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INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA NO 3

TEMA: Practica 3

INTEGRANTES:

1. Alquinga Fernandez Kevin Gerardo

2. Cumbal Cumbal Anthony Wlaldimir

3. Riera Suarez Estefanía Carolina

4. Realpe Lisintuña Alex Omar

5. Aguirre Guayasamín Matéo Nicolás

GRUPO NO 1

PARALELO: 2

FECHA DE REALIZACIÓN DEL LABORATORIO: 12/11/2019

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 19/11/2019


RESUMEN

En la práctica se reconoció las propiedades físico-químicas de las proteínas mediante

reacciones de coloración, las cuales se llevaron a cabo con determinadas soluciones

como albumina, aminoácido, glucosa, caseína y leche, mediante cinco reacciones. La

primera reacción de Biuret, la cual dará positiva para aminoácidos, presentando un color

violeta y azul. La segunda xantoproteica con la cual también se utilizó fenol tiroxina,

esta identifica proteínas con grupos aromáticos, presentando una coloración amarrillo

claro, naranja o incoloro. La tercera reacción de ninhidrina en donde también se utilizó

agua, esta reacciona con todos los aminoácidos presentando una coloración azul,

naranja o incolora. La cuarta reacción de precipitación realizada con CuS04, ácido

fosfotúnsgtico, (NH4)2S04, ETOH, ácido acético, reaccionando con la albumina y dando

una coagulación y ciertas coloraciones desde blanquecino a amarrillas. Y por último

coagulación de las proteínas por efecto de alta temperatura en la cual solo hubo un

cambio de color. Se observó y registro cada reacción para cada una de estas.

Palabras claves: Aminoácidos, Proteinas, Propiedades .


1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL


Realizar algunas reacciones coloridas específicas para la identificación de
los aminoácidos que constituyen a una proteína.

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS


 Determinar si diversas sustancias son o no proteínas y aminoácidos.
 Identificar las características presentes en aminoácidos y proteínas.
 Establecer la importancia de estas reacciones para distinguir las
proteínas.

2. MARCO TEÓRICO

Las proteínas son polímeros de alto peso molecular formadas por


cadenas lineales de aminoácidos. El nombre proteína proviene de la
palabra griegaπρώτα ("prota"), que significa "lo primero" o del dios
Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar.
Las proteínas desempeñan un papel fundamental en los seres vivos y
son las biomoléculas más versátiles y más diversas. Realizan una
enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:
estructural, reguladora, transportadora, defensiva, enzimática, contráctil,
etc.
Cada una de ellas posee un tamaño, forma y carga definida en un
sistema determinado. Existen una gran cantidad de pruebas permiten la
identificación o determinación cualitativa de las proteínas como tal, o de
sus monómeros constituyentes.
El reconocimiento de proteínas en clara de huevo se puede realizar por
medio de la coagulación de proteínas, precipitación de proteínas y
reacciones coloreadas.
La reacción de Biuret permite identificar la presencia de enlaces
peptídicos al reaccionar con en cobre alcalino presente en el reactivo,
dando complejos de color.Los aminoácidos aromáticos presentes en las
proteínas reaccionan con HNO3, dando nitroderivados coloreados. La
ninhidrina, un agente oxidante poderoso reacciona con los
aminoácidos, a un pH entre 4 y 8, para dar compuestos coloreados, es
una reacción muy sensible e ideal para identificar aminoácidos por
cromatogramas y para su determinación cuantitativa. Los compuestos
con radical hidroxibencenico, reaccionan con el Reactivo de Millón
formando compuestos rojos.
Existen muchos agentes precipitantes de las proteínas, entre los
principales se encuentran los solventes orgánicos, las sales de metales
pesados, los ácidos concentrados y las sales neutras. Los solventes
orgánicos probablemente causan precipitación, al bajar la constante
dieléctrica y aumentar la interacción proteína-proteína. Las sales de
metales pesados, cargadas positivamente, neutralizan la carga de las
proteínas, que a pH 7 y por encima de él están, usualmente, cargados
negativamente, haciéndolas precipitar. Ciertos compuestos ácidos
poseen una carga negativa grande, que neutraliza una proteína cargada
positivamente, formando una sal insoluble; los reactivos ácidos son más
efectivos a pH ácido, donde las proteínas tienen carga positiva.

3. RECURSOS UTILIZADOS

3.1 MATERIALES
Cantidad Apreciación
Descripción Por Por Rango (R) (A∓)
curso grupo

Gradilla 5 3 - -

Piceta con agua 1 1 (0-250) mL 50 mL


destilada
Pipeta aforada 5 1 (0-5) mL 5 mL

Pipeta aforada 5 1 (0-10) mL 10mL

Tubos de ensayo 100 20 (0-15) mL 2 mL

Varilla de vidrio 5 1 - -

Vaso de precipitación 5 2 (0-100) mL 100 mL

Vaso de precipitación 5 1 (0-250)mL 250mL

Probeta 15 1 (0-10)mL 2mL

Huevo de gallina/ 5 1 - -
estudiantes

3.2 EQUIPOS

CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Baño de maría 1 0

3.3 REACTIVOS
Nombre/ Cantidad Cantidad Concentración Fórmula química (estado
por grupo (M,N,%, etc.) de agregación)

D-Glucosa 4mL 1% C6H12O6(s)

Agua destilada(L) - - H2O(l)

Glucosa 4 mL 1% C6H12O6(ac)

Albumina 4mL 1% -

Caseína 4mL 1% -

Aminoácido 4mL -

Tirosina 4mL 1% C9H11NO3

Aminoácido X 4mL -

Fenol 4mL -

Sulfato de amonio 4mL 5% (NH4)2S04

Sulfato de cobre 4mL 5% CuS04

Etanol 4mL 95% C2H5OH

Ac. Fosfotunsgtico 4mL 5%

Ninhidrina 1.0 C9H6O4

4. PROCEDIMIENTO
I.-Reacciones de coloración de una proteína
a. Reacción de Biuret:
Utilizar 2,0 mL de las soluciones listadas en la tabla siguiente cada una
en un tubo de ensayo, agregar 2 mL de NaOH 10% y mezclar.
Posteriormente se agregan gota a gota 0,5 mL de CuSO41% y mezclar
de nuevo. Observar el resultado.
Nota: Preparación del reactivo de Biuret: (Opcional)
Pesar 3 gr. De CuSO4.5H2O, adicionarle 9 gr. De tartrato de sodio y
potasio y disolver en 500 ml de NaOH 0.2 M; Añadir 5 gr. De KI y
completar a 1000 ml con NaOH.
(NaOH 0.2 M: 8 gramos de NaOH en 1 litro de agua)
b. Reacción Xantoproteica:
A 2.0mLde las soluciones listadas en la tabla siguiente cada una en un
tubo de ensayo, se le agrega 1 mL de HNO3 concentrado. Calentar
cuidadosamente hasta ebullición. Dejar enfriar la solución y agregar con
precaución NaOH al 10% en exceso (por lo menos 3 mL). Anotar los
cambios
c. Reacción de la Ninhidrina:

Preparación del reactivo de Ninhidrina 0.2%:


Pesar 0.2 gr. De Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o acetona

c.1. A 2.0mlde las soluciones listadas en la tabla siguiente cada una


en un tubo de ensayo, se le agrega 0,5 mL de la solución de
ninhidrina al 1%. Hervir durante 1 ó 2 min y dejar enfriar.

c.2. Anote e interprete sus resultados.

d. Reacciones de Precipitación:

a. Sales de metales pesados: acetato de plomo, nitrato


de plata, sulfato de cobre. b. Ciertos ácidos:
fosfotúnsgtico, perclórico, tricloroacético, etc.
c. Soluciones concentradas salinas: sulfato de amonio, cloruro de
sodio, sulfato de sodio, etc. d. Agentes deshidratantes: metanol,
etanol, acetona, etc.

Procedimiento:

a. Preparación de solución de albúmina de huevo: en un vaso de


precipitados prepara una solución con la clara de los 2 huevos y
adiciona agua en una relación 70:30, la yema se desecha.
b. Realizar el ensayo para la albúmina, mezclándola con volúmenes
iguales (0.5 ml) de cada solución listada en la tabla.
c. Con ayuda de cruces (++) expresar la mayor o menor cantidad de
precipitado
d. Coagulación de las proteínas por efecto de alta temperatura:

e.1. Coloque 2.0 mL de la solución de albúmina de huevo en un


tubo de ensayo y calentar en baño de María durante 2 min.

e.2.Observe y trate de disolver la proteína coagulada.

5. BIORREACCIONES
a) Reacción de Biuret
b) Reacción Xantoproteica

c) Reacción de Ninhidrina
a. Reacción de Biuret

TUBO N° SOLUCION OBSERVACIÓN

Presenta un color
transparente, azul
1 Albúmina 1% pálido (Positivo).

Presenta un color
transparente,
2 Caseína 1% violeta (Positivo).

Presenta un color
transparente,
3 Aminoácido celeste
(negativo).

Presenta un color
transparente,
4 Glucosa 1% celeste claro
(negativo).

Presenta un color
blanco, violeta
5 Leche (positivo).

b. Reacción Xantoproteica

TUBO N° SOLUCIÓN OBSERVACIÓN

1 Albúmina La solución presenta tres capas, la


primera transparente, la segunda amarillo
claro y la tercera naranja.

2 Caseína La solución presenta tres capas la primera


amarillo claro, la segunda amarillo claro y
la tercera naranja.
3 Tirosina La solución presenta tres capas la primera
amarillo claro, la segunda amarillo claro y
la tercera naranja.

La solución presento una homogenización


transparente.
4 Aminoácido X

5 Fenol La solución se presentó en tres capas, la


primera naranja, la segunda naranja claro
y la tercera un naranja oscuro.

6 Glucosa La solución presento una homogenización


transparente.

La solución presento dos capas la primera


de color amarillo y la segunda de naranja.
7 Leche

c. Reacción de la ninhidrina

TUBO SOLUCIÓN OBSERVACIÓN

La solución
presento una
1 Albúmina
homogenización
transparente.

Se observó tres
capas la primera
2 Caseína transparente, la
segunda celeste y
la tercera azul
violeta.

Se observó tres
capas la primera
amarillo, la
3 Aminoácido segunda amarillo
x pálido y la tercera
naranja.

La solución
presento una
4 Glucosa
homogenización
transparente.
La solución
presento una
5 Agua homogenización
transparente.

Se observó tres
capas la primera
blanca, la
segunda violeta
azul y la tercera
6 Leche lila.

d. Reacciones de Precipitación

Proteína CuS04 Ácido (NH4)2S04 ETOH Acido


Fosfotúnsgtico
5% 95% Acético
5%
0.5 ml
Albúmina Transparente con Transparente con Transparente Transparente Transparente,
precipitado precipitado con con precipitado si tuvo
(2 mL) blanquecino, total blanquecino con precipitado blanquecino, precipitación,
coagulación. partículas amarillo claro, coagulación coagulación
grandes pero coloidal. parcial. parcial.
conserva su
consistencia.

.
e. Coagulación de las proteínas por efecto de alta temperatura
 Se observó que a los dos minutos el tubo se coagulo.
 La albumina se coagulo en pequeños trozos blancos.
 No se pudo disolver la proteína coagulada.
6. CÁLCULOS
No existieron
7. RESULTADOS

REACCIÓN CON BIURET

Tubo N° Solución Observaciones

1 Albúmina 1% Transparente → Azul pálido (+)

2 Caseína 1% Transparente → Violeta (+)

3 Aminoácido Transparente → Celeste (-)

4 Glucosa 1% Transparente → Celeste claro (-)

5 Leche Blanco → Violeta (+)

REACCIÓN XANTOPROTEICA

Tubo N° Solución Observaciones

1 Albúmina Transparente → Amarillo claro → Naranja (+)

2 Caseína Amarillo → Amarillo claro → Naranja (+)

3 Tirosina Amarillo → Amarillo claro → Naranja (+)

4 Aminoácido X Transparente → Transparente → Transparente (-)

5 Fenol Naranja → Naranja claro → Anaranjado oscuro (+)

6 Glucosa Transparente → Transparente → Transparente (-)

7 Leche Amarillo → Amarillo oscuro → Naranja (+)

REACCIÓN CON NINHIDRINA

Tubo N° Solución Observaciones

1 Albúmina Transparente → Transparente → Transparente (-)

2 Aminoácido Amarillo crema → Amarillo pálido → anaranjado (+)

3 Caseína Transparente → Celeste → Azul violeta (+)


4 Glucosa Transparente → Transparente → Transparente (-)

5 Agua Transparente → Transparente → Transparente (-)

6 Leche Blanco → violeta azul → Lila (+)

REACCIÓN CON PROTEÍNAS

Proteína CuSO4 Ácido (NH4)2SO4 ETOH 95% Ácido


Tricloroacé Acético 0.5
5% tico 5% ml

Albúmina Transparent Transparent Transparent Transparent Transparent


e e e e e
(2 ml)
↓ ↓ ↓ ↓ ↓

Blanco Blanco Amarrillo Blanco/ Transparent


claro e
Transparent
e

Coagulación Partículas Coloidal Coagulación Coagulación


Característica total grandes y parcial parcial
consistencia
constante

COAGULACIÓN POR EFECTO DE LA


TEMPERATURA

Albúmina (2 ml) Observaciones

Se observó cambios en la
consistencia de la albúmina
con resultados heterogéneos
Calor dando lugar a pequeñas
partículas presentes en la
(2 – 3 min) solución.

No es posible revertir la acción


resultante del calor lo que no
permite la disolución de la
proteína coagulada.
Disolver

8. DISCUSIÓN

La ninhidrina es específica para aminoácidos y proteínas, para diferenciar


entre carbohidratos, aminoácidos y proteínas. Reacciona con todos los α-
aminoácidos contenidos en la proteína dando lugar a la formación de un
complejo color purpura cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, a excepción de la
prolina e hidroxi-prolina que dan lugar a complejos de color amarillo. Este
complejo colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por
resonancia, el cual es independiente de la coloración original del aminoácido
y/o proteína.

Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. Por
ejemplo, en aquellos casos donde la prueba de Biuret es negativa y positiva
la de Ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres.
(MIKI, 2017)

En el caso de la ninhidrina como se pudo corroborar en la práctica del


laboratorio se tuvo una exitosa identificación de proteínas ya que reaccionó
favorablemente con los aminoácidos que las constituyen dando un
característico cambio de color lo que no ayuda a identificar su presencia en
cada muestra analizada en la práctica.

El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (gracias a


la presencia de NaOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto
de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre
los iones Cu+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que
forma parte de los enlaces peptídicos, esto si la reacción da positiva. Cuando
la reacción de biuret da negativa, queda de color azul. (Argañaraz, 2017)

Para la reacción de Biuret pudimos observar que en algunos de los casos no


se dio la reacción esperada para la identificación de proteínas lo que daba un
resultado negativo quedando como evidencia un color azul claro en la
muestra analizada lo cual nos da a entender que no existe presencia de
proteínas en la misma, a diferencia de las otras muestras que tuvieron un
cambio de color a un color violeta dando un resultado positivo para la prueba.

Esta reacción se usa para detectar la presencia de proteínas solubles en una


solución. Se realiza mediante el uso de HNO3 concentrado que, en presencia
de proteínas o aminoácidos con restos aromáticos torna la solución de un
color amarillo oscuro.

Los anillos fenilo que contengan un grupo activante pueden ser nitrados
produciendo un compuesto Amarillo. La producción de un producto coloreado
Amarillo al añadir ácido nítrico es una prueba para la presencia de tirosina o
triptófano en una proteína. La adición de base fuerte hace que el color se
torne más oscuro hacia anaranjado. Las manchas amarillas en la piel
causadas por ácido nítrico son el resultado de la reacción xantoproteica.

La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución


electrofílica aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido
nítrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH acido. (Westerfeld,
2012)

9. CONCLUSIONES
 Se determinó que existen diferentes pruebas para la identificación de
proteínas y aminoácidos que permitieron establecer un resultado positivo
o negativo de acuerdo a las características y composición de cada una de
ellas, evidenciado en coloraciones, presencia de anillos, etc.
 Se identificaron las características respectivas de las sustancias de
prueba mediante diversas reacciones como la Reacción de Biuret que fue
positiva debido a que las proteínas dieron un color violeta, el color
desarrollado se debe a la formación de un complejo de coordinación con
el Cu++ como es el caso de la leche y la albumina o La reacción
xantoproteica la cual fue positiva para prótidos que contienen
aminoácidos con anillos aromáticos. En la reacción estos anillos se nitran,
por lo que aparece el color amarillo intenso de sus derivados nitrados
como en el caso de Caseína o Tirosina.
 También se determinó que, si se somete a las proteínas a la acción de
ciertos agentes que trastornan su organización, se alteran sus
propiedades físicas, químicas y biológicas naturales, y se dice que las
proteínas se desnaturalizan.
La importancia de estas reacciones es establecer las características
principales en las diferentes pruebas para la identificación cualitativa de
sustancias que pueden contener aminoácidos, proteínas o péptidos. Y
cuando se usan varias pruebas en la muestra, se pueden determinar
ciertas sustancias en específico.

10. CUESTIONARIO
a) Explique a que se deben las diferencias observadas. discuta
los resultados de todas las pruebas realizadas.
REACCIÓN DE BIURET

Albúmina 1%: Se formó una Caseína 1%: “La reacción de la


coloración violeta, su resultado es caseína con el reactivo de Biuret
positivo para el reconocimiento de observamos una coloración violeta lo
proteínas, “debido a la formación de que quiere decir que nos dio positivo
un complejo de coordinación entre los ya que se da la formación de un
cationes cúpricos (𝑪𝒖𝟐+ ) en medio complejo de coordinación entre los
alcalino con las uniones peptídicas iones Cu2+ y los pares de electrones
(los pares de electrones no no compartidos del nitrógeno que
compartidos del nitrógeno)” forma parte de los enlaces peptídicos
de la proteína”

Aminoácido: Oobservamos que Glucosa 1%: Ppudimos observar que


pudo cambiar a color celeste con cambio a un color celeste claro, con
blanco con más espumas “en muestra textura “en muestra donde la cantidad
donde la cantidad es mayor, una es mayor, una prueba de elección es
prueba de elección es la de Biuret” la de Biuret”.

Reacción Xantoproteica

Albúmina: Se formó una coloración Caseína: Color amarrillo casi


naranja por “la interacción entre el transparente “la interacción entre el
ácido nítrico y la clara de huevo, esto ácido nítrico y la muestra, esto produjo
produjo la reacción del ácido nítrico la reacción del ácido nítrico con los
con los aminoácidos aromáticos de aminoácidos aromáticos de las
las proteínas de la clara, los cuales proteínas de la muestra, los cuales
fueron posteriormente nitro derivados fueron posteriormente nitro derivados
de anillos aromáticos” de anillos aromáticos”

Tirosina: Color amarrillo intenso “la Aminoácido X: No se presentó


interacción entre el ácido nítrico y la coloración debido a que “la interacción
muestra, esto produjo la reacción del entre el ácido nítrico y la muestra no
ácido nítrico con los aminoácidos produjo la reacción del ácido nítrico
aromáticos de las proteínas de la con los aminoácidos aromáticos de
muestra, los cuales fueron las proteínas de la muestra, los cuales
posteriormente nitro derivados de no fueron posteriormente nitro
anillos aromáticos” derivados de anillos aromáticos”

Fenol: Color amarrillo transparente “la Glucosa: No se presentó coloración


interacción entre el ácido nítrico y la debido a que “la interacción entre el
muestra, esto produjo la reacción del ácido nítrico y la muestra no produjo la
ácido nítrico con los aminoácidos reacción del ácido nítrico con los
aromáticos de las proteínas de la aminoácidos aromáticos de las
muestra, los cuales fueron proteínas de la muestra, los cuales no
posteriormente nitro derivados de fueron posteriormente nitro derivados
anillos aromáticos” de anillos aromáticos”

REACCIÓN DE LA NINHIDRINA

Albúmina: Se dio un cambio de color Caseína: Se dio una coloración


a celeste bajo o amarillo al reaccionar violeta “la ninhidrina reacciona
con la ninhidrina y este demoró más específicamente con el grupo de al-
tiempo en cambiar de color y la amino de los aminoácidos, ya sean
presencia de aminoácidos. “La causa libres o bien unidos mediante enlaces
principal de este comportamiento en peptídicos”
la prueba se debe a que durante la
reacción se consumen dos
equivalentes de Ninhidrina por cada
aminoácido”
Aminoácido: Presenta color azul Glucosa: No presenta coloración
violeta, al reaccionar con la ninhidrina porque “la ninhidrina reacciona
cambió casi inmediatamente a azul específicamente con el grupo de a-
violeta; lo cual nos reveló la presencia amino de los aminoácidos, ya sean
de aminoácidos “la ninhidrina libres o bien unidos mediante enlaces
reacciona específicamente con el peptídicos”
grupo de a-amino de los aminoácidos,
ya sean libres o bien unidos mediante
enlaces peptídicos”
Agua: No se pudo observar cambio
de color debido a que “la ninhidrina
reacciona específicamente con el
grupo de a-amino de los aminoácidos,
ya sean libres o bien unidos mediante
enlaces peptídicos”.

REACCIONES DE PRECIPITACIÓN

(CuS04)5%: Se formó una Ácido Fosfotúnsgtico 5%: Se formó


precipitación de color verde con el una precipitación de color blanco con
metal pesado dando como resultado el Ácido Fosfotúnsgtico, da como
positivo, “esto a causa de la presencia resultado positivo, por el carácter
de Cobre (metal pesado) en el acido del reactivo se presentó un
reactivo, por tanto, al haber presencia cambio abrupto en las cargas
de iones metálicos se neutralizaron formales de los grupos esenciales de
las cargas anicónicas de los grupos las proteínas presentes, esto afectó
esenciales de la proteína causando las interacciones de la estructura
una precipitación debido a la terciaria, produciendo la
desestabilización de esta” desactivación y posterior degradación
de las proteínas”

(NH4)2S04: Se formó una precipitación ETOH 95%: Se formó un anillo color


de color transparente con el “Sulfato blanco con el etanol dando como
de Amonio ((NH4)2So4), da como resultado positivo, “debido a que el
resultado negativo debido a que el reactivo es un solvente orgánico polar
Sulfuro de Amonio al ser una sal produce agregados de moléculas
neutralizó las interacciones (puentes proteicas que causan la
de hidrogeno) de la estructura desestabilización de los enlaces de
terciaria de la proteína, causando así hidrogeno presentes en la estructura
un desdoblamiento de esta, la cual se de las proteínas de la clara”
precipitó a consecuencia”

REACCIÓN DE COAGULACIÓN

Ácido Acético 0.5 ml: Se formó una precipitación de color blanco espeso y
baboso con el Ácido acético, que da como resultado negativo debido a que
“las proteínas presentes se desestabilizaron por el efecto del calor sobre los
enlaces de la estructura terciaria (en gran parte enlaces de hidrogeno),
causando así un desdoblamiento de la proteína y una disminución progresiva
de su solubilidad”

De acuerdo a estos resultados obtenido en la prueba de Biuret ¿Cuántos


enlaces peptídicos se requieren como mínimo para que esta reacción de
resultados positivos?
Para que los resultados sean positivos utilizando la prueba de Biuret debe
dar una coloración violeta, esta depende mucho de la concentración de
proteínas en la muestra debido a que esta prueba se la utiliza para la
identificación de proteínas, “péptidos que presentan dos o más enlaces
peptídicos que se unen a cationes cúpricos en un medio alcalino” Fuente
especificada no válida.

b) ¿Cree usted que en la prueba de biuret puede utilizarse para


la determinación cuantitativa de las proteínas? ¿Qué método
utilizaría para ello?
No se puede usar la prueba de Biuret para determinación cuantitativa de
proteínas, debido a que esta prueba es un método colorimétrico que nos
permite determinar la concentración de proteínas en una muestra
determinada. En cambio, si queremos determinar cuantitativamente las
proteínas podemos usar estos métodos:” Bradford y el ácido
bicinconínico, así como métodos alternativos como el de Lowry” Fuente
especificada no válida.
c) Explicar qué ocurre al añadir HN03concentrado, al calentar y al
añadir la base, ¿cuándo se realiza la prueba de la reacción
Xantoproteica?
Al añadir HNO3 concentrado, al calentar y al añadir la base en la prueba
Xantoproteica “se presenta como coloración amarillenta, esta prueba solo
reacciona con las proteínas, es decir solo identifica proteínas mientas que
con otras muestras no funciona se queda con el color de la muestra
mismo” Fuente especificada no válida.
d) ¿Por qué se presenta diferencia de intensidad del color
desarrollado en la reacción de ninhidrina entre un aminoácido
y una proteína? ¿Si ambas soluciones se encuentran a la
misma concentración?
La reacción de Ninhidrina se puede usar tanto en proteínas como en
aminoácidos, pero cambia la intensidad de color debido a que “cuando
existe presencia de aminoácidos este cambia a un color azul violeta, pero
en cambio en proteínas este color puede ser a veces un poco claro debido
a que existen grupos amino libres de los aminoácidos en la muestra”
Fuente especificada no válida.
e) ¿Cree usted que un tripéptido dará la reacción de ninhidrina? ¿Por
qué?
Un tripéptido si puede dar la reacción de Ninhidrina, pero si tiene grupos
amino libres de los aminoácidos, siempre y cuando se encuentren en un
pH entre 4 y 8, se puede presentar la coloración azul violeta.Fuente
especificada no válida.
f) Explique el efecto de la alta temperatura sobre la naturaleza
de la proteína. ¿Este efecto es reversible?
El efecto de la alta temperatura es la desnaturalización de la proteína, es
decir “pierde las estructuras superiores (secundaria, terciaria, cuaternaria)
quedando solo en su estructura primaria, este efecto es reversible debido
a que la estructura primaria lleva la información necesaria para la adoptar
niveles superiores, a este proceso se le conoce como renaturalización”
Fuente especificada no válida.

g) Diferencie coagulación de precipitación proteica.


La Coagulación Proteica “es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar sobre la
proteína la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y
cuaternaria”, mientas que la Precipitación Proteica “consiste en la
desnaturalización de la estructura terciaria originando la formación de un
"coágulo" que se observa como un precipitado en la solución” Fuente
especificada no válida.

h) Explica el fundamento químico de cada una de las


reacciones coloreadas: reacción de Biuret, reacción
Xantoproteica y reacción de los aminoácidos azufrados.
Reacción de Biuret: “Es un ensayo general para las proteínas. Cuando
una proteína reacciona con el cobre (II) sulfato (azul), la prueba positiva
es la formación de un complejo de color violeta”
Fuente especificada no válida.

Reacción Xantoproteica: “Se representa la producción de un producto


de color amarillo en la adición de ácido nítrico. Realizado en un ensayo
para detectar la presencia de tirosina y triptófano en una proteína” Fuente
especificada no válida.

Reacción de los Aminoácidos Azufrados: “Se pone de manifiesto


mediante la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo,
esta reacción se desarrolla en un medio básico y en presencia de acetato
de plomo, que permite la formación de sulfuro de plomo” Fuente
especificada no válida.
i) Explica las reacciones químicas que ocurren en cada
proceso.
Reacción de Biuret

Reacción Xantoproteica
Reacción de la Ninhidrina

Reacción de Precipitación con CuSO4

Reacción de Coagulación
j) ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?
Reacción de Biuret: Se formó una coloración violeta, su resultado es
positivo para el reconocimiento de proteínas, “debido a la formación de un
complejo de coordinación entre los cationes cúpricos (𝐶𝑢2+ ) en medio
alcalino con las uniones peptídicas (los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno)” Fuente especificada no válida.

Reacción de Xantoproteica: Se formó una coloración naranja por “la


interacción entre el ácido nítrico y la clara de huevo, esto produjo la
reacción del ácido nítrico con los aminoácidos aromáticos de las proteínas
de la clara, los cuales fueron posteriormente nitro derivados de anillos
aromáticos”
Fuente especificada no válida.
Reacción de la Ninhidrina: Se dio un cambio de color a celeste bajo o
amarillo al reaccionar con la ninhidrina y este demoró más tiempo en
cambiar de color y la presencia de aminoácidos. “La causa principal de
este comportamiento en la prueba se debe a que durante la reacción se
consumen dos equivalentes de Ninhidrina por cada aminoácido”
Fuente especificada no válida.
Reacción de Precipitación: Se formó una precipitación de color verde
con el metal pesado dando como resultado positivo, “esto a causa de la
presencia de Cobre (metal pesado) en el reactivo, por tanto, al haber
presencia de iones metálicos se neutralizaron las cargas anicónicas de
los grupos esenciales de la proteína causando una precipitación debido a
la desestabilización de esta” (Se formó un anillo color blanco con el etanol
dando como resultado positivo, “debido a que el reactivo es un solvente
orgánico polar produce agregados de moléculas proteicas que causan la
desestabilización de los enlaces de hidrogeno presentes en la estructura
de las proteínas de la clara”
Se formó una precipitación de color blanco con el Ácido Fosfotúnsgtico,
da como resultado positivo, por el carácter acido del reactivo se presentó
un cambio abrupto en las cargas formales de los grupos esenciales de las
proteínas presentes, esto afectó las interacciones de la estructura
terciaria, produciendo la desactivación y posterior degradación de las
proteínas” .
Se formó una precipitación de color transparente con el “Sulfato de
Amonio ((NH4)2So4), da como resultado negativo debido a que el Sulfuro
de Amonio al ser una sal neutralizó las interacciones (puentes de
hidrogeno) de la estructura terciaria de la proteína, causando así un
desdoblamiento de esta, la cual se precipitó a consecuencia” Fuente
especificada no válida.

Reacción de Coagulación: Se formó una precipitación de color blanco


espeso y baboso con el Ácido acético, que da como resultado negativo
debido a que “las proteínas presentes se desestabilizaron por el efecto del
calor sobre los enlaces de la estructura terciaria (en gran parte enlaces de
hidrogeno), causando así un desdoblamiento de la proteína y una
disminución progresiva de su solubilidad” Fuente especificada no válida.

k) ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una


proteína?
Para saber si una sustancia desconocida es una proteína podemos usar
la prueba química del Biuret, debido a que identifica proteínas, obteniendo
como resultado una coloración violeta, “otra prueba que se puede usar es
la de Ninhidrina debido a que esta busca enlaces peptídicos obteniendo
un color amarrillo, pero si más se quiere pruebas físicas sencillas
podemos usar la de coagulación o del Sulfato de Amonio ((NH4)2So4)”
Fuente especificada no válida.

l) ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret? Explica


por qué.
“Si, puesto que el reactivo de Biuret reacciona con proteínas
independiente al ser liquidas o sólidas”, porque su propósito es la
identificación de proteínas en la muestra a ser evaluada.Fuente
especificada no válida.

11. APLICACIÓN INDUSTRIAL A LA BIOTECNOLOGÍA

12. Aplicación industrial a la biotecnología.

Según (Pareja, 2005), “hoy día existen cientos de genes de proteínas


terapéuticas que se han expresado a nivel de laboratorio, y que están intentando
demostrar su adecuación clínica. Ya existen más de 30 proteínas aprobadas
para su uso clínico.

Sustancia Empresa Enfermedad


factor antihemofílico Miles, Baxter, Hemofilia A
Genetics Institute
DNasa I Genentech Fibrosis quística
Eritropoyetina (EPO) Amgen, Ortho Biotech Anemia, enf. renal
Glucocerebrosidasa Genzyme Enfermedad de
Gaucher
Hormona del Genentech Enanismo hipofisario
crecimiento
Insulina Eli Lilly Diabetes
Interferón alfa-2a Hoffmann-LaRoche ciertas leucemias,
sarcoma de Kaposi
Interferón alfa-2b Schering-Plough ciertas leucemias,
Sarcoma de Kaposi,
hepatitis B y C
Interferón alfa-n3 Interferon Sciences Herpes genital
Interferón gamma-1b Genentech enf. granulomatosa
crónica
Interleucina-2 Chiron Carcinoma células
renales
Somatotropina Eli Lilly Deficiencia hormona
crecimiento
Activador tisular del Genentech Infarto agudo de
plasminógeno (tPA) miocardio, embolismo
pulmonar masivo

El porcentaje de proteínas terapéuticas que se fabricarán por métodos


recombinantes irá creciendo con el tiempo.

Comentemos algunos ejemplos de los citados en la tabla anterior:

La insulina es el primer caso de proteína por ingeniería genética aprobada


para uso en humanos. Los mamíferos producen insulina en las células beta de
los islotes de Langerhans del páncreas, y regula los niveles de glucosa en la
sangre. El defecto de su síntesis conduce a la diabetes. Hasta la ingeniería
genética la insulina para diabéticos procedía de páncreas de cerdos o vacas,
que aunque es biológicamente activa en humanos, no es idéntica a la nuestra,
de modo que se pueden producir algunos problemas de reacciones inmunes
adversas.
La hormona de crecimiento es un péptido de 191 aminoácidos producido por
la hipófisis (glándula pituitaria), que estimula el crecimiento normal. Los niños
que no producen niveles adecuados tienden a tallas inferiores a las normales
(enanismo hipofisario). Antes, esta enfermedad se trataba con hormona
extraída de cerebros de cadáveres, extracción larga y costosa, con poco
rendimiento, cuyo producto, además, de vez en cuando daba infecciones con
virus y priones procedentes de los cerebros de los cadáveres. Todo esto se ha
resuelto con la ingeniería genética. Millones de dosis de la hormona
recombinante se administran cada año a cientos de miles de pacientes.
Hace poco se aprobó el uso de DNasa-I para el tratamiento de la fibrosis
quística (la enfermedad monogénica más frecuente en poblaciones
caucasianas, que hace que los afectados sean muy susceptibles a infecciones
bacterianas en sus pulmones, con lo que se acumula un grueso moco que les
dificulta la respiración). La DNasa-I, administrada como aerosol, puede romper
el componente ADN del moco acumulado en los pulmones del enfermo,
disminuyendo su viscosidad y facilitando la respiración del paciente.
Igualmente se está intentado obtener una alginato-liasa que rompe el
componente alginato secretado por bacterias Pseudomonas aeruginosa que
son responsables de buena parte del moco de los enfermos de fibrosis
quística.
La primera proteína terapéutica recombinante obtenida en células de
mamífero es el activador tisular del plasminógeno (tPA), que se administra a
víctimas de ataques cardíacos (infarto agudo de miocardio). Esta sustancia
cataliza la conversión del plasminógeno en plasmina, que a su vez disuelve la
fibrina de los coágulos sanguíneos. El tPA recombinante, desarrollado por
Genentech fue licenciado en 1987 con el nombre comercial de Activasa®.
Aparte de su empleo para el infarto agudo de miocardio (aprobado en 1987),
se ha aprobado su empleo en el embolismo pulmonar agudo (1990) y en la
isquemia aguda (1996).”

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12. ANEXOS