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Si dividono in:
• N-glicosilate (su Asparagina)
• O-glicosilate (su Serina o Treonina. Raramente su Tirosina,
idrossiprolina, idrossilisina)
9 Analisi MS
9 Frazionare
• Rimozione chimica
- β-eliminazione in ambiente alcalino (preferita per O-glicosilazioni)
- Ossidazione con periodato
- Trattamento con trifluorometansulfonato (distruzione completa)
- Idrazinolisi (può danneggiare le proteine)
• Rimozione enzimatica
- N-glicosidasi F (PNG-F), per N-glicosilazioni
- Altre glicosidasi
MASS SPECTROMETRY
L’analisi della frazione glucidica viene effettuata
mediante:
9Glucosidasi specifiche
rompono selettivamente legami
presenti nella componente
oligosaccaridica
O-GLICOSILAZIONE:
DIGESTIONE SPECIFICA DEGLI OLIGOSACCARIDI
9Glucosidasi specifiche
rompono selettivamente
legami presenti nella
componente
oligosaccaridica
ANALISI MS PER INDIVIDUARE LA PRESENZA E
(EVENTUALMENTE) IL TIPO DI OLIGOSACCARIDE
Il sequenziamento degli oligosaccaridi può essere fatto mediante MALDI-Tof
su ioni selezionati o ESI-MS/MS.
ESPERIMENTI MS/MS PER IL SEQUENZIAMENTO DI OLIGOSACCARIDI
IONI A,B,C:
La carica rimane
sull’estremità non
riducente
IONI X; Y; Z:
La carica rimane
sull’estremità riducente
RIASSUMENDO:
ALTRE MODIFICAZIONI POSTTRADUZIONALI
9 2D SDS-PAGE
9 2nd D MS
n
9 MSn
9 ……
STRATEGIE di analisi:
9 Rivelazione specifica
9 Analisi MS