TALLER CATÁLISIS BIOLÓGICA

CINÉTICA ENZIMÁTICA

DANIELA CERÓN BARRETO

PROFESORA: LUZ B. PARDO

BIOQUÍMICA

GRUPO 2

FUNDACIÓN UNIVERSIDAD DE AMÉRICA

BOGOTÁ, D.C
DE MAYO DE 2017
 CINÉTICA ENZIMÁTICA

La cinética enzimática hace referencia al estudio de la velocidad de reacciones catalizadas por

enzimas. Esta velocidad de reacción depende de la concentración de moléculas del sustrato, la
temperatura, la presencia de inhibidores, pH del medio que afecta la conformación de la molécula
enzimática. Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo de la reacción
catalítica y de la especificidad de la enzima.

Las reacciones enzimáticas se caracterizan porque aunque se aumente la concentración de sustrato

la velocidad no aumenta linealmente, aparece un efecto de saturación. La saturación se debe a que
todos los centros activos están ocupados.

Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de desaparición del sustrato) en función del tiempo
se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o simplemente, la cinética de la reacción. A
medida que la reacción transcurre, la velocidad de acumulación del producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el sustrato de la reacción. Para evitar esta complicación se procede
a medir la velocidad inicial de la reacción (v0). La velocidad inicial de la reacción es igual a la
pendiente de la curva de avance a tiempo cero.

1. CURVA DE PROGRESO

Tiempo micro moles micro moles

segundos sustrato producto
0 100 0
5 90 10
10 81 19
15 72,9 27,1
20 65,6 34,4
25 59 41
30 53,1 46,9
35 47,8 52,2
40 43 57
45 38,7 61,3
60 34,9 65,1
Tabla 1. Resultados experimentales de una curva de progreso

Curva de progreso
120
Micro moles de producto

100 y = 2.06x - 12.36

R² = 1
80
60
40
20
0
-20 0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo (s)

Gráfica 1. Curva de progreso

 2. SISTEMAS DE LINEARIZACIÓN

A Vo 1/A 1/Vo A/Vo Vo/A

10 28,6 0,1000 0,0350 0,3497 2,8600
20 44,4 0,0500 0,0225 0,4505 2,2200
30 54,5 0,0333 0,0183 0,5505 1,8167
40 61,5 0,0250 0,0163 0,6504 1,5375
50 66,7 0,0200 0,0150 0,7496 1,3340
60 70,6 0,0167 0,0142 0,8499 1,1767
70 73,7 0,0143 0,0136 0,9498 1,0529
80 76,2 0,0125 0,0131 1,0499 0,9525
90 78,3 0,0111 0,0128 1,1494 0,8700
100 80 0,0100 0,0125 1,2500 0,8000
Tabla 2. Datos para linearizar la ecuación de Michaelis

2.1 Sistema de Henri (Michaelis)

Gráfica 2. Sistema de Henri (Michaelis)

2.2 Sistema de Lineweaver-BURK

Gráfica 3. Sistema de Lineweaver-Burk

2.3 Sistema de Hanes

Sistema de HANES
1.4000

1.2000

1.0000

0.8000
[A]/Vo

0.6000

0.4000

0.2000

0.0000
0 20 40 60 80 100 120
[A]

Gráfica 4. Sistema de Hanes

2.4 Sistema de Hofstee

Sistema de HOFSTEE
3.50000

3.00000

2.50000

2.00000
Vo

1.50000

1.00000

0.50000

0.00000
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Vo/[A]

Gráfica 5. Sistema de Hofstee

 2.5 Sistema de Eissenthal y Bowden

Sistema de EISENTHAL Y CORNISH-BOWDEN

200
180
160
140
120
100
Vo

80
60
40
20
0
-120 -100 -80 -60 -40 -20 -20 0 20 40 60
-[A]

Gráfica 6. Sistema de Eisenthal y Cornish-Bowden

3. INHIBIDORES

[A] Vo V10 V20 V30 1/Vo 1/V10 1/V20 1/V30 1/A

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1 100 66,7 50 40 0,01 0,0149925 0,02 0,025 1
2 133,3 88,9 66,7 53,3 0,00750188 0,01124859 0,0149925 0,01876173 0,5
3 150 100 75 60 0,00666667 0,01 0,01333333 0,01666667 0,33333333
4 160 106,7 80 64 0,00625 0,00937207 0,0125 0,015625 0,25
5 166,7 111,1 83,3 66,7 0,0059988 0,0090009 0,0120048 0,0149925 0,2
6 171,4 114,3 85,7 68,6 0,00583431 0,00874891 0,01166861 0,01457726 0,16666667
7 175 116,7 87,5 70 0,00571429 0,00856898 0,01142857 0,01428571 0,14285714
8 177,8 118,5 88,9 71,1 0,0056243 0,00843882 0,01124859 0,0140647 0,125
9 180 120 90 72 0,00555556 0,00833333 0,01111111 0,01388889 0,11111111
10 181,8 121,2 90,9 72,7 0,00550055 0,00825083 0,0110011 0,01375516 0,1
Tabla 3. Datos para el cálculo del tipo de inhibidor

0.03

0.025 y = 0.0125x + 0.0125

0.02 y = 0.01x + 0.01

1/Vo

0.015 y = 0.0075x + 0.0075

0.01 y = 0.005x + 0.005

0.005

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
1/A
Gráfica 6. Inhibidor no competitivo
 Constante de inhibición
0.014
0.012 y = 0.0003x + 0.005
0.01
Pendientes
0.008
0.006
0.004
0.002
0
-30 -20 -10 0 10 20 30 40
I

Gráfica 7. Constante de inhibición (Kii, Kis)

De acuerdo con los datos para calcular el tipo de inhibidor, la gráfica obtenida corresponde a un
inhibidor no competitivo, es decir, se une tanto a la enzima libre como al complejo enzima-sustrato.
Este tipo de inhibidor disminuye la velocidad máxima de la enzima, es decir, la unión del inhibidor
obstaculiza la catálisis, sin alterar la afinidad de la enzima por el sustrato. Por otra parte, las
constantes de inhibición: Kis, constante de inhibición que afecta la pendiente y Kii, constante de
inhibición que afecta la intersección para el inhibidor no competitivo es de 20

4. CONCLUSIÓN

El estudio de las enzimas permite explicar detenidamente los mecanismos catalíticos en los que
intervienen, asimismo saber el papel que cumplen en el metabolismo a nivel de la célula y por qué
factores se puede ver afectada la cinética de las mismas. De acuerdo a la ecuación de Michaelis y
Mente que propone la relación entre la velocidad máxima de una reacción catalizada
enzimáticamente, con la formación del complejo enzima-sustrato y la formación de producto, se logra
el estudio matemático de las enzimas con el fin de determinar los valores de Km (constante de
Michaelis) y velocidad máxima que son únicos para cada enzima.

5. BIBLIOGRAFÍA
 Cinética enzimática. Tomado de: http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm
 Cinética enzimática. Tomado de:
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/miembros/Web_Sofia/GRUPOS/Tema%207.pdf
 Inhibidores enzimáticos. Tomado de: http://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-6-
enzimas/inhibidores-enzimaticos.html