Introdução a

Biologia

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Molecular
Prof. Dr. Wagner Gouvêa dos Santos
Biomedicina
Conteúdo da Aula • Introdução a Biologia Molecular
• Explorando o domínio molecular
• A interface entre Bioquímica e
Génética
• História da bioquímica do DNA
• História da bioquímica do RNA
• História da Bioquímica das proteínas
 • Atualmente as teorias científicas suportam a divisão dos

Introdução
organismos vivos em três grandes domínios:

• 1. Bactérias

Geral • 2. Archae - organismos que vivem em ambientes extremos

 Termófilas – toleram ambientes com altas temperature
 Halófilas - toleram concentrações Salinas muito altas
 Metanogênicas - produzem metano como bioproduto do
metabolismo

• 3 Eucariotas

• Dentro destes domínios as células podem ser

categorizadas baseado em sua complexidade

• Como se deu essa complexidade? Qual a base molecular

dessa diversidade celular ?
Explorando o • A área da Biologia Molecular surge na
tentativa de compreender os fenômenos
domínio biológicos a nível molecular.
molecular
• Para isso envolve estudos relacionados a
estrutura e função gênica a nível
molecular.
• Como resultado estuda a base molecular
do processo de replicação, transcrição e
tradução do material genético.
• O principal foco da Biologia Molecular é
dessa forma compreender as interações
entre os vários sistemas de uma célula,
incluindo as interações entre DNA, RNA
e sintese de proteínas.
• Como essas interações são reguladas.
 A escala
de medida
molecular

10-15 fento f fm fg fl
10-18 atto a am ag al
Explorando o • A área da Biologia Molecular se
domínio sobrepoe a outras áreas da Biologia e
molecular química especialmente a Genética e
Bioquímica.

DNA

Todo organismo RNA

vivo depende
basicamente de
três moléculas Proteína
críticas
Breve Histórico
•Desde o final dos
anos 50 e início dos
anos 60,
biologistas
moleculares já
acumulavam um
conjunto de
conhecimentos
Breve Histórico • Caracterizar, isolar e manipular os
componentes moleculares de células e
organismos:

 DNA –armazenamento da informação

genética

 RNA – intermediário da informação

 Proteínas - O principal tipo de

molécula estrutural e enzimática na
célula.
 • Microscopia
Breve Histórico
• Início em 1665
• Robert Hooke (1635-1703)
 Descobriu que os
organismos são constituídos
por células

• Matthias Schleiden
(1804-1881) e Theodor
Schwann (1810-1882) Matthias Schleiden

 Expandiram o estudo das

células em 1830

Theodor Schwann
 • 1865 – Gregory Mendel
Breve Histórico descobre as regras básicas da
hereditariedade estudando
ervilhas
 Um indivíduo possui duas
Principais unidades hereditárias
Eventos na alternativas para uma
Mendel: o pai da
História da determinada característica
genética
(Dominante X Recessivo)
Biologia
Molecular

1800 - 1870 • 1869 Johann Friedrich

Miescher – Descobriu o
DNA e o chamou de
nucleína

Johann Miescher
 • 1881 Edward Zacharias
Principais  Demonstrou que os cromossomos são
Eventos na constituídos por nucleína
História da
Biologia
• 1899 Richard Altmann
Molecular  Renomeou Nucleína como ácido nucléico

1880 - 1900 • Por volta de 1900

 Estrutura química de todos os 20 aminoácidos
foram identificadas
 • 1902 - Emil Hermann
Principais Fischer
Eventos na  Ganhador do prêmio Nobel :
História da Demonstrou que os aminoácidos
são ligados para formar as
Biologia proteínas
Molecular Emil
Fischer
• 1911 - Thomas Hunt Morgan
 Descobriu que os genes sobre os
1900 - 1911 cromossomos são as unidades
discretas da hereditariedade

• 1911 - Pheobus Aaron

Theodore Lerene Thomas
 Descobriu o RNA Morgan
 • 1941 – George Beadle and
Principais Edward Tatum George
Beadle
Eventos na  Identificaram que os genes
História da fazem as proteínas
Biologia
Molecular
Edward
Tatum

1940 - 1950 • 1950 – Edwin Chargaff

 Descobriu que Citosina se
complementa com Guanina e
Adenina se complementa
com timina

Edwin Chargaff
 • 1950s – Mahlon Bush
Principais Hoagland
Eventos na  Primeiro a isolar o RNA
História da
Biologia
Molecular

Mahlon Hoagland
• 1952 – Alfred Hershey e
1950 - 1952 Martha Chase
 demonstraram que DNA é
o material genético
 • 1952-1953 James D.
Principais Watson e Francis H. C.
Eventos na Crick
História da  Deduziram a estrutura da dupla
hélice do DNA
Biologia
Molecular James Watson e
Francis Crick

1952 - 1960
• 1956 George Emil Palade
 Mostrou que o local de
síntese das enzimas no
citoplasma da célula é uma
organela constituida por RNA
chamada de ribossomos

George Emil Palade

 • 1970 Howard Temin and
Principais David Baltimore
Eventos na  Independentemente isolaram a
primeira enzima de restrição
História da
Biologia  Possibilitou que o DNA pudesse ser
Molecular cortado em tamanhos reprodutíveis em
sítios específicos pelas Enzimas de
restrição chamadas de endonucleases

1970 • Os fragmentos de DNA

cortados podem ser ligados a
carreadores ou vetores
bacterianos e introduzidos
em bactérias
• Clonagem gênica ou
Tecnologia do DNA
Recombinante
 • 1977 Phillip Sharp e
Principais Richard Roberts
Eventos na
História da
Biologia  Demonstraram que o
Molecular pré-mRNA era Phillip Sharp
processado pela
excisão dos íntrons e
1970 - 1977 união dos éxons. Em
um processo chamada
de “splicing”

Richard Roberts
 • 1986 Leroy Hood:
Principais  Desenvolveu o método
Eventos na automatizado de sequenciamento
História da • 1986 - Iniciativa do projeto
Biologia Genoma Humano foi Leroy Hood
Molecular anunciado.
• 1995 – Publicação dos
mapas dos cromossomos
1986 - 1995 3,11,12 e 23 com razoável
resolução

• Os mapas fornecem a localização

de marcadores em cada
cromossomo tornando a
localização de um gene mais fácil.
 • 1995 John Craig Venter:
Principais Primeiro genoma bacteriano
Eventos na sequenciado
História da
Biologia
Molecular • 1995 – novos instrumentos Craig Venter
de sequenciamento por
fluorescência automatizado
1995 -1996 e operados por robótica.

• 1996 – Primeiro genoma

eucariota sequenciado –
Levedura
 • 1999 John Craig Venter:
Principais Primeiro cromossomo
Eventos na humano sequenciado
História da (cromossomo 22)
Biologia
Molecular
• 2001 – Primeira versão do
sequenciamento do genoma
1997 - 2001 Humano publicada em
revista de reconhecimento
internacional
 • Abril de 2003 – Projeto
Principais Genoma Humano concluído
Eventos na
História da • Genoma de camundongo é
sequenciado
Biologia
Molecular
• 2004 – Genoma de rato é
sequenciado
2003 – dias atuais

• Introdução ao
sequenciamento de última
geração
 Possibilitou o sequenciamento
de dezenas de genomas
 • 2003 Francisco Mojica
Principais Tecnologia CRISPR –
Eventos na Repetições Palindrômicas
História da Curtas Agrupadas e
Biologia Interspaçadas Francisco Mojica
Molecular • Permite manipular a edição
de genomas

Anos recentes
• 2018 – cientista chinês He
Jiankui declara ter alterado
o DNA de duas crianças
gêmeas para torná-las
resistente ao virus HIV.
He Jiankui
• Questão ética entra em
profundo debate
Biologia
Molecular do
DNA –

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Estrutura e
função
Primeira vez
que o DNA foi
isolado
1869. Friedrich Miescher, cientista suíço, estudando a
química da célula escolheu estudar leucócitos que
apareciam em abundância as bandagens de curativos em
um hospital próximo a Universidade.
Isolou um material rico em fósforo das células e chamou
de nucleína.
Mais tarde encontrou esse material em outros tipos de
células.
Mais tarde outros cientistas começaram a descrever a
propriedades químicas do DNA com mais detalhes.
Estrutura do DNA
Pentose

OH H
Ribose 2’-desoxirribose
RIBOSE
-D-Ribofuranose DESOXIRIBOSE
-D-2-desoxirribofuranose
 Estrutura do DNA
Bases Nitrogenadas

PURINAS

Purina Adenina Guanina

PIRIMIDINAS

Pirimidina Citosina Uracila Timina

Adenina = Timina Guanina  Citosina

 Estrutura do DNA
Fosfato
 Estrutura do DNA
Nucleotídeo
 Estrutura do DNA
Fita simples
polinucleotídeo
Base

Base

Base

5’ → 3’
5’AACGTTGCTATCGT3’
Estrutura do DNA

Os grupos tri-fosfatos de alta

energia são clivados em
nucleosídeo monofosfato
(nucleotídeo) e os açúcares são
ligados por uma ligação diéster
Dupla
hélice de
DNA
Dupla
hélice de
DNA
Estabilidade da dupla hélice
Ligações Covalentes

Forças de Van der

Walls

Sítios Hidrofóbicos

Sítios Hidrofílicos

Pontes de
Hidrogênio
Formas
que a
dupla
hélice de
DNA pode
assumir
Formas de DNA
e
graus de
enovelamento
/supertorção
catodo
_
Canaleta do gel
Gel de agarose

Forma com um
corte em uma das
fitas (nikado) Corrida de
Direção da migração

Forma linear
diferentes
formas de DNA
Forma plasmidial em
superenovelada
gel de agarose

anodo
+
 Cromátides
irmãs

centrômero

Estrutura
do
Alças de
nucleossomo cromossomo
Dupla
cromatina fibra
hélice
( - 75 Kb)

arcabouço Filamentos de
cromatina 30 nm
Cromossomos em diferentes espécies
Espécie Número de
cromossomos
Humanos 46
camundongos 40
Ratos 42
Mosca das frutas 8
Bacteria 1
Cada célula
humana
contém 46
cromossomos
(exceto
gametas)
núcleo Membrana nuclear Cromossomos condensados

Cromossomos
em diferentes
fases
celulares
 Composição
do Genoma
Humano

Modificado de Strachan e Read

Estrutura
Gênica
Genes
codificam
proteínas
Estrutura Gênica de
organismos procariotas
• Nos procariontes, o genoma é compacto com
poucos ou nenhum espaço entre os genes.

• Os genes que codificam proteínas envolvidas em

uma determinada via metabólica, são encontrados
numa disposição contínua ao longo do DNA.

• O conjunto desses genes orientados nesta

disposição é chamado de OPERON
RNA operador Genes Estruturais
Polimerase

Promotor Gene Promotor Gene g Gene h Gene i

regulador

• O Operon é transcrito sequencialmente.

• O RNAm (RNA mensageiro) carrega a mensagem

completa do operon em uma única fita de RNA
ininterrupta.

• O genoma tem poucas ou nenhuma sequência

repetitiva
Estrutura Gênica de
organismos Eucariotas
• A informação genética está distribuida em
várias moléculas de DNA.

• Possuem tamanho de genomas muito diferentes

(não se relaciona ao número de genes).

• Possuem muitas sequências repetitivas não

codificantes e os genes são interrompidos.

• Os genes que constituem “operons” não estão

necessariamente em continuidade ou em
sequência.

• Os genes que constituem um operon podem

estar localizados em diferentes cromossomos.

• O RNAm (RNA mensageiro) carrega a

mensagem completa do operon em uma única
fita de RNA ininterrupta.

• O genoma tem poucas ou nenhuma sequência

repetitiva
 Estrutura de um gene Eucariota
Iniciação da códon de término da
tradução TAA Término da
Transcrição
transcrição
Iniciação da
Caixa Caixa Tradução códon ATG
CAAT TATA

Exon Intron Exon Intron Exon

Região
Promotora
Sequências Sequências Não
codificadoras codificadoras Sinal de
poliadenilação
5’ 3’
O DNA contém o código para
síntese de proteínas
Genes
contém
introns e
exons
Biologia
Molecular do
RNA –

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Estrutura e
função
RNA Breve • 1956 – Alexander Rich e David Daves
descobrem hélice dupla de RNA e
Histórico mostram que um poliribonucleotídeo de
uridina e poliribonucleotídeo de Adenina
se hibridizam espontaneamente
• 1960 descoberta de moléculas híbridas de
DNA e RNA
• 1969 desenvolvimento do método de
hibridização in situ
• 1974 estrutura cristalina de um tRNA
• 1993 descoberta dos primeiros genes
codificadores de microRNAs
• 1995 desenvolvimento e comercialização
da tecnologia de microarranjos, método
de hibridização quantificável
Estrutura do RNA
DNA X RNA
ribose Desoxiribose
Usado no Usado no DNA
RNA
Bases
nitrogenadas
do RNA
Tipos de RNA
• RNA mensageiro – serve como intermediário da informação contida
no DNA
• RNA ribosomal – RNA que faz parte da estrutura dos ribossomos
• RNA transportador – transporta aminoácidos para a síntese de
proteínas
• snRNA – Pequenos RNAs nucleares – participam em vários processos
nucleares incluindo maturação de pré-mRNA
• snoRNA – pequenos RNAS nucleolares – participam no
processamento e modificação química dos RNAS ribossomais
• miRNA , RNAi– regulação da expressão gênica
• Outros RNAs – participam em diversos processos celulares como
síntese de telômeros, inativação do cromossomo X, transporte de
proteínas
RNA ribossomal

http://compbio.pbworks.com/ and (http://fig.cox.miami.edu/

Estrutura do
RNA
transportador
O código Genético
• Exitem 20 aminoácidos codificados na forma de
sequência de três nucleotídeos embora outros
possam ser criados a partir de processamento
pos-traducionais

• Desde que existem 4 bases possíveis para formar

o códon, combinando 3 bases de cada vez, existem
43 ou 64 codons possíveis, resultando um sistema
altamente redundante
O código
genético
Molduras de leitura no DNA – (ORF)

Moldura de leitura 1

Moldura de leitura 2

Moldura de leitura 3

Moldura de leitura 1
direção 3’-5’
Estrutura e Aminoácidos
função de
Proteínas
• Moléculas que dão origem as proteínas.

R
H O
N C C
H OH
H
Ligação Peptídica

• É a ligação covalente entre dois

aminoácidos.

• Quando poucos aminoácidos estão ligados

→ peptídeo
• Quando muitos aminoácidos estão ligados
→ proteína
O grupo OH do ácido carboxílico de um aminoácido
se liga em um dos hidrogênios da amina do outro
aminoácido, formando uma molécula de água.

R R
H O H
O
N C C N C C
H OH H OH

H H

H2O
Estrutura das proteínas
• Diferente da maioria dos polímeros orgânicos, as
moléculas de proteínas adotam uma conformação
tridimensional específica (arranjo espacial dos átomos na
proteína)
• Esta estrutura adotada pelas proteínas permite a esta
classe de moléculas apresentar funções biológicas
específicas
• Esta estrutura específica de cada proteína é chamada de
conformação nativa. (conformação functional de uma
proteina)
• A conformação nativa possui um grande número de
interações favoráveis no interior da proteína
Tipos de ligações
não covalentes
que auxiliam no
envovelamento
de proteínas
Diferentes
níveis de
organização
encontrados
em
proteínas
Estrutura Primária
hélice

folha
Estrutura
secundária
 Estrutura
terciária –
ligações
que
Estrutura Terciária mantém a
estrutura
terciária

Domínio
Estrutura
Quaternária
Estrutura
e função
das
proteínas
Função das proteínas
• Catálise – Enzimas
• Estrutural – queratina
• Transporte – hemoglobina
• Transporte transmembrane – Na+/K+ ATPases
• Toxinas – veneno de cobras, ricina (semente de mamona)
• Função contrátil – actina e miosina
• Hormônios – insulina
• Defesa - anticorpos
• O Citoesqueleto
microtúbulos: manutenção da forma e
mobilidade celular, ancoragem de outras
estruturas celulares
Classificação das proteínas
• Simples – composta apenas por resíduos de aminoácidos
• Conjugada – contém grupos prostéticos ( íons metálicos,
cofatores, lípides, carboidratos
Doenças causadas por alterações
na estrutura de proteínas
• Encefalopatia Espongiforme (Doença da vaca
louca) – afetam gado e pecuária e doença de
Creutzfeldt-JaKob em humanos

• Anemia Falciforme – mudança de um único

aminoácido na hemoglobina