UNIVERSIDAD NACIONAL DE

LOJA
FACULTAD AGROPECUARIA Y DE RECURSOS
NATURALES RENOVABLES

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y

ZOOTECNIA

BIOTECNOLOGÍA
REPRODUCTIVA

DOCENTE:
Dr. Manuel Quezada Mg.Sc

ALUMNOS:
Tatiana Rivera
Tamara Rosales
Pamela Rugel
Cristina Ruiz
Osmar Sanmartín
Wilmer Sivisapa
Xiomara Tacuri

Loja – Ecuador
Octubre 2019 – Marzo 2020
 1. TEMA:

Práctica 1: Examen Andrológico

del Reproductor Bovino.

DOCENTE:
Dr. Hugo Viñán Mg.Sc
 2. INTRODUCCIÓN
El óptimo aprovechamiento de un toro como reproductor de un rodeo o en un centro de
Inseminación artificial, depende de sus funciones reproductoras y de la capacidad de éste
para producir semen de buena calidad.
El examen andrológico del semental se realiza con el propósito de detectar problemas
reproductivos, observar las cualidades físicas del eyaculado e identificar la cantidad de
anormalidades presentes; en el análisis del semen se valoran las características físicas,
motilidad y conteo del número de células espermáticas en cámara de Neubauer, luego se
realiza una tinción para determinar las anormalidades morfológicas presentes en dichas
células. Este examen le permite al ganadero y al centro de Inseminación artificial conocer
el estado reproductivo real de sus toros.
Es decir, el examen andrológico o de aptitud reproductiva (EAR) de un toro por la
importancia económica que reviste, constituye una parte integrante de la medicina
preventiva. La evaluación de la aptitud reproductiva de los toros (aptitud física, calidad
seminal, líbido y habilidad de servicio) es suficientemente confiable como para detectar
toros que posean una alta fertilidad potencial y aquellos que sean claramente subfértiles
o infértiles.
 3. OBJETIVOS
3.1.Objetivo General
Determinar el procedimiento que se realiza en el Examen Andrológico del Reproductor
Bovino.
3.2.Objetivo Especifico
 Identificar las formas de recolección de semen del bovino
 Realizar e Identificar la evaluación de las características macro y microscópicas del
semen bovino.
 Conocer la técnica de empajillado para la obtención de pajuelas en Bovinos.
 4. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA.
4.1.Recolección de semen
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales de campo:
 Vagina Artificial: Consta de las siguientes partes:
- Manga de látex
- Tubo rígido de látex
- Válvula del tubo rígido
- Cono colector
- Tubo colector
- Capuchón
 Electro-Eyaculador
Procedimiento
Vagina Artificial: Primeramente, se realiza el armado, se hace una doble camisa con la
manga de látex, éste hará una pared, el agua ingresa por la válvula del tubo rígido con
algo de presión de aire para que genere un estímulo, previo se coloca unas ligas en ambos
extremos para una mayor seguridad.
Colocamos el cono colector en un extremo y se asegura nuevamente con ayuda de unas
ligas, aquí es donde eyaculará el animal, finalmente se coloca el tubo colector con su
capuchón, el capuchón ayuda a prevenir shock de temperatura y controlar rayos del sol
que son espermicidas.
La temperatura adecuada para ésta vagina artificial oscila entre 40 °C a 42 °C, si varía
ésta temperatura no se estimulará el animal ya que en el caso de bovinos éste eyacula por
temperatura.
Colecta: La postura depende de la persona, puede colocarse en el lado derecho o
izquierdo, si se coloca en el lado derecho con la mano izquierda se direcciona el pene
hacia la entrada de la vagina; el toro inmediatamente ingresa, siente la temperatura y hace
el golpe de riñón, no se debe tener firme la vagina artificial por el riesgo de que pueda
caer el tubo colector por lo que ésta se debe correr junto con el golpe de riñón y finalmente
el semen caerá al tubo.
Electro-eyaculador: Se usa un ánodo el cual estará conectado a un regulador de voltaje
que provocará impulsos, esto ingresará por el recto del animal donde estimulará: próstata
y vesículas bulbo uretrales.
Éstos impulsos de electricidad estimulan las glándulas y harán que el animal eyacule, sin
embargo, aquí no realiza el golpe de riñón sino lo hará por goteo, normalmente ésta
técnica es usada en toros de lidia, demasiadamente bravos.
Una de sus desventajas es que generará una cantidad de orina en el eyaculado, por lo que
éste semen es contaminado.
4.2.Evaluación macroscópica del semen.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales de campo:
 Semen
Materiales de Laboratorio:
 Tubo de ensayo milimetrado
 Tira indicador de pH
Procedimiento
Volumen: Se observa directamente en un tubo graduado de 15ml aproximadamente, ya
sea plástico o de vidrio, teniendo en cuenta que un toro mayor de 2 años debe tener un
eyaculado de no menos de 4ml. El volumen puede variar de acuerdo a la raza siendo en
razas de leche de 6 a 12 ml y una concentración de 750 a 800 millones de espermatozoides
por ml y en razas de carne de 3 a 5 ml con una concentración de 1200 1500 millones de
espermatozoides.

pH: Se evalúa extrayendo una gota de semen del tubo y colocándola sobre una tira
indicadora de pH. Se considera un pH normal, entre 6.8 a 7. No introducir la tira dentro
del tubo para no alterar el semen con el reactivo de la misma. Si el pH es muy acido puede
estar relacionado a enfermedades reproductivas, cuando el pH es alcalino puede estar
ligado a la alimentación.
Color: se consideran normales los colores que van del blanco al amarillento, siendo
patológicos, los colores rosado, amarronado y verdoso.
Densidad: la densidad del semen varía desde un semen blanco acuoso, blanco lechoso,
blanco cremoso, hasta un cremoso, estando directamente relacionada con la
concentración.
 Cremosa Muy Buena >750 x 106 esp/mm3
 Lechosa Buena 400 a 750 x 106 esp/mm3
 Blanquecina Lechosa Regular 250 a 400 x 106 esp/mm3
 Traslúcida Mala <200 x 106 esp/mm3

M.M.Ma (Motilidad en Masa Macroscópica): se evalúa observando el tubo de

recolección y detectando la presencia o no de movimiento masal o de remolinos, también
denominadas ondas. El vigor de la muestra se califica en un rango de 1 a 5, siendo 1 muy
malo y óptimo (muy bueno) de 4 a 5.
4.3.Evaluación microscópica del semen.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales de campo:
 Semen
Materiales de Laboratorio:
 Pipeta
 Puntillas
 Porta y cubre objetos
 Tubo de pedal de 2ml
 Vaselina
 Microscopio
 Solución formolada 5%
 5 ul Tinción Eosina
 5 ul Tinción Nigrosina
 Cámara de Neubauer
Procedimiento
Motilidad: existen 3 tipos de Motilidad:
 Motilidad en masa o Masal: Movimiento en ondas. Se lo califica en un rango de
1 a 5, si se observa en el tubo de ensayo una buena onda se lo califica con 4 o 5 y
si no tiene mucho movimiento se califica con 1 o 2.
 Motilidad Total: ≥ 80% semen fresco y ≥ semen descongelado. Movimientos de
todos los espermatozoides. Existen diferentes tipos de movimientos: hacia
adelante, en Zig-Zag (derecha-izquierda), sobre su propio eje y espermatozoides
inmóviles.
 Motilidad Progresiva: Un espermatozoide se mueve de un punto a otro en una
línea recta.

Concentración espermática: Número de espermatozoides que se encuentran por ml.

Hay diferentes formas de obtener la concertación. Normalmente se va a tener
concentraciones que van desde los 300 a 2000 millones de esp/ml
 Sistema de Análisis Computarizado CASA®: es un Software de análisis seminal.
Este sistema cuenta con un microscopio de contraste de fases, en el cual consiste que
el lente del microscopio va a tomar un video y una fotografía, en la cual se va a tener
 una solución 1:40. Lo que va hacer es grabar los movimientos de cada uno de los
espermatozoides, la velocidad, si se mueve hacia la izquierda, derecha, hacia adelante,
hacia atrás o si no se mueve, vamos a determinar esta información en
aproximadamente 3 a 4 segundos. Vamos a obtener concentración, motilidad total,
progresiva, vigor, número de espermatozoides vivos y muertos.
Los espermatozoides que se muevan hacia adelante van a tomar una coloración verde,
los espermatozoides que no tengan un movimiento progresivo hacia adelante, hacía
los lados o en su propio terreno van a tener una coloración anaranjado y los
espermatozoides que no se muevan se van poner de color rojo.

 Espectrofotómetro: es una cajita que tiene un láser, que se realiza una dilución y este
láser pasa sobre la cápsula y cuenta la cantidad de espermatozoides que esta disueltos
en la solución y en cuestión de 10 segundos da un promedio de la cantidad aproximado
de espermatozoides que pueda tener.

 Hemocitómetro ó Cámara de Neubauer: Se la ocupa para el conteo de glóbulos

rojos y blancos, la zona periférica y la zona central para hacer el conteo de los
espermatozoides. En la zona central encontramos 25 cuadros grandecitos y dentro de
cada cuadro grande encontramos 16 pequeños. Se va a contabilizar los
espermatozoides que hay por cuadrado, contando 4 cuadrado pequeños y se saca el
promedio, mediante una fórmula.
 Vamos hacer una solución 1 en 200. Colocar 2000 ul (2 ml) de solución formolada al
5% o solución fisiológica y 10 ul de semen puro en un tubo de Pedal de 2 ml y se
homogeniza. Como el semen se encuentra puro en baño maría y dejamos pasar el
tiempo, la viabilidad del semen va a ir bajando paulatinamente porque el pH se va a
modificar, ya que va haber espermatozoides muertos y eso va a provocar oxidación
del contenido, para evitar eso es realizar una mezcla 1 en 1, si tenemos 10 ml semen
colocamos 10 ml de dilutor para tener una solución Buffer.
Luego preparamos la cámara de Neubauer, en las barras laterales fijamos el cubre
objetos con vaselina, luego con ayuda de una pipeta tomamos de la solución 1 en 200,
10 ul y la colocamos en los surcos de la cámara. Finalmente llevamos al microscopio
para su observación con el lente de 40x,
Para su contabilización utilizamos la siguiente fórmula:
#𝑬 = 5𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 × 200𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 × 10 𝑎𝑙𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐á𝑚𝑎𝑟𝑎 = 𝑚𝑚3
𝑚𝑚3 × 1000 = 𝑒𝑠𝑝/𝑚𝑙

Vitalidad: Para evaluar la vitalidad del semen se necesitó de dos sustancias Tinción
Eosina y Nigrosina, las tinciones y el semen deben mantenerse para su uso en las
evaluaciones a 30°C (baño maría) para evitar el shock térmico.
Primero se procedió a colocar en una placa 5ul de Eosina, después 5ul de Nigrosina y por
ultimo 10ul de semen, después se 10 a 15 segundos se procedió a mezclar la Eosina con
el semen, dejamos transcurrir de 10 a 15 segundos y mezclamos con la Nigrosina. Luego
dicha mezcla procedemos a realizar un frotis en forma vertical en una nueva placa y lo
cubrimos con un cubre-objetos y llevamos al microscopio a observar con el lente de 40x
Se realizara un conteo de 100 espermatozoides divididos en grupos de 10
espermatozoides en 10 lugares distintos de la muestra
Morfología: tenemos anormalidades de tipo Primario (Espermatogénesis), Secundario
(Cola Epidídimo) y Terciario (Manipulación) Primero se procedió a colocar en una placa
5ul de Eosina, después 5ul de Nigrosina y por ultimo 10ul de semen, después de 10 a 15
segundos se procedió a mezclar la Eosina con el semen, dejamos transcurrir de 10 a 15
segundos y mezclamos con la Nigrosina. Luego dicha mezcla procedemos a realizar un
frotis en forma vertical en una nueva placa y lo cubrimos con un cubre-objetos y llevamos
al microscopio a observar con el lente de 40x. Se realizara un conteo de 100
espermatozoides divididos en grupos de 10 espermatozoides en 10 lugares distintos de la
muestra y se procederá a observar y contar las anormalidades.
4.4.Procesamiento y Empajillado de semen.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales de campo:
 Semen
Materiales de Laboratorio:
 Dilutor crioprotector Tridalyl – Andromet
 Alcohol polivinílico
 Cristales de plásticos
 Pajuelas de 0.5
 Nitrógeno Liquido
 Jeringa de insulina
 Máquina envasadora
Procedimiento
Para poder procesar necesitamos de un dilutor más crioprotector, para disminuir los daños
producidos por la criopreservación, formación de cristales a nivel de su membrana que
no dañen la funcionalidad ni estructura del espermatozoide.
Partes de una Pajuela: La pajuela es un plástico delgado, consta de dos partes de
algodón y en el centro tiene alcohol polivinílico, sustancia que en contacto con cualquier
líquido se endurece. La muestra seminal solo llega hasta el alcohol polivinílico.
Para sellar contamos con algunas opciones:
 Alcohol polivinílico
 Cristales de látex o metálicos
 Selladores de plástico
Se realiza una mezcla de dilutor (AndroMed) más semen en una caja Petri.
Con la ayuda de una pipeta automática o también llamada cámara al vacío se absorbe las
pajuelas, en caso de no contar con este artefacto podríamos realizar una pipeta con la
ayuda de una jeringa de insulina y una punta, cortamos la punta por la mitad y la
colocamos en forma inversa en la jeringa y ya podemos usarla.
Luego de absorber el semen + dilutor, con la ayuda de una peineta se procede a sacar la
burbuja, una vez realizado esto continuamos con el sellado usando cualquiera de las
técnicas antes descritas.
Tomar en cuenta que se debe estar homogenizando la mezcla constantemente ya que los
espermatozoides se decantan y se van hacia el fondo.
 CONCLUSIONES
 Se aprendió todas la técnicas de colecta de semen bovino mediante la utilización de
una vagina artificial como se arma este instrumento y cuál es su mecanismo,
conociendo las precauciones que se deben tener y el mecanismo de otra técnica como
es la utilización de un electro eyaculador.
 Una de las pruebas más sencilla es la evaluación de la densidad seminal que se la
determina mediante la observación de color del semen que va desde blando lechoso,
blanco cremoso (mayor concentración) y blanco acuoso (menor concentración), el pH
se determina mediante un pH metro o un papel indicador. Este debe estar 6.8-7, si el
pH está en 6 significa que existe una enfermedad y si esta mayor de 7 hay problemas
con la alimentación
 La concentración espermática es una de las pruebas de análisis seminal más
importante. La concentración puede calcularse por varios métodos a partir de una
muestra de semen. Entre estos métodos destaca la espectrofotometría, colorimetría,
citometría de flujo y uso de cámara de recuento celular como la Neubauer. El método
más extendido es la utilización de la cámara de recuento celular. Este análisis se lleva
a cabo mediante el conteo en microscopio óptico con la utilización de un cámara de
Neubauer cuya fórmula es # de espermatozoide *5c*2000*10AC=mm3 *1000
conc/ml.
 La motilidad es uno de los parámetros más importantes del análisis seminal. Los
espermatozoides pueden presentar 2 tipos de movimientos: Movimiento de rotación
(alrededor de su eje), Movimiento progresivo (desplazamiento de la célula hacia
adelante. Dentro de la motilidad total un caso especial hace referencia a la
denominada “motilidad masal” movimientos en ondas MB-B-R-M. La motilidad total
debe ser ≥ a 80% en semen fresco y ≥ a 60% en semen congelado y la motilidad
progresiva debe ser >= a 70% por ello la motilidad es esencial debido a que a mayor
motilidad hay más probabilidades que los espermatozoide lleguen al ovulo y lo
fecunde.
 Para determinar las anormalidades morfológicas se realiza un conteo de 100 células
es satisfactorio cuando no existen problemas mayores. Se exige un 80-90% de células
normales si existe un mayor número se debe descartar al reproductor. La mayor tasa
de anormalidades se presenta en reproductores jóvenes con 25% y en los mayores de
2 años debe ser < 10-11% y la vitalidad espermática es importante mediante la cual
 se analiza el % de espermatozoides viables es decir que están vivos mediante la
coloración que los espermatozoides presentan al momento de la tinción si están de
color rojo significa que están muertos por ello la motilidad debe ser menor o igual a
la vitalidad.
 La técnica de empajillado es fundamental mediante la cual que realiza la división de
la colecta espermática en numerosas pajuelas ya sean de 0.25 o de 0.50 las cuales
tienen una concentración de 30 millones mediante la ayuda de dos dilutores ya sea
Andromet o Tridalyl, para sellar se lo puede realizar mediante la utilización de alcohol
polivinílico o selladores de plástico.