UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

TRABAJO DE TITULACIÓN SOMETIDO A CONSIDERACIÓN DEL

HONORABLE CONSEJO DIRECTIVO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
AGROPECUARIAS COMO REQUISITO PREVIO PARA
OPTAR AL GRADO DE

INGENIERO AGRÓNOMO

ESTABLECIMIENTO DE TRES MEDIOS DE CULTIVO

PARA LA FASE DE ENRAIZAMIENTO IN VITRO DE
ANTURIO (Anthurium andreanum)

AUTOR
JESSENIA DEL ROCÍO LUCERO MURILLO

DIRECTOR
ING. AGR. IVÁN VILLACRES MIELES. Mg. Sc

2013

i
Este trabajo de titulación ha sido aceptado en la forma presente por el tribunal de grado
designado por el H. Consejo Directivo de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad Técnica de Machala, como requisito parcial para optar al grado de

INGENIERO AGRÓNOMO

___________________________________________
Ing. Agr. Iván Villacres Mieles. Mg. Sc
Director de Tesis

___________________________________________
Ing. Agr. Abrahan Cervantes Álava. Mg. Sc
Miembro del Tribunal

___________________________________________
Ing. Agr. Alexander Moreno Herrera. Mg. Sc.
Miembro del Tribunal

ii
 DEDICATORIA

A Dios, Por ser mi fortaleza, mi guía y mi compañero a lo largo de mi vida, por

permitirme alcanzar mis objetivos y encontrar el camino correcto para logarlo, por su
infinito amor y porque gracias a él he conseguido culminar esta etapa de mi vida.

A mis padres Esperanza y Liberto, Por su apoyo incondicional, por su amor, por sus
consejos, y su ejemplo de vida, que me han permitido formarme como persona y
profesionalmente, por enseñarme el verdadero valor de la vida, a aprender de los
errores y cumplir siempre mis objetivos.

A mis hermanos, Leonardo y Betsy, los cuales han estado a mi lado siempre
compartiendo buenos y malos momentos.

A Néstor Aguirre, por formar parte mi vida, por su amor, comprensión y paciencia, por
enseñarme que con perseverancia y deseos de superación todo se puede logar.

A mis amigas, Cristina y Andrea, por su gran amistad, por sus consejos, por cada uno
de los momentos que compartimos a lo largo de nuestra formación profesional, por el
apoyo incondicional que me brindaron en el transcurso de mi trabajo de tesis.

Jessenia del Rocío

iii
 AGRADECIEMIENTO

A la Universidad técnica de Machala y a la Escuela de Ingeniería Agronómica por

abrirme sus puertas, y brindarme la posibilidad de formarme profesionalmente.

A la Ingeniería Anita Castillo, por sus conocimientos, por haber sigo mi guía y por su
apoyo incondicional en el desarrollo de mi trabajo de tesis.

A mi director de tesis el Ingeniero Iván Villacres, y a mis miembros del tribunal de

grado el Ing. Abrahan Cervantes y el Ing. Alexander Moreno, por haber confiado en
mí, brindándome la asesoría necesaria para culminar este proyecto de investigación.

A mis maestros, por brindarnos sus enseñanzas, sus concejos, que con paciencia y
dedicación han ido formando a lo largo de su vida profesionales, y que han contribuido
al progreso y desarrollo de nuestro país.

La Autora

iv
 UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ACTA DE CESIÓN DE DERECHOS DE TESIS DE GRADO Y TRABAJOS DE

TITULACIÓN
Consigno con el presente escrito la cesión de los Derechos de Tesis de grado/ Trabajo
de Titulación, de conformidad con las siguientes clausulas:
PRIMERA
Por sus propios derechos y en calidad de Director de Tesis el Ing. Agr. Iván Villacres
Mieles Mg. Sc. y la tesista Srta. Jessenia del Rocío Lucero Murillo, por sus propios
derechos, en calidad de Autora de tesis.
SEGUNDA
La tesistaSrta. Jessenia del Rocío Lucero Murillo, realizó la Tesis Titulada
“ESTABLECIMIENTO DE TRES MEDIOS DE CULTIVO PARA LA FASE DE
ENRAIZAMIENTO IN VITRO DE ANTURIO (Anthuriumandreanum)” para optar por
el título de Ingeniero Agrónomo, en la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad Técnica de Machala, bajo dirección del Docente Ing. Agr. Iván
VillacresMieles Mg. Sc., es política de la Universidad que la Tesis de Grado se aplique
y materialice en beneficio de la colectividad.
Los comparecientes Ing. Agr. Iván Villacres Mieles. Mg. Sc., como Director de Tesis y
la tesista Srta. Jessenia del Rocío Lucero Murillo, como autora de la misma, por medio
del presente instrumento, tienen a bien ceder en forma gratuita sus derechos de Tesis a
la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Técnica de Machala y
conceden autorización para que la Universidad pueda utilizar esta Tesis en su favor y/o
de la colectividad, sin reserva alguna.

v
APROBACIÓN

Las partes declaran que reconocen expresamente todo lo estipulado en la presente

Cesión de Derechos.
Para constancia suscriben la presente Cesión de Derechos en la ciudad de Machala a los
10 días del mes de Diciembre del año 2013

______________________________ _______________________________
Ing. Agr. Iván Villacres Mieles. Mg. Sc. Srta. Jessenia del Rocío Lucero Murilo
DIRECTOR DE TESIS AUTORA

vi
La responsabilidad de esta investigación, resultados y
conclusiones del presente trabajo, pertenecen
exclusivamente a su autor

___________________________

Jessenia del Rocío Lucero Murillo

vii
 ÍNDICE DE CONTENIDO

Tema Página
1. INTRODUCCIÓN 1
Objetivos 2
2. REVISIÓN DE LITERATURA 3
3. MATERIALES Y MÉTODOS 12
3.1. Materiales 12
3.1.1 Ubicación política 12
3.1.2 Ubicación geográfica 12
3.1.3 Clima y ecología 12
3.1.4 Materiales 12
3.1.5 Tratamientos 13
3.1.6 Variables evaluadas 14
3.1.7 Medición de las variables 15
3.2. Métodos 16
3.2.1 Preparación de los medios de cultivo 16
3.2.2Desinfección, preparación y siembra del material 17
3.2.3 Condiciones del cultivo in vitro 18
3.2.4Enraizamiento de los explantes in vitro 18
3.1.8 Diseño experimental 19
3.1.8.1 Modelo matemático 19
3.1.8.2 Hipótesis estadística 19
3.1.8.3 Análisis de varianza 19
3.1.9 Análisis estadístico 20
3.1.9.1Prueba de separación de promedios 20
3.1.10 Especificaciones del diseño 20
4. RESULTADOS 21
4.1. Altura de la planta in vitro 21

viii
4.2. Altura de brotes a los 30 días 22
4.3. Altura de brotes a los 60 días 22
4.4. Número de hojas por plántula a los 30 y 60 días 24
4.5. Número de raíces de plántulas de anturios 26
4.6. Longitud de raíces de plántulas de anturios 28
4.7. Porcentaje de mortalidad 29
4.8. Porcentaje de sobrevivencia 30
5. DISCUSIÓN 31
6. CONCLUSIONES 33
7. RESUMEN 34
8. SUMMARY 35
9. BIBLIOGRAFÍA 36
APÉNDICE

ix
 ÍNDICE DE CUADROS
Figura Página

1. Tipo y nivel de auxinas ANA, AIA, ANA+AIA (0.5, 1.5, 2.5 y 3.5 14
mg/l) y concentración de sales MS, utilizados para la inducción
del crecimiento radicular del cultivo de anturios (Anthurium
andreanum).
2. Medios de cultivo de M&S con hormona ANA y AIA al 100 y 50 16
% de concentración sales.
3. Análisis de varianza modelo Fijo 19
4. Altura de planta a los 30 y 60 días 23
5. Número de hojas por planta 25
6. Número de raíces por planta 27
7. Longitud de raíces por planta 29
8. Emisión foliar y la relación entre los niveles y tipo de auxina ANA 40
y AIA al 50 y 100 % de concentración de sales en los explantes de
anturios.

x
 ÍNDICE DE FIGURAS
Figura Página

1. Altura inicial de los explantes de Anturios (Anthurium andreanum) 21

2. Efecto de las auxinas + concentración de sales a los 30 y 60 días en la 22

altura de los explantes in vitro de anturios.

3. Efectos de las auxinas y concentración de sales de Murashige y 24

Skoog en la emisión foliar de los explantes de anturios.

26
4. Acción de auxinas y concentración de sales M&S en el desarrollo de
las raíces en los explantes de anturios.
28
5. Efecto de la concentración de auxinas y sales M&S en la formación de
raíces de los explantes de anturios.
30
6. Porcentaje de mortalidad de los explantes de anturios
30
7. Porcentaje de sobrevivencia de los explantes de anturios

xi
 ÍNDICE DE FOTOGRAFÍAS
Figura Página

1. Preparación de los medios de cultivo 17

2. Esterilización de los medios en la autoclave 17
3. Desinfección, preparación y siembra del material 17
4. Cuarto de incubación de las plantas in vitro 18
5. Efecto de las hormonas en el enraizamiento in vitro 18
6. Medición de la altura de los explantes de anturio (Anthurium 22
andreanum)
9. Conteo del número de raíces de los explantes de anturios 26
7. Desarrollo radicular de anturio 41
8. Medición de las variables de los explantes de anturios 41
9. Contaminación y tratamientos para la recuperación de los explantes de 41
anturios.

xii
 INTRODUCCIÓN
El anturio, es una planta herbácea perenne originaria de los bosques lluviosos de
Colombia, Ecuador y América Central, y se caracteriza por la belleza y durabilidad de
sus flores. Lo que comercialmente se conoce como flor es en realidad una hoja
modificada llamada espata.

Ecuador tiene mayor aceptación en el mercado Norteamericano y la UE, con anturios

que están disponibles en más de 10 colores, altamente apreciada por sus hermosas flores
y exótico follaje, por lo que su uso se centra principalmente en la parte ornamental
Trujillo (2000). Las cualidades mencionadas antes hacen que la especie tenga una
demanda mundial muy pronunciada y alcance altas cotizaciones en el mercado.

La propagación tradicional de anturios por semillas o hijuelos es muy lenta y poco

rentable, puede durar varios años desde la siembra hasta la floración, además la
descendencia presenta alta variabilidad genética e infestación por enfermedades, lo que
afecta negativamente su comercialización.

Para controlar estos problemas se han desarrollado métodos de propagación in vitro bajo
condiciones de asepsia estrictas, empleando segmentos de hojas foliares en un medio de
Murashige & Skoog que le brindará a la planta soporte y todos los nutrientes que esta
necesite para su desarrollo, obteniendo de esta manera grandes volúmenes de plantas
libres de plagas y enfermedades en el menor tiempo posible.

Actualmente, el proceso de regeneración indirecta in vitro de anturio es una alternativa

rápida y eficiente que permite la obtención de plantas sanas, libres de bacterias u hongos
Castellanos et al.(2006). Además, constituye una alternativa para la producción masiva
de plantas, sumada a la garantía de homogeneidad genética cuando se parte de explantes
apropiados (Lee, Cruz y García, 2003).

Mediante este trabajo se obtuvo una buena respuesta del anturio in vitro con la
aplicación de auxinas para aumentar su desarrollo radicular, como método alternativo
para elevar la producción, además minimizó el riesgo de mortalidad de los explantes y
se obtuvo un material vegetal élite.

1
En consecuencia a lo antes expuesto se formuló para esta investigación los siguientes
objetivos:

1. Determinar la concentración óptima de auxinas, mediante la evaluación de tres

medios de cultivo para la fase de enraizamiento, que permita la formación de mayor
número de raíces en los explantes.

2. Establecer el efecto de las auxinas en el enraizamiento de los explantes de anturios

(Anthurium andreanum Lind).

2
 2. REVISIÓN DE LITERATURA
Anthura (2011) manifiesta que el Anturio es una planta ornamental que se distingue por
los llamativos colores de su espata, apreciada por su larga vida en florero (15 a 20 días),
muy razonable con respecto a otras especies. Inicialmente, su cultivo y selección se
realizó en Francia y Bélgica, descubierto durante una expedición al oeste de los Andes
en Colombia y Ecuador en el año 1876, dando origen mediante hibridaciones a las
variedades de flores para corte y maceta.

Anthurium andraeanum Linden es un planta perenne herbácea y epífita. La raíz es

fibrosa, cilíndrica, consistencia carnosa, no se profundiza mucho en la tierra, es blanca
y produce varias raíces adventicias. Murguía (1996). El tallo es monopódico, simple,
herbáceo cuando la planta esta joven y semileñoso cuando es adulto, llegando a crecer
hasta 1.5 m, esta planta crece en promedio hasta 60 cm de altura, las hojas tienen forma
de corazón con una vena o vascularidad central principal y muchas laterales que se
encuentran adheridas a los peciolos largos con una disposición alternada en el tallo para
Álvarez (2006) la flor comercial es una hoja modificada llamada espata en forma de
corazón de alrededor de 5-8 cm de longitud, la cual envuelve a una estructura cilíndrica
denominada espádice de aproximadamente 9,5 cm de longitud, Salgado (2007).El
espádice es grueso, de colores rojo, rosado, amarillo, blanco, verde, bicolor y naranja,
con 300 florecillas diminutas, aproximadamente, las cuales son blancas, hermafroditas,
con un ovario, dos carpelos y cuatro anteras (Murguía, 2007).

Para Trujillo (2000) los anturios durante muchos años han sido multiplicados utilizando
métodos tradicionales como la siembra por semillas o propagación sexual, la división de
plantas, esquejes o “chupones” del rizoma, propagación por acodo, los que resultan
lentos y presentan algunos inconvenientes.

Según Ruiz (2000)Anthurium andreanum L. Es una especie de flores protóginas.

Aunque las plantas son autocompatibles, la polinización cruzada es preferida para
producción comercial de semilla, donde se realiza una selección de plantas “élite” por
aspectos como tamaño, forma de la espata y color. Sin embargo, este es un proceso
lento, que lleva hasta tres años desde que se establece la semilla hasta floración,

3
posteriormente pasan seis o siete meses para que se formen los frutos maduros y se
obtenga la semilla, además su viabilidad es muy corta, presenta una gran variación en la
progenie y la fase juvenil es de larga duración (Pierik, 1974).

Murguía (2007) explica que la separación de hijuelos es más rápida y práctica; los
hijuelos brotan del tallo, de uno a ocho por año, dependiendo de la variedad y el manejo
que se le dé a la planta; se espera que den su primera flor en ocho a diez meses y en ese
momento se separan de la planta con mucho cuidado.

El mismo autor señala que por este método, las plantas resultantes también son iguales a
las plantas que les da origen, con el inconveniente de que tienen que ser adultas y
grandes para seleccionarlas, y el hecho de sembrar secciones implica el riesgo de que se
presenten infecciones o que incluso se pierdan.

Para Ruiz (2000) la propagación in vitro, es un método de propagación rápido, que

permite obtener un gran número de plantas libres de enfermedades, virus, bacterias u
hongos, en muy poco tiempo. Consta de cinco etapas, que se describen a continuación:

Etapa 0: Este autor se refiere al mantenimiento de la planta madre, en condiciones

sanitarias óptimas, con una nutrición y riego adecuados, para permitir un crecimiento
vigoroso y libre de enfermedades.

Etapa 1: También señala que para la etapa de iniciación, se realiza el aislamiento estéril
de los explantes, eliminando los contaminantes externos como hongos y bacterias que
habitan en forma natural en el ambiente. De ésta manera se puede llevar a cabo un
crecimiento y desarrollo sin contaminación para poder establecer el cultivo in vitro.

Etapa 2: Para Castillo (2004) esta etapa es la fase de introducción del material in vitro,
donde luego de la desinfección superficial del material seleccionado, se coloca en medio
de cultivo estéril. Para posteriormente en el lapso de una semana o quince días
dependiendo de la especie, comienza la regeneración de nuevos tejidos vegetales,
iniciando el ciclo de cultivo in vitro.

Etapa 3: Este autor sostiene también que en esta fase se produce la multiplicación de los
brotes pertenecientes a los explantes que sobrevivieron a las etapas anteriores, se espera
originen brotes con varias hojas, ya que en la base de cada hoja hay una yema que se
desarrollará luego de ser puesta en contacto con el medio de cultivo. Estos nuevos
brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras, de
esta forma aumenta el número de plantas en cada repique o división de las plantas.

4
Etapa 4: Explica también que para enraizar los explantes se transfieren los brotes
obtenidos durante la fase de multiplicación de un tamaño aproximado de 2 centímetros,
a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga auxinas. Esta
operación se realiza en la cámara de flujo laminar. Este método permite ser más flexible
a la hora de escoger los brotes, ya que éstos obtienen del medio la fuente de energía para
enraizar, y por tanto no es necesario que tengan las hojas muy bien desarrolladas para
realizar la fotosíntesis.

El autor señala también, que la última fase de una cadena de Micropropagación consiste
en la aclimatación acondiciones ambientales de las plantas obtenidas in vitro. Las
microplantas enraizadas in vitro se siembran en un sustrato humedecido de
turba/vermiculita (1:1) y se colocan en una cámara de aclimatación con una humedad
relativa del 90 %. Durante dos semanas la humedad relativa va disminuyendo hasta
alcanzar los valores del ambiente exterior.

Toro (2004) manifiesta que el cultivo de tejido in vitro se basa en la “Totipotencia

celular”, que es la capacidad de las células para regenerarse en una planta completa. El
cultivo in vitro se realiza en estrictas condiciones de asepsia, con medios de cultivo
nutritivos y condiciones artificiales controladas, simulando el medio de la planta madre.

Para este mismo autor la micropropagación o propagación clonal, es una de las

aplicaciones más generalizadas del cultivo in vitro, a través del cual un fragmento
(explante) de una planta madre, produce una descendencia uniforme, con plantas
genéticamente idénticas, denominadas clones.

Según Pierik (2000) existen diferentes métodos de propagación vegetativa in vitro, entre
éstos se incluyen: esquejes de segmentos nodales, ramas axilares, generación de órganos
adventicios (raíces o vástagos) sobre explantes, formación de embriones somáticos
sobre callo, y regeneración de plantas a partir de suspensiones celulares y protoplastos

Añade, además que para la formación de órganos adventicios, se conocen dos procesos:
organogénesis directa, en la que del explante se originan directamente brotes o raíces, y
organogénesis indirecta, en la que hay formación de callo a partir del explante, y de este
tejido calloso se originan los brotes y raíces.

El autor señala que la organogénesis indirecta o regeneración de órganos a partir de

callo, consta de las siguientes etapas:

 Desdiferenciación de células diferenciadas.

5
  División celular, seguida por formación de callo.
 Formación de órganos.
 Desarrollo de órganos

Así mismo aclara que en organogénesis indirecta, un callo es un tejido tumoral, que
surge sobre heridas de órganos y tejidos diferenciados. Por lo que se denomina
inducción de callo al inicio de su formación. Si en el explante diferenciado solo existen
células diferenciadas, es necesario producir una desdiferenciación, antes de que tenga
lugar la división celular, siendo las células parenquimáticas las que generalmente
pueden sufrir este proceso. La desdiferenciación, permite que las células del explante de
una planta adulta presenten una redefinición. En este proceso, las células adultas son
capaces de pasar de su forma adulta a la forma juvenil. Después de la desdiferenciación,
las células se empiezan a dividir rápidamente bajo la influencia de reguladores de
crecimiento, lo que da lugar al callo.

Según Geir (1990) cualquier órgano (raíz, tallo, hoja, flor, etc.) puede ser usado como
material inicial para la inducción de callo. El material inicial y la posición del explante
sobre la planta madre, pueden tener una gran influencia en procesos como la división
celular y la formación de callo.

Ruiz (2000) manifiesta que para comenzar con la formación de callos a partir de un
explante es necesario agregar reguladores exógenos al medio de cultivo. Éste regulador
exógeno a aplicar dependerá del genotipo del explante y de su contenido de hormonas
endógenas.

Este mismo autor sostiene que otros factores importantes para la formación de callo son
el genotipo, el medio nutritivo, factores físicos de crecimiento como luz y temperatura.

Además menciona, que se debe considerar que un callo es un tejido de crecimiento

rápido y fácil de cultivar. Si se van a utilizar los callos como medio de propagación
vegetativa de plantas, deben de reunir los siguientes requisitos:

 No deben de perder su potencial regenerativo después de varios repicados.

 Debe ser estable genéticamente.
 El material obtenido debe ser idéntico a la planta madre en la medida que sea
posible.

6
Las planta donadoras del material vegetal deben haber permanecido en estricto cuidado
tanto en invernadero como en cámaras de ambiente controlados, sin embargo la mayoría
de cultivos se realizan con explantes cultivados en campo, lo que acarrea consigo una
probabilidad grande contaminación por que si es necesario utilizar este tipo de explante
se recomienda:

 Impedir las infecciones de insectos ya estos son portadores de enfermedades.

 Utilizar fungicidas o bactericidas para controlar la proliferación de hongos.

La selección del material vegetal constituye una etapa importante en el proceso del
cultivo in vitro ya que de ello depende el éxito del desarrollo vegetal por lo que se
requiere que el material sea lo más homogéneo posible, sano con un genotipo adecuado
y en estado fisiológicamente adecuado ya que esto tiene un fuerte efecto sobre la
división celular y en la regeneración in vitro. (Pirerik, 1990).

Castillo (2004) informa que el medio de cultivo es el sustrato donde se va a colocar al

explante seleccionado, se compone de una mezcla de sales minerales, vitaminas,
reguladores de crecimiento, azúcar, agua y agar. Su composición depende de la especie
vegetal con la que se trabaja, edad de la planta, edad del órgano o tejido, tipo de órgano
o tejido que se cultiva y de la etapa del proceso de micropropagación.

Además cumple con dos funciones principales: proporciona soporte físico y todos los
nutrientes necesarios para el desarrollo del explante (Cañizares, 1998).

Para Geir (1990) en el cultivo in vitro de anturios, se utiliza generalmente el medio

derivado de la fórmula de Murashige & Skoog, utilizando la mitad de los
macroelementos, el total de los microelementos y hierro, glucosa y las hormonas que
son modificadas en cada etapa de crecimiento y desarrollo.

Toro (2004) manifiesta que los medios de cultivo deben contener todos aquellos
elementos esenciales para el explante, compuesto generalmente por macro o
microelementos. Se deben incluir los macroelementos (C, H, O, P, K, N, S, Ca, y Mg)
que son esenciales para los tejidos vegetales e intervienen en la conservación del
equilibrio iónico en las plantas, y los microelementos (B, Zn, Mn, Cu, Mo, Fe, Cl) que
participan en los mecanismos enzimáticos como activadores o constituyentes de las
coenzimas.

Según Roca y Mroginski (1991) entre los compuestos orgánicos, la sacarosa es el azúcar
que más se utiliza, y se puede reemplazar por glucosa y en menor medida por fructosa;
7
usualmente la maltosa y la galactosa son menos efectivas. Se sabe que la ausencia de
azúcares se convierte en un factor limitante en la organogénesis de los tejidos,
presentando una acción metabólica y energética, siendo esencial para el crecimiento y
desarrollo in vitro. La sacarosa es generalmente la fuente carbonada que se utiliza en los
estudios de organogénesis; sin embargo; en algunas ocasiones se ha sustituido por la
glucosa o fructosa.

El azúcar, es empleada como fuente de carbono, ya que los explantes se desarrollan en

condiciones poco apropiadas para la fotosíntesis, la concentración ideal varia en el
rango de 1 a 5 %, sin embargo deben tomarse en cuenta la edad, el tipo de explantes
para administrar una concentración, ya que los embriones muy jóvenes necesitan
concentraciones altas de azúcar (Pierik, 1990)

Toro (2004) considera que las vitaminas son requeridas como catalizadores en varios
procesos metabólicos. Favorecen el crecimiento de las células de plantas superiores y la
diferenciación de los callos, por lo que pueden llegar a ser un factor limitante. Entre las
vitaminas utilizadas para el cultivo in vitro están: tiamina, ácido nicotínico, piridoxina y
myo-inositol.

Para Pierik (1990), los reguladores de crecimientos son compuestos orgánicos

involucrados en el desarrollo, crecimiento y actividad metabólica de las plantas,
constituyen un elementó importante en el cultivo in vitro ya que están encargados de la
distribución de los compuestos que la planta biosintetiza y además determina todos los
órganos relativos de la planta.

Debido a que desencadenan respuestas en muchas partes del vegetal, la concentraciones

adecuadas de los mismos varían con respecto a la especie, órgano, estado de desarrollo
y factores ambientales es por esto que no se puede generalizar acerca de los efectos de
estos compuestos en los procesos de crecimiento, para que el sistema de respuesta sea
eficiente el regulador de crecimiento debe encontrarse en la cantidad adecuada , debe
ser reconocido por los receptores de las células blanco y dar lugar a la formación del
complejo hormona-receptor para que de esta manera inicie la transducción de señales, la
cual inicia una serie de cambios que integran una respuestas compleja inducen a la
respuesta fisiológica (Kurina, 2009).

8
Las sustancias reguladoras de crecimiento que generalmente se usan en la mayoría de
los casos son del tipo de las auxinas o las citocininas, y en menor grado otros
reguladores (Roca y Mroginski, 1991).

García (2000) aclara que el desarrollo de las técnicas de cultivo de tejido fue posible
gracias a la acción de las auxinas sobre la división celular.

Las auxinas constituyen un grupo de hormonas vegetales que se producen en las partes
de las plantasen fase de crecimiento activo y regulan muchos de desarrollo vegetal,
afectan el crecimiento del tallo, hojas, raíces, desarrollo ramas laterales y frutos,
estimulando la elongación o alargamiento e ciertas células e inhibiendo el crecimiento
de otras, en función de la cantidad d auxina en el tejido vegetal y su distribución (Pierik,
1990).

Lo efectos fisiológicos más importantes en las plantas son: inducción de la división

celular, formación de callo, formación de raíces adventicias, aumento de extensibilidad
de la pared celular y participación en la diferenciación celular y en el fenómeno de
dominancia apical (CONICET, 2004).

Sin embargo, Krikorian(1991) mencionaqueel nombre auxina significa en griego

“crecer” y es dado a un grupo de compuestos que estimulan la elongación. Existen
varias auxinas naturales, tales como el AIA (ácido indolacético), indol-3-acetonitrilo,
etilindol-3-acetato, indol-3-carboxialdehido, indol-3-acetaldehido, indol-3-acetamida,
ácido indol-3-carboxílico, entre otras. De éstas el AIA es el compuesto de mayor
utilización.

Ruiz (2000) considera que las auxinas sintéticas que más se utilizan en el
establecimiento de los cultivos son: 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), ácido
naftalenacético (ANA) y ácido indol-3-butírico (AIB). Estas generalmente producen
elongación celular y expansión de los tejidos, división celular (formación de callo)
formación de raíces adventicias, proliferación axilar y adventicia.

Este mismo autor señala que el acido indol-3-acético (AIA), es la principal auxina
endógena, sintetizada en la planta a partir del L-triptofano, que puede estar libre o
formando parte de proteínas. Los principales lugares de síntesis son los ápices de
coleoptilos de las gramíneas, en meristemos apicales de tallos y, en menor proporción
de las raíces, también en embriones y en hojas jóvenes, flores y frutos. Afectan al
crecimiento del tallo, las hojas y las raíces, al desarrollo de ramas laterales y elongación

9
de ciertas células e inhibiendo el crecimiento de otras, en función de la cantidad de
auxina en el tejido vegetal y su distribución.

No obstante, Lucas (2002) considera que además hay otros procesos de correlación,
como la dominancia apical, diferenciación celular, activación del cambium vascular,
desarrollo del sistema radicular y aéreo, crecimiento de los frutos (biosíntesis de etileno,
cuaje y maduración), formación de flores, frutos (partenocárpicos), raíces y semillas,
efectos sobre el fototropismo y el gravitropismo, inhibición de la abscisión y control de
malas hierbas.

No es posible establecer una concentración particular de la auxina, sin embargo en

general se utiliza el AIA en concentraciones que varían de 0,001 a 10 mg L-1, siendo un
punto óptimo entre 0,1 a 1 mg L-1 (Krikorian, 1991).

Según González, Raisman y Aguirre (1999)el ácido naftalenacético (ANA)es un

miembro de la clase de hormonas conocidas como auxinas sintéticas, utilizado en
cultivos que requieren inducir la caída de frutos, ya sea para una eliminación parcial de
frutos jóvenes y reducir la competencia, o para mejorar los tamaños (manzana, pera).
Además se utiliza para promover el crecimiento y diferenciación celular, floración,
senectud e inducir la formación de raíces en los callos no diferenciados.

Generalmente se utiliza en concentraciones entre 1 a 10 mg L-1, con un punto óptimo

de 2 mg L-1 (Krikorian, 1991).

Pierik (1990) explica que el cultivo de anturio el medio a utilizar debe ser sólido, para
que haya crecimiento y diferenciación de órganos. El agar disuelto forma un gel que es
capaz de retener agua y absorber compuestos, la concentración habitual es de 0,6 –
0,8%.

El agar, se utiliza como gelificante y permite la retención de agua y absorción de

compuestos, mientras mayor es la concentración, mayor es la retención de agua que
puede alcanzar, debe tener una densidad que permita que el explante pueda absorber los
nutrientes pero que al mismo tiempo los mantenga firmes para que tenga un crecimiento
adecuado. (Evans, 2003).

El agua representa el 95 % de su composición, por tal razón es necesario que se

atraviese un procesos de destilación (Pierik, 1999), la utilización del agua corriente
conlleva un efecto negativo sobre la preparación de medios.

10
La organogénesis puede estar afectada por una gran variedad de factores como la luz,
temperatura, humedad relativa, y pH (Toro, 2004).

Para Roca y Mroginski (1991) generalmente en el establecimiento de los cultivos, una

fuente luminosa está compuesta de lámparas fluorescentes (del tipo “luz de día”) y
lámparas incandescentes que brinden entre 1000 y 4000 lux de iluminación.

El fotoperíodo afecta la morfología en el linaje de la planta el cual es relativo a las

respuestas del explante durante los siguientes cultivos. También puede afectar los
niveles internos de los reguladores de crecimiento, usualmente 12 a 16 horas con 1000 a
3000 lux es suficiente para inducir la organogénesis. Además el fotoperíodo, cantidad e
intensidad de luz pueden ser críticos para la formación de brotes en algunas especies
Ruiz (2000), al igual que la calidad de la luz especialmente la roja y la roja intensa
también afectan los procesos hormonales y consecuentemente los resultados in vitro
(Salgado, 2007).

Roca y Mroginski (1991) manifiestan que las temperaturas entre 25 y 28ºC son
adecuadas para el establecimiento de los cultivos, sin embargo la temperatura óptima
del cuarto de crecimiento se encuentra entre 20-28ºC. La regulación de ésta se puede
lograr mediante un sistema de aire acondicionado, alarmas y controles.

Toro (2004) aclara que dentro del cuarto de crecimiento, la humedad relativa debe ser
entre 70 – 80%, ya que valores más bajos, usualmente provocan una desecación del
medio de cultivo.

Este autor señala que el pH es un factor limitante para el crecimiento y desarrollo de

explantes in vitro, de forma general se recomienda ajustar el pH entre 5,5 y 5,8 ya que
un pH más bajo suele producir inestabilidad de AIA, giberelinas, vitamina B1 y ácido
pantoténico. Además favorece la precipitación de sales de fosfato y sales férricas, por lo
que un pH de 5,7 a 5,8 es adecuado para mantener todas las sales en forma soluble
(Murashige y Skoog, 1962).

La contaminación de los explantes se puede presentar en forma exógena por una

inadecuada esterilización del material vegetal o en forma endógena cuando existen
contaminantes sistémicos difíciles de eliminar Toro (2004). Para Roca y Mroginski
(1991), las fuentes de donde proceden los contaminadores son: el explante (tejido), el
medio, el aire y el investigador; siendo la más importante el material vegetal.

11
Contaminación exógena, es el tipo de contaminación que el explante lleva en su
superficie se puede eliminar mediante un eficiente protocolo de desinfección,
generalmente se hace uso de soluciones de hipoclorito de sodio (NaOCl) en
concentraciones de 1 a 3%, es una de las preparaciones más útiles como germicida, se lo
ha utilizado durante muchos años como esterilizante superficial en los tejidos, siempre y
cuando no se produzcan lesiones debido a su acción blanqueadora. Como esterilizante
superficial también se utiliza la solución de bicloruro de mercurio (HgCl2), sin embargo
es altamente tóxico y se debe utilizar con cautela en una solución acuosa entre 0.1 a
1.5% (p/v) por 3 a 10 minutos. También se puede hacer uso de desinfectantes como el
yodo, fungicidas, y otros bactericidas de naturaleza química (Roca y Mroginski, 1991).

La Contaminación endógena, se produce cuando los contaminantes se encuentran

dentro del tejido y por ende son difíciles de eliminar. En este caso puede ser útil la
inclusión de fungistáticos o bacteriostáticos en el medio de cultivo; el sulfato de
gentamicina, la penicilina y el sulfato de estreptomicina (10 a 50 mg L-1), son algunos
de los productos de amplio espectro que se pueden utilizar (Roca y Mroginski, 1991).

Salgado (2007), menciona que el cultivo de tejidos incrementa el promedio de

multiplicación normal de las plantas y puede considerarse como una fuente de material
limpio, ya que está libre de bacterias y otras enfermedades como la antracnosis,
decadencia, mancha de la hoja y nudo de raíz.

12
 3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 MATERIALES

3.1.1 UBICACIÓN DEL ESTUDIO

El presente trabajo de investigación se lo desarrolló en el Laboratorio de Biotecnología
de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Técnica de Machala,
ubicada a 5,5 km de la vía Machala- Pasaje; perteneciente a la parroquia El Cambio,
cantón Machala, provincia de El Oro.

3.1.2 UBICACIÓN GEOGRÁFICA

La Facultad de Ciencias Agropecuarias tiene las siguientes coordenadas geográficas:
Latitud: 79o 57´ 05” W
Longitud: 03O 17´ 16” S
Altitud: 8 msnm

3.1.3 CLIMA Y ECOLOGÍA

Según Cañadas (1983) la zona tiene una ecología seco tropical, la temperatura media
anual de la zona es de 25oC, la precipitación es de 699 mm anuales, la
evapotranspiración anual es de 1126 mm. Según la clasificación climática de
Thornthwaite, tiene un clima sin exceso de agua, megatérmico o cálido. Corto período
lluvioso y gran parte del año presenta déficit hídrico.

3.1.4 MATERIALES UTILIZADOS

Cámara de flujo laminar, autoclave, balanza analítica, estufa, agitador, pHmetro,

destilador de agua, refrigerador, cajas petri, frascos de vidrio, botellas, probetas, pinzas,
tijeras, mechero, bisturí y piceta.

Los reactivos: macroelementos, microelementos, Myo-inositol, ácido nicotínico,

piridoxina, tiamina, glycina, sacarosa, agar, gentamicina, ácido naftalenacético (ANA),
ácido indol-acético (AIA).

13
Insumos: explantes de anturio (2 cm de altura), papel aluminio, papel toalla, fungicidas,
parfilm, bisturís, regla, marcadores, jabón antibacterial líquido, alcohol, cloro,
detergente y agua destilada estéril (ADE).

3.1.5 TRATAMIENTOS

Cuadro 1. Tipo y nivel de auxinas (ANA, AIA, ANA-AIA 0.5, 1.5, 2.5 y 3.5 mg/l)
y concentración de sales MS, utilizados para la inducción del crecimiento
radicular del cultivo de anturios (Anthurium andreanum)
Concentración Concentración de sales
Tratamientos Tipo de auxina
de auxinas(mg/l) MS (%)

1 ANA 0,5 50
2 ANA 0,5 100
3 ANA 1,5 50
4 ANA 1,5 100
5 ANA 2,5 50
6 ANA 2,5 100
7 ANA 3,5 50
8 ANA 3,5 100
9 AIA 0,5 50
10 AIA 0,5 100
11 AIA 1,5 50
12 AIA 1,5 100
13 AIA 2,5 50
14 AIA 2,5 100
15 AIA 3,5 50
16 AIA 3,5 100
17 ANA y AIA 0,5 + 0,5 50
18 ANA y AIA 0,5 + 0,5 100
19 ANA y AIA 1,5 + 1,5 50
20 ANA y AIA 1,5 + 1,5 100
21 ANA y AIA 2,5 + 2,5 50
22 ANA y AIA 2,5 + 2,5 100
23 ANA y AIA 3,5 + 3,5 50
24 ANA y AIA 3,5 + 3,5 100
(*)= el medio compuesto únicamente con Murashige & Skoog al 50 y 100%

14
3.1.6 VARIABLES EVALUADAS

 Altura de la planta a los 30 y 60 días

 Números de hojas a los 30 y 60 días
 Número de raíces a los 30 y 60 días
 Longitud de las raíces a los 30 y 60 días
 Porcentaje de contaminación a los 30 y 60 días
 Porcentaje de sobrevivencia a los 30 y 60 días

3.1.7 MEDICIÓN DE LA VARIABLES

Altura de la planta a los 30 y 60 días

Para la toma de este dato, con ayuda de un flexómetro se procedió a medir desde la
base del medio del cultivo hasta el inicio de la hoja y su resultado se expresó en
centímetros, para esto se dispuso de tres plantas tomadas al azar por tratamiento.

Número de hojas a los 30 y 60 días

Para determinar el número de hojas de las plantas propagadas, se tomó tres plantas al
azar por tratamiento y se contabilizó el total de hojas por explantes de anturio.

Número de raíces a los 30 y 60 días

Para establecer el número de raíces, se procedió a tomar tres plantas al azar por
tratamiento y se contabilizó el total de raíces por explantes de anturios.

Longitud de las raíces a los 30 y 60 días

Para determinar la longitud de las raíces, se escogió tres plantas tomadas al azar por
tratamiento y se midió desde la base del tallo hasta el término de la raíz.

Porcentaje de contaminación a los 60 días

Para determinar el porcentaje de contaminación en plantas propagadas, se procedió a
contar el total de plantas contaminadas en cada uno de los tratamientos utilizando una
simple regla de tres.

Total de plantas contaminadas − total de plantas propagadas

Contaminación % =  X 100
Total de plantas contaminadas

15
Porcentaje de sobrevivencia a los 60 días
Para estimar el porcentaje de sobrevivencia en plantas propagadas, se procedió a contar
el total de plantas prendidas libres de contaminación en cada uno de los tratamientos
utilizando una simple regla de tres.

Total de plantas vivas − total de plantas propagadas

Sobrevivencia % =  X 100
Total de plantas vivas

3.2 MÉTODOS

3.2.1PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

El medio empleado para la fase de enraizamiento de anturio fue el de Murashige &

Skoog suplementado con hormonas como el Ácido nalftalenácetico, Acido Indolácetico,
gentamicina, agar, sacarosa; el pH fue ajustado a 4,8 dosificándose 20 ml por frasco. Se
esterilizaron los medios en autoclave a 120ºC durante un tiempo de 30 minutos.

Cuadro 2. Medios de cultivo de M&S con hormona ANA y AIA al 100 y

50 % de concentración sales.
Medio de Cultivo
Descripción Dosis 100% Dosis 50% U
Macroelementos 10 5 ml
Sulfato de Mg 5 2,5 ml
Microelemento 0,5 0,25 ml
Fuente de Hierro 0,5 0,25 ml
Hormonas
ANA 0.5 - 1.5 - 2.5 - 3.5 0.5 - 1.5 - 2.5 - 3.5 ml
AIA 0.5 - 1.5 - 2.5 - 3.5 0.5 - 1.5 - 2.5 - 3.5 ml
ANA - AIA 0.5 - 1.5 - 2.5 - 3.5 0.5 - 1.5 - 2.5 - 3.5 ml
Vitaminas
Tiamina 0,5 0,5 ml
Ac. Nicotínico 0,5 0,5 ml
Piridoxina 0,5 0,5 ml
Myo-inositol 10 10 ml
Glicina 2 2 ml
Azúcar 3 3 gr
Agar 0,45 0,45 gr

16
 Fotografía 1. Preparación de los medios de cultivo

Fotografía 2. Esterilización de los medios en la autoclave

3.2.1.1 DESINFECCIÓN, PREPARACIÓN Y SIEMBRA DEL

MATERIALVEGETAL

Se procedió a realizar la desinfección de la cámara de flujo con alcohol industrial y se

esterilizó con rayos ultravioletas por treinta minutos, luego de este procedimiento y en
la etapa de multiplicación se escogió los explantes que tuvieron aproximadamente 2 cm
de altura, con ayuda de un bisturí y manteniendo todas las condiciones de asepsia se
procedió a separar los explantes y se los sembró en frascos de vidrio en 20 ml del medio
de cultivo, los frascos fueron tapados con papel aluminio y sellados con parafilm.

Fotografía 3. Desinfección, preparación y siembra del material

17
3.2.1.2 CONDICIONES DEL CULTIVO IN VITRO

Los explanes fueron colocados en un cuarto de incubación, el mismo que se mantuvo en

un ambiente regulado, con una temperatura de 22 a 27ºC, proporcionándoles luz por
16horas y una humedad relativa del 60 al 80%. Estos factores fueron controlados con la
ayuda de timer para regular el fotoperiodo y un acondicionador de aire para mantener la
temperatura y humedad relativa requerida por el cultivo.

La temperatura y humedad relativa se las midió con el empleo de un termómetro

ambiental y un hidrógrafo.

Fotografía 4. Cuarto de incubación de plantas in vitro

3.2.1.3 ENRAIZAMIENTO DE LOS EXPLANTES IN VITRO.

Esta etapa correspondió al enraizamiento de los explantes en donde determino el nivel

de enraizamiento, el tiempo del enraizamiento y la variación de la longitud de los
brotes que se obtuvieron en la etapa de multiplicación y la nueva etapa de
enraizamiento, sobre cuatro factores 0.5, 1.5, 2.5, 3.5 de ANA , AIA, ANA-AIA como
hormona inductora del enraizamiento en el medio de cultivo Murashige y Skoog al 100
y 50 % de concentración de sales, estableciendo un diseño completamente al azar,
dando como resultado 24 tratamientos con 5 cinco repeticiones.

Fotografía 5. Efecto de las hormonas en el enraizamiento in vitro.

18
3.2.2 DISEÑO EXPERIMENTAL

Se empleó el diseño Bloques Completamente al azar con 24 tratamientos y cinco

replicas, totalizando un total de 120 unidades experimentales.

3.2.2.1 Modelo matemático

El modelo matemático, estuvo representado por la siguiente ecuación lineal:

Yij = 𝜇 + 𝜏𝑖+ 𝜉𝑖𝑗

Donde:

Yij = Altura de brotes, numero de hojas, número de brotes.

µ = Representa el promedio general del ensayo.
τi= Efectos del AIA y ANA en el enraizamiento de los explantes de Anturios.
€ijk= Error experimental.

3.2.2.2 Hipótesis del diseño y modelo matemático

Nula Ho:

La aplicación de auxina en los medios de cultivo no difirió significativamente con

relación a los tratamientos.

Alternativa Ha:

La aplicación de auxinas en los medios de cultivo difirió significativamente con

respecto a los restantes tratamientos.

3.2.2.3 Análisis de varianza modelo fijo I

Cuadro 3.Análisis de varianza modelo Fijo

Fuentes de variación G.L. Varianza esperada

Tratamientos 23 σ2 + Στ2/n

Error experimental 96 σ2
Total 119

19
3.2.3 ANÁLISIS ESTADÍSTICO
0.5
Las variables evaluadas en porcentaje, se las normalizó a arco- seno {P} previo el
análisis de varianza. Para la prueba de separación de promedios se empleó la técnica de
contrastes o comparaciones entre tratamientos con respecto testigo.

Una Prueba complementaria consistió en someter los datos a una prueba de

independencia de los tratamientos con las diferentes variables analizadas, empleando la
prueba de Chi cuadrado, con un nivel de significación α = 0.01.

3.2.3.1 Pruebas de separación de promedios

Si el error experimental se mantiene dentro de las especificación es técnicas (CV<

10%), los promedios de tratamiento se compararon mediante una prueba de Duncan con
un nivel de significación de 1%.

3.2.4 ESPECIFICACIONES DEL DISEÑO

Unidad experimental 1

Número de tratamientos 24

Número de réplicas 5

Número de plantas /ensayo 120

20
 4. RESULTADOS
4.1 ALTURA DE LAS PLANTAS INVITRO

5,7
6 4,9 5,2
4,42 4,5
Altura planta cm

3,8 3,8
4 3,26
2
2

ALTURA 0 DIAS

TRATAMIENTOS

Figura 1. Altura inicial de los explantes de Anturios (Anthurium andreanum)

En el cuadro 4 se visualiza las alturas promedias de las plantas de anturio (Anthurium

andreanum), obtenidas mediante propagación clonal in vitro en tres instancias de
desarrollo desde mayo a julio involucrando sesenta días de observaciones. Partiendo de
la evaluación realizada el siete de mayo, en el análisis de varianza, el cuadrado medio
de tratamientos y no su significativo, lo cual indica que se partió de muestras con alturas
homogéneas; así el rango de variación en el grupo de los tratamientos con Ácido
naltalenacético ANA fue de 2,82 a 4,4 cm.

El segundo grupo con AIA (ácido indol acético), el rango de variación fue de 3,8 a 6,24
cm y para el tercer grupo de tratamientos en los cuales se mezclan las dos hormonas y
sales sin variar la dosis de cada componente, el rango de variación se amplió entre 2 a
8,2 cm. En la figura 1 se observa la variabilidad inicial.

21
 Fotografía 6. Medición de la altura de los explantes de anturio

4.2 ALTURA DE PLANTA A LOS 30 DÍAS

De acuerdo con el cuadro 4 el cuadrado medio para tratamientos fue altamente
significativo, lo cual indica que los tratamientos influyeron sobre el incremento en
altura de las plántulas; en el grupo de tratamientos con ANA, la mayor altura fue de 4,6
cm con ANA 0,5 +sales 100. En el segundo grupo AIA el mayor promedio 6,4 cm (AIA
1,5 +100 sales) y para el tercer grupo con la mezcla de ANA +ANA se registro el mayor
promedio de todo el ensayo con plantas de 8,2 cm de altura.

Los rangos de Duncan con una significación del 5% variaron entre 3,5 a 4,3 cm.

4.3 ALTURA DE PLANTA A LOS 60 DÍAS

bc
8 ab
ab ab ab
Altura de plantas en cm

7 ab ab a ab
6 b ab ab a cc
abbc bc ab
5 ab
ab ab
4
3 bc
ab
2
1 0 DIAS
0 30 DIAS
60 DIAS

Tratamientos

Figura 2. Efecto de las auxinas + concentración de sales a los 30 y 60 días

en la altura en los explantes in vitro de anturio.

22
En concordancia con los análisis anteriores, a los 60 días el cuadrado medio de
tratamientos fue altamente significativo y según la prueba de Duncan los rangos de
significación para realizar la separación de promedios de tratamientos en función de su
orden jerárquico variaron entre 2,48 a 3,08 cm. En este contexto los tratamientos que
caen dentro del rango de 8,2 a 5,12 cm corresponden a la elite de tratamientos. Dentro
de este rango se ubican cinco tratamientos que contienen AIA + sales y tres del
grupos ANA +AIA (cuadro 4).

Cuadro 4. Altura de planta a los 30 y 60 días

Tratamientos 0 Días 30 Días 60 Días

Auxina- Sales promedio promedio promedio
0.5 ANA + 50 sales 2,84 ns 3,76ab 4,70bc
0.5 ANA +100 sales 4,42 ns 4,60 ab 4,10bc
1.5 ANA + 50 sales 3,94ns 3,60 ab 3,90bc
1.5 ANA+ 100 sales 3,00ns 2,10 ab 3,80bc
2.5 ANA + 50 sales 4,10ns 1,40 c 2,60 c
2.5 ANA +100 sales 4,40ns 3,60 ab 3,90 bc
3.5 ANA + 50 sales 4,10 ns 4,10 ab 2,80 c
3.5 ANA + 100 sales 4,20ns 4,50 ab 5,00 b
AIA 0.5 + sales 50 4,60ns 5,20 ab 5,90 ab
AIA 0.5 + sales 100 4,50ns 5,00 ab 5,60 ab
AIA 1.5 + sales 50 3,26 ns 3,90 ab 4,40 bc
AIA 1.5 + sales 100 5,70ns 6,40 ab 6,20 ab
AIA 2.5 + sales 50 3,80ns 4.10 ab 4,80 bc
AIA 2.5 + sales 100 6,24 ns 6,90 a 7,70 a
AIA 3.0 + sales 50 4,90ns 5,20 ab 6,00 ab
AIA 3.0 + sales 100 5,80ns 6,00 ab 6,60 ab
ANA + AIA 0.5-0.5 + sales 50 3,80ns 4,00 ab 4,00 bc
ANA + AIA 0.5-0.5 + sales 100 2,00 ns 2,20 c 2,20 c
ANA + AIA 1.5-1.5 + sales 50 3,80ns 2,80 c 2,80 c
ANA + AIA 1.5-1.5 + sales 100 3,80ns 5,20 ab 5,28 ab
ANA + AIA 2.5-2.5 + sales 50 5,20ns 6,60 ab 6,50 ab
ANA + AIA 2.5-2.5 + sales 100 2,60ns 3,00 ab 3,10 bc
ANA + AIA 3.5-3.5 + sales 50 5,06 ns 5,50 ab 6,12 ab
ANA + AIA 3.5-3.5 + sales 100 5,20ns 4,00 ab 4,20bc
promedio general 4,35 4,5 45,575
Varianza de tratamientos 8,6 ns 21,08 ** 11,11**
Varianza del Error 15,3 7,83 3,95
Rangos de Duncan P < 0.01 4,98-6,1 3,50-4,34 2,48-3,08
*1.63 y 1.93 CV% 87.15% 61,47% 60.71%

23
4.4 NÚMERO DE HOJAS POR PLÁNTULA A LOS 30 Y 60 DÍAS

En la figura 3 se presenta el histograma del número de hojas por planta en los 24

tratamientos que integraron este ensayo. En la parte inferior se presenta la identificación
de los tratamientos correspondientes a tres grupos de hormonas más sales minerales:
ANA, 0,5; 1,5; 2,5; y 3,5 + 50 o 100 mg de sales. Ácido indolacético AIA y
ANA+AIA con niveles similares a los antes indicados. Los promedios más altos se
ubican en el grupo de tratamientos formulados con ácido Indolacético AIA, como se
verá al contrastar estos valores con loa rangos de Duncan empleando un nivel de
significación del 5%.

10 a
9 ab a
8
NUMERO DE HOJAS

ab ab
7 ab ab
ab ab
6 ab ab ab ab ab
ab ab a
5 ab ab b b ab ab
4 ab ab ab
b b ab ab
3 b b b
2
0 DIAS
1
0 30 DIAS
60 DIAS

TRATAMIENTO

Figura 3. Efectos de las auxinas y concentración de sales de Murashige

Y Skoog en la emisión foliar de los explantes de anturios

Según el cuadro 5 en la lectura inicial a los cero días el rango de variación fue de dos a
cinco hojas por planta con promedio general de 3,2 y un coeficiente de variación del
44,19%.

A los 30 días después de la primera lectura el número de hojas por plántula se

incrementó hasta un máximo de 8,8 en el tratamiento AIA 3,0 + sales 50, el mismo que
fue significativamente similar a los tratamientos que difirieron en 3,63 hojas que
correspondió al valor máximo del rango de Duncan con una probabilidad del 0,95. En

24
este grupo se incluyen parte de los tratamientos formulados con AIA y La Mezcla de
ANA+ AIA.

Los tratamientos formulados con ANA presentaron menor número de hojas por planta
variando entre 1,8 a 4,4 hojas/planta.

Para el grupo de tratamientos que incluyó la asociación de los dos hormonas ANA y
AIA, el número de hojas en los casos de menor relevancia fue de 2.2, 2.4, 2.6 y 4 hojas
por planta. Para el ensayo le correspondió un promedio general de 4,68 hojas, con un
coeficiente de variación del 50,52%.

Cuadro 5. Número de hojas por planta

Tratamientos 0 Días 30 Días 60 Días

Auxinas - sales Promedio Promedio Promedio
0.5 ANA + 50 sales 2,0 b 4,8 b 4,74 ab
0.5 ANA + 100 sales 2,2 b 2,8 b 4,00 ab
1.5 ANA + 50 sales 2,0 b 3,0 b 3,90 ab
1.5 ANA+ 100 sales 2,8ab 4,4 b 3,80 b
2.5 ANA + 50 sales 3,2ab 2,0 b 2,60 b
2.5 ANA + 100 sales 2,6 b 2,2 b 3,88 ab
3.5 ANA + 50 sales 2,6 b 1,8 b 2,80 b
3.5 ANA + 100 sales 3,2ab 3,6 b 5,00 ab
AIA 0.5 + sales 50 3,0 ab 6,6 ab 5,16 ab
AIA 0.5 + sales 100 4,0 ab 7,2 ab 5,00 ab
AIA 1.5 + sales 50 2,4 b 4,6 b 3,88 ab
AIA 1.5 + sales 100 3,6ab 4,2 b 6,40 ab
AIA 2.5 + sales 50 1,8 b 7,4 ab 4,06 ab
AIA 2.5 + sales 100 4,4 ab 6,4 ab 6,88 ab
AIA 3.0 + sales 50 4,4 ab 8,8 a 5,20 ab
AIA 3.0 + sales 100 3,8 ab 5,6 ab 6,00 ab
ANA+AIA 0.5-0.5 + sales 50 3,2ab 5,4 ab 5,40 ab
ANA+AIA 0.5-0.5 + sales 100 2,8ab 2,2 b 2,20 b
ANA+AIA 1.5-1.5 + sales50 2,4 b 2,8 b 2,80 b
ANA+AIA 1.5-1.5 + sales 100 2,4 b 5,2 ab 5,20 ab
ANA+AIA 2.5-2.5 + sales 50 3,8 ab 6,6 ab 6,60 ab
ANA+AIA 2.5-2.5 + sales 100 2,6 b 2,6 b 2,60 b
ANA+AIA 3.5-3.5 + sales 50 5,0a 8,2 ab 8,20 a
ANA+AIA 3.5-3.5 + sales100 3,2 ab 4,0b 4,00 ab
Promedio general 3,2 4,68 4,6
Varianza de tratamientos 8,4** 123,6** 14,8**
Varianza del Error 2,0 5,4 7,8
Rangos de Duncan P < 0.01 1,8-2,2 2,90 -3,63 3,5-4,33
*1.63 y 1.98

25
4.5 NÚMERO DE RAÍCES DEPLANTULAS DE ANTURIOS

Fotografía 7. Conteo del número de raíces de los explantes de anturios

En la figura 4 se aprecia la dispersión del número de raíces por planta, promediadas de

cinco observaciones, de acuerdo con esta figura no existió uniformidad en la emisión de
raíces; en el grupo de tratamientos con ácido naltalenacético ANA, 13 de los cuarenta
plantas lo que representa el 32,5% no las emitieron y 67,5% fueron casos positivos; para
el grupo de tratamientos con AIA el porcentaje de plantas enraizadas fue de 40% y en
el tercer grupo de tratamientos que incluyó la mezcla de las dos hormonas sólo 22,5%
de plantas las desarrollaron.

4
a
3,5 a
NUMERO DE RAICES

3
ab ab
2,5
2 ab ab
ab ab
ab ab ab
1,5 ab bc bc bc ab c c ab ab
bc bc c c bc c c
1
c c
0,5 0 DIAS
0
30 DIAS
60 DIAS

TRATAMIENTOS

Figura 4. Acción de las auxinas y concentración de sales M & S en el desarrollo de las raíces en los
explantes de anturios

26
En este contexto los cuadrados medios de tratamientos correspondientes a las
evaluaciones a los 30 y 60 días fueron altamente significativos, lo cual indica que el
enraizamiento de las plantas está relacionado con las hormonas empleadas en los
medios. El número de raíces emitidas no guarda relación alguna con las dosis de las
hormonas aplicadas a los medios.

Los mejores promedios, (Cuadro 6) correspondieron a los tratamientos AIA 2,5 +sales
50 con un promedio de 3,4 raíces por planta más los que difieren de este promedio en
2,25 mm.

Cuadro 6. Número de raíces por planta

Tratamientos 0 Días 30 Días 60 Días

Fitohormonas-sales Promedio Promedio Promedio
0.5 ANA + 50 sales 0 0 0
0.5 ANA +100 sales 1 bc 1,4 ab 1,8 ab
1.5 ANA + 50 sales 1,2 bc 1,2bc 1,8 ab
1.5 ANA +100 sales 0,6 c 1,4 ab 1,2 ab
2.5 ANA + 50 sales 1c 0,4 c 1,2 ab
2.5 ANA +100 sales 1,4 ab 0,6bc 0,8 c
3.5 ANA + 50 sales 1c 1bc 1c
3.5 ANA +100 sales 1,2bc 1,2bc 0,8c
AIA 0.5 + sales 50 0 0 0,8c
AIA 0.5 + sales 100 1,6 ab 2,6 ab 1c
AIA 1.5 +sales 50 0 0 0
AIA 1.5 +sales 100 1,2bc 3 ab 2,4 ab
AIA 2.5 + sales 50 0 0 1c
AIA 2.5 + sales 100 2,6 ab 3,2 a 3,4 a
AIA 3.0 + sales 50 0 1,4 ab 1,2 ab
AIA3.0 + sales 100 2,2 ab 3 ab 3,2 ab
ANA+AIA 0.5-0.5 + sales 50 0 0,4 c 0,2
ANA + AIA 0.5-0.5 + sales 100 1 0,4 c 1c
ANA+ AIA 1.5-1.5 + sales50 0 0 0
ANA + AIA 1.5-1.5 + sales 100 1,4 ab 1,4 ab 1,2ab
ANA+ AIA 2.5-2.5 + sales 50 0,4 c 0,4 c 0
ANA + AIA 2.5-2.5 + sales 100 0 0 0
ANA+ AIA 3.5-3.5 + sales 50 0 1bc 1c
ANA + AIA 3.5-3.5 + sales100 1.4 ab 1,4 ab 1,4 ab
Promedio general 0,80 1,10 1,10
Varianza de tratamientos 2,80 ** 6,30** 2,24 ns
Varianza del Error 0,67 1,40 2,11
Rangos de Duncan P < 0.01 1,02-1,27 1,48-1,83 1,81-2,25
*1.63 y 1.98 CV % 102% 107.56 132%

27
4.6 LONGITUD DE LAS RAÍCES

4,5
a
4
Longitud de raices cm

3,5 a
ab
3 ab ab ab
b
2,5 b ab b
ab b ab
2 b b
c
1,5 cb
1 c b
0 DIAS
0,5
0 30 DIAS
60 DIAS

TRATAMIENTOS

Figura 5.Efecto de la concentración de auxinas y sales M & S

En la formación de raíces de los explantes de anturios

A los 30 días, en el grupo de tratamientos con ácido naftalenacetico ANA en su nivel

más bajo, no hubo desarrollo de raíces por la fenolización del medio y muerte de la
plantas; en este contexto, con ANA 2,5 – y 3,5 tampoco hubo formación de raíces. La
longitudes de estas varió entre 0,66 cm a 3,40 cm; pero las diferencias entre los
promedios no lograron superar el mayor rango de Duncan que se situó en 3,76 cm.

En los sesenta días posteriores, se encontró alta significancia estadística para

tratamientos, debido a la mortalidad de plantas a causa de la contaminación del medio
de enraizamiento. De los tratamientos probados el Grupo ANA presentó el mayor
porcentaje de plantas vivas y la mayor longitud de la raíces especialmente con ANA 1,5
+ 50 de sales minerales, promediando 2,8 cm de longitud y 12,5% de plantas no
enraizadas.

Las formulaciones con AIA, en la evaluación final se reportó en las plantas longitudes
de raíces de 0,7 cm a 3,3 cm, existiendo diferencias significativas entre promedios de
tratamientos por presentar diferencias superiores al rango de Duncan de 1,54 cm.
(cuadro 4).

28
Los tratamientos con mortalidad de 50% y bajo crecimiento de las raíces fueron los que
contuvieron la mezcla de ANA + AIA.

Cuadro 7. Longitud de raíces por planta

Tratamientos 0 Días 30 Días 60 Días
Hormonas - sales promedio promedio promedio
0.5 ANA + 50 sales 0,00 0,00 0,00
0.5 ANA +100 sales 0,66 ns 1,94 b 1,90 ab
1.5 ANA + 50 sales 2,70 ns 1,58 b 2,80 ab
1.5 ANA+ 100 sales 1,25 ns 1,00 c 1,16 b
2.5 ANA + 50 sales 0,00 0,80 c 0,875 b
2.5 ANA +100 sales 3,40 ns 0,00 1,20 b
3.5 ANA + 50 sales 0,00 1,80 b 3,10 ab
3.5 ANA + 100 sales 2,80 ns 1,70 b 1,80 ab
AIA 0.5 + sales 50 0,00 0,00 0,70 b
AIA 0.5 + sales 100 1,80 ns 1,80 b 1,60 ab
AIA 1.5 +sales 50 0,00 0,00 0,00
AIA 1.5 +sales 100 1,20ns 1,20 c 2,00 ab
AIA 2.5 + sales 50 0,00 0,00 0,56 b
AIA 2.5 + sales 100 2,60ns 2,60 b 3,30 a
AIA 3.0 + sales 50 0,00 0,00 0,94 b
AIA 3.0 + sales 100 2,00 ns 2,00 b 2,80 ab
ANA+ AIA 0.5-0.5 + sales 50 0,00 0,00 0,10 b
ANA + AIA 0.5-0.5 + sales 100 1,80ns 1,80 b 0,70 b
ANA+ AIA 1.5-1.5 + sales 50 0,00 0,00 0,00
ANA + AIA 1.5-1.5 + sales 100 3,90ns 3,90 a 2,70 ab
ANA+ AIA 2.5-2.5 + sales50 0,00 0,00 0,00
ANA + AIA 2.5-2.5 + sales 100 0,00 0,00 0,00
ANA + AIA 3.5-3.5 + sales 50 0,20ns 0.20 c 0,80 b
ANA + AIA 3.5-3.5 + sales 100 0,00 0,00 0,00
promedio general 1,01 0,93 1,10
varianza tratamientos 6,99** 5,92** 6,60**
varianza del Error 1,21 0,68 1,40
Rangos de Duncan P<0.05 1,37-3,76 1,03-1,24 1,48-1,78

4.7 PORCENTAJE DE MORTALIDAD

Se pudo demostrar en la figura 6 que los explantes contaminados, si reportaron

diferencias estadísticas a los 30 y 60 días. Debido a que el tamaño de los explantes es
directamente proporcional a su regeneración y crecimiento posterior in vitro. En la
medida que aumenta el tamaño, se incrementa los valores de regeneración, pero el
riesgo de aparición de patógenos en los tejidos vegetales aumenta Pérez (1998). Por este

29
motivo el porcentaje de contaminación que se registró a los treinta días fue de 15 % para
los tratamientos con ANA, y los sesenta días del 20 % tanto para los tratamientos con
ANA y la mezcla de las dos hormonas ANA y AIA. Con menor porcentaje de
contaminación los tratamientos con acido indolacetico.

9
20 % 20 %
% PLANTAS CONTAMINADAS.

8
7
15%
6
5
4 30 dias
7.5 %
3
60 dias
2
2.5 %
1
0
ANA AIA ANA - AIA
TRATAMIENTOS

Figura 6. Porcentaje de mortalidad de los explantes de anturios

(Anthurium andreanum)

4.8 PORCENTAJE DE SOBREVIVENCIA

En el figura7 se puede observar que el total de plantas propagadas de anturios por

métodos in vitro equivalen al 100 %, resultado que presentó diferencia estadística a los
treinta y sesenta días donde se registró una sobrevivencia de los explantes del 97,5%, y
80%, lo que demuestra que hubo incidencia significativa por contaminación fúngica
como bacteriana.

45 97.5 %
40 92.5 %
% DE SOBREVIVENCIA

85 % 80 % 80%
35
30
25
20
30 dias
15
10 60 dias
5
0
ANA AIA ANA - AIA
TRATAMIENTOS

Figura 7. Porcentaje de sobrevivencia de los explantes deanturios

(Anthurium andreanum)

30
 5. DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos se encontraron que las concentraciones de auxinas estudiadas
produjeron diferentes respuestas en las variables evaluadas. Se observó que los
reguladores de crecimiento son responsables del crecimiento relativo de todos los
órganos de plantas, es por ello que García (2000) aclara que las técnicas in vitro fue
posible gracias a la acción de auxinas sobre la división celular.

Los tratamientos donde se empleo acido naftalenacetico presentaron mayor cantidad de

plántulas enraizadas, con un porcentaje del 67.5%. Como indica González, Raisman y
Aguirre (1999), esta auxina promueve el crecimiento y diferenciación celular y la
formación de raíces en callos no diferenciados. No obstante el mejor promedio de raíces
se dio en el tratamiento donde se aplico Acido Indolacetico 2.5+ 50% de concentración
de sales, con un promedio de 3,4 raíces por planta. Varios estudios han indicado una
correlación positiva entre niveles endógenos de ácido indolacético (AIA) en plántulas y
el número de raíces adventicias producidas por plántula como señala Álvarez
(1989).Además Gaspar y Couman (1987), afirman que las auxinas presentan mayores
efectos en las formaciones de las raíces adventicias ya que las yemas son al principal
fuente de auxinas endógenas y permiten la rizogénesis.

La aplicación de la auxina acido indolacetico en los medios de cultivo demostró tener

mayor incidencia en el crecimiento de los explantes y en las emisión foliar, dando como
mejor resultado AIA 2.5 + 100 % de sales, puesto que esta hormona promueve el
crecimiento del tallo, hojas y raíces, como señala Ruiz (2000).

La mezcla de las dos hormonas ANA y AIA, no demostraron resultados significativos,

para ninguna de las variables evaluadas, esto se debe a que el acido naftaleacetico es
una auxina sintética, a diferencia del acido indolacetico que es una auxina natural, que
no es fácilmente degrada por las enzimas naturales de las plantas, ni por los
microorganismos como señala Raven, Evert y Eichhon (1992). Existen estudios que
indican una mayor eficiencia en las auxinas sintéticas como ANA con respecto del AIA,
esto puede deberse a que en el caso de ANA, no puede ser degradado por AIA-oxidasa

31
y oras enzimas encargadas de la degradación del AIA, lo que hace que permanezca por
más tiempo en el tejido.

Para Frazier (1981); la aplicación de hipoclorito de sodio contribuyo en gran manera a

la desinfección de los explantes in vitro, es una sustancia química empleado como
agente antioxidante y germicida, actúa directamente oxidando las proteínas celulares de
los microorganismos menciona Toro (2004), estadísticamente se comprobó quedurante
los treinta primeros días de cultivo el 15% de los explantes tratados con ANA, se
contaminaron y la 60 días el porcentaje de contaminación fue igual tanto para ANA
como para el tratamiento donde se mezclo las dos hormonas ANA y AIA, la menor
cantidad de plantas contaminadas se reflejo para el grupo AIA, Por tanto los
tratamientos con acido indolacetico tuvieron mayor cantidad de explantes vivos. Todos
los tratamientos fueron desinfectados al 1% hipoclorito de sodio, durante un tiempo de
10 minutos de inmersión en la solución, luego se procedió a realizare un triple lavado
con agua destilada para eliminar residuos de hipoclorito de sodio, se pudo demostrar
que los tratamientos tratados con ANA fueron más susceptible a la contaminación de
agentes patógenos.

32
 6. CONCLUSIONES

1. La aplicación de dos hormonas Acido Naftalenacetico y Acido Indolacetico en

el medio del cultivo no produjo efectos en el desarrolla radicular de los
explantes in vitros.

2. La mayor cantidad de raíces, número de hojas y crecimiento de los explantes se

logro cuando se adiciono la hormona de acido indolaceteico al medio de cultivo.

3. El tratamiento donde se obtuvo mayor producción de raíces en el cultivo in vitro

fue el de Acido Indolacetico 2.5 + 50% concentración de sales.

4. El grupo de tratamientos con Acido nalftaleacetico, reflejo mayor cantidad de

explantes contaminados, demostrando ser susceptible la contaminación por
hongos.

5. Los explantes contaminados por agentes patógenos, sometidos a tratamientos

con fungicidas e hipoclorito de sodio, no demostraron recuperación y murieron
por invasión del hongo en el tejido de las planta.

6. Acido naftaleacetico, produjo un efecto negativo en los explantes de anturios,

tornándose su área foliar con una coloración parduzca, procedente de la
fenolación de medio de cultivo, lo que disminuyo la emisión de hojas.

7. En los medios de cultivo compuestos por fitohormonas ANA acido

naftalenaetico y AIA, acido indolacético, más sales minerales en dos niveles 50
y 100 mg/l de medio de cultivo, los explantes sanos de Anthurium andreanum,
no se obtuvo un enraizamiento total en todos los tratamientos.

33
 7. RESUMEN
Establecimiento de tres medios de cultivo para la fase de enraizamiento in vitro de
anturio (Anthurium andreanum) se realizó en el Laboratorio de Biotecnología de la
Facultad de Ciencias Agropecuarias, y se planteo los siguientes objetivos: 1.
Determinar la concentración óptima de auxinas, mediante la evaluación de tres
medios de cultivo en la fase de enraizamiento, que permita la formación de mayor
número de raíces en los explantes; 2. Establecer el efecto de las auxinas en el
enraizamiento de los explantes de anturios (Anthurium andreanum Lind). se empleo
el medio Murashige & Skoog ajustando el pH a 4,8 y esterilizado en una autoclave a
120ºC durante 30 minutos, para este ensayo se escogieron brotes de la etapa de
multiplicación que tuvieron 2 cm del altura y se sembró en frascos de vidrio con 20
ml de medio. Los explanes fueron colocados en un cuarto de incubación, a una
temperatura de 27ºC, y humedad relativa del 80%.Los tratamientos consistieron
cuatro niveles de las auxinas ANA, AIA y ANA+AIA 0,5-1,5-2,5 y 3,5; con dos
concentraciones de sales 50 y 100 mg, en los cuales se evaluó altura de la planta,
número de hojas, número de raíces, longitud de las raíces, porcentaje de
contaminación, porcentaje de sobrevivencia. En el número de hojas por planta se
destacó los tratamientos formulados con AIA 0,5 + sales.El medio de cultivo con el
que se obtuvieron mayor número raíces fue ANA 1,5 + 50 % de concentración de
sales, además estimulo el alargamiento radicular, favoreciendo de esta manera la
absorción de nutrientes. Para el grupo de tratamientos con AIA el 40% de plantas
emitieron raíces; el nivel de enraizamiento más bajo se obtuvo con la mezcla de
ANA + AIA, debido a un probable efecto antagónico, AIA y ANA son hormonas
del grupo de las auxinas, ANA fue más favorable para la formación radicular de los
brotes y AIA para la emisión foliar de los mismos. El medio de cultivo
recomendado para el enraizamiento in vitro de anturio es ANA 1.5 mg. y 50 % de
concentración de sales. Las técnicas in vitro son favorables para la propagación de
plantas y al mismo tiempo susceptible a la contaminación por agentes patógenos si
no se lleva las condiciones de asepsia adecuados.

34
 8. SUMMARY
Establishment of three cultivation means for the phase of rootment in anturio vitro
(Anthurium andreanum) he was carried out in the Laboratory of Biotechnology of the
Ability of Agricultural Sciences, and you outlines the following objectives: 1. to
determine the good concentration of auxinas, by means of the evaluation of three
cultivation means in the rootment phase that allows the formation of more number of
roots in the explantes; 2. to establish the effect of the auxinas in the rootmentof the
anturios plants (Anthurium andreanum Lind). you employment the means Murashige &
Skoog adjusting the pH at 4,8 and sterilized in a key car to 120º C during 30 minutes,
for this rehearsal buds of the multiplication stage were chosen that they had 2 cm of the
height and it was sowed in glass flasks with 20 ml of half. Level them they were placed
in an incubation room, to a temperature of 27º C, and relative humidity of 80%. The
treatments four levels of the auxinas ANA, AIA and ANA+AIA 0,5-1,5-2,5 and 3,5
consisted; with two concentrations of salts 50 and 100 mg, in which it was evaluated
height of the plant, number of leaves, number of roots, longitude of the roots,
percentage of contamination, percentage of survival. In the number of leaves for plant
stood out the treatments formulated with AIA 0, 5 + you leave. The means of cultivation
with which you/they were obtained bigger number roots was ELL 1, 5 + 50% of
concentration of salts, I also stimulate the lengthening radicular, favoring this way the
absorption of nutritious. For the group of treatments with AIA 40% of plants emitted
roots; the level of lower rootment was obtained with ANA mixture + AIA, due to a
probable antagonistic effect, AIA and ANA is hormones of the group of the auxinas,
ANA was more favorable for the formation of roots of the buds and AIA for the
emission to foliate of the same ones. The means of cultivation recommended for the
enraizamiento in anturio vitro is ANA 1,5 mg. and 50% of concentration of salts. The
techniques in vitro are favorable for the propagation of plants and at the same time
susceptible to the contamination for agents patógenos if it is not taken the adapted
conditions of asepsis.

35
 9. BIBLIOGRAFÍA CITADA
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.

38
APÉNDICE

39
Cuadro 8.Emisión foliar y la relación entre los niveles y tipo de auxina ANA y AIA al
5 y 100% de concentración de sales en los explantes de anturios.
Tratamientos Número de hojas Mayo
Hormona - sales R1 R2 R3 R4 R5 TI Ym
0.5 ANA + 50 sales 2 2 2 2 2 10 2,0
0.5 ANA + 100 sales 2 3 3 2 1 11 2,2
1.5 ANA + 50 sales 3 2 2 2 1 10 2,0
1.5 ANA + 100 sales 3 4 3 2 2 14 2,8
2.5 ANA + 50 sales 3 4 3 2 4 16 3,2
2.5 ANA + 100 sales 2 1 2 4 4 13 2,6
3.5 ANA + 50 sales 3 3 1 3 3 13 2,6
3.5 ANA + 100 sales 3 3 3 4 3 16 3.2
AIA 0.5 + sales 50 5 3 3 2 2 15 3,0
AIA 0.5 + sales 100 3 4 3 3 7 20 4,0
AIA 1.5 + sales 50 3 2 2 3 2 12 2,4
AIA 1.5 + sales 100 5 4 2 4 3 18 3,6
AIA 2.5 + sales 50 2 1 2 3 1 9 1,8
AIA 2.5 + sales 100 5 6 5 2 4 22 4,4
AIA 3.0 + sales 50 3 7 4 4 4 22 4,4
AIA 3.0 + sales 100 3 8 3 3 2 19 3,8
ANA+ AIA 0.5-0.5 + 50 3 1 3 4 5 16 3,2
ANA+ AIA 0.5-0.5 + 100 3 3 3 3 2 14 2,8
ANA+ AIA 1.5-1.5 + 50 2 4 2 3 1 12 2,4
ANA+ AIA 1.5-1.5 + 100 2 2 2 2 4 12 2,4
ANA+AIA 2.5 -2.5 + 50 6 4 4 3 2 19 3,8
ANA +AIA 2.5-2.5 + 100 3 4 2 2 2 13 2,6
ANA+AIA 3.5 -3.5 + 50 10 11 10 0 10 41 8,2
ANA +AIA 3.5 -3.5 + 100 4 4 2 2 4 16 3,2
383 31.917
1222,4 10.187

Cuadro 9. Cuadro de análisis de varianza del efecto de auxinas y concentración de sales

M & S, en los explantes de anturios (Anthurium andreanum).
Análisis de varianza
Fuentes de variación G.L S.C C.M FC F0,05 F0.01
Tratamientos 23 192,992 8.390,942 41,739 2,33 3,3
Error experimental 96 192,992 201,033
Total 119 402,592

40
Cuadro 10. Emisión foliar y la relación entre los niveles y tipo de auxina ANA y AIA al
5 y 100% de concentración de sales en los explantes de anturios
Tratamientos Altura
Hormona - sales R1 R2 R3 R4 R5 TI Ym
0.5 ANA + 50 sales 3,5 4,5 4,5 2,5 3,8 18,8 3,76
0.5 ANA + 100 sales 4,5 6 5 3,5 4 23 4,6
1.5 ANA + 50 sales 3 5,5 4,8 0 4 17,3 3.46
1.5 ANA + 100 sales 3,5 0 0 3 4 10.5 2,1
2.5 ANA + 50 sales 3,5 0 0 3,4 0 6,9 1,38
2.5 ANA + 100 sales 3,6 4 4 6,5 0 18,1 3,62
3.5 ANA + 50 sales 3,5 4 2 5 6 20,5 4.,1
3.5 ANA + 100 Sales 4,5 4,5 6 3 4,5 22,5 4,5
AIA 0.5 + sales 50 7,3 4,5 5 6 3 25,8 5,16
AIA 0.5 + sales 100 5 4,5 4,5 4 7 25 5
AIA 1.5 + sales 50 4 4 4 3.,8 3,6 19,4 3,88
AIA 1.5 + sales 100 8 7 6 6 5 32 6,4
AIA 2.5 + sales 50 4,3 4 4 5 3 20,3 4,06
AIA 2.5 + sales 100 8 9 6,4 6 5 34,4 6,88
AIA 3.0 + sales 50 6,5 6 5 4,5 4 26 5,2
AIA 3.0 + sales 100 5 8,5 5 6,5 5 30 6
ANA+ AIA 0.5-0.5 + 50 3,5 4,5 3,5 3,5 5 20 4
ANA+ AIA 0.5-0.5 + 100 4 0 4 0 3 11 2,2
ANA+AIA 1.5-1.5 + 50 3 7 4 0 0 14 2,8
ANA +AIA 1.5 -1.5 + 100 8 5 4 3 6 26 5,2
ANA+AIA 2.5 -2.5 + 50 10 7 7 5 4 33 6,6
ANA+AIA 2.5 -2.5 + 100 6 7 2 0 0 15 3
ANA+AIA 3.5 -3.5 + 50 10 11 10 0 10 41 8,2
ANA +AIA 3.5 -3.5 + 100 6 0 2 6 6 20 4
180 4.5

Cuadro 11. Cuadro de análisis de varianza del efecto de auxinas y concentración de

. sales M & S, en los explantes de anturios (Anthurium andreanum).

Análisis de varianza
Fuentes de variación G.L S.C C.M FC F0,05 F0.01
Tratamientos 7 147,6 21,086 2,69* 2,33 3,3
Error experimental 32 250,4 7,825
Total 39 398

41
Apéndice 5. Resumen fotográfico

Fotografía 8. Desarrollo radicular de anturio

Fotografía 9. Medición de las variables de los explantes de

Anturios

Fotografía 10. Contaminación y tratamiento para la recuperación

de explantes de anturios

42