enumeraran a
continuación solo las que se utilizan mas frecuente:
1. Enzimas vinculadas con la respiración

a) Oxidasa
b) Catalasa
2. Descomposición de azucares simples
2.1) Producción de acido o acido y gas
Fermentación de carbohidratos
2.2) Detección de enzimas y vías metabólicas
a) RM-VP (rojo de metilo – Vogues Proskauer)
3. Fuente única de carbono
a) citrato
4. Descomposición de carbohidratos aminoácidos y otros
a) Indol
b) H2S
c) Lisina
d) Urea
5. Ensayos combinados
a) TSI (Triple Azúcar Hierro)
b) LIA (Agar Hierro Lisina)
c) Bilis esculina
Observación: Revisar esquema para la identificación del germen anexos
ANTIBIOGRAMA
- Prueba para seleccionar el antibiótico más eficaz en el tratamiento de una infección determinada.
- Consiste en efectuar un cultivo del microorganismo en el medio mas apropiado y después de diseminarlo
en placa petri con agar al que se le colocan discos de papel de filtro impregnados con solución de
antibiótico.
METODO
1. Después de preparar las placas petri con el medio sólido agar sangre o Mueller Hinton se distribuye
sobre la placa el microorganismo previamente cultivado en forma uniforme y abundante con una asa de
de siembra.
2. El agar debe tener un espesor de 4 mm, equivalente a 60 ml para placas de 150 mm de diámetro y 25 ml
para placas de 90 mm de diámetro.
3. Colocar los discos sobre este medio solido con pinzas estériles, dejando 2 cm. entre cada uno.
4. Inmediatamente llevar a la estufa e incubar a 37º C durante 12-18 horas.
LECTURA
1. Se buscan las zonas de inhibición (no crecimiento bacteriano) alrededor de los discos (halo claro) que
deben ser medidos con una regla en mm en la parte exterior y reversa de la placa.
2. Una zona de inhibición indicara sensibilidad o resistencia del antibiótico correspondiente, según las
medidas obtenidas en mm, para lo cual se usara una tabla de medidas conforme a las instrucciones del
fabricante.
PAUTAS GENERALES
1. Los discos deben conservarse a 4º C.

2. La zona de inhibición depende de:
- El poder de difusión del antibiótico en el medio.
- El espesor del medio: si tiene un espesor grueso permite una difusión vertical mayor del antibiótico,
con lo que disminuye la difusión superficial resultando en una zona de inhibición menor.
- La colocación del disco, un disco colocado verticalmente deja pasar poco antibiótico al medio.
3. Seleccionar los discos según la procedencia de la muestra
MEDIOS DE CULTIVO A USAR DE ACUERDO AL TIPO DE ESPECIMEN ANALIZAR
UROCULTIVO COPROCULTIVOS SECRECIONVAGINAL SEC. DE ABCCESOS Y SEC. FARINGEA

Y URETRAL LIQUIDOS CORPORALES
Agar EMB Agar Mac Conkey Agar Mac Conkey Agar Mac Conkey Agar Mac Conkey
Agar CLED Agar XLD Agar Manitol Salado Agar Manitol Salado Agar Sangre
Agar SS Agar Thayer Martin Agar Chocolate Agar Manitol salado
Agar TBCS Agar Chocolate Agar Sabouraud Agar Sangre con
Agar Sangre Caldo Tioglicolato Gentamicina
Agar Sabouraud Agar Chocolate
ESPUTO
(GERMENES COMUNES)
Mac Conkey
Agar Manitol Salado
Agar sangre
Agar Sabouraud
Agar Chocolate
BIOQUIMICAS MÁS FRECUENTES DE LOS PRINCIPALES PATOGENOS ENTERICOS OXIDASA NEGATIVOS
GERMENES TSI LIA GAS S I M CIT UREA MR VP

Salmonella typhi K/A K/K 98 N P 97 N P 97 N N P N
Salmonella paratyphi K/A K/A P 99 N 90 N P 95 N N P N
Salmonella galliriarum K/A K/K 90 N P N N N N P N
Salmonella pollorum K/A K/K P 99 P 90 N N N N P 90 N
Salmonella sp K/A K/K 95 P 95 P 50 N P 95 P 50 N P N
Serratia marcencens (S99) K/A 98 K/K P 55 N N P 97 P 98 N 85 N 80 P 98
Serratia rubidaea (S99) A/A K/K 55 N 70 N N P 85 P 95 N 98 N 80 P
Serratia liquefaciens (S98) K/A 90 K/K 95 P 75 N N P 95 P 90 N 97 P 93 P 93
Proteus mirabilis K/A 98 K/A P 96 P 98 N 98 P 95 P 65 P 98 P 97 P 50
Proteus vulgaris K/A 98 K/A P 85 P 95 P 98 P 95 N 85 P 95 P 95 N
Providencia rettgeri K/A 95 K/A N 90 N P P 94 P 95 P 98 P 93 N
Providencia stuarti K/A 98 K/A N N P 98 P 85 P 93 N 70 P N
Shiguella sonnei K/A 98 K/A N N N N N N P N
Shiguella flexneri K/A K/A N 97 N P/N N N N P N
Shiguella dysenteriae K/A K/A N N N 56 N N N P N
Shiguella boydii K/A K/A N N N 71 N N N P N
Enterobacter aerogenes A/A 95 K/K 98 P N N P 97 P 95 N 98 N 95 P 98
Enterobacter cloacae A/A 93 K/A P N N P 95 P P 65 N 95 P
Enterobacter agglomerans K/A 60 K/A N 80 N N 80 P 85 P 50 N 80 N 50 P 70
Citrobacter freundii A/A 78 K/A P 89 P 78 N 67 P 89 P 78 N 56 P N
Citrobacter diversus A/A k/A K/A P 98 N P P 95 P P 75 P P 98

Klebsiella pneumonia A/A 98 K/K 98 P 97 N N N P 98 P 95 N 90 P 95
Klebsiella oxytoca A/A K/K P 97 N P N P 95 P 90 N 80 N
Klebsiella ozaenae K/A 70 K/A 60 P 50 N N N N 70 N 90 P 98 N
Escherichia coli A/A 95 K/A 90 P 95 N P 98 P 95 N N P N
E. coli EPEC A/A K/A-K/K P/N N P/N P/N N N P N
E. coli EIEC A/A-K/A K/A P/N N P/N N/p N N P N
Edwarsiella tarda K/A K/K P P P P 98 N N P N
Yersinia pestis K/A K/A N N N N N N 95 P 80 N
Yersinia enterocolitica K/A K/A 95 N 95 N P 50 N 98 N P 75 P 97 P 98
BIBLIOGRAFÍA
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Microbiology Laboratory in the Diagnosis of Infectious Diseases: Guideline to Practice
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Transport, and Storage. En: Manual of Clinical Microbiology 7 th ed. American Society
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3. Murray PR. Specimen Collection and Transport. En: ASM Pocket Guide to Clinical
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Ediciones Científicas y Técnicas, SA. México, 1997.
8. Gilberto AM, Mauricio AR. Interpretación Clínica del Laboratorio. 6ª ed. Ed. Médica
Panamericana. LDA, Colombia, 2000.
9. Koneman EW, Roberts GD. Practical Laboratory Mycology, 3 rd Ed. Williams and Wilkins.
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10. Mc Ginnis MR. Laboratory Handbook of Medical Mycology. Academic Press New York, 1980.
11. Evans EGV, Richardson MD. Medical Mycology. A practical aprproach. Published in the
Practical Approach Series. IRL Press at Oxford University , 1989.
12. Salvatella R, Eirale C. Examen Coproparasitario. Metodología y empleo. Revisión técnico
metodológica. Rev Med Uruguay, 12(3):215-225, 1996.
13. Beaver PC, Jung RC, Cupp EW. Parasitología Clínica, 3ª Ed. Salvat Editores SA. Mexico, 1992.
14. Athias A. Parasitología Clínica, 3ª Ed. Publicaciones Técnicas. Mediterráneo Lda. Chile,
1996.Departamento de Laboratorio Clínico. Hospital de Clínicas. 2004
15. Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance
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supplement.
2010. CLSI document M100- S20. Vol. 30; Nº 1.
16. Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias del
Instituto Nacional de Salud , descrita en la Sección 6, Identificación Bacteriana, pág. 48.
17. Manual de procedimientos para la Prueba de Sensibilidad Antimicrobiana por el
Método de Disco Difusión, Serie de Normas técnicas Nº30.
GLOSARIO DE TERMINOS MICROBIOLOGICOS
1. Antibiograma: Examen solicitado al cultivo microbiológico de diversos especímenes clínicos, su

utilidad es determinar el antibiótico más apropiado para contrarrestar microorganismos causantes de
la infección.
2. Antibiótico: Agente biológico o químico que inhibe el crecimiento de los microorganismos
3. ATCC: American Type Culture Collection, son cepas controles comerciales.
4. Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad humana y del
ambiente, frente a diferentes riesgos producidos por agentes biológicos, físicos, químicos o
mecánicos
5. Cepa: Cultivo puro formado por bacterias descendientes de un solo aislamiento.
6. Cepas de cultivo Stock: Representan el verdadero Banco de Cultivos. Son mantenidas en un sistema
cerrado de conservación a una temperatura de –70ºC para minimizar su actividad genética y
fisiológica, para evitar su potencial mutación.
7. Cepas de cultivo Semistock: Son cepas provenientes del cultivo stock, mantenidas a –20ºC por un
periodo intermedio entre el relativamente permanente cultivo en stock y el cultivo de cepas control
para el trabajo diario.
8. Cepas de cultivo de trabajo diario: Son cultivos control para el trabajo diario, provenientes de
cultivos semistock. Para este propósito se utilizan cultivos de 24 horas y son tranplantados
diariamente en los medios respectivos.
9. Cepas Domésticas: Son cepas aisladas de las muestras microbiológicas, las cuales han sido
caracterizadas y son utilizadas para el control de calidad.
10. Colonia: Crecimiento visible bacteriano, generalmente en medios sólidos, originada por la
multiplicación de una sola bacteria preexistente.
11. Concentración Inhibitoria Mínima (CIM): Corresponde a la concentración más débil de un

antibiótico capaz de inhibir el crecimiento visible de una cepa bacteriana al cabo de 18 – 24 horas de
incubación.
12. Crioconservación: Congelamiento y almacenamiento de células vivas a muy bajas temperaturas.
13. Disco de Sensibilidad: Discos impregnados con algún antimicrobiano usados para determinar la
susceptibilidad antimicrobiana por disco de difusión.
14. Escala de McFarland: Estándar de turbidez de sulfato de bario. La escala usada para el inóculo de
las pruebas de susceptibilidad por el método de disco difusón es 0.5 .
15. Esterilización: Proceso validado que permite la eliminación de toda forma de vida microbiana
incluyendo endosporas bacterianas.
16. Incubación: Mantenimiento de cultivos bacterianos en condiciones favorables para su desarrollo y

multiplicación.
17. Inóculo: Alícuota de un cultivo bacteriano transferida a un medio de cultivo.

18. Intermedio (I): Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Esta categoría
incluye las cepas bacterianas que pueden ser inhibidas por concentraciones del antibiótico superiores
a las obtenidas con las dosis habituales.
19. Medio de Cultivo: Medio artificial de sustancias nutritivas, que puede ser sólido, semisólido o
líquido, necesarias para el crecimiento y multiplicación bacteriana in vitro.
20. Microaerofílico: Organismo que crece y se reproduce mejor en la presencia de una tensión de 5% de
oxígeno, 10% de anhidrido carbónico y 85% de nitrógeno.
21. Reconstituir: Restablecer la forma original de una sustancia previamente alterada para su
conservación y almacenamiento, mediante la combinación con un líquido adecuado.
22. Resistente (R):Categoría clínica definida por las pruebas de susceptibilidad in vitro. Las cepas
bacterianas incluidas en esta categoría no son inhibidas por las concentraciones séricas del
antibiótico normalmente alcanzadas con las dosis habituales del mismo.
23. Sensible: Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Implica que una
infección debida a la cepa bacteriana estudiada puede ser tratada apropiadamente con la dosis de
antibiótico recomendada para el tipo de infección y la especie infectante.
24. UFC: Unidad formadora de colonia

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TOMA DE MUESTRAS BACTERIOLÓGICAS INSTRUCTIVO.

Toda la información diagnóstica que el laboratorio de microbiología puede proporcionar, depende de la

Normas básicas generales:

1 MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO

1.1 MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

1.1.1 EXUDADO FARINGEO

1.1.4 EXUDADO NASAL

1.1.5 MUESTRAS DE OÍDO

1.1.6 MUESTRAS OCULARES.

1.1.6.1 EXUDADO CONJUNTIVAL

C. NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.

3.1.2 TÉCNICA PARA HOMBRES.

3.2 OBTENCIÓN DE ORINA PARA UROCULTIVO EN EL PACIENTE CON SONDA VESICAL

3.3 PUNCIÓN SUPRAPÚBICA

C. VOLUMEN MÍNIMO DE LA MUESTRA.

4.1 LIQUIDO CEFALORRAQUÍDEO

4.1.2 -LCR EN PACIENTES CON SHUNTS VENTRICULARES:

4.1.2.2 LCR obtenido del circuito de la derivación.

5 PIEL Y TEJIDOS BLANDOS.

5.3 HERIDA QUIRÚRGICA

6 MUESTRAS DEL TRACTO GASTROINTESTINAL

6.1 MATERIAS FECALES

6.2 HISOPOS RECTALES

6.3 MUESTRAS DIGESTIVAS ALTAS

6.3.2 BIOPSIA GASTRICA-ANTRAL OBTENIDA POR ENDOSCOPIA

6.4 MUESTRAS DIGESTIVAS BAJAS

7.1 TRACTO GENITAL FEMENINO

7.1.1 EXUDADO VAGINAL

C- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN

7.1.2 EXUDADO ENDOCERVICAL

C-NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN

7.1.4 EXUDADOS RECTALES

7.1.9 GANGLIOS LINFÁTICOS INGUINALES

7.1.10 LÍQUIDO AMNIÓTICO

7.2 TRACTO GENITAL MASCULINO

7.2.2 MUESTRAS PARA DIAGNÓSTICO DE PROSTATIS

7.3 MUESTRAS PARA EL ESTUDIO DE CHLAMYDIAS Y MYCOPLASMAS UROGENITALES.

9. MUESTRAS PARA ESTUDIO INMUNOLÓGICO DE LAS INFECCIONES BACTERIANAS

10. MUESTRAS PARA INVESTIGACIÓN DE AGENTES INFECCIOSOS POR TÉCNICAS DE

TOMA DE MUESTRAS PARA ESTUDIO PARASITOLÓGICO Y MICOLÓGICO

1. MUESTRAS PARA ESTUDIO PARASITOLÓGICO

1.1.2. Espátula adhesiva.

A.- MATERIAL NECESARIO:

1.1.5. Sondeo duodenal.

1.1.6. Aspirado de lesiones intestinales por rectosigmoidoscopía.

1.1.7. Biopsias de intestino.

1.2. Muestra para estudio parasitológico de piel.

A.- MATERIAL NECESARIO:

C.- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN:

1.3. Muestras para estudio parasitológico en sangre.

1.3.1. Sangre en fresco.

1.3.2. Frotis de sangre.

1.3.3. Gota gruesa.

A.- MATERIAL NECESARIO:

C.- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN:

C.- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN:

A. PREPARACIÓN DEL PACIENTE:

1.7. Biopsias para estudio parasitológico.

1.9. Muestras para cultivo parasitológico.

1.10. Muestras para trepoinvestigación.

2. MUESTRAS PARA ESTUDIO INMUNOLÓGICO DE PARASITOSIS

3. MUESTRAS PARA ESTUDIO MICOLÓGICO.