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EXTRACCION DE LA CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO

EXTRACTION AND DETERMINATION CASEIN ISOELECTRIC POINT

Ardila Greilly (05242097)

Corporación tecnológica de Bogotá, Tecnología en Química Industrial


Bogotá, Colombia
12/11/2015

Una característica de las proteínas y otros


RESUMEN biopolímeros es que la carga total que
adquieren depende del pH del medio. De la
Se llevó a cabo el procedimiento de misma manera las proteínas tienen una carga
extracción y separación de la caseína de una neta dependiendo del pH del medio en el que
muestra de leche común, La caseína es una se encuentren y de los aminoácidos que la
proteína conjugada de la leche del tipo componen. La caseína es una proteína
fosfoproteína que se separa de la leche por conjugada de la leche del tipo fosfoproteína
que se separa de la leche por acidificación y
acidificación y forma una masa blanca. Se
forma una masa blanca. Las fosfoproteinas
realizó la determinación experimental del son un grupo de proteínas que están
punto isoeléctrico de la proteína separada químicamente unidas a una sustancia que
(5,2) haciendo preparación de soluciones a contiene ácido fosfórico. En la caseína la
diferentes concentraciones y medida su mayoría de los grupos fosfato están unidos
absorbancia en el espectrofotómetro. por los grupos hidroxilo de los aminoácidos
serina y treonina. La caseína en la leche se
Palabras clave: Proteína, caseína, extracción, encuentra en forma de sal cálcica (caseinato
Punto isoeléctrico. cálcico). La caseína
representa cerca del 77% al 82% de las
ABSTRACT proteínas presentes en la leche y el 2,7% en
composición de la leche líquida.
Carried out the process of extraction and
MATERIALES Y METODOS
separation of casein from a sample of regular
milk, Casein is a milk protein conjugate of Extracción de la caseína:
the type phosphoprotein which is separated
from milk by acidification and forms a white A una mezcla de agua destilada y leche
mass. Experimental determination of the caliente se le agregó 1 mL de ácido acético
isoelectric point of the separated protein (5.2 1M hasta formar un precipitado, se filtró y se
agregó etanol para volver a filtrar.
) was performed by preparing solutions at
different concentrations and the absorbance Determinación del punto isoeléctrico:
measured in a spectrophotometer .
A 50 mg de caseína se le adicionó agua
destilada, Hidróxido de potasio y se preparó
una solución de 10 mL, los cuales se
distribuyeron los 10 tubos de ensayo (1 mL
en cada uno), a los cuales se les agregó los
volúmenes correspondientes a la tabla No. 1,
INTRODUCCION y se midió la absorbancia de cada uno de
ellos a 640 nm para realizar la posterior acetato
ácido ácido
gráfica (Gráfica No. 1) de absorbancia Vs pH de pH
Tubo acético acético
sodio aprox.
0.1 m 0.01m
RESULTADOS Y ANALISIS DE 0.1m
TESULTADOS 1 0.5 9.5 3.2
2 1 9 3.6
Extracción de la caseína:
3 1.5 8.5 3.8
Al adicionar el ácido acético a la leche se 4 2 8 4
observa un cambio en su composición, 5 3 7 4.2
evidenciándose una precipitación completa, 6 4 6 4.5
ya que la fase líquida es traslúcida y la fase 7 6 4 5
sólida completamente blanca. Se puede 8 8 2 5.1
explicar ya que de acuerdo al cambio de pH
9 6 4 5.5
experimentado por la leche, inicialmente
entre 6,5 y 6,7, allí la proteína (caseína) se 10 8 2 6.1
encuentra cargada negativamente solubilizada BLANCO 2 8 4
con sal cálcica, al acidificarse el pH se acerca Tabla No. 1. Fracción para preparación de
al punto isoeléctrico de la proteína, al llegar a soluciones según sus componentes a pH
pH aproximado a 4,2 y 4,7 se neutraliza la aproximado.
caseína (los grupos fosfatos se protonan), así
Se obtuvieron los siguientes resultados
se precipita debido a que hay menos
correspondientes a la medición de la
repulsiones intermoleculares, evidenciándose
absorbancia de la muestra de caseína a
la separación de estos compuestos por medio diferentes pH en diferentes tubos de ensayo
de densidad ya que la densidad del agua es 1 (10) a 640 nm:
g/ml quedando arriba por tener densidad más
baja que la caseína que es de 1.3g/ml, esta pH
separación se da debido a que cuando las Tubo Absorbancia
Experimental
proteínas en este caso la caseína se encuentra 1 2,81 0,081
a pH de punto isoeléctrico son menos 2 3,01 0,058
solubles en agua y se da la separación de la 3 3,12 0,004
proteína y el agua. 4 3,21 0,002
5 3,35 -0,004
Ca2 + Caseinato + CH3COOH Caseína +
CaCOOH 6 3,54 0,008
7 3,85 0,010
Después de precipitada la caseína, se procede 8 4,18 0,014
a lavado para eliminar el suero y grasas 9 5,20 0,040
forzando a la parte soluble de la caseína con 10 7,5 0,011
la lactosa a cristalizar. Tabla No. 2 Medidas de las absorbancias de
la caseína a diferentes pH en solución.

Determinación del punto isoeléctrico: Con los anteriores datos se realizó una gráfica
pH Vs Absorbancia, en la que se muestra el
Con la preparación previa de las siguientes comportamiento de las soluciones:
soluciones se prepararon la solución para
medir su correspondiente absorbancia:
indicando que la proteína se ha
pH Vs absorbancia insolubilizado.
0.1
Se observa la disminución de la actividad de
0.05
la proteína (caseína) con referencia a su pH
debido a que cuanto está a pH alejados de su
0 punto isoeléctrico se comporta diferente,
0 2 4 6 8 igual se puede notar en su inestabilidad
-0.05 después de pasar por el punto en que sus
cargas son neutras.
Gráfica No 1. PH Vs absorbancia

Derivada de absorbancia
0.1

0.05

0
0 2 4 6 8 CONCLUSIONES
-0.05
Se logró la debida separación de la proteína
Gráfica No. 2 derivada de absorbancia
de la leche (caseína) con el proceso de
Según la gráfica el punto isoeléctrico se acidificación.
encuentra en (5,2), ya que se puede observar
un aumento de la absorbancia por respecto al Se determinó el punto isoeléctrico
pH. experimental de la caseína (5,2) con la
interpretación de la gráfica de pH Vs
Al utilizar un porcentaje de error tenemos Absorbancia
que:
Se evidenció error en el procedimiento de
teorico − experimental medición de las absorbancias ya que el
% 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = porcentaje de error alcanza el 10%.
teorico
4,7 − 5,2 Se adoptaron conocimientos teóricos y
% 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = × 100 = 10,6%
4,7 prácticos con respecto a las proteínas.

La prueba para determinar el punto


isoeléctrico de la caseína no es aceptable, ya BIBLIOGRAFIA
que el porcentaje indica que se hicieron
errores en el proceso pero que son aceptables, Lehninger principios de bioquímica. Nelson,
ya que están cerca del rango en que precipita David L., Michael M. Cox.
la caseína. las soluciones de acetato de sodio
Fisicoquímica de moléculas. Extracción de
y ácido acético al 0.1 y 0.01 se usaron como
caseína y determinación de punto
soluciones amortiguadoras que permitieron
isoeléctrico. Licenciatura de Biotecnología.
identificar la proteína ya que la caseína se
solubiliza fácilmente en valores de pH
alejados a su punto isoeléctrico, en el tubo
que se observa una ligera precipitación está