‘

Atividade 2
Para essa atividade utilize o artigo em anexo​:

CALEFEE, R. B. T. et al. Clonagem de genes: métodos e aplicações. Revista

Uningá, v. 47, p. 73-77, 2016.

Responda:

1 - O que são os sítios MSC encontrados em alguns plasmídeos?

RESPOSTA​: São múltiplos sítios de reconhecimento de enzimas de restrição, que

permitem que o plasmídeo nessa região, seja clivado por endonuclease, e
consequentemente seja adicionado fragmentos de DNA, por meio dos MSC é
possível obter ainda o chamado plasmídeo de expressão que permite a expressão
de um gene de relevância para uma célula hospedeira.

2 - Explique uma vantagem do uso de vetores baseados em vírus em relação a

plasmídeos.

RESPOSTA: ​Os vetores baseados em vírus apresenta a vantagem da eficiência,

quando comparado ao plasmídeo para clonagem de fragmentos maiores. Isso ocorre
porque os fagos (vírus que contaminam bactérias), podem ser empacotados in vitro
o que proporciona 100% de eficácia na infecção da célula hospedeira, essa
característica, possibilita a integração do inserto de DNA em uma célula hospedeira
final, ou multiplicação em uma célula bacteriana, via ciclo lítico.

3 - Descreva dois métodos de transformação genética de bactérias.

RESPOSTA: ​A transformação bacteriana é realizada pela absorção de fragmentos

de DNA exógenos presentes no ambiente circundante podendo ser utilizado dois
métodos distintos.

A) ELETROPORAÇÃO: Neste método, é introduzido DNA em uma célula

eucariótica de forma viral, por meio de corrente elétrica, a partir, da formação de
poros localizados na membrana da célula.
‘

B) TRANSFECÇÃO: ​Ao contrário da eletroporação, neste método a introdução do

DNA na célula eucariótica, acontece, utilizando-se métodos químicos do tipo lipídico
ou físico, onde ocorre a neutralização das moléculas carregadas negativamente,
facilitando a sua introdução em membranas negativas da célula. Substâncias
químicas, como fosfato de cálcio, revestem a molécula de DNA neutralizando a
carga ou criando uma carga positiva, o que torna simplificado a transfecção do DNA.

4 - Cite três kits de clonagem gênica.

RESPOSTA:

1- ADVANTAGE PCR CLONING Kit: ​Este kit, tem como principal objetivo a união
de fragmentos de DNA que têm 15 pb homólogos nas suas extremidades lineares,
tornando o processo rápido e preciso. Um uso típico para esta tecnologia de PCR
seria para clonar produtos em vetores, sem a utilização de enzimas de restrição,
ligase, ou fosfatase.

2- CLONEJET PCR CLONING KIT: ​Este kit, é um sistema avançado para uma alta
eficiência de clonagem de produtos de PCR gerados por polimerases de DNA
termoestáveis ou qualquer outro fragmento de DNA.

3- INSTACLONE PCR CLONING KIT