DSC

Differential Scanning Calorimetry-calorimetría de barrido diferencia

La calorimetría de barrido diferencial (DSC) es una técnica que se usa para caracterizar la
estabilidad de una proteína u otra biomolécula directamente en su forma nativa. Lo hace
mediante la medición del cambio de calor asociado con la desnaturalización térmica de la
molécula cuando se calienta a un ritmo constante.
Principio de medición
Una biomolécula en solución está en equilibrio entre sus conformaciones nativa (plegada) y
desnaturalizada (desplegada). Cuanto mayor es el punto medio de transición térmica (Tm),
más estable es la molécula. La DSC mide la entalpía (∆H) de despliegue que resulta de la
desnaturalización inducida por calor. También se utiliza para determinar el cambio en la
capacidad de calor (ΔCp) de la desnaturalización. La DSC puede dilucidar los factores que
contribuyen al plegado y estabilidad de las biomoléculas nativas. Estos factores incluyen
interacciones hidrofóbicas, enlaces de hidrógeno, entropía de conformación y ambiente
físico.

Los datos precisos y de alta calidad obtenidos a partir de DSC proporcionan información
vital sobre la estabilidad de proteínas en el desarrollo de procesos y en la formulación de
posibles candidatos terapéuticos.
Las macromoléculas y conjuntos macromoleculares (>5000 daltons) como proteínas, ácidos
nucleicos y lípidos pueden formar estructuras bien definidas que se someten a cambios de
conformación térmicamente inducidos. Estos Re-arreglos estructurales dan lugar a la
absorción de calor causada por la redistribución de enlaces no covalentes. Los calorímetros
de barrido diferencial miden esta absorción de calor.

Cómo funciona la DSC

El núcleo térmico de un sistema DSC se compone de dos celdas, una de referencia y otra
de muestra. El dispositivo está diseñado para mantener las dos celdas a la misma
temperatura a medida que se calientan.
Realización de una medición
Para realizar una medición DSC, la celda de referencia se llena primero con solución
reguladora y la celda de muestra con solución de muestra. Luego se calientan con un
incremento de barrido constante. La absorción de calor que se produce cuando una proteína
se despliega provoca una diferencia de temperatura (ΔT) entre las celdas, lo que da como
resultado un gradiente térmico a lo largo de las unidades de Peltier. Esto establece un
voltaje, que se convierte en potencia y se utiliza para controlar la unidad de Peltier para
devolver el ΔT (diferencial de temperatura) a 0 °C. Alternativamente, se puede permitir que
las celdas alcancen el equilibrio térmico pasivamente a través de la conducción.

Generación y análisis de datos

La entalpía de despliegue de proteínas es el área bajo el pico de DSC normalizado en
función de la concentración, y sus unidades son calorías (o joules) por mol. En ciertos casos,
se pueden ajustar modelos termodinámicos a los datos para obtener la energía libre de Gibb
(ΔHcal), la entalpia de van't Hoff (ΔHvH), la entropía (ΔS) y el cambio en la capacidad de
calor (ΔCp) asociado con la transición.
DSC se utiliza ampliamente en las áreas de descubrimiento y desarrollo de medicamentos.
Las aplicaciones clave incluyen:

• Caracterización y selección de las proteínas más estables o los posibles candidatos

para el desarrollo de productos bioterapéuticos
• Estudios de interacción de ligandos
• Optimización rápida de las condiciones de purificación y fabricación
• Determinación fácil y rápida de las condiciones óptimas para formulaciones de
líquidos
• Ensayo rápido para indicar la estabilidad de proteínas objetivo para pruebas