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Polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP): se refiere a

secuencias específicas de nucleótidos en el ADN que son reconocidas y


cortadas por las enzimas de restricción (también llamadas endonucleasas de
restricción) y que varían entre individuos. (VERGEL & GUAPULEMA, 2019)
El volumen de amplificado que se va a utilizar varía en función de la
intensidad de las bandas obtenidas en el revelado. En este caso, al ser las
bandas de gran intensidad se emplea un volumen de 2 μL. La enzima de
restricción que se emplea es la Hinf I. Cada enzima posee su propio buffer
de reacción con una composición determinada, a una concentración de 10x.
Además cada enzima viene con la temperatura óptima dada por el
fabricante, en este caso es de 37ºC.

El volumen final es de 10 μL, y se varía en función de la cantidad de


volumen de amplificado que se adicione modificando el volumen de H2O
libre de nucleasas para obtener ese volumen concreto. Se prepara una
mezcla de reacción añadiendo los siguientes reactivos en este orden:

- Agua libre de nucleasas 69 μL

- Buffer de la enzima: 10 μL

- Enzima de restricción: 1 μL

De este mix se toman 8 μL más 2 μL del volumen amplificado de M1 en un


tubo y se repite el mismo proceso para M2. Este proceso se realiza a
temperatura ambiente pero las enzimas de restricción deben ser
almacenadas a bajas temperaturas (congelador) antes de usarlas.
Se lleva al termociclador Swift (ESCO) y se realiza el RFLP a la temperatura óptima dada por el
fabricante de 37ºC. El tiempo de digestión es de 2:00-2:30 horas. (Burmeister, 2007).

1. RECOMENDAR EL DESARROLLO DE NUEVOS PRODUCTOS AGROINDUSTRIALES, EN BASE


A LOS PROCESOS IDENTIFICADOS.

 Se necesitan técnicas rápidas como método de extracción


PowerWater DNA isolation kit se obtiene una mayor calidad de las
bandas amplificadas de la levadura estudiada y en un mayor rango
de concentraciones, para la identificación de diferentes
microorganismos y esto se hace cada vez más necesario para que
los estudios ecológicos sean capaces de procesar grandes
cantidades de muestras. Idealmente, los métodos de extracción de
ADN deben ser simples, rápidos y eficientes.