Microtuberizacion In Vitro de cuatro variedades de papa.

(Solanum tuberosum L)

Microtuberization In Vitro of four potato varieties. (Solanum tuberosum L)

Amanda Jaramillo Santos1, María de J. Rivera González2, Hector Montaño

Rodríguez3, José Jaime Lozano García4

Resumen

El presente trabajo se realizó con la finalidad de inducir microtuberización en

cuatro variedades de papa, sin embargo solamente se trabajó con la variedad Alpha
debido a que no se logró la cantidad de plántulas necesarias de las tres variedades
restantes. Se utilizaron como inductores de tuberización hormonas como BAP, CCC y
ABA y dos fotoperíodos uno de días cortos (8 horas/luz) y otro de oscuridad continua .
El mejor tratamiento inductor de tuberización, fue el tratamiento 5 que contenía 5 mg/lt
de BAP + 500 mg/lt de CCC y que permaneció en oscuridad después de las cuatro
semanas de iniciación con cinco microtubérculos promedio por frasco, en cuanto al
número de ojos o yemas presentes en los microtubérculos el mejor tratamiento fue el
tratamiento 2 (8 horas/luz + BAP 5 mg/lt + CCC 500 mg/lt) con un promedio de 7 yemas
por tubérculo seguido de los tratamientos 4 (oscuridad continua sin hormonas),
tratamiento 5 (BAP 5 mg/lt + CCC 500 mg/lt + oscuridad continua), y finalmente el
tratamiento 6 (ABA 0.2 mg/lt + oscuridad permanente).
Palabras clave: microtuberización, fotoperido, hormonas, yemas.

Abstract

The present work was made with the idea to induce the microtuberization in four
potato varieties, however only Alpha variety was used due to a low quantity of plants to
the test of the other three varietes. BAP,CCC and ABA were hormones who were used
like a tuberization inductors, also two photoperiods were used “short days - 8
hours/light” and “permanent darkness”. The best treatment like a tuberization inductor
was the number 5 (5 mg/l of BAP + 500 mg/l of CCC + permanent darkness). Talking of
present of buds in the microtubers the best treatment was the number 2 (8 hours/light
+ BAP 5 mg/lt + CCC 500 mg/lt ) with an average of 7 buds per tuber following of
treatments 4 (permanent darkness without hormones), treatment 5 (BAP 5 mg/lt + CCC
500 mg/lt + permanent darkness), and finally the treatment 6 (ABA 0.2 mg/lt +
permanent darkness).
Key words: microtuberization, fotoperiod, hormones, buds.

1,2, 3 y 4 Profesores-Investigadores Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro-Unidad Laguna, Periférico y Carretera a Santa
Fe, Torreón Coahuila.

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Introducción

La papa es el tercer cultivo más importante a nivel mundial. En México la papa

es la segunda hortaliza más consumida después del jitomate. particularmente en
Coahuila y Nuevo León se siembran aproximadamente 6, 500 hectáreas, con un
rendimiento medio comercial de 30 ton/ha. Los programas de producción de tubérculos
para semilla de forma convencional presentan una baja tasa de multiplicación y son
altamente susceptibles a las enfermedades, la cual se puede transferir a la progenie a
través de los tubérculos. El cultivo de tejidos in vitro es una herramienta muy útil en la
obtención de material sano en un corto período de tiempo y en un espacio pequeño. La
utilización de microtubérculos como semilla tiene grandes ventajas, existen
antecedentes de que los microtubérculos aguantan condiciones adversas de plantación
y producen plantas más vigorosas en las generaciones sucesivas, también existen
reportes de que es posible obtener mayor número de minitubérculos de plantas
procedentes de microtubérculos que de plántulas cultivadas in vitro. Con el
establecimiento de un sistema de producción de microtubérculos in vitro, se puede
iniciar un proyecto de producción de semilla básica que les permita a los productores de
papa de nuestro estado tener mayor disposición de esta, asegurando con ello un buen
rendimiento de este cultivo.

Metodología Experimental

El experimento se realizó durante el mes de junio del 2003 en el laboratorio de

Biotecnología del Departamento de Biología de la U.A.A.A.N.-U.L. El experimento
constó de 6 tratamientos con 5 repeticiones, el diseño utilizado fue un completamente al
azar.
Inicialmente se utilizaron brotes procedentes de minitubérculos los cuales se
desinfestaron con hipoclorito de sodio al 5% durante 2 minutos, pasando
posteriormente por etanol al 70% durante dos minutos. Se lavaron tres veces en agua
destilada estéril. Posteriormente se pasaron a la campana de flujo laminar y se
sembraron en frascos gerber que contenían medio de Murashige &Skooge previamente
esterilizado a 21 libras de presión durante 15 minutos, complementado con 3.0% de
sacarosa y 0.8 % de agar, ajustando el pH a 5.7 . después de esto los frasco se
colocaron en un cuarto de crecimiento con un fotoperíodo de 16 horas/luz a una
temperatura de 23 ºC. Una vez que las plántulas alcanzaron una altura de
aproximadamente 5 cm. Se subcultivaron utilizando segmentos nodales como
explantes hasta obtener el número adecuado de plántulas para establecer el
experimento.

Establecimiento del experimento.- Se seccionaron nudos individuales de las

plántulas previamente cultivadas in vitro, se les cortaron las hojas y se colocaron en
frascos gerber con un medio inductorio que contenía 30 ml de medio de Murashige &
Skooge al que se le ajustó el pH a 5.7 y se complemento con sacarosa al 8% y agar a
razón del 0.8 % , previamente esterilizado, en donde permanecieron en un cuarto de
crecimiento durante 28 días a 23ºC con un fotoperíodo de días largos (16 horas/luz).
Después de este tiempo se procedió a definir los tratamientos de la manera siguiente:
T1 Fotoperiodo de 8 horas luz sin hormonas, T2 Fotoperíodo de 8 horas luz adicionado

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con 5 ml de una solución que contenía 5 mg/lt de BAP + cloruro de clorocolina (CCC) a
razón de 500 mg/ lt, T3 Fotoperíodo de 8 horas/luz + ácido abscicico (ABA) ,T4
oscuridad permanente sin hormonas, T5 oscuridad permanente adicionado con 5 mg/lt
de BAP + cloruro de clorocolina (CCC) y finalmente T6 oscuridad permanente + ácido
abscicico. La inoculación de las soluciones con hormonas se realizó utilizando
membranas de filtración para jeringas marca Whatman con un diámetro de poro de 0.2
micras. Todos y cada uno de los tratamientos permanecieron en un cuarto de
crecimiento a una temperatura de 23 ºC durante 77 días. Las variables a evaluar fueron
tamaño de la plántula, número de entrenudos, numero de brotes, peso fresco de planta,
número de microtubérculos formados por frasco, diámetro de los microtubérculos, peso
fresco de los microtubérculos, y número de yemas por microtubérculo. Un vez que
transcurrió el tiempo establecido para inducir microtuberización, se extrajeron las
plantas de cada uno de los tratamientos se les lavaron las raíces y se colocaron en
papel absorbente procediendo a tomar la longitud total de planta, posteriormente, con
extremo cuidado se le cortaron los tubérculos formados pesándose las plantas con
raíces y microtubérculos cada uno por separado y registrando el peso en la tabla
correspondiente utilizando una balanza analítica para tal efecto con una presición de
0.00001 g, Después de pesados los microtubérculos se colocaron en una caja de Petri
con un circulo de papel milimétrico en su base y se determinó el tamaño de los mismos.

Las variables evaluadas fueron. Altura de planta, número de nudos, número de

brotes, peso fresco de la planta, número de microtubérculos, tamaño de
microtubérculos, peso fresco de microtubérculos y número de yemas por
microtubérculos.

Resultados Y Discusión

Para la variable altura de planta los mejores tratamientos fueron el tratamiento 1 (8

horas/luz sin hormonas) y el tratamiento 3 (8 horas luz + BAP) siendo aquellos que
permanecieron con un fotoperiodo de días largo inicialmente y posteriormente pasaron
a un fotoperiódo de días corto de 8 horas/luz, alcanzando una altura promedio por
repetición de 5 cm. Correspondiendo también a estos tratamientos el mayor número de
nudos por planta, presentando un promedio de 7 entrenudos por planta; con respecto al
número de brotes los mejores tratamientos fueron el 2 ( ocho horas luz + BAP + CCC)
y el tratamiento 1 (ocho horas/luz sin hormonas) con un promedio de 2 brotes por
planta. El mejor tratamiento en cuanto a la inducción de microtuberización fuero los
tratamientos 5 (Oscuridad contínua + BAP + CCC) y el tratamiento 4 (oscuridad contínia
sin hormonas) con un promedio de 5 y 4 microtubérculos por repetición
respectivamente. Con respecto al peso fresco de las plantas el mejor tratamiento
corresponde al tratamiento 3 (ocho horas/luz + ABA) con 0.7 g por repetición en
contraste con el tratamiento 4 (oscuridad sin hormonas) con un peso promedio de 0.3 g
por repetición). El mejor tratamiento para peso fresco de tubérculos fue el tratamiento 2
(fotoperíodo de 8 horas/luz + BAP+ CCC). Con respecto al tamaño de tubérculos el
mejor tratamiento resultó ser el tratamiento 2 (ocho horas/luz + BAP + CCC) factor
directamente relacionado con peso del tubérculo. El tratamiento 2 (ocho horas/luz
también fue el que presentó los tubérculos con mayor número de yemas siendo en

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 promedio 7 seguido por los tratamientos 4, 5 y 6. Estos resultados están concentrados
en el cuadro 1.

Tratamiento Nº tuberculos Peso Tamaño de Nºde Altura planta Nº de nudos Nº de brotes Peso de
tubérculos tubérculos yemas (centímetros) planta
(gramos) (centimetros) (gramos)

1 0 0 0 0 4.7 7.5 1.2 0.47

2 3.8 0.07 0.28 7.3 4.6 6.8 1.2 0.51
3 0 0 0 0 4.9 7.2 0.84 0.76
4 4.6 0.06 0.16 5.6 3.8 5.8 0.38 0.30
5 5.2 0.04 0.21 4.8 3.8 5.7 0.50 0.33
6 3.0 0.04 0.14 4.7 3.6 5.7 0.40 0.38

Cuadro 1. Concentración de resultados de cada uno de los tratamientos para cada una de las
variables.

Tratamiento 1.- 8 horas luz, sin hormonas.

Tratamiento 2.- 8 horas luz + BAP + CCC.
Tratamiento 3.- 8 horas luz + ABA.
Tratamiento 4.- Oscuridad permanente sin hormonas.
Tratamiento 5.- Oscuridad permanente + BAP + CCC
Tratamiento 6.- Oscuridad permanente + ABA

Conclusiones

El análisis estadístico por comparación de medias permitió determinar que el

tratamiento 5 (fotoperiodo 2 + BAP+CCC) resultó ser el mejor inductor de tuberización
obteniéndose un promedio de 5 microtubérculos por repetición. Resulta interesante
considerar la cantidad de microtubérculos obtenidos en el tratamiento 4 ya que es
estadísticamente igual que el tratamiento 5 y tiene la ventaja de no requerir hormonas,
lo que podría reducir costos de producción. Con respecto a las demás variables el
mejor tratamiento fue el tratamiento 2 (8 horas/luz + BAP + CCC) con el cual se
obtuvieron los tubérculos más grandes y de mayor peso, así como las plantas de más
altura, mayor número de nudos y mayor biomasa, Es necesario continuar con esta
investigación a fin de trabajar con aquellas variedades de papa que mejor se adapten a
la región en cuanto a resistencia a diversos factores ambientales y biológicos, así como
el implementar otras metodologías que aumenten la producción de un mayor número
de microtubérculos y que no involucren inversiones cuantiosas.

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Literatura Citada

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Memorias del curso internacional sobre tecnología de producción de papa INIFAP-
PRECODEPA, Toluca, México. P.p. 1-5.

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