Determinación de hierro sérico

Separación y reducción del hierro unido a la

transferrina mediante la adición del buffer
Glicina-HCl pH 1.9 con ácido ascórbico y su
posterior tinción mediante la adición de un
agente cromógeno (batofenantrolina
sulfonatada). La intensidad del color
determinada espectrofotométricamente es
proporcional a la concentración de hierro en la
muestra.
 0.5 mL muestra 2 mL Buffer Glicina-HCl -
(agua, suero, patrón + ácido ascórbico
17.91µmol/L)
Agitar y dejar reposar durante 30 minutos

Leer DO 530 nm vs Blanco de agua desionizada (DO1)

50 µL Batofenantrolina
sulfonatada

Agitar y dejar reposar durante 60 minutos

Leer DO 530 nm vs Blanco reactivo (DO2)

Cálculos: HS = DO2 -DO1 (M) x 17.91 µmol/L
DO2 - DO1 (P)
Determinación de capacidad total de
fijación de hierro por la transferrina

Se basa en la saturación total de la

transferrina con una solución concentrada de
hierro y la eliminación posterior del exceso de
hierro libre con un adsorbente insoluble
(carbonato de magnesio) que se elimina por
centrifugación.El hierro del sobrenadante es
determinado por la técnica de hierro sérico.
 0.5 mL muestra (suero) + 1 mL Patrón 89.55µmol/L
Agitar y dejar reposar durante 15 minutos
100 mg carbonato de
magnesio
Agitar intermitentemente durante 30 minutos

Centrifugar 1000 g 15 minutos

Decantar

Centrifugar 1000 g 15 minutos

Extraer 0.5 mL del sobrenadante

DETERMINACIÓN DE HIERRO SÉRICO

Cálculos: CT = DO2 -DO1 (M) x 17.91 µmol/L x 3
DO2 - DO1 (P)
 IS = HS
CT

VALORES DE REFERENCIA
HS 10.7 - 32.2 µmol/L
CT 50.1 - 75.2 µmol./L
IS 0.16 - 0.60
 Fuentes de error

 Limpieza del material  LIBRE DE HIERRO

 Pipeteo, especialmente del sobrenadante

 pH del buffer Glicina -HCl  1.9  0.02

 Preparación y conservación de los sueros  libre

de eritrocitos, no hemólisis, congelarlos.
Inconvenientes de la determinación de HS

 Ritmo circadiano.
 Disminuye en los procesos infecciosos agudos y
crónicos.
Disminuye en los procesos inflamatorios y malignos.
 Variaciones en las mujeres en edad fértil.
 Aumenta como resultado del daño tisular.
 Ventajas y Desventajas de la
determinación de CT
 No tiene ritmo circadiano.
 Aumenta en la deficiencia de hierro, consumo de
anticonceptivos orales, a partir del segundo trimestre
del embarazo, en procesos hepáticos con necrosis.
 Disminuye en los procesos infecciosos agudos y
crónicos, en los procesos renales y con pérdida de
proteínas.
 Disminuye en los procesos inflamatorios agudos y
crónicos, en enfermedades malignas
 A: Normal
89.5
B: Deficiencia de hierro
71.6 C: Embarazo (3ertrimestre)
D: Anticonceptivos orales
53.7 E: Procesos agudos y
crónicos (infecciones,
inflamaciones, malignos)
35.8
F: Hemocromatosis,
talasemia mayor, porfiria
17.9
G: Nefrosis

A B C D E F G

HS + CL =CT
 Determinación de PEL
Se basa en la extracción de la protoporfirina presente
en el eritrocito mediante el empleo de una mezcla de
solventes orgánicos y ácido clorhídrico 1,5 mol/L y su
posterior medición fluorimétrica en el espectro.

Determinación Determinación
espectrofluorimétrica espectrofotométrica
(pequeños volúmenes de (mayores volúmenes de
sangre) sangre y 3 )

VALORES DE REFERENCIA
Niños: Hasta 75 µg PEL/ dL eritrocitos
Adultos: Hasta 50 µg PEL/ dL eritrocitos
PEL aumenta en: Deficiencia de hierro, intoxicación
plúmbica, enfermedades malignas, infecciones crónicas,
anemias hemolíticas, enfermedades hepáticas y porfirias.
 Determinación de Ferritina Sérica
Técnicas inmunológicas

Inmunoradioisotópicas
Inmunoenzimáticas
RIA: Se marca el Ag
ELISA: Se marca el Ag o
IRMA: Se marca el Ac el Ac con una enzima que
desarrolla color
VALORES DE REFERENCIA
16-300 µg/L

Ferritina sérica  - Deficiencia de hierro

 - Procesos infecciosos, inflamatorios y
malignos, enfermadades hepáticas,
hemocromatosis.