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1. ENZIMAS ................................ ................................ ................................ .......................... 3

1.1 Velocidad de una reacción ................................ ................................ ........................ 3
1.2 Las enzimas son altamente especificas................................ ................................ ...... 4
1.3 Mecanismo de acción enzimática................................ ................................ .............. 4
1.4 Vias metabolicas ................................ ................................ ................................ ....... 6
1.5 Catalisis Enzimatica ................................ ................................ ................................ ... 6
1.6 Efecto de la concentración de sustrato................................ ................................ ...... 7
1.7 Efecto de la concentración de la enzima................................ ................................ .... 8
1.8 Efecto de la temperatura y el pH................................ ................................ ............... 8
1.9 Clasificación de las enzimas................................ ................................ ....................... 8
1.10.1 Inhibidores competitivos................................ ................................ ........................ 9
1.10.2 Competidor reversible. ................................ ................................ .......................... 9
1.10.3 Competidor irreversible. ................................ ................................ ........................ 9
1.10.4 La inhibición no competitiva ................................ ................................ ................ 10
1.10.5 Reversible no competitivo................................ ................................ .................... 10
1.10.6 Irreversible no competitivo. ................................ ................................ ................. 11
1.11 Cofactores ................................ ................................ ................................ .................. 11
1.11.1 Coenzimas ................................ ................................ ................................ ........... 11
Mecanismo de acción de las coenzimas................................ ................................ .............. 12
2. Cinética Enzimática................................ ................................ ................................ ..........13
2.1. MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN ................................ ................................ 14
2.2 CÁLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA................................ ............................ 16
BIBLIOGRAFIA ................................ ................................ ................................ ......................... 17

1 ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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INTRODUCCION
Las enzimas funcionan como
catalizadores, que son sustancias que
facilitan (acelerar) reacciones sin llegar
a entrar en la reacción. Se utilizan una
y otra vez, y una sola molécula de
enzima puede mediar miles de
reacciones en un solo segundo. Incluso
reacciones simples, como la disolución
de dióxido de carbono en el agua no
tendría lugar en gran medida por sí
sola. Pero podemos hacer que se
disuelva en el agua en concentraciones
más altas a alta presión. Las bebidas
carbonatadas tienen CO2 a alta
presión. Al soltar la presión al retirar la
tapa, un montón de burbujas de CO2
se liberan. Pero en sistemas biológicos
la disolución de CO2 se lleva a cabo en
condiciones normales a una tasa más
de 10,6 veces mayor que la de las
reacciones no catalizadas. Esto es
posible gracias a una enzima llamada
anhidrasa carbónica, que interviene en
la reacción. Del mismo modo, todas las
reacciones en los sistemas biológicos
son mediados por una o más enzimas y
así las reacciones tienen lugar a
velocidades más altas.

i ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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V  a
Las enzimas son biocatalizadores que controlan casi todas las reacciones celulares. Un
catalizador es un compuesto que acelera una reacción química sin sufrir ningún cambio en la
calidad o cantidad. Las enzimas son proteínas globulares, cada uno con una estructura
específica (conformación nativa), función, distribución de las cargas eléctricas, y la geometría
de la superficie cuya especificidad depende de su estructura terciaria. La estructura terciaria
determina la forma tridimensional. Ellos son responsables del control de una sola reacción y
por tanto son responsables por el control del metabolismo. Hay alrededor de 700 enzimas en
una célula procariota típica y hay miles de enzimas en una célula eucariota.

Las enzimas funcionan como catalizadores, que son sustancias que facilitan (acelerar)
reacciones sin llegar a entrar en la reacción. Se utilizan una y otra vez, y una sola molécula de
enzima puede mediar miles de reacciones en un solo segundo. Incluso reacciones simples,
como la disolución de dióxido de carbono en el agua no tendría lugar en gran medida por sí
sola. Pero podemos hacer que se disuelva en el agua en concentraciones más altas a alta
presión. Las bebidas carbonatadas tienen CO2 a alta presión. Al soltar la presión al retirar la
tapa, un montón de burbujas de CO2 se liberan. Pero en sistemas biológicos la disolución de
CO2 se lleva a cabo en condiciones normales a una tasa más de 10,6 veces mayor que la de las
reacciones no catalizadas. Esto es posible gracias a una enzima llamada anhidrasa carbónica,
que interviene en la reacción. Del mismo modo, todas las reacciones en los sistemas biológicos
son mediados por una o más enzimas y así las reacciones tienen lugar a velocidades más altas.

Las enzimas operan en los reactivos, los cuales son conocidos como Y Y

Y, para luego
convertirlos en productos. La reacción puede requerir energía o puede liberar energía. La
enzima no se ve afectada por la reacción.

A + B + Enzima AB + Enzima

Enzima + sustrato Producto + Enzima

Las reacciones químicas dependen de la energía de los sustratos suficiente para causar que las
moléculas se mueven y por lo tanto chocan. Esto se logra generalmente con el calor.El calor
aumenta el movimiento de las moléculas y hace que la colisión sea más probable. El calor
necesario para lograr esto es a menudo inadecuado dentro de una celula. Las enzimas pueden
ser utilizadas en lugar de calor para aumentar la probabilidad de que los reactivos se chocan
en la posición correcta. Las enzimas juntan los reactivos y los mantiene en la posición correcta
con respecto a la otra. Las reacciones se producen entre los átomos e implican cambios en la
distribución de los electrones. Antes de entrar en detalles sobre el mecanismo de acción de la
enzima, vamos a discutir la velocidad de una reacción.

VVelocidaddeaeacció
La velocidad de reacción se define como la velocidad con la que ocurre una reacción. La
velocidad de una reacción se puede expresar de dos maneras. Se puede expresar en términos
del producto formado o el sustrato consumido. La tasa o velocidad de una reacción también
puede ser definida como la cantidad de producto formado por unidad de tiempo (por segundo
o por minuto) o la cantidad de sustrato consumido por minuto. La cantidad puede ser

ë ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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expresada en miligramos (mg) o microgramos (ug), y también se puede expresar en moles (M),
milimoles (mM), o micromoles (lM).

V
Velocidad de una reacción = cantidad de producto formado por minuto

En el caso de las reacciones mediadas por enzimas, la velocidad de reacción suele ser
representado como actividad de la enzima, que se relaciona con la cantidad de enzimas. La
cantidad de las enzimas se expresa en unidades. Es la unidad internacional (UI) para expresar
la cantidad de enzimas. Una unidad de las enzimas se define como la cantidad de enzimas
necesarias para convertir 1 lM de sustrato a producto o para producir un lM producto por
unidad de tiempo en condiciones fisiológicas (temperatura ambiente, presión normal, y el pH
fisiológico).

Vaseimassoaltameteespecificas

Las moléculas de la enzima, en comparación con las moléculas de sustrato, son muy grandes.
Las moléculas de sustratose unen a la moléculas de la enzima en ciertos sitios específicos en la
superficie de la molécula de la enzima, conocidos como uniones de sustrato o ͞sitios activos͟,
para formar el complejo enzima sustrato (complejo ES). El complejo ES finalmente termina en
el producto con el lanzamiento de la enzima libre e intacta. El sitio activo de la enzima es
responsable de las reacciones que conducen a la formación del producto. El sitio activo de la
molécula de la enzima es sólo una porción muy pequeña y es complementaria a la forma
molecular del sustrato. Esta es la razón principal de la especificidad de sustrato de una enzima.
Las reacciones químicas que normalmente se producen se deben a las colisiones moleculares
entre los reactivos o los sustratos, en las reacciones enzimáticas las moléculas de sustrato son
llevados en la proximidad de tenerlos en los sitios activos de la enzima. Así, la molécula
enzimática facilita la reacción entre los sustratos sin ninguna colisión entre ellos. La capacidad
de una molécula de la enzima para acelerar una reacción es en varios órdenes de magnitud
mayor de lo normal que los catalizadores inorgánicos.

Vecaismodeaccióeimática

ENERGIA DE ACTIVACION (Ea)

Las reacciones implican la realización y la ruptura de enlaces. Algunos enlaces deben ser
quebrado en el inicio de una reacción, y esto requiere de energía. No importa que tan
exergónica (reacciones que proceden a la liberación de energía) pueda ser la reacción global,
algo de energía debe ser añadida al principio para romper los enlaces necesarios y conseguir
que empieze la reacción (por ejemplo, el rasgado de papel, la chispa en el cilindro). Esta es la
energía de activación (Ea). La energía de activación puede ser definida como la energía
necesaria para que una molécula tome parte en una reacción. Esta energía es suministrada a
menudo en forma de calor, pero esto puede no ser práctico en una celula.

Todas las moléculas orgánicas contienen energía que puede ser liberado por la
descomposición de la molécula. Tal reacción sería fuertemente exergónica, y no espontánea,
porque la energía de activación debe ser suministrada para conseguir que empiece la reacción
u ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI
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de la energía de activación necesaria para poner en marcha la reacción de conversión del

sustrato(s) en su producto (s). Estos pasos se presentan de forma esquematica en la figura 5.6
para el caso de la enzima glicolitica fructuosa difosfato aldolasa

 Vfectodelacocetaciódesstato 
V
La concentración del sustrato es uno de los factores que afectan a la velocidad de una reacción
enzima-catalizador. La velocidad de una reacción catalizada por la enzima a diferentes
concentraciones de sustrato se puede medir, y los valores se pueden representar en un gráfico
con la concentración de sustrato sobre el eje X y su velocidad correspondiente en el eje Y. Se
puede observar en el gráfico que a medida que la concentración de sustrato aumenta hay un
correspondiente aumento en la velocidad de reacción. Sin embargo, más allá de una
concentración de sustrato, la velocidad se mantiene constante sin ningún tipo de aumento.
Esta velocidad máxima de una reacción enzima-catalizada en la saturación del sustrato se
llama la Vmax. Una reacción alcanza su Vmax cuando todos los sitios activos de las moléculas
de enzima están saturados con las moléculas de su sustrato de modo que la tasa de formación
de producto estará en su máximo. Hay una concentración de sustrato en el que la reacción
alcanza su Vmax. Del mismo modo, hay una concentración de sustrato en el que la velocidad
de la reacción es la mitad de la Vmax. Esta concentración de sustrato es una constante para
una enzima en particular y que es conocida como Km o constante de Michaelis-Menton . El
valor Km de una enzima es inversamente proporcional a la afinidad de la enzima a su sustrato.
Si el valor de Km de una enzima es baja indica su alta afinidad hacia el sustrato. La relación
entre la V, Km, Vmax, y la concentración de sustrato [S] se puede representar por una
ecuación, la ecuación de Michaelis-Menton 

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Ñ ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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Vfectodelacocetaciódelaeima 

El efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción es más o menos similar

a la de la concentración de sustrato. Bajo el exceso de concentración de sustrato, si aumenta la
concentración de la enzima se produce un aumento correspondiente en la velocidad de
reacción, pero sólo hasta un punto determinado. Después de este punto no hay aumento de la
velocidad de reacción que corresponde al aumento de la concentración de la enzima.

VfectodelatempeataelpH

Las enzimas siempre muestran la temperatura típica y óptimo de pH que son características de
esta enzima y apropiado para su función. La mayor parte de la enzima trabaja en el pH
fisiológico, que es de 7,5, a pesar de que su pH óptimo es diferente. las enzimas de mamíferos,
por ejemplo, siempre muestran temperaturas optimas de alrededor de 37 ° C mientras que las
de los peces de hielo alrededor de 0 ° C. La mayoría de las enzimas se desnaturalizan a 45 ° C o
menos, pero no los de los organismos termófilos.

Vlasificaciódelaseimas

Las enzimas se clasifican en seis grandes grupos o clases sobre la base de las reacciones que
catalizan. Se enumeran en la Tabla 5.3, junto con la reacción que catalizan.

è ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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  i


Inhibición de l enzim

Las enzimas pueden ser reguladas de varias maneras  por la temperatura y el pH como se
mencionó anteriormente, o por el control de la síntesis o de forma local (es decir, después de
su síntesis). Estamos interesados en este último aquí. Hay ciertos compuestos llamados
inhibidores de la enzima, que inactivan la enzima de forma permanente o temporal. Hay
muchos tipos de inhibidores. Algunos son perjudiciales (venenos) y algunos son importantes
mecanismos de regulación. Algunas inhibiciones son mecanismos de control deliberado, y
algunos son perjudiciales para el organismo. Las enzimas se han inactivado por alguna
molécula (un inhibidor) que cambia su forma o bloquea el sitio activo.


a iidoescompetitivos

Estas son moléculas que se unen de forma reversible o irreversible al sitio activo. Ellos
compiten con el sustrato para el espacio en el sitio activo. La mayor parte de origen natural
inhibidores competitivos son irreversibles.


i ompetidoevesile Estos competidores no son las moléculas de sustrato, pero
las moléculas similares a las moléculas de sustrato. Por lo tanto, compiten con el substrato
para ocupar el centro activo de la molécula enzimática. Si están en alta concentración, que
esencialmente puede inactivar la enzima. Estos son de escasa importancia en los sistemas
naturales. La competencia es reversible y el competidor puede ser abrumado por la alta
concentración de sustrato. Por ejemplo, el ácido fumárico es el inhibidor competitivo de la
enzima deshidrogenasa succínico. La estructura del ácido fumárico es similar a la del ácido
succínico, el sustrato real de la enzima.
V



 ompetido ievesile El competidor y el sustrato compiten por el sitio activo,
pero el competidor ocupa el sitio activo de forma permanente por lo tanto desactiva la

 ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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enzima. inhibición competitiva no clásica es la unión de la S en el sitio activo y previene la

unión del I en un sitio diferente. Lo contrario también es cierto. El monóxido de carbono es un
inhibidor irreversible de la competencia de la hemoglobina. El oxígeno es el sustrato.V
V


ai iicióocompetitiva

En la inhibición no competitiva el inhibidor y el sustrato no compiten por el espacio en el sitio

activo. El sustrato entra en el sitio activo, pero el inhibidor reacciona con otra parte de la
molécula enzimática. Puede ser reversible o irreversible. La inhibición reversible no
competitiva es un mecanismo importante de control metabólico.


 evesileocompetitivo. Este tipo de inhibición implica dos sitios de unión en la

molécula de la enzima  el sitio de costumbre activa y un sitio de reglamentación segundo
donde se une el inhibidor. El inhibidor y el sustrato no compiten por el mismo sitio. Si el sitio
de reglamentación está ocupado por el inhibidor de la continuación, la forma del sitio activo se
cambia para que las moléculas de sustrato no puede encajar y reaccionar. Este tipo de
inhibición, a menudo se llama control alostérico, es muy importante en la regulación de las
vías metabólicas en la célula.

V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
En el control alostérico de la molécula del producto final a menudo actúa como un inhibidor de
una de las enzimas en la vía, por lo general el primero.

Cuando las altas concentraciones del producto final se acumulan, algunas de ellas reacciona
con las enzimas por primera vez en su sitio de reglamentación y hacerlo inactivo. Esto se
traduce finalmente en una disminución en la concentración del producto. Cuando esto ocurre,
el inhibidor se retirará del sitio de reglamentación y la enzima se activa de nuevo. Este es un
ejemplo de retroalimentación negativa. Este es un tipo de reacción que veremos una y otra vez
en la biología, en todos los niveles de la célula a los ecosistemas. La retroalimentación negativa
impide que las reacciones fuera de control. El termostato de los aires acondicionados, hornos,

10 ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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incubadoras y es un mecanismo de retroalimentación negativa. Cuando la temperatura se

eleva por encima del punto de control del sistema de calefacción de la incubadora se apaga.


aevesileocompetitivo Estos inhibidores no compiten con el sustrato para el

espacio en el sitio activo en el sentido de que se unen irreversible y no hay por tanto ninguna
posibilidad de competencia. Se unen irreversible con alguna otra parte de la enzima (o al sitio
activo) y permanentemente desnaturalizar o inactivar la misma. Que permanentemente
alteran la conformación nativa de la proteína. Se incluyen los metales pesados, cianuro, gas
nervioso, y el arsénico.



ofactoes
Las proteínas se asocian a menudo con grupos de otras sustancias químicas conocidas como
cofactores o grupos prostéticos. Las enzimas no son una excepción. A menudo las moléculas,
átomos, iones o otros como las proteínas son necesarias para el funcionamiento de las
moléculas de enzima. Estos pueden ser una parte permanente de la molécula, como la
mayoría de los iones (Zn, Mg, Fe) o puede ser sólo temporalmente asociados a la proteína. Los
pequeños grupos , prostéticos orgánicos son a menudo llamados coenzimas. La mayoría de las
coenzimas son derivados de vitaminas.

Además algunas enzimas no proteícas también tienen grupos prosteticos o partes no

proteico. Ellos son 
Nucleoproteínas  tienen ácido nucleico como el grupo prostético
Glicoproteínas  tienen hidratos de carbono como el grupo prostético
Lipoproteínas  tienen lípidos como el grupo prostético




oeimas

Los coenzimas son cofactores orgánicos no proteicos, termoestables, que unidos a una
apoenzima constituyen la holoenzima o forma catalíticamente activa de la enzima. Tienen en
general baja masa molecular (al menos comparada con la apoenzima) y son claves en el
mecanismo de catálisis, por ejemplo, aceptando o donando electrones o grupos funcionales,
que transportan de un enzima a otro.

11 ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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A diferencia de las enzimas, las coenzimas se modifican y consumen durante la reacción

química; por ejemplo, el NAD+ se reduce a NADH cuando acepta dos electrones (y un protón) y
por tanto se agota; cuando el NADH libera sus electrones se recupera el NAD+, que de nuevo
puede actuar como coenzima.

ecaismodeacciódelascoeimas 
El mecanismo de acción básico de las coenzimas es el siguiente

ÿV La coenzima se une a un enzima,

ÿV La enzima capta su sustrato específico,
ÿV La enzima ataca a dicho sustrato, arrancándole algunos de sus átomos,
ÿV La enzima cede a la coenzima dichos átomos provenientes del sustrato,
ÿV La coenzima acepta dichos átomos y se desprende de la enzima.
ÿV La coenzima transporta dichos átomos y acaba cediéndolos, recuperando así su
capacidad para aceptar nuevos átomos.

Este último paso es esencial para no agotar la dotación de coenzimas de una célula ya que las
enzimas junto con las que actúa no pueden realizar la reacción química sin el concurso de su
coenzima.

Algunas coenzimas están fuerte y permanentemente unidas a su enzima, constituyendo en la

práctica un grupo prostético; tal es el caso del FMN a la enzima NADH deshidrogenasa o el FAD
a la succinato deshidrogenasa.

Cada coenzima está especializada en aceptar y transportar un tipo de átomos determinado;

unos aceptan hidrógenos, otros grupos acetilo, amino, etc. No obstante, las coenzimas no son
nada específicas respecto a las enzimas a las que se unen, de modo que una misma coenzima
puede unirse a un gran número de enzimas distintas y es por ello que el número de coenzimas
diferentes es relativamente bajo.

XincipleY cenzimY
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1i ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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iV iticaimática

La velocidad de una reacción mediada por la enzima o la actividad de la enzima está

estrechamente controlada por una serie de factores que incluyen el medio ambiente (medio
ambiente celular) factores como la temperatura y el pH. Los otros factores son las
concentraciones de sustrato y de enzima.

La velocidad de una reacción puede medirse monitoreando la formación del producto o por la
desaparición del sustrato. Una cantidad específica de enzimas se le permite interactuar con un
exceso de sustrato por un período específico de tiempo. El producto formado puede medirse
mediante la explotación de cualquiera de sus características físicas o propiedades químicas,
tales como el desarrollo del color, la absorbencia a una longitud de onda particular de la
radiactividad de la luz, etc Por ejemplo, si el producto que se forma es de color o se puede
desarrollar cualquier color con algún otro reactivo, la intensidad del color puede ser medido
por un espectrofotómetro de absorción. La reacción mediada por la enzima tiene que llevarse
a cabo bajo condiciones fisiológicas, proporcionando un buffer de pH adecuado y la
temperatura óptima por lo general entre 20 ° C y 37 º C. También es necesario establecer
cofactores y los iones de metal esencial para las enzimas específicas. Todos estos factores
fisiológicos tienen que ser mantenidas in vitro para mantener la proteína en su conformación
específica en tres dimensiones y estado activo. Cambios en algunos de estos parámetros, en
particular factores como la temperatura, el pH y fuerza iónica puede destruir la
conformación de la enzima o de la estructura tridimensional. Este cambio de conformación en
la estructura tridimensional de una enzima seguido por la pérdida de actividad se denomina
desnaturalización.

La ciné
ic enzimá
ic estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos
estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de
la especifidad del enzima. La velocidad de una reacción catalizada por un enzima puede
medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el
enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas
condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax). La velocidad
como ya hemos dicho se puede determinar bien midiendo la aparición de los productos o la
desaparición de los reactivos

Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de

desaparición del sustrato) en función del tiempo se obtiene
la llamada curva de avance de la reacción, o simplemente, la
cinética de la reacción. A medida que la reacción transcurre,

1ë ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

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la velocidad de acumulación del producto va disminuyendo porque se va consumiendo el

sustrato de la reacción (Figura de la derecha). Para evitar esta complicación se procede a medir
la velocidad inicial de la reacción (v0). La velocidad inicial de la reacción es igual a la pendiente
de la curva de avance a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de v0 se
realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda
considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento. Además, en
estas condiciones no es necesario considerar la reacción inversa, ya que la cantidad de
producto formada es tan pequeña que la reacción inversa apenas ocurre. De esta forma se
simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.

Para estudiar la cinética enzimática se mide el

efecto de la concentración inicial de sustrato sobre
la velocidad inicial de la reacción, manteniendo la
cantidad de enzima constante. Si representamos v0
frente a [S]0 obtenemos una gráfica como la de la
Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequeña, la
velocidad inicial es directamente proporcional a la
concentración de sustrato, y por tanto, la reacción
es de primer orden. A altas [S]0, el enzima se
encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad
ya no depende de [S]0. En este punto, la reacción
es de orden cero y la velocidad es máxima (Vmax).

i

a
a
aHa
 
Los estudios sistemáticos del efecto de la
concentración inical del sustrato sobre la actividad
enzimática comenzaron a realizarse a finales del siglo
XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo
enzima-sustrato como intermediario del proceso de
catálisis enzimática. En 1913, Leonor Michaelis (foto de
la izquierda) y Maud Menten (foto de la derecha) desarrollaron esta teoría y
propusieron una ecuación de velocidad que explica el comportamiento cinético de los
enzimas.

Para explicar la relación oservada entre la velocidad inicial (v0) y la concentración inicial de
sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimáticamente
ocurren en dY e
pY En la primera etapa Ye fm el cmplej enzimY Y

 y en la
segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la fmción del pd c
, liberando el
enzima libre

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinéticas individuales de cada proceso y
también reciben el nombre de cnY
n
eY micYcópicY de velcidd. Según esto, podemos
afirmar que

1u ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

 c

 

  


  i


ÿV V0V1V234V254V
ÿV V0V1V2354V
ÿV 6V0V16V2354V

Se puede distinguir entre enzim libe (E) y enzim nid l Y Y

 (ES), de forma que la
cncen
ción

l de enzim, [ET], (que es constante a lo largo de la reacción) es

[ET] = [E] + [ES]

Como [E] = [ET] - [ES], resulta que v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

Este modelo cinético adopta la hipó
eYiY del eY
d eY
cini, según la cual la
concentración del complejo enzima-sustrato es pequeña y constante a lo largo de la reacción
(Figura de la derecha). Por tanto, la velocidad de formación del complejo enzima-sustrato (v1)
es igual a la de su disociación (v2+ v3)

v1 = vi + vë
Además, como [ES] es constante, la velocidad de formación de los productos es constante

v = v3 = k3 [ES] = constante.

Como v1=v2+v3, podemos decir que

k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

Despejando [ES], queda que , siendo

, en donde la expresión (k2+k3)/k1 se ha sustituído por KM, o cnY
n
e de MicheliYMen
en.

Este enlace nos aporta una explicación sobre las razones que hacen de la K M un
parámetro cinético importante .

Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formación del producto es

Ü



v = v3 = k3 [ES] =
 


Para cualquier reacción enzimática, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos casos
extremos

ÂV À cncen
cineY de Y Y

 peq eñY ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los
términos entre paréntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva constante,
kobs, de forma que la expresión queda reducida a v = kobs [S], con lo cual la reacción es
un pceY ciné
ic de pime den.

ÂV À cncen
cineY de Y Y

 elevdY ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de

reacción es independiente de la concentración del sustrato, y por tanto, la reacción es
1º ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI
 c

 

  


  i


un pceY ciné
ic de den ce. Además, tanto k3 como [ET] son constantes, y nos
permite definir un nuevo parámetro, la velcidd máxim de l ección (Vmax) Vmax =
k3 [ET], que es la velocidad que se alcanzaría cuando todo el enzima disponible se
encuantra unido al sustrato.

Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación general de la velocidad, (la fórmula

recuadrada anteriormente), obtenemos l expeYión máY cncid de l ec ción de
MicheliYMen
en

Hay enzimas que no obedecen la ecuación de Michaelis-

Menten. Se dice que su cinética no es Michaeliana. Esto
ocurre con los enzimY lY
éicY, cuya gráfica v frente a [S]
no es una hipérbola, sino una sigmoide (Figura de la derecha).
En la ciné
ic Yigmide, pequeñas variaciones en la [S] en
una zona crítica (cercana a la KM) se traduce en grandes
variaciones en la velocidad de reacción.

ii 
 
V max
  a

La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-

Menten (v0 frente a [S]0) es una hipérbola (Figura de la
izquierda). La Vmax corresponde al valor máximo al que
tiende la curva experimental, y la KM corresponde a la
concentración de sustrato a la cual la velocidad de la
reacción es la mitad de la Vmax.

Para determinar gráficamente los valores de KM y Vmax

es más sencillo utilizar la epeYen
ción dble
ecípc (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una línea
recta. Esta representación doble recíproca recibe el
nombre de epeYen
ción de Lineweve 
(Figura de la derecha). Es una recta en la cual

ÿV La pendiente es KM/Vmax
ÿV La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
ÿV La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos experimentales se

puede calcular gráficamente, los valores de KM y Vmax
de un enzima para diversos sustratos.

1£ ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI

 c

 

  


  i


 a a a

BIOTECNOLOGIA Y INGENIERIA GENETICA AJ NAIR

BROCK BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS

MICHAEL T. MADIGAN
JHON M. MARTINKO
JACK PARKER
EDITORIAL  PEARSON PRENTICE HALL
10ma EDICION

http//www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#e

1Ñ ANTHONY MARCO ORTIZ HUANQUI