RIGHT TIME, RIGHT PLACE: PROBING THE FUNCTIONS OF ORGANELLE POSITIONING

La disposición espacial apropiada de los orgánulos subyace en muchos procesos celulares, incluyendo la
señalización, la polarización, y el crecimiento. A pesar de la importancia de posicionamiento local, la
conexión exacta entre la localización subcelular y la función de orgánulos a menudo no se entiende
completamente. Para hacer frente a esto, los estudios recientes han desarrollado y empleado diferentes
estrategias para manipular directamente las distribuciones de orgánulos, tales como el uso de
heterodimerización (sensible a la luz) para controlar la interacción entre orgánulos seleccionadas y proteínas
motoras específicas, moléculas adaptadoras o factores de anclaje. Revisamos aquí la importancia de la
localización subcelular, así como herramientas para el control de posicionamiento orgánulo local. Debido a
que estos enfoques permiten el control de la distribución espacio-temporal de orgánulos, que serán
herramientas muy valiosas para desentrañar el funcionamiento locales y los mecanismos que controlan el
posicionamiento.
Tendencias
Muchos orgánulos tienen localizaciones subcelulares muy distintas, especialmente en las células que están
polarizados y / o espacialmente extendida. Muchos procesos celulares, tales como la migración, el
crecimiento de neuritas, formación de microvellosidades, y la mitosis, se correlacionan con
reposicionamiento orgánulo bien definido e indica actividades de orgánulos espacialmente definidos. Los
métodos tradicionales para interferir con el posicionamiento del orgánulo, tales como la interrupción de la
dinámica del citoesqueleto o actividad de la proteína motora, tienen muchos efectos secundarios pero
sugieren un papel para el posicionamiento orgánulo en muchos procesos celulares. Nuevas estrategias que
emplean reclutamiento de motores seleccionados, adaptadores, o moléculas de anclaje a orgánulos
específicos se puede utilizar ahora para controlar el posicionamiento del orgánulo con precisión espacio-
temporal y para dilucidar la conexión precisa entre la posición y la función de orgánulos.
El Posicionamiento de la organela frecuentemente correlaciona con la función.
Las organelas son compartimientos delimitados dentro de las células y llevan un conjunto especializado de
moléculas para realizar funciones específicas. El posicionamiento y las actividades espacialmente definidas
diferentes de orgánulos se producen en muchos tipos de células, pero son especialmente evidente en las
células que son, o bien polarizada, o espacialmente extendido, o ambos, tales como las células epiteliales,
sincitio muscular, o neuronas (Figura 1). Por ejemplo, el núcleo está típicamente situado en el centro con el
aparato de Golgi del centrosoma y en estrecha proximidad, mientras que el retículo endoplasmático (ER) a
menudo se extiende por todo el citoplasma. Elementos de los sistemas de secreción y endosomal se
encuentran más dinámicamente localizados porque trasladan entre el aparato de Golgi, la membrana
plasmática (PM), y los lisosomas. En los últimos años se han acumulado pruebas de que las células explotan
la distribución subcelular de los orgánulos para disponer localmente procesos celulares incluyendo la
señalización, la polarización, y el crecimiento. Estos acontecimientos han provocado un interés en la
exploración de las funciones no canónicas de orgánulos que dependen de la disposición espacial apropiada.
El posicionamiento orgánulo local es a menudo un proceso de dos pasos que implica el transporte activo
seguido de la inmovilización. El transporte activo es impulsado por proteínas motor del citoesqueleto que se
pueden mover direccionalmente a lo largo de uno de los dos tipos de biopolímeros del citoesqueleto:
filamentos de actina o los microtúbulos. La actina facilita la movilidad de las proteínas motoras de la
superfamilia de la miosina, mientras que los microtúbulos sirven como pistas para dos familias de proteínas
motoras, quinesina y dineína, que se mueven hacia los microtúbulos extremo (+) o extremo (-),
respectivamente. La mayoría de las proteínas motoras del citoesqueleto se asocian con las cargas a través
de su dominio de cola, a menudo mediada por moléculas adaptadoras específicas que regulan interacciones
motor-carga particulares. Estas interacciones determinan las operaciones de carga, así como la descarga en
el espacio y el tiempo, y, junto con la actividad de factores de anclaje controlado, definen la distribución de
la carga. Curiosamente, las proteínas motoras también pueden funcionar como factores de anclaje. Por
ejemplo, la dineína posiciona el aparato de Golgi, mientras que varios motores de miosina pueden oponerse
al transporte y cargas de anclaje a base de microtúbulos.
Teniendo en cuenta el importante papel de las proteínas del citoesqueleto y de motor, muchas técnicas
convencionales se han dirigido a la manipulación de la actividad de estas proteínas para entender mejor las
funciones de posición orgánulo. Sin embargo, los avances técnicos recientes, como optogenética, están
comenzando a ofrecer formas nuevas y más precisas para manipular el posicionamiento orgánulo.
Revisamos aquí la importancia de la localización orgánulo y poner de relieve varias estrategias interesantes
para manipular el posicionamiento orgánulo que recientemente han surgido. Se discute brevemente la
evidencia existente para la importancia de colocación de los orgánulos más grandes tales como el núcleo,
ER, y el aparato de Golgi, seguido de una discusión más extensa acerca de la distribución de los orgánulos
dinámicos como gránulos de ARNm, mitocondrias, endosomas y lisosomas, y los sitios de contacto entre
orgánulos.
Figura 1. Posicionamiento Funcional subcelular de Orgánulos en diferentes tipos celulares. (A) en las
células epiteliales el núcleo se encuentra más basalmente, con el retículo endoplásmico (ER) y Golgi
orientado hacia el lado apical. En las células epiteliales con microvellosidades, los endosomas de reciclaje y
sus quinasas asociadas se colocan debajo de la membrana apical para inducir la polimerización de actina y
la formación de microvellosidades. Las líneas verdes son actina. (B) En las neuronas, el ER se puede encontrar
en el cuerpo celular, cerca de los conos de crecimiento axonal, en el eje dendrítico, y en las espinas
dendríticas. El aparato de Golgi reside en el cuerpo celular, pero está orientado hacia la dendrita más grande
o el axón emergente en las neuronas en desarrollo. Las mitocondrias se localizan cerca de las espinas
dendríticas, los puntos de ramificación axonal y los conos de crecimiento, en los que se creen para satisfacer
la demanda local de energía. El ARNm se traduce a nivel local en los conos de crecimiento axonal y las espinas
dendríticas de inflexión para permitir la inducción de LTP y el crecimiento de cono al encontrar señales
extracelulares. Un pool de endosomas de reciclaje se almacena en la punta del cono de crecimiento y en la
base de las espinas dendríticas para permitir la entrega rápida de las membranas y los receptores a la
superficie cuando sea necesario. En la dirección opuesta, los endosomas de señalización viajan desde el cono
de crecimiento hacia el cuerpo celular tras la internalización del receptor inducida por ligando. (C) Los
miocitos tienen una distribución de orgánulos específicos, con el retículo sarcoplásmico (SR) que está
alineado entre el túbulo-t y las mitocondrias para el control de la homeostasis del calcio durante la excitación
y la contracción muscular. La cinta de Golgi típica se dispersa en pilas de Golgi más pequeñas que se
concentran alrededor de los núcleos que están espaciados uniformemente a lo largo de la fibra muscular.
Además, unos pocos núcleos están anclados por debajo de la unión neuromuscular (UNM),
presumiblemente para ayudar a la traducción local de los ARNm especializados.
Métodos convencionales para interferir con el posicionamiento de organelas.
Debido a que la red del citoesqueleto es crucial para la organización celular apropiada (Figura 2A),
interrumpiendo la red de microtúbulos usando agentes dirigidos a microtúbulos se ha usado frecuentemente
para alterar el posicionamiento del orgánulo (Figura 2B). Por ejemplo, la desestabilización de microtúbulos
utilizando nocodazole resulta en la dispersión de los lisosomas y el aparato de Golgi. A pesar de que afecta
el aumento o descomposición del citoesqueleto es un método eficaz para alterar la organización celular, la
manipulación modificaciones posteriores a la traducción de tubulina (PTMs) o estructuras podría ser más
sutiles. PTM se cree que afectan la estabilidad y preferencias proteínas motor de microtúbulos. Por ejemplo,

Figura 2. Diferentes enfoques para manipular el posicionamiento subcelular de Orgánulos. (A) En las
células eucariotas, las proteínas motoras del citoesqueleto controlan el transporte y el posicionamiento de
las proteínas, ARNs, y orgánulos. (B) La modificación de la dinámica del citoesqueleto o modificaciones post-
traduccionales de microtúbulos (PTM) altera la manera en que las proteínas motoras distribuyen a los
orgánulos. (C) Cambiar la abundancia, la actividad, la velocidad o dirección de proteínas de motor puede
cambiar la posición de los orgánulos. (D) sembrando células en un micro-patrón de distribución de las
moléculas de adhesión unifica orgánulos y permite el análisis sistemático de posicionamiento del orgánulo.
(E) Los orgánulos cargados con nanopartículas magnéticas se pueden acumular en los lugares donde se
aplican las fuerzas magnéticas locales. (F) Los motores que une físicamente o anclajes a orgánulos utilizando
química o heterodimerización inducida por la luz puede reubicar orgánulos específicos con una precisión
espacial y temporal. (G) Propiedades de herramientas orgánulo-reposicionamiento.
el tratamiento con la tubacina alfa-tubulina-inhibidor específico desacetilasa redirigido JIP1 (proteína
JNKinteracting 1) a partir de un subconjunto a casi todos los consejos de neuritas. Efectos similares se han
observado tras el tratamiento con el agente taxol estabilizadores de microtúbulos. Por lo tanto, la
modificación de la dinámica del citoesqueleto de microtúbulos o PTM son métodos para interrumpir las
distribuciones de carga. Sin embargo, cambiando el citoesqueleto no sólo afecta a orgánulos específicos de
interés, sino también cambia drásticamente la morfología celular, a menudo conduce a muchos efectos
secundarios no deseados.
Las interacciones motor-carga específicas y de conexión factor-carga pueden controlar la localización del
orgánulo y su actividad puede ser mejorada o reducida para alterar el posicionamiento de orgánulos (Figura
2C) artificialmente. Por ejemplo, la sobreexpresión de KIF5 (proteína de la familia Kinesin 5) se ha utilizado
para reducir la acumulación perinuclear de lisosomas [19], mientras que se demostró que el knock-out del
anclaje mitocondrial de la syntaphilin para aumentar la motilidad mitocondrial en los axones del hipocampo
del ratón. inhibidores de moléculas pequeñas también se pueden utilizar y son eficaces en cuestión de
minutos. Por ejemplo, para estudiar el papel de los endosomas de reciclaje Rab11-positivos (proteínas Ras-
11 relacionados) en el reciclaje endosomal en la organización y la orientación del huso mitótico, un inhibidor
de la dineína se utilizó para agotar el pool Rab11 centrosomal durante la mitosis [20]. Por lo tanto, el cambio
de la abundancia o actividad de proteínas de motor puede trasladar un subconjunto de los orgánulos debido
a interacciones específicas motor-carga. Sin embargo, una sola clase de proteínas de motor en general, se
une a más de un tipo de carga, y por lo tanto alterará el posicionamiento de múltiples tipos de orgánulos.
Funciones del Posicionamiento de Organelas.
A continuación destacamos ideas recientes en los papeles de posicionamiento de orgánulo. La mayoría de
estas ideas han surgido o bien mediante la observación de co-ocurrencia de movimientos de orgánulos con
el proceso de interés o mediante la interrupción de las distribuciones de orgánulos a través de cambios en
la dinámica del citoesqueleto o actividad de la proteína de motor, como se describe anteriormente.
Los orgánulos grandes: Núcleo, ER, aparato de Golgi.
El núcleo es uno de los orgánulos más grandes en células eucariotas y, a menudo se representa como un
orgánulo centralizado y estacionario. Sin embargo, en muchos tipos de células en el núcleo no se encuentra
ni central ni inmóvil [21]. Imágenes de células que migran reveló que el núcleo se aleja desde el borde
anterior hasta posicionar el centro organizador de microtúbulos estacionaria (MTOC) entre el núcleo y el
borde anterior, que es necesaria para la migración dirigida [22-24]. En los núcleos de las células epiteliales
se observan generalmente más cerca del lado basolateral [25] (Figura 1A), pero se pueden mover
apicalmente antes de la mitosis. Alterar la migración nuclear al interferir con la distribución típica de
actomiosina mostró que la migración del núcleo hacia el lado apical es necesario para la reintegración de
células hijas en el epitelio en desarrollo [26]. En el sincitios multinucleados muscular la mayor parte de los
núcleos están espaciados uniformemente a lo largo del eje de la fibra [27], pero algunos núcleos están
ancladas por debajo de grupos de receptores de acetilcolina en la post-sinapsis de la unión neuromuscular
(NMJ) (Figura 1C), presumiblemente para ayudar a la traducción de los ARNm locales especializados cerca
de la NMJ.
El ER es continua con la membrana externa de la envoltura nuclear y, a menudo se extiende a través de todo
el citoplasma. En las neuronas, el ER enriquece en los puntos de ramificación dendríticas (Figura 1B). El
cambio de la localización y la complejidad del ER mediante la alteración de la actividad de una proteína de
anclaje ER-microtúbulos reveló la implicación de estas estructuras ER locales en la formación de nuevas
ramas [32]. ER también se puede encontrar en el axón donde procesa proteínas sintetizadas de forma local.
Curiosamente, la perturbación inducida por fármacos del circulamiento ER-Golgi impidió la guía de axones
repulsiva, que indica un papel para las proteínas locales ER-procesado en las respuestas de crecimiento
cónicas [33]. El sincitio muscular cuenta con un ER especializado, conocido como el retículo sarcoplásmico
(SR), que específicamente alinea perpendicularmente a las invaginaciones de la PM (Figura 1C) y está
implicada en la señalización de Ca2 + tras la excitación muscular.
Las proteínas secretadas a menudo viajan a través del aparato de Golgi, y su ubicación puede sesgar la
membrana destinado a la secreción y por lo tanto influyen en la polarización celular. Por ejemplo, los puestos
de Golgi enriquecen en los puntos de ramificación dendríticas (Figura 1B). Debido a que el bloqueo de ambos
ER-a-Golgi y el tráfico secretor tardío condujeron a la reducción de brotes y ramificación dendríticas, se
propusieron puestos de Golgi para proporcionar membranas necesarias para la neurite recién formando y la
rama creciente[36]. Curiosamente, también se encontraron puestos de Golgi en los puntos de ramificación
dendríticas para colocalizar con los sitios de nucleación de microtúbulos. Esta nucleación acentrosomal fue
derogada en ausencia de g-tubulina funcional o el homólogo de Drosophila AKAP450 (Proteína A-quinasa de
anclaje 9 / AKAP9), y dio como resultado la reducción de arborización dendrítica [37]. En el sincitio muscular,
pequeñas y fragmentadas pilas de Golgi están asociados con sitios de salida de ER a lo largo de la fibra
muscular, pero se concentran alrededor del núcleo [38,39] (Figura 1C). En resumen, el posicionamiento
específico del núcleo, el ER y el aparato de Golgi es importante para la polarización adecuada, la formación
de tejido, y el desarrollo muscular.
Centrosomas
Centrosomas se componen de dos centriolos cilíndricos rodeado de una masa densa de material
pericentriolar (PCM). En muchas células del centrosoma sirve como el principal centro de MT-organización
(COMT) y se cree que determina la orientación de la red de microtúbulos y la dirección del tráfico post-
Golgi[40]. Debido a la reubicación del centrosoma se observó antes de la formación inicial del axón [41,42],
y la inactivación del centrosoma mediada por la proteína fluorescente de color rojo KillerRed que afectó la
formación axónica [43], se ha sugerido que el centrosoma desempeña un papel en la formación del axón
neuronal proporcionando las membranas necesarias y proteínas. Sin embargo, debido a moscas mutantes
que carecen de los centrosomas aún tiene un brote de axón normal [44], la ablación del centrosoma no
impide el brote del axón en neuronas de hipocampo de rata [45], y la localización del centrosoma no predice
el sitio de formación de axones en las células ganglionares de la retina de pez cebra [46], el papel exacto del
centrosoma en la polarización neuronal ha sido difícil de alcanzar.
mRNA gránulos y ribosomas
El almacenamiento subcelular de las moléculas de ARNm y los ribosomas permite la síntesis de proteínas
locales cuando las circunstancias lo requieran, y pueden ser utilizados para establecer los gradientes de
concentración de proteínas. Por ejemplo, durante el giro atractivo de los conos de crecimiento axonal, el
mRNA de b-actina mostró reubicarse hacia el lado del cono de crecimiento más cercana a la señal atractivo
(Figura 1B). La inhibición de la síntesis de b-actina por oligonucleótidos de morfolino antisentido impidió el
aumento de la polimerización de la actina y el cono de crecimiento, lo que indica que se requiere la
traducción del ARNm local para cono de crecimiento [47,48]. Del mismo modo, las señales repulsivas inducen
la acumulación de ARNm que codifica proteínas implicadas en la despolimerización de la actina, lo que
resulta en la retirada del cono local de crecimiento [49,50]. Además, se demostró que los polirribosomas y
un subconjunto de mRNAs localizan específicamente a las espinas dendríticas [51,52], donde la traducción
local está vinculado con la plasticidad sináptica [53-55].
Mitocondrias
Las mitocondrias están a menudo distribuidos por toda la célula y cumplen diversas funciones, incluyendo la
producción de ATP, almacenamiento de calcio, y la transducción de señales [56]. Sin embargo, su localización
es muy específica y precisamente regulada. Ambas proteínas adaptadoras y factores de anclaje han sido
reportadas para detectar concentraciones de Ca2 +, dando como resultado el enriquecimiento de las
mitocondrias en los sitios con niveles incrementados de Ca2+, tales como los botones presinápticos[57,58]
(Figura 1B). En las neuronas del hipocampo de ratones con knockout de syntaphilin, el aumento de la
motilidad mitocondrial se correlaciona con un aumento de la variabilidad impulso a impulso en la fuerza
presináptica, mostrando que las mitocondrias estables facilitan a una robusta transmisión presináptica [59].
Además, las mitocondrias posicionadas en los puntos de ramificación axonal se han correlacionado con la
estabilización de rama. La ablación de estas mitocondrias deficientes en la formación de ramas Mito-
KillerRed-mediada, demuestra un papel para estas mitocondrias en la estabilización de la rama [60,61].
En las células musculares, las mitocondrias residen en las uniones ER-PM y absorben Ca2 + tras la excitación
muscular [35] (Figura 1C). En las células epiteliales, las mitocondrias se distribuyen uniformemente en
condiciones normales [62], pero enriquecen en sentido anterior en algunas células cancerosas epiteliales.
Perturbando la distribución asimétrica a través de la sobreexpresión o knockdown de moléculas de fusión,
la fisión, o moléculas adaptadoras de motor mitocondriales en estas células cancerosas dieron lugar a la
migración celular reducida. Esto indica que la acumulación apical de las mitocondrias es importante para la
migración de células de cáncer y promueve la invasión del cáncer y la metástasis [63]. Las mitocondrias
también se enriquecen en el surco de segmentación durante la citocinesis [64], y se reubican a distintas
regiones subcelulares con referencia a la diferenciación de las células secretoras profesionales [65], pero la
función de la mitocondria en estos procesos y la importancia de su posicionamiento no se han resuelto.
Endosomas tempranos
La endocitosis tradicionalmente se ha considerado como una vía para la degradación y desactivación de los
receptores de superficie que son internalizados en respuesta a la unión del ligando. Sin embargo, ha quedado
claro que las colas de receptores internalizados pueden asociarse con los targets de señalización en el
endosoma, lo que resulta en la regulación de señalización. Además, múltiples adaptadores endosomo-
asociado y proteínas de andamiaje en el endosoma pueden funcionar como sitios de señalización de montaje
complejo para regular espacialmente la señalización [66-68].
En las células precursoras neurales de pez cebra, la distribución asimétrica de los endosomas Sara se ha
relacionado con la división celular asimétrica. Los endosomas Sara son endosomas tempranos que contienen
receptores Notch, y están marcados por el adaptador de proteínas endosomal Sara. Aumentar el nivel de
asimetría endosomal de Sara por medio de la expresión de una Rab5 constitutivamente activo resultó en
divisiones celulares más asimétricos. Esto demuestra que el tráfico direccional de los endosomas dentro de
la célula madre puede determinar si las células se dividen asimétricamente y, posteriormente, definen el
destino celular [69,70]. En resumen, los endosomas tempranos son sitios de ensamblaje del complejo de
proteínas que concentran eventos de señalización y la motilidad de estos endosomas se utiliza para propagar
señales a diferentes compartimentos celulares. La localización correcta de los endosomas tempranos en
tanto, es crucial para el buen funcionamiento celular.
Endosomas de reciclaje.
Las membranas y receptores internalizados pueden ser degradados por el lisosoma o reciclarse de nuevo a
la PM, ya sea directamente o a través de un compartimiento de reciclaje. Las endosomas de reciclaje (RES)
están marcados por el Rab11 GTPasa, que es el regulador clave del tráfico de RE. Debido a que el REs puede
ser localizado cerca de la superficie celular, las células pueden responder rápidamente a los estímulos
externos a través de exocitosis local del RES, lo que resulta en la reorganización dinámica de la superficie de
la célula [71]. Por ejemplo, en respuesta al factor de crecimiento neuronal (NGF REs) y su carga NgCAM
(molécula de adhesión celular de la neurona-glía) son redirigidos hacia el PM en las células PC12. La
sobreexpresión de la forma dominante negativa o Rab11 abroga la reubicación de las RES y perjudica la
formación de neuritas inducida por NGF [72]. Del mismo modo, se demostró que el reciclaje de RE en el axón
distal estimula el crecimiento de axones a través del aumento de la entrega de los receptores quinasa
relacionada tropomiosina-(TRK) y B1-integrinas [73-75]. Por otra parte, la VAMP2 proteína de membrana
(membrana de proteína asociada a vesículas 2) se entrega inicialmente tanto a los axones y dendritas, pero
el reciclaje preferencial de VAMP2 partir de los resultados de membrana dendríticas en la localización axonal
de VAMP2 [76]. Estos resultados sugieren que el brote y la polarización en el desarrollo de las neuronas
dependen de la actividad selectiva de RES.
Durante la potenciación a largo plazo (LTP), que es la ampliación y el fortalecimiento de las sinapsis
excitadoras tras la activación repetida, más receptores de tipo AMPA (AMPAR) de glutamato se insertan en
el post-sinapsis. Este proceso de co-ocurrió con el tráfico de membrana del RES a la superficie de la columna
vertebral. La interrupción de la vesícula de reciclaje mediante interferencia con la actina basada en proteína
motora miosina Vb, por la sobreexpresión de una forma dominante negativa de Rab11, o mediante el
bloqueo de la fusión de membranas obstaculizada ampliación columna vertebral inducida por LTP. Esto
indica que el traslado de la ER es esencial para la inducción de LTP [77,78], en consonancia con la reciente
demostración de que los modelos matemáticos muestran que el posicionamiento del RES dentro de la
columna vertebral aumenta la posibilidad de que los receptores AMPA exocitado serán incorporados a la
post-sinapsis [79].
Además de las membranas de distribución y otras cargas, el RES también puede funcionar como centros de
señalización. El REs lleva quinasas y otros factores reguladores, tales como activadores de la nucleación de
la actina, y su posición dentro de la célula pueden mejorar localmente los procesos de señalización o la
polimerización de la actina. En los enterocitos, ER se cree que dicta la forma de las microvellosidades, y esto
está estrechamente relacionado con el posicionamiento de la miosina-V-dependiente de ER en el extremo
apical de la célula (Figura 1A). Los pacientes que sufren de enfermedad de inclusión de microvellosidades,
que se asocia con mutaciones en la miosina Vb, no pueden posicionar REs apicalmente, lo que resulta en la
atrofia de microvellosidades, mala absorción de nutrientes, y la aparición de inclusiones en las
microvellosidades cerca del núcleo, donde el REs Rab11 + están enriquecidas[80,81].
Lisosomas
Durante la autofagia, proteínas y orgánulos intracelulares están rodeados por una doble membrana,
distribuido a los lisosomas, y posteriormente degradados. La inducción de la autofagia está muy regulada.
En la presencia de nutrientes suficientes, ATP y oxígeno, el regulador maestro mTORC1 (target mamífero de
la rapamicina complejo 1) es reclutado a y activado en los lisosomas [82-84] donde inhibe la autofagia y
facilita la síntesis de proteínas y el crecimiento celular.
La activación inducida por nutrientes de mTORC1 recientemente se ha demostrado que se correlaciona con
la reubicación de los lisosomas de la zona perinuclear hacia la periferia de la célula. Sorprendentemente, la
localización periférica forzada de lisosomas inducida por la sobreexpresión de KIF2A, KIF1B-b, o el adaptador
ARL8(similar al factor de 8 ADP-ribosilación), una activación de mTORC1 acentuada sobre la recuperación de
nutrientes, que muestra que la respuesta de nutrientes es modulada por la posición de lisosomas [11].
Curiosamente, en líneas de células estriatales derivados de la huntingtina mutada (mHtt) knock-in en
ratones, modelos de la enfermedad de Huntington (HD), se observó una localización perinuclear grave de
los lisosomas y un aumento en la actividad mTORC1 en condiciones basales [19].
La remoción de acumulaciones de cobre tóxicos en hepatocitos se lleva a cabo por el ATP7B ATPasa y
transportador de cobre que bombea cobre desde el citosol en los lisosomas. A altas concentraciones de
cobre, ATP7B reposiciona desde el Golgi a los lisosomas, bombas de cobre, y recluta a dineína para inducir
la reubicación de los lisosomas hacia la superficie canalicular para una exocitosis lisosomal. Por lo tanto se
requiere la distribución de dineína impulsada ATP7B mediada de los lisosomas a la superficie canalicular para
la desintoxicación de cobre [85].
Además de afectar a la autofagia y el aclaramiento de cobre, el movimiento centrífugo de los lisosomas
también se ha demostrado que estimula la migración celular y la motilidad, tal vez debido al aumento de la
entrega de moléculas de adhesión, los esqueletos proteicos de señalización e hidrolasas ácidas vía exocitosis
lisosomal[86]. Por lo tanto, en nutrientes inducida por la activación mTORC1, la motilidad celular y la
propagación de células puede todo depender de la posición de los lisosomas.
La mayoría de sitios de contacto Inter-Orgánulo son compartimentos membranosos que llevan un conjunto
especializado de moléculas para llevar a cabo reacciones bioquímicas específicas. Sin embargo, el
intercambio de lípidos, metabolitos, y Ca2+ entre orgánulos se requiere a menudo y se puede lograr a través
de sitios de contacto por membrana (MCS) [35]. Por ejemplo, los contactos de ER el PM, las mitocondrias,
los endosomas, y el aparato de Golgi [87-93], mientras que los sitios de contacto entre las mitocondrias y las
mismas estructuras celulares también se han descrito [56], así como lisosoma-peroxisoma [94], Golgi-PM
[95] y las interacciones de Golgi-lisosoma [96].
Muchas especies de lípidos diferentes constituyen las membranas celulares, con cada orgánulo teniendo su
propia composición lipídica característica. La mayoría de los lípidos se hacen en el ER y pueden ser tratadas
a través de otros orgánulos o el transporte vesicular a través de proteínas de transporte de lípidos (LTP), que
a menudo están dirigidos a los MCSs y puede intercambiar una molécula lipídica a la vez. Por ejemplo, fosfa-
tidylserine (PS), fosfatidiletanolamina (PE) y fosfatidilcolina (PC) se intercambian entre el RE y las
mitocondrias en los SCM [35]. Además, estudios recientes demostraron que la proteína de unión oxysterol-
(OSBP) relacionados con las proteínas específicas (ORP) mediaban el intercambio de PS y fosfatidilinositol 4-
fosfato (PI4P) en los sitios de contacto ER-PM. Curiosamente, la reclutación artificial de ORP5 ER-unido a la
PM, pero no de una forma truncada y citosólica de ORP5, podría cambiar PS y PI4P niveles [97,98]. Estos
resultados muestran que se requieren para el intercambio de los SCM lípidos y la distribución de lípidos
correcta entre los orgánulos.
El ejemplo clásico de una respuesta de Ca2 + en el que se requieren absolutamente contactos estrechos de
orgánulos es acoplamiento excitación-contracción en las fibras musculares. El Ca2 + inicial desencadena una
afluencia de Ca2 + más pronunciada liberación de la SR, que conduce a la activación de la miosina y el
contracción muscular. Para restaurar los niveles de Ca2 + en el SR, el sensor luminal de calcio STIM1 (estroma
interacción molécula 1) se traslada a las uniones ER-PM (Figura 1C) donde se abre los canales de Ca2 + en el
PM, lo que permite al SR restaurar sus niveles de Ca+2 [99] . Una respuesta similar se ha informado de las
sinapsis neuronales excitatorias, donde la actividad sináptica induce la reubicación de STIM2 a las líneas de
unión de ER-PM (Figura 1B). La reubicación de STIM2 conduce entonces a la fosforilación de Glu-A1
(subunidad del receptor de AMPA) y la entrega de los receptores AMPA a la superficie, lo que resulta en el
fortalecimiento de la sinapsis[100].
Además de intercambiar materiales, se observaron sitios de constricción endosoma ER-marcado antes de la
fisión del endosoma, y para formar una barrera de difusión para la carga endosomal. Curiosamente, a la
sobreexpresión de RTN4 (reticulon 4) para alargar el ER, el número de fisiones endosomales se redujo
significativamente [101]. Del mismo modo, se muestran los sitios de contacto ER-mitocondrias colocalizan
con los sitios de las mitocondrias de fisión [102] y la formación de autofagosoma [103]. Estos resultados
indican que la posición y la dinámica de la ER controlan espacio temporalmente la fisión de los endosomas
y mitocondrias, así como la formación de autofagosomas. El papel exacto de sitios de contacto ER en estos
procesos no se conoce. El ER podría funcionar como una plataforma de andamio, y puede proporcionar
especies de lípidos-ER específica o suministro de Ca2 + para conducir los procesos dependientes de Ca2
+[101]. Además, la importancia de la fisión ER-mediada también ha sido difícil de alcanzar, pero estos
eventos podrían contribuir a todos los reordenamientos celulares y a la selección durante la mitosis, la
migración celular, o la polarización. Es importante destacar que, los contactos ER-mitocondrias alterados se
han asociado con la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y la esclerosis lateral amiotrófica
[104-106], lo que indica que los sitios de contacto orgánulo son importantes para el funcionamiento
adecuado de las células.
Herramientas emergentes para estudiar y manipular el Posicionamiento de Orgánulos.
Presentamos evidencia sobre la importancia del posicionamiento de orgánulos en muchos procesos
celulares basales. Sin embargo, una cantidad sustancial de esta evidencia se basa en la co-ocurrencia de
movimientos de orgánulos con el proceso de interés, y esto no prueba una relación causal. Otra evidencia
está basado en los efectos de la redistribución de orgánulos sobre la interrupción de la dinámica del
citoesqueleto o actividad de la proteína motora, pero estos tratamientos pueden tener muchos efectos
secundarios y, a menudo no son selectivos para los orgánulos de interés. Por lo tanto, para explorar mejor
las funciones de localización orgánulo específico, se deben usar herramientas más selectivas. Ahora vamos
a poner de relieve diferentes enfoques recientemente desarrollados que permita una perturbación más
controlada y selectiva del posicionamiento de orgánulos.
Manipulación de la morfología celular.
Para estudiar sistemáticamente la conexión precisa entre la localización y función de orgánulos, la
organización espacial de los orgánulos debe estar bien definido. Sin embargo, se observan fuertes diferencias
morfológicas entre las células en una población, causado por diferencias en la densidad celular local y la
posición de células dentro de un islote celular. La presencia y la distribución de célula-célula y la matriz
extracelular por contacto celular (ECM) influyen en la organización del citoesqueleto y en consecuencia el
orgánulo posicionamiento [107108]. Para estandarizar la organización celular espacial, las células
individuales se pueden sembrar en micropatrones de moléculas de adhesión celular en el que las
perturbaciones sutiles en la topología del orgánulo se pueden observar y cuantificar [107-109] (Figura 2D).
Por ejemplo, el eje de polaridad centrosoma-núcleo parecían diferir entre células sembradas en patrones de
fibronectina adhesiva geométricamente diferentes [107], lo que demuestra que la localización de los
contactos célula-ECM puede afectar el posicionamiento del orgánulo. Además de la estandarización, los
micropatrones también se podrían utilizar para estudiar cómo afectan las limitaciones geométricas en la
distribución del orgánulo [110].
Manipulación de la actividad, velocidad, o direccionalidad de la Proteína motor, utilizando la luz.
La sobreexpresión, knockdown, o la inhibición de las proteínas motoras ha sido ampliamente utilizada para
alterar el posicionamiento de orgánulo. Recientemente se han desarrollado enfoques que permiten ahora a
la activación del motor con precisión espacio-temporal utilizando la luz. Una estrategia es fotocontrolar la
hidrólisis de ATP mediante la incorporación de moléculas fotocrómicas en el dominio ATPasa de las proteínas
de motor, como se hizo para el control de la motilidad de la quinesina 5 y kinesin 1 in vitro [111112].
Alternativamente, el desenjaulamiento de los activadores de proteína de motor inducida por la luz se puede
utilizar para controlar procesividad de la proteína motor [113]. Además, un estudio reciente mostró que,
tras la exposición a la luz azul, la velocidad y la direccionalidad de los motores manipulados de la miosina VI
y kinesin 14 podrían manipularse in vitro [114]. Sin embargo, estas técnicas hasta ahora no han aplicado a
cambiar la posición de los orgánulos y, de manera similar a los métodos convencionales para alterar la
actividad motora, tales manipulaciones en la mayoría de los casos afectan el posicionamiento de múltiples
tipos de orgánulos.
Manipulación de orgánulos utilizando nanopartículas magnéticas (MNPS).
Las fuerzas magnéticas aplicadas de manera focal permiten la acumulación espacial de los MNPS dentro de
las células vivas. Las MNPs pueden acoplarse a casi cualquier proteína o dominio de unión a proteínas, lo
que permite la concentración local de una proteína o estructura de interés [115-117]. Por ejemplo, las
nanopartículas magnéticas conjugadas con RAN (proteína nuclear relacionada con Ras) -GTP [118] se podrían
utilizar para polimerizar artificialmente y localmente microtúbulos. Por otra parte, para estudiar el rol de la
señalización de endosomas en el brote de neuritas, las neuronas se cargaron con MNPs acoplados a
anticuerpos contraTrkB que fueron endocitados posteriormente en endosomas de señalización. La
aplicación de fuerzas magnéticas definidos podría jalar a los endosomas de señalización lejos del cono de
crecimiento, y esto resultaría en la detención del brote de axones [115]. Es importante destacar que el
transporte de otros orgánulos tales como mitocondrias y las vacuolas se mantuvo sin cambios (Figura 2E).
El transporte de vesículas MNP-dirigida puede ser controlado con mucha precisión; sin embargo, sólo los
compartimentos endocíticos son apropiados para cargar MNP mediada por ligando. Los métodos
alternativos pueden ofrecer MNPS más pequeñas en el citosol y potencialmente podrían dirigirse a otros
orgánulos para su posterior manipulación.
Acoplamiento Molecular de Motores o anclajes a orgánulos específicos.
La mayoría de las proteínas motoras del citoesqueleto asocian con las cargas a través de su dominio de cola,
a menudo mediada por moléculas adaptadoras específicas que median las interacciones específicas motor
de carga [2,3] Estas interacciones determinan las operaciones de carga y la descarga en el espacio y el
tiempo, y por lo tanto definen la distribución de la carga. Por lo tanto, uniendo físicamente un motor
seleccionado o molécula adaptadora a un orgánulo de interés puede inducir desplazamientos de orgánulos.
El rol de la mitocondria en la degeneración axonal fue estudiado en C. elegans mediante la expresión de un
constructo de fusión de longitud completa quinesina 1 y la proteína de la membrana mitocondrial externa
TOM7. Este acercamiento forzó a la mitocondria a desplazarse desde el cuerpo celular en el axón [119]. Sin
embargo, así como con la sobreexpresión de la proteína de motor, estas manipulaciones duran para toda la
vida de un organismo y no son adecuadas para lograr el control temporal sobre las reubicaciones de
orgánulos.
El reclutamiento de los motores moleculares a las cargas mediante heterodimerización inducido
químicamente sí permite la iniciación controlada de transporte de carga. En resumen, las señales de la
membrana de la orientación de orgánulos se pueden fusionar a FKBP (proteína de unión a FK506) que, tras
la adición del rapálogo, se puede reticular a proteínas motoras fusionados-FRB o adaptadores fusionados a
un FRB (dominio FKBP rapamicina de unión) [120-122 ] (Figura 2F). Mediante la contratación de diferentes
tipos de proteínas motoras, los orgánulos podrían verse obligados a moverse anterógrada, retrógrada, o
quedan inmovilizados [7121]. Debido a que la absorción de rapálogo tarda varios minutos, es difícil de
controlar con precisión el inicio de movimiento de carga. Un enlazador fotoenjaulado recientemente
desarrollado que conecta la dihidrofolato reductasa (DHFR) a la de Halo-tag fue utilizado recientemente para
acoplar al instante a proteínas motoras DHFR-marcadas a los orgánulos Halo-marcados tras la exposición a
la luz 385-405 nm [123]. Sin embargo, de manera similar a la heterodimerización rapálogo inducida, esta
interacción no se podría revertir [121124] y resultó en interacciones motor-carga persistentes [123].
El reclutamiento luz-controlada del motor sería ideal, ya que esta interacción podría ser reversible y no
requiere cofactores exógenos. La luz azul inducida por la interacción de un LOV2 (iluminación oxígeno de
detección de voltaje) de dominio con un dominio PDZ de ingeniería (PSD95 / discos grandes / zonula
occludens 1) [125], y la interacción entre criptocromo 2 y CIB1 (interactuando cryptochrome- hélice-bucle-
hélice 1) [126], recientemente han sido explotados para reclutar motores a orgánulos específicos con control
de espacio-temporal [127]. El uso de estos dos sistemas, la motilidad de peroxisomas, mitocondrias, y
endosomas de reciclaje podría ser iniciado o detenido [127]. La iluminación láser dirigido específicamente
podría depletar las zonas de peroxisomas o mitocondrias seleccionado, mientras que los endosomas de
reciclaje podrían ser forzados en espinas dendríticas específicas, o en distancias lejanas dirigidas o hacia los
conos de crecimiento axonal. Sorprendentemente, la adición de los endosomas de reciclaje estimuló los
brotes, revelando que la dinámica de crecimiento de conos son sensibles al posicionamiento del
endosoma[127]. El trabajo posterior extendió este enfoque optogenético a los lisosomas [128]. Diferentes
(optogenética) sistemas de hetero-dimerización difieren en la sensibilidad a la luz azul, la velocidad de
disociación, la compatibilidad con N-terminal en comparación con las fusiones C-terminales, y en su
oligomerización frente a las propiedades de homodimerización (que se resumen en la Tabla 1), y se pueden
utilizar para manipular el posicionamiento del orgánulo con diferentes dinámicas.
Observaciones finales.
En los últimos años se ha convertido cada vez más claro que muchos orgánulos tienen funciones que
dependen de un posicionamiento adecuado. Sin embargo, en muchos casos las funciones locales precisas y
las vías moleculares que subyacen a la localización han seguido siendo poco clara debido a la falta de
herramientas para perturbar la colocación de un orgánulo seleccionado sin efectos fuera de la meta. No
obstante, los nuevos enfoques que están surgiendo ahora que el uso de acoplamiento (sensible a la luz) de
las proteínas motoras o anclar factores de orgánulos seleccionados para controlar espacio-temporalmente
el posicionamiento del orgánulo. Estas herramientas serán valiosos en el tratamiento de muchas cuestiones
pendientes, por ejemplo dirigiéndoxse en cómo la Mitocondria estacionaria contribuye a la ramificación del
axón y a la función de la sinapsis, la forma en que los endosomas de reciclaje contribuyen a la polarización y
brote del axón, y cómo los lisosomas en la superficie estimulan la migración celular y la motilidad. Además,
la investigación futura podría descubrir más correlaciones entre distribuciones de orgánulos aberrantes y
condiciones patológicas (vea las preguntas pendientes).
La mayoría de los estudios de posicionamiento de orgánulos hasta el momento se han realizado en cultivos
de células simples en 2D, y la importancia de la localización orgánulo en un contexto multicelular puede ser
subestimada en este tipo de modelos. Por lo tanto, con el reposicionamiento orgánulo controlada en
modelos 3D o in vivo podría descubrir papeles (adicionales) de disposiciones espaciales adecuados en
procesos tales como la división celular asimétrica, mantenimiento de células madre, y la formación de tejido.
Por todas estas preguntas, será necesario un mayor desarrollo de los módulos de optogenética para
combinar el control de encendido y apagado de los orgánulos de transporte con imágenes multiespectrales
y sin la necesidad de compuestos exógenos. A pesar de estos desafíos, el trabajo futuro usando estas técnicas
interesantes, sin duda, iluminará las muchas funciones locales de orgánulos.

Cuestiones pendientes
¿Qué mecanismos controlan el posicionamiento de orgánulos?
¿Cómo las mitocondrias contribuyen a la ramificación del axón y a la función de la sinapsis?
¿Cómo los endosomas de reciclaje señalizan durante la polarización y brote del axón?
¿Cuál es el papel exacto de puestos de Golgi en la dendrita?
¿Cómo el transporte centrífuga de los lisosomas contribuyen a la migración celular y la motilidad?
¿Cómo el contacto con los sitios ER contribuyen a la fisión de los endosomas y las mitocondrias?
¿Cómo puede la manipulación óptica de la redistribución de organelas combinarse con imágenes multicolor?
Puede ser el posicionamiento de organelas controlada in vivo?