TESIS

Universidad Peruana Cayetano Heredia
Facultad de Ciencias y Filosofía
“Alberto Cazorla Talleri”
ANALISIS PROXIMAL, POLIFENOLES TOTALES, ACIDO ASCORBICO Y ACTIVIDAD

SECUESTRANTE DE RADICALES LIBRES (DPPH+) DE LA PULPA LIOFILIZADA DE
CAMU-CAMU (Myrciaria dubia Mc. Vaugh Kunth) Y SU EFECTO SOBRE LA
GLUCOSA SÉRICA, PERFIL LIPIDICO Y ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE EN RATAS
DIABÉTICAS INDUCIDAS POR ESTREPTOZOTOCINA
ANTONIO ENRIQUE TUCTO BELLO
Tesis para optar por el Título Profesional de Químico
Farmacéutico
Lima-Perú
2015
El presente trabajo se realizó bajo la dirección:
M.Sc. León Faustino Villegas Vílchez
M.Sc. Ana Colarossi Salinas
M.Sc. Rocío Inga Peña

JURADO CALIFICADOR
Presidente: Dr. José Aliaga Arauco
Secretario: MSc. César López Matayoshi
Vocal: MSc. Graciela Untiveros Bermúdez

DEDICATORIA
Dos personas en este mundo son las que me han dado las
herramientas necesarias para realizar mis proyectos como ser
humano y profesional. Dedico este trabajo a mis padres, ya
que sin su soporte y apoyo desinteresado han logrado que
culmine este trabajo de investigación y que realice muchos
más en el futuro, con el fin de aportar nuevos
conocimientos…
AGRADECIMIENTOS
- A mis padres, por el apoyo incondicional en todos los rubros

para la finalización de mis proyectos y la modelización de
otros nuevos, formándome de manera integral.
- A mis asesores, los profesores León Villegas, Ana Colarossi y

Rocío Inga, por su constante evaluación y consejos con el
objetivo de finalizar el presente trabajo.
- Al profesor Camilo Díaz Santibañez, del cual obtuve la asesoría

en el área referente a los datos botánicos del fruto estudiado.
- A los miembros del Servicio de Control de Calidad,

especialmente a Julio Hidalgo y Leisy Casas
- A mis amigos, los cuales siempre con sus consejos permitieron

que finalice mi tesis de pregrado y que crezca como
profesional y ser humano.
ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN .............................................................................................. 1
2. MARCO TEÓRICO ........................................................................................... 4
2.1. Diabetes Mellitus ...................................................................................... 4
2.2. Características y causas de la Diabetes Mellitus tipo 1 ....................... 5
2.3. Características y causas de la Diabetes Mellitus tipo 2 ....................... 6
2.4. Complicaciones de la Diabetes Mellitus . ¡Error! Marcador no definido.
2.4.1. Complicaciones agudas ................................................................... 7
2.4.2. Complicaciones crónicas ................................................................. 8
2.5. Criterio para el diagnóstico de Diabetes Mellitus ................................. 9
2.6. Aumento de prevalencia de casos a nivel nacional y mundial .......... 10
2.6.1. Diabetes según tipo ........................................................................ 11
2.7. Relación entre la Diabetes Mellitus y radicales libres ........................ 12
2.8. Intervención terapéutica en Diabetes Mellitus .................................... 14
2.8.1. Intervención no farmacológica en el tratamiento de la Diabetes
Mellitus .......................................................................................................... 15
2.8.2. Intervención farmacológica en el tratamiento de la Diabetes
Mellitus .......................................................................................................... 16
2.9. Modelo de inducción de Diabetes con estreptozotocina ................... 19
2.10. Aspectos taxonómicos generales de la planta de camu-camu ...... 20
2.10.1 Clasificación botánica ..................................................................... 20
2.10.2. Hábitat y descripción ................................................................... 21
2.10.3. Origen............................................................................................ 22
2.10.4. Ecología y adaptación ................................................................. 23
2.10.5. Importancia y usos....................................................................... 24
2.10.6. Composición química y valor nutricional .................................. 24
2.10.7. Fenología ...................................................................................... 25
2.11. Liofilización de la pulpa de camu-camu y sus ventajas .................. 26
3. HIPÓTESIS .................................................................................................... 27
4. OBJETIVOS ................................................................................................... 28
4.1. General.................................................................................................... 28
4.2. Específicos ............................................................................................. 28
5. MATERIALES Y MÉTODOS .......................................................................... 30
5.1. Materiales ............................................................................................... 30
5.1.1. Equipos de laboratorio ................................................................... 30
5.1.2. Reactivos de laboratorio ................................................................. 30
5.1.3. Muestras vegetales ......................................................................... 30
5.1.4. Animales de Laboratorio ................................................................ 32
5.2. Métodos Analíticos ................................................................................ 36
5.2.1. Determinación de humedad de pulpa fresca de camu-camu ...... 36
5.2.2. Análisis proximal del liofilizado de camu-camu ........................... 36
5.2.3. Cuantificación de componentes bioactivos del liofilizado de
camu-camu.................................................................................................... 38
5.2.4. Evaluación de la Glicemia, Perfil lipídico y Actividad antioxidante
in vivo .......................................................................................................... 40
5.3. Análisis estadístico................................................................................ 47
6. RESULTADOS ............................................................................................... 48
6.1. Liofilización de pulpa de camu-camu................................................... 48
6.2. Determinación de humedad de la pulpa fresca de camu-camu ......... 48
6.3. Análisis proximal del liofilizado de camu-camu..................................... 49
6.3.1. Determinación de la humedad ........................................................... 49
6.4 Cuantificación de componentes bioactivos del liofilizado de camu-
camu ................................................................................................................. 51
6.4.1. Determinación de los Polifenoles Totales ..................................... 51
6.4.2. Determinación de la capacidad antioxidante por captura del
radical DPPH ................................................................................................. 52
6.4.3. Determinación de Ácido ascórbico................................................ 52
6.5. Evaluación del Peso corporal, Glicemia, Perfil lipídico y Actividad
antioxidante in vivo ......................................................................................... 54
6.5.1. Peso corporal................................................................................... 55
6.5.2. Estimación de glucosa sérica ........................................................ 57
6.5.3. Estimación de Perfil Lipídico (Colesterol total, Triglicéridos
séricos, Colesterol HDL y Colesterol LDL) ................................................. 59
6.5.4. Evaluación de la actividad antioxidante in vivo (ABTS+) ............. 61
7. DISCUSIÓN.................................................................................................... 64
8. CONCLUSIONES ........................................................................................... 77
9. RECOMENDACIONES .................................................................................. 78
10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................... 80
LISTA DE TABLAS
Tabla Página
1. Niveles de perfil lipídico adultos con Diabetes Mellitus 10
2. Propiedades de las preparaciones de insulina 17
3. Comparación de los fármacos utilizados para el 18

tratamiento de la Diabetes Mellitus
4. Pérdida acumulada de Vitamina C en los mejores 26

tratamientos por ensayo al término de la evaluación
5. Procedimiento para la estimación de la capacidad 39

antioxidante por captura del radical DPPH
6. Procedimiento para la cuantificación de la glucosa 42

sérica
7. Procedimiento para la cuantificación de los 43

triglicéridos séricos
8. Procedimiento para la cuantificación del colesterol 44

total
9. Procedimiento para la cuantificación del colesterol 45

HDL
10. Porcentaje de humedad en pulpa de camu-camu y 49

porcentaje de liofilizado obtenido
11. Porcentaje de humedad residual en el liofilizado de 49

camu-camu
12. Composición química proximal del liofilizado de 50

camu-camu
13. Valores de concentración de ácido gálico y 51

absorbancia obtenida para la curva de calibración
14. Contenido de Polifenoles totales, expresados en 52
miligramos de Ácido Gálico
15. Capacidad inhibitoria de la oxidación 52

16. Áreas (mAU) obtenidas de las inyecciones de los 53
estándares de Ácido Ascórbico
17. Concentración de Ácido Ascórbico en el liofilizado de 54

camu-camu
18. Efecto del liofilizado de camu-camu en el peso 56

corporal en ratas
19. Efecto del liofilizado de camu-camu en el nivel de 58

glucosa sérica en ratas
20. Efecto del liofilizado de camu-camu en el perfil 60

lipídico en ratas
21. Efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad 62

antioxidante in vivo (ABTS+)
LISTA DE FIGURAS
Figura Página
1. Número de casos de Diabetes registrados en el período 11
2010-2013
2. Casos notificados de Diabetes Mellitus según tipo 12

(Primer semestre-2013)
3. Estructura molecular de la estreptozotocina 19
4. Frutos de Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (camu- 21

camu)
5. Liofilizado de camu-camu 48
6. Composición química proximal del liofilizado de camu- 50

camu
7. Curva de calibración del Ácido Gálico 51
8. Cromatograma del estándar de ácido ascórbico 54
9. Efecto del extracto acuoso del liofilizado de camu-camu 57

en el peso corporal en ratas
10. Efecto del liofilizado de camu-camu en el nivel de 59

glucosa sérica en ratas
11. Efecto del liofilizado de camu-camu en el perfil lipídico 61

en ratas

antioxidante in vivo (ABTS+) expresada por el porcentaje
de inhibición de radicales libres

antioxidante in vivo (ABTS+) expresada en mmol
trolox/ml plasma)
GLOSARIO
Ortotrópico: Que presenta crecimiento vertical.
Plagiotrópico: Que presenta crecimiento horizontal.
Alogamia: Polinización cruzada y fecundación entre individuos genéticamente

diferentes
Geitonogamia: Polinización entre flores distintas del mismo individuo.
Xenogamia: Polinización entre flores de distintos individuos.
Hercogamia: Aquello que presentan ciertas flores en las cuales las anteras y
estigmas están muy separadas unas de otras.
Riparia: Termino que describe a la vegetación típica de las riberas de ríos y

arroyos.
Heliofita: Cualquier especie de planta que requiere de plena exposición a la luz

solar y desarrollarse.
Plántula: Etapa del desarrollo del esporofito, que comienza cuando la semilla sale
de su dormancia y germina y termina cuando el esporofito desarrolla sus primeras
hojas no cotiledonares.
Liofilización: Proceso en el que se congela el producto y posteriormente se

introduce en una cámara de vacío para realizar la separación del agua por
sublimación.
Radical libre: Molécula (orgánica o inorgánica), en general extremadamente

inestable y, por tanto, con gran poder reactivo. Actúan alterando las membranas
celulares y alterando el material genético celular.
Estrés oxidativo: Desorden en el balance entre la producción de especies

reactivas de oxigeno (radicales libres) y las defensas antioxidante. Se discute su
relación como un posible rol en la producción de daño de tejido en la Diabetes
Mellitus.
Isocrático: El solvente conserva la misma concentración durante todo el tiempo

de corrida (muestreo o análisis), sea que se trate de un solvente puro o de
mezclas de solventes.
Dilución: Acción y efecto de diluir. Disminuir la concentración de una disolución

añadiendo disolvente.
Calcinación: Es la accionar de calcinar o quemar la muestra.

ABREVIACIONES
AAP Aminoantipirina
Abs Absorbancia
ABTS+ Ácido 2,2'–azino–bis– (3–etillbenzotiazolin–6–

sulfonico
ADN Ácido Desoxiborronucleico
ATP Adenosin Trifosfato
CEH Colesterol ester hidrolasa
CHOD Colesterol oxidasa
CoQ10 Coenzima Q-10
CT Colesterol Total
DAD Detector con Arreglo de DIodos
DHAP Dihidroxihidrogenacetona fosfato
DIRESA Dirección Regional de Salud
dL Decilitro
DPPH 2, 2-difenil-1-picrilhidrazil
DS Desviacion Estandar
eq Equivalente
g% Gramos por ciento
g. Gramo
GlcNAc N-acetilglucosamina
GLP-1 Glucagon-like peptide-1
GLUT-4 Glucose Transporter Type 4
GOD Glucosa oxidasa
GPS Global Positioning System
GSH Glutatión reducida
HDL High-Density Lipoprotein
HPLC High-Performance Liquid Chromatography
kg Kilogramo
L Litro
LDL Low-Density Lipoprotein
M Molar
mAU Mass Absorbance Unit
Mbars Milibars
mg Miligramo
mL Mililitro
mm Milimetro
mmHg Milimetros de mercurio
mmol Milimol
mmol/mL Milimol por mililitro
mRNA Ácido Ribonucleico mensajero
Mx Muestra
N Número de platos teóricos
nm Nanómetro
NO Óxido Nítrico
NPH Neutral Protamine Hagedorn
oC Grado centígrado
OGTT Test de Tolerancia la Glucosa Oral
OMS Organización Mundial de la Salud
p/v peso/volumen
PAP Fenol+Aminofenazona
PIC Solución de Hexanosulfonato de sodio
POD Peroxidasa
ROS Especie reactiva de oxigeno
rpm Revoluciones por minuto
RSD Desviación Estándar Relativa
S.A.C. Sociedad Anónima Cerrada
Std Estándar
STZ Estreptozotocina
T Factor de asimetría
TAC Carbohidratos disponibles totales
TG Triglicéridos séricos
tR Tiempo de retención
UDP Uridina disfosfato N-acetilglucosamina
uL Microlitro
umol Micromol
UV Ultravioleta
v/v Volumen/volumen
α Alfa
β Beta
ϒ Epsilon
RESUMEN
Actualmente, ante el aumento en la prevalencia de casos de pacientes con

Diabetes Mellitus en el Perú y en el resto del mundo, se han propuesto diversos
productos para su tratamiento, entre sintéticos o convencionales y productos
naturales, los cuales con diversos mecanismos de acción, amortiguan el efecto
hiperglucemiante de la enfermedad.
El camu-camu (Myrciaria dubia Mc. Vaugh Kunth) presenta una alta concentración
de antioxidantes (entre ellos ácido ascórbico o Vitamina C, polifenoles totales, etc.)
y la Diabetes Mellitus se caracteriza por presentar estrés oxidativo en la células β
de los islotes de Langerhans en el páncreas, y por tanto, ocurre daño y deterioro
celular: En el presente estudio se evaluó la actividad hipoglucemiante de la pulpa
liofilizada de camu-camu, el perfil lipídico y la actividad antioxidante in vivo en
ratas tratadas con estreptozotocina (STZ), compuesto que genera destrucción de
las células β de los islotes de Langerhans en el páncreas, lo cual mimetiza a la
Diabetes Mellitus.
La pulpa de camu-camu fue liofilizada y se le realizó el análisis proximal,

cuantificación de polifenoles totales, actividad sobre la captura del radical DPPH y
contenido de ácido ascórbico o vitamina C por HPLC.
El análisis proximal presenta valores de 3.965 g de proteínas, 1.51 g de grasas

totales, 80.15 g de carbohidratos disponibles totales, 2.96 g de fibra total, 2.67 g
de cenizas, todos ellos expresados en 100 gramos de liofilizado de camu-camu;
además se obtuvo 153.3 mg equivalentes de ácido gálico/g de liofilizado, el
porcentaje de inhibición de la oxidación de 94.021 %, a una concentración de
1.104 mg/mL y la concentración de vitamina C fue de 191.28 mg/g de liofilizado.
El estudio de actividad sobre la glicemia fue realizado en ratas normoglicémicas e

hiperglucémicas machos Holtzman inducidas por STZ (55 mg/kg). Se les
administró el reconstituido de liofilizado de camu-camu equivalentes a dosis de
5.74, 28.7 y 57.4 mg/kg de peso corporal. Como control positivo se utilizó
glibenclamida con una dosis de 40 mg/kg de peso corporal.
Se concluye que el liofilizado de camu-camu presenta actividad hipoglicemiante en

ratas diabéticas inducidas con estreptozotocina, y la disminución de la glicemia es
proporcional a la dosis. No se observó disminución significativa de glucosa sérica
en ratas normoglucémicas. Se observó también que el liofilizado de camu-camu
actúa en la tasa de peso corporal, siendo esta significativa (p<0.05). Con respecto
al perfil lipídico, el liofilizado de camu-camu redujo triglicéridos séricos, colesterol
total y colesterol LDL y aumento colesterol HDL en comparación con las ratas
diabéticas sin tratamiento. Además se observó que la administración oral del
liofilizado de camu-camu incrementó la actividad antioxidante plasmática en ratas
diabéticas inducidas con estreptozotocina y en las normoglucémicos, generando
un efecto protector en animales normoglucémicos y un efecto restaurador en las
ratas diabéticas.
ABSTRACT
Currently, with the increased prevalence of cases of diabetic patients in Peru and
in the world, several products have been proposed for its treatment, including
conventional and synthetic or natural products, which have different mechanisms
of action, attenuate the hyperglycemic effect of the disease.
The camu-camu fruit (Myrciaria dubia Mc. Vaughn Kunth) has a high concentration
of antioxidants (including ascorbic acid or vitamin C, total polyphenols, etc.) and
Diabetes Mellitus is characterized by oxidative stress in β cells of the islets of
Langerhans in the pancreas, and thus, damage and cell damage occurs. In the
present study the hypoglycemic activity of the lyophilized pulp of camu-camu, lipid
profile and antioxidant activity in vivo in rats treated with streptozotocin was
evaluated (STZ), compound which generates the destruction of β cells of the islets
of Langerhans in the pancreas which mimics Diabetes Mellitus.
The pulp of camu-camu was lyophilized and underwent proximate analysis,

quantification of total polyphenols, activity on DPPH radical capture and content of
ascorbic acid or vitamin C by HPLC.
Proximate analysis shows values of 3.965 g protein, 1.51 g total fat, 80.15 g of total
carbohydrates available, 2.96 g of total fiber, 2.67 g of ashes, all expressed in 100
grams of freeze-dried camu-camu; plus 153.3 mg gallic equivalents / g of
lyophilized acid, the percent inhibition of 94.021% oxidation at a concentration of
1.104 mg / mL and the concentration of vitamin C was obtained was 191.28 mg / g
of lyophilized.
The study on hypoglycemic activity was conducted in male Holtzman normal

glycemic and hyperglycemic STZ (55 mg / kg) induced rats. They were
administered the reconstituted lyophilized camu-camu equivalent to doses of 5.74,
28.7 and 57.4 mg / kg of body weight. As a positive control glibenclamide is used
with a dose of 40 mg / kg body weight.
It is concluded that the lyophilized of camu camu has hypoglycemic activity in
streptozotocin -induced diabetic rats, and decrease blood glucose is proportional to
the dose. No significant decrease in serum glucose was observed in normal
glycemic rats. It was also noted that the freeze-dried camu camu acts in the rate of
body weight, this being significant (p < 0.05). With regard to lipid profile, lyophilized
camu camu reduced serum triglycerides, total cholesterol and LDL cholesterol and
increase HDL cholesterol compared to untreated diabetic rats. It was also
observed that oral administration of lyophilized camu-camu increase plasma
antioxidant activity in streptozotocin-induced diabetic rats and the normal glycemic
rats, probably generating a protective effect in normal glycemic animals and a
restorative effect in diabetic rats.
1. INTRODUCCIÓN
Actualmente, la Diabetes Mellitus se ha convertido en un problema de ámbito

sanitario bastante importante en el Perú y el mundo por la carga de enfermedad
en términos de discapacidad y mortalidad prematura que ocasiona. En el año 2000
se estimó que alrededor de 165 millones de personas en el mundo vivían con
Diabetes y que este número ascenderá a 300 millones en el 2030.1 La prevalencia
de Diabetes en América Latina varía entre 10 y 15 %, en el Perú ésta se estima en
5.5 %2. La magnitud de la misma está en aumento, debido al incremento de
factores como la obesidad, el sobrepeso, el sedentarismo y los hábitos
inadecuados alimentarios.
A pesar de la existencia de distintos tratamientos efectivos para la Diabetes

Mellitus tales como la insulina e hipoglucemiantes orales respecto a mantener los
valores de glucosa sérica en el rango normal, estos pueden presentar numerosos
efectos adversos tales como la hipoglucemia, alteración de la función hepática o
renal, alteración gastrointestinal, efectos hematológicos, coma diabético, entre
otros3. Aparte de ello, los medicamentos sintéticos pueden tener la actividad
hipoglucemiante, pero tienen inefectividad como agentes antioxidantes y se ha
demostrado que estos juegan un rol importante en el tratamiento de la Diabetes
Mellitus. Existe evidencia creciente que en ciertos estados patológicos,
especialmente enfermedades crónicas, la producción incrementada y/o una
eliminación inefectiva de especies reactivas de oxigeno (ROS) pueden desarrollar
un rol crítico, ya que la alta reactividad de los ROS determina cambios en todos
los componentes celulares virtualmente, conduciendo a la peroxidación lipídica. Se
ha reportado la relación entre la producción de ROS y la capacidad perturbada de
la defensa antioxidante en pacientes diabéticos4, 5. También ha sido sugerido que
el incremento de producción de radicales libres y el estrés oxidativo es el evento
central en el desarrollo de las complicaciones diabéticas 4. Esta sugerencia ha sido
sostenida por la demostración del incremento de los niveles de los indicadores de
estrés oxidativo en pacientes diabéticos. Es por ello que se muestra razonable
1
sugerir que los compuestos antioxidantes pueden desarrollar un rol importante en
el tratamiento de la Diabetes.
Durante el fin del siglo XIX y el inicio del siglo XX, se ha estudiado a los
compuestos antioxidantes, un grupo vagamente definido de compuestos
caracterizados por su habilidad de ser oxidados en lugar de otros compuestos
presentes. Al inicio, los usos de estos compuestos antioxidantes oscilaban entre el
almacenamiento de alimentos hasta la vulcanización del caucho, pero fue solo
después que los biólogos se dieron cuenta de la importancia de los compuestos
antioxidantes en la salud con las publicaciones en la década de los 60 sobre
vitaminas y flavonoides6. En la década de los 70, Cameron y Pauling, encontraron
que el ácido ascórbico (vitamina C) es un agente protector potencial contra el
cáncer en seres humanos7. En los años recientes, muchas investigaciones
testifican el creciente interés en los roles de los antioxidantes de los sistemas en el
cuerpo humano trabajando en conjunto en las células contra las especies
reactivas de oxígeno tóxicas, su relación con los diversos procesos
fisiopatológicos y sus posibles implicancias terapéuticas8. Es interesante aclarar
que los mecanismos de defensa de los antioxidantes envuelven estrategias
enzimáticas y no enzimáticas. Los antioxidantes no enzimáticos más comunes
incluyen a las vitaminas A, C y E, glutatión, ácido α-lipóico, carotenoides,
coenzima Q10 (CoQ10), varios bioflavonoides, antioxidantes minerales (cobre,
zinc, manganeso y selenio), y cofactores tales como ácido fólico, ácido úrico,
albumina, y vitaminas B1, B2, B6 y B12. Los antioxidantes enzimáticos incluyen
superóxido dismutasa, catalasa, glutatión peroxidasa y glutatión reductasa 9.
Mientras los ROS han sido enlazados al cáncer, complicaciones diabéticas y
enfermedades cardiovasculares, los compuestos antioxidantes se han mostrado
como posible terapia para la prevención de dichas enfermedades10. La evidencia
de los estudios experimentales, epidemiológicos y clínicos han probado la utilidad
de los compuestos antioxidantes, los cuales podrían ser de ayuda para el
tratamiento de la Diabetes Mellitus y sus complicaciones.
2
El camu-camu (Myrciaria dubia Mc. Vaugh Kunth) es un arbusto de crecimiento
indeterminado, encontrado a través del bosque lluvioso del Amazonas de
Colombia, Venezuela, Perú y Brasil que pertenece a la familia Mytaceae. Su fruto
es de un color rojizo de 2.5 cm de diámetro con un sabor ácido fuerte. Este fruto
es una fuente importante de vitamina C con valores en un rango entre 9-50 g/kg11,
12. Es debido a ello que se ha creado una fuerte demanda de esta fruta en el
mercado de productos naturales mundial, especialmente en forma de jugos,
extracto o pulpa congelada y seca (por liofilización) por el mercado de los Estados
Unidos y Japón13. Evidentemente, por la presencia de compuestos antioxidantes
tales como el ácido ascórbico, antocianinas y otros compuestos fenólicos, se ha
reportado que presenta una fuerte actividad antioxidante, evaluando ello mediante
el método DPPH con el compuesto químico 2,2-difenil-1-picrihidrazil (DPPH)14.
Además de ello, se ha demostrado que el método de liofilización permite

conservar a largo plazo los componentes antioxidantes en la pulpa de camu-camu
y además permite concentrar estos compuestos en menores cantidades, lo cual
permitiría una facilidad para su administración15.
Por todo lo expuesto, se considera importante la evaluación de la actividad

hipoglucemiante del liofilizado de camu-camu, además de evaluar su acción en las
complicaciones de la Diabetes, tales como la alteración en el perfil lipídico
(Colesterol total, Triglicéridos séricos, Colesterol HDL, Colesterol LDL) y la
actividad antioxidante in vivo (ensayo ABTS+); todo esto para un mejor
aprovechamiento de las propiedades benéficas en lo que a salud se refiera.
Es por ello que este trabajo busca determinar si el liofilizado de camu-camu

presenta actividad hipoglucemiante, mediante la evaluación de glucosa sérica,
ante la probable acción de sus componentes antioxidantes presentes y su amplia
gama de beneficios relacionados a la salud, expuestos previamente.
3
2. MARCO TEÓRICO
2.1. Diabetes Mellitus
La Diabetes Mellitus es una condición en la cual el cuerpo no produce suficiente o

no responde apropiadamente a la insulina, una hormona producida en el
páncreas. La insulina habilita a las células a absorber glucosa en orden para
convertir ella en energía. En la Diabetes, el cuerpo puede no responder
apropiadamente a su propia insulina o no generar suficiente insulina o ambas.
Esta causa que la glucosa que se acumula en el torrente sanguíneo genere varias
complicaciones16, 17.
Existiendo 2 grupos en su clasificación (Diabetes Mellitus tipo I y Diabetes Mellitus

tipo II), se considera que la de tipo I (insulino-dependiente) ocurre principalmente
en infantes y población juvenil, características por un déficit total de producción de
insulina endógena y que por tanto requiere de insulina como tratamiento
indispensable para su sobrevivencia, y la Diabetes Mellitus tipo II o no insulino-
dependiente, que ocurre en población adulta y anciana, con un déficit parcial de
producción de insulina endógena y fenómenos de resistencia a su acción y que es
tratada con agentes orales18.
De estas 2 clases descritas, la Diabetes tipo II representa el cuadro

hiperglucémico más frecuente representado el 90 % de los diabéticos, mientras
que la Diabetes tipo I se produce en cerca del 10 % de diabéticos19.
La incidencia de Diabetes está incrementándose a nivel mundial y rápidamente

asumiendo proporciones epidémicas. En el Perú el 3.2 % de la población de 15 y
más años de edad fue diagnosticada con Diabetes Mellitus. Y acorde con la
Organización Mundial de la Salud (OMS), más de 220 millones de personas a
nivel mundial tienen Diabetes, y alrededor del 80 % de muertes por Diabetes
ocurren en países en vías de desarrollo, además de proyectarse que las muertes
por Diabetes se duplicaran entre el 2005 y el 203019.
4
La magnitud de la misma está en aumento, debido al incremento de factores como
la obesidad, el sobrepeso, el sedentarismo y los hábitos inadecuados de
alimentación, además de un cambio en el proceso de envejecimiento en países
desarrollados. Dados todos estos factores expuestos, un incremento en el número
de casos de Diabetes será más evidente en países desarrollados. Al inicio del
siglo XXI, la Diabetes Mellitus, especialmente la Diabetes Mellitus tipo 2, ha
asumido proporciones epidémicas y se ha convertido la enfermedad crónica más
prevalente, y obviamente la de mayor problema de salud pública ante su alto costo
para los sistemas de salud20.
2.2. Características y causas de la Diabetes Mellitus tipo 1
 Características de la Diabetes Mellitus tipo 1
La Diabetes Mellitus tipo 1 se caracteriza principalmente por:
 Usualmente ocurre antes de los 30 años de edad, pero también

puede ocurrir en cualquier edad. El pico de incidencia ocurre durante
la pubertad, alrededor de los 10-12 años en niñas y 12-14 años en
niños.21
 Inicio abrupto de signos y síntomas de la hiperglucemia: sed y
hambre incrementada, micción frecuente, pérdida de peso y fatiga. 22
 Propensos a cetosis.21
 Causas de la Diabetes Mellitus tipo 1
Las causas principales de la Diabetes Mellitus tipo 1 son:
 Predisposición genética 21
 Exposición ambiental: Virus, toxinas, estrés.21
 Reacción autoinmune: Las células β que producen insulina en el
páncreas son destruidas.21
5
2.3. Características y causas de la Diabetes Mellitus tipo 2
 Características de la Diabetes Mellitus tipo 2
Se ha determinado que la Diabetes Mellitus tipo 2 se caracteriza

principalmente por:
 Generalmente ocurre después de los 30 años de edad, pero actualmente se

reportan casos en niños y adolescentes.21
 Prevalencia incrementada en algunos grupos étnicos (afroamericanos,
hispano-latinos).
 Frecuentemente obesos.21,22
 Puede o no tener síntomas de hiperglucemia.21,22
 Puede tener también cansancio extremo, visión borrosa, retraso en la
cicatrización, entumecimiento y hormigueo de manos y pies, infección por
levaduras frecuentes.21
 Causas de la Diabetes Mellitus tipo 2
Las principales causas de la Diabetes Mellitus tipo 2 son principalmente:
 Resistencia a la insulina: No se utiliza insulina que genera el organismo

porque existe defecto en el receptor celular, por tanto, la glucosa no está
disponible para ser absorbida en las células para obtención de energía. 21
 Secreción de insulina reducida: El páncreas no secreta suficiente

insulina.21
 Producción excesiva de glucosa del hígado: Resultado de la respuesta
de la defectuosa secreción de insulina.21
2.4. Complicaciones de la Diabetes Mellitus
Las complicaciones de la Diabetes Mellitus son:
6
2.4.1. Complicaciones agudas
 Hiperglucemia
La hiperglucemia es una anormalidad bioquímica muy común. Esta es

frecuentemente detectada en análisis bioquímicos de rutina de pacientes
asintomáticos, y es encontrada durante condiciones que imponen una carga para
las células β pancreáticas, tales como el embarazo, enfermedades severas o
tratamiento con drogas tales como los corticoesteroides.22
 Hipoglucemia
La hipoglucemia (Glucosa sérica<60mg/dL) más bien es el resultado del

tratamiento de la Diabetes que de una manifestación de la misma enfermedad. De
hecho, más bien muchos de los pacientes fallecen a causa de la hipoglucemia que
la hiperglucemia.22
 Descompensación aguda
- Cetoacidosis diabética
La cetoacidosis diabética es la mayor emergencia médica en diabéticos y

permanece como una causa seria de morbilidad principalmente en pacientes con
Diabetes Mellitus tipo 1. Esta es causada por la deficiencia de insulina y un
incremento en hormonas catabólicas, generando la sobre producción de glucosa y
cuerpos cetónicos. Las características bioquímicas marcadas de la cetoacidosis
diabética son: Hiperglucemia, hipercetonemia y acidosis metabólica.22
- Acidosis láctica
La acidosis latica es confirmada por la alta concentración de ácido láctico en la

sangre (usualmente>5.0 mmol/L). El tratamiento es con bicarbonato de sodio vía
intravenosa suficiente para ajustar el pH plasmático por encima de 7.2, junto con
la insulina y glucosa.22
7
- Fallo circulatorio agudo
Esto puede ocurrir en cualquiera de estos tipos de descompensación metabólica

aguda.
2.4.2. Complicaciones crónicas

 Complicaciones microvasculares
- Complicaciones oculares
 Retinopatía: Esta es caracterizada por hemorragia y microaneurismas
asociadas con lesiones microvasculares en la retina las cuales estas
cercanamente relacionadas con la hiperglucemia.23
 Catarata: La catarata es la opacidad ocular permanente y es la causa más
común del deterioro visual en la población de edad avanzada.23
- Nefropatía diabética
Este problema se manifiesta desde una microalbuminuria hasta fallo renal el cual
esta manifestado por un aumento anormal de la creatinina sérica.24
- Neuropatía diabética
La neuropatía es una complicación común de la Diabetes Mellitus, generalmente

es considerada por estar relacionada a la duración y la severidad de la
hiperglucemia. Esta ha sido definida como la presencia de síntomas y/o signos de
la disfunción del nervio periférico en diabéticos después de la exclusión de otras
causas.25
- Complicaciones podológicas (Ulceraciones, infecciones)
La infección podológica en pacientes con Diabetes esta entre las infecciones

bacterianas más comunes encontradas en la práctica clínica. Desafortunadamente
estas infecciones y sus secuelas son también la causa más común de
discapacidad y la razón de la mayor tasa de internamiento hospitalario entre
pacientes diabéticos.26
8
 Complicaciones macrovasculares
- Complicaciones cardiovasculares
 Complicaciones en la arteria coronaria: Genera y es causa de la
morbilidad y mortalidad en pacientes con Diabetes, quienes tienen un
incremento alto de riesgo de presentarla.27
 Hipertensión (Presión arterial>140-90 mmHg) es la comorbilidad común
en Diabetes. La hipertensión es el factor de mayor riesgo en las
enfermedades cardiovasculares y complicaciones microvasculares tales
como la retinopatía y nefropatía. En la Diabetes tipo 1, esta es a menudo el
resultado de una nefropatía subyacente. En la Diabetes tipo 2, esta es
probable de estar presente como parte del síndrome metabólico (obesidad,
hiperglicemia, dislipidemia).27
 Complicaciones cerebrovasculares
El riesgo de un accidente cerebrovascular esta incrementada entre 150 a

400 % en pacientes con Diabetes, empeorando si no existe control
glicémico.27
2.5. Criterio para el diagnóstico de Diabetes Mellitus
 Glucosa sérica rápida > 126 mg/dL (después de no consumo de calorías

por al menos 8 horas).27,28
 Síntomas de hiperglicemia y una glucosa sérica casual> 200 mg/dL

(tomada en cualquier momento del día sin considerar el tiempo de la última
toma de alimento)27
 Test de tolerancia a la glucosa oral (OGTT) (75 gramos por dosis), La

glucosa sérica después de las 2 horas de la ingesta de la dosis de
glucosa>200 mg/dL.28
9
Tabla 1. Niveles de perfil lipídico en pacientes adultos con Diabetes Mellitus3
Lípido Valores
Colesterol LDL < 100 mg/dL
Colesterol HDL Varón: >45 mg/dL
Mujer: >55 mg/dL
Triglicéridos < 150 mg/dL
2.6. Aumento de prevalencia de casos a nivel nacional y mundial
Desde el punto de vista epidemiológico, la Diabetes tipo 2 tiene una prevalencia

en la población mundial que oscila entre 2 a 5 %, exceptuando las poblaciones
nativas de América del Norte y el Pacifico, resaltando el grupo de mayores de 65
años que llegan a tener una prevalencia de hasta 20 %. En Latinoamérica, el
estimado de personas con Diabetes Mellitus ascendió a 13.3 millones en el 2000 y
para el 2030 ha sido proyectado en 32.9 millones. La prevalencia de Diabetes en
América del Sur varía entre 10-15 %, en el Perú ésta se estima en 5.5%29.
En el 2013, globalmente se ha estimado que 382 millones de personas sufren de

Diabetes Mellitus con una prevalencia de 8.3 %. América del Norte y el Caribe son
las regiones con la más alta prevalencia con una prevalencia de 11 %29.
Con el fin de obtener una perspectiva más amplia del aumento de la prevalencia
de Diabetes Mellitus en lo que se refiere al Perú, la Dirección General de
Epidemiología (DGE) propuso un sistema de vigilancia de Diabetes basada en
casos atendidos en los servicios de salud, la misma que complemento los
indicadores de prevalencia de Diabetes Mellitus en población general y en grupos
de riesgo, así como aquellos que muestran la prevalencia de los factores de
riesgo. El Sistema de Vigilancia de Diabetes en servicios de salud se desarrolla
desde el año 2010 como un sistema piloto en algunos hospitales de Lima y de las
regiones del país20.
10
Figura 1. Número de casos de Diabetes registrados en el periodo 2010-201320
Desde el inicio de la Vigilancia Epidemiológica de Diabetes al 2013 se habían

registrado 5001 casos de Diabetes en 16 Hospitales (seis de ellos en Lima) y en
una clínica privada de Lima. Entre enero y junio del 2013, se han registrado 928
casos, esto representa el 18,6 % de los casos registrados desde el inicio del piloto
y el 24,2 % de los casos registrados el año 201220.
Desde la puesta en funcionamiento, el Sistema de Vigilancia de Diabetes ha

recogido un número creciente de casos, al mismo tiempo que, el número de
hospitales ha ido en incremento. El primer semestre del año 2013 hubo una
reducción del número de casos registrados, atribuidos a la ausencia de asistencias
técnicas desde las Direcciones Regionales de Salud (DIRESA) a los hospitales y
desde la DGE a las DIRESA. También hubo un retraso importante en la
aprobación del documento que no ha permitido la implementación del Sistema
Nacional de Vigilancia Epidemiológica en otras DIRESA20.
2.6.1. Diabetes según tipo
En el Perú, el 91,1 % de los casos registrados al primer semestre del 2013

correspondieron a Diabetes Mellitus tipo 2, el 1,7 % corresponde a Diabetes
11
Mellitus tipo 1, el 1.0 % a Diabetes gestacional y un 5,8 % corresponde a casos en
los cuales no se ha especificado el tipo de Diabetes.
Figura 2. Casos notificados de Diabetes según tipo (Primer semestre-2013)20
Si asumimos que estos casos corresponden a Diabetes Mellitus tipo 2,

considerando que en la historia clínica consta sólo el diagnóstico de Diabetes (sin
especificar), los casos de Diabetes Mellitus tipo 2 constituirían el 96,9 % de los
casos notificados20.
2.7. Relación entre la Diabetes Mellitus y radicales libres

La Diabetes experimental en animales ha provisto una visión amplia en cuanto a
los trastornos fisiológicos y bioquímicos en la Diabetes. Muchos de estos
trastornos se manifestaron en cambios significativos en el metabolismo lípido y su
estructura30. Estos cambios estructurales son claramente de naturaleza oxidativa y
están asociados con el desarrollo de enfermedades vasculares 31. En ratas
diabéticas, la peroxidación lipídica incrementada estuvo también asociada con la
hiperlipidemia32. Durante la Diabetes, una alteración profunda en la concentración
y composición de los lípidos ocurre. El hígado y el riñón son importantes para la
homeostasis de la glucosa y los lípidos, ellos participan en el consumo, oxidación
12
y la conversión metabólica de los ácidos grasos libres, síntesis de colesterol,
fosfolípidos y triglicéridos.32 Entonces es por ello que se espera tener cambios en
el hígado y el riñón durante la Diabetes Mellitus.
Existe evidencias que indican una relación entre la hiperinsulinemia y la

producción de radicales libres. En adipocitos humanos intactos, la exposición a
insulina lleva a una acumulación dosis y tiempo dependiente de hidrogeno
peroxidasa en el medio de suspensión33. En ratas, las concentraciones
incrementadas de insulina seguidas de una inyección intraperitoneal de dextrosa
han sido encontradas por estar asociadas a la producción incrementada de
radicales libres34. El origen de la concentraciones de radicales libres en
condiciones de insulino-resistencia podrían ser debido a (a) una sobrecarga
insulino-mediada de la actividad del sistema nervioso simpático (b) un aumento de
las concentraciones de ácidos grasos libres séricos.
Muchos estudios han mostrado que el incremento de peróxidos lipídicos y/o estrés
oxidativo está presente en pacientes diabéticos4, 35,36. El estrés oxidativo puede
ser incrementado antes de los signos de las complicaciones de la Diabetes
Mellitus. Sin embargo, el rol del estrés oxidativo en la iniciación y progresión de la
Diabetes sigue siendo incierto. Es discutible si el estrés oxidativo precede a la
aparición de las complicaciones diabéticas o si esta meramente refleja la
presencia de complicaciones o las consecuencias de las complicaciones. En la
Diabetes, el estrés oxidativo parece causado por la producción incrementada de
ROS, reducción en las defensas antioxidantes y el estado REDOX celular
alterado37. El estrés oxidativo incrementado en la Diabetes tipo 2 tiene además
una variedad de efectos importantes en la aterogénesis, incluyendo oxidación
lipoproteica, particularmente oxidación de colesterol LDL. La peroxidación lipídica
de ácidos grasos poliinsaturados, una de las reacciones de los radicales in vivo,
puede adecuadamente reflejar estrés oxidativo incrementado en Diabetes38.
La susceptibilidad diabetes-inducida hacia la peroxidación de lipoproteínas de baja

densidad (LDL) es prevenida ante la presencia de vitamina E 39. El suplemento
13
dietético de vitamina E también mejora el metabolismo de ácidos grasos y
disminuye la peroxidación lipídica en tejido de ratas diabéticas. Los cambios en
enzimas antioxidantes inducidos por diabetes en diferentes órganos son
corregidos en diferentes grados por la vitamina E40, pero la combinación de
vitamina E con otro antioxidante, estobadina, la cual está clasificada como un
derivado piridoindol de ϒ-carbolina, proveen protección superior contra los déficits
de estas enzimas41. Como un antioxidante crítico para la protección de los lípidos
plasmáticos, la vitamina C actuara en condiciones tales como la hiperglucemia. La
administración crónica de vitamina C de 1 g/dL en pacientes de edad avanzada
con Diabetes tipo 2 disminuye los radicales libres plasmáticos e incrementa los
niveles de glutatión reducida (GSH) celular sobre un periodo de 4 meses. 42,43
Los frutos del camu-camu (Myrciaria dubia Mc Vaugh Kunth) son fuente ricas de
vitamina E, vitamina C y polifenoles, conocidos como compuestos antioxidantes 44.
Por lo tanto, el enfoque actual hacia la investigación de la Diabetes para estudiar
la planta de Myrciaria dubia de la cual se cree que genera regulación del
metabolismo de la glucemia, así como otras complicaciones metabólicas.
2.8. Intervención terapéutica en Diabetes Mellitus
El objetivo del tratamiento es principalmente salvar la vida de los pacientes y

aliviar los síntomas que estos pudieran presentar. Los objetivos secundarios son
prevenir a largo plazo las complicaciones de la Diabetes Mellitus y por eliminación,
varios factores de riesgo, con el fin de incrementar la longevidad de los
pacientes.22 La terapia de reemplazo de insulina es el pilar para los pacientes con
Diabetes tipo 1 mientras las modificaciones en la dieta y estilo de vida son
consideradas la piedra angular para el tratamiento y manejo de la Diabetes tipo 2.
La insulina es también importante en la Diabetes tipo 2 cuando los niveles de
glucosa sérica no pueden ser controlados por la dieta, la pérdida de peso, ejercicio
y medicación vía oral.3 Los agentes hipoglucemiantes orales son también útiles en
el tratamiento de la Diabetes tipo 2. Los agentes hipoglucemiantes orales incluyen
a las sulfonilureas, biguanidas, inhibidores de la α-glucosidasa y las
14
tiazolidenodionas.3 El objetivo principal de estos fármacos es corregir el desorden
metabólico subyacente, tales como la resistencia a la insulina y la inadecuada
secreción de insulina. Ellos deberían ser prescritos en combinación con una dieta
apropiada y cambios en el estilo de vida. Evidentemente se debe recalcar que las
estrategias planteadas para el cambio de la dieta y estilos de vida sedentarios son
para reducir el peso, mejorar el control glucémico y reducir el riesgo de
complicaciones cardiovasculares, las cuales son causa del 70 al 80 % de muertes
de aquellos que tienen Diabetes.17
2.8.1. Intervención no farmacológica en el tratamiento de la Diabetes Mellitus
Los pacientes con Diabetes deben ser educados con respecto a nutrición,
ejercicios y fármacos dirigidos a reducir la glucosa plasmática. Es de gran
importancia la participación de educadores certificados y de personal sanitario
(enfermera, nutricionista, farmacéutico) especializados en educación de pacientes.
En términos de régimen sanitario, se utiliza el término tratamiento médico
nutricional para describir el régimen alimentario que coordina el consumo de
calorías y otros aspectos de la Diabetes como fármacos y ejercicios. En la
Diabetes tipo 1 es de gran importancia equilibrar el consumo de calorías con la
dosis de insulina. En la Diabetes tipo 2 la dieta se dirige a perder peso, disminuir la
presión arterial y el riesgo de ateroesclerosis. El ejercicio proporciona múltiples
beneficios para pacientes con Diabetes, pero la dosificación del tratamiento
hipoglucemiante puede requerir ajuste para evitar la hipoglucemia relacionada con
el ejercicio.
Además de las modificaciones en el estilo de vida, los principales métodos no

farmacológicos incluyen descenso de la progresión del metabolismo normal de la
glucosa con cirugía bariátrica.3 Varios procedimientos, lo que incluye la colocación
de bandas gástricas, derivación gástrica y derivación biliopancreática mejoran la
tolerancia a la glucosa y previenen o corrigen la Diabetes tipo 2.
15
2.8.2. Intervención farmacológica en el tratamiento de la Diabetes Mellitus
Las metas de la terapia para la Diabetes Mellitus tipo 1 y 2 son: (1) eliminar
síntomas relacionados con la hiperglucemia; (2) reducir o eliminar las
complicaciones micro y macrovascular a largo plazo y (3) permitir al paciente
alcanzar un estilo de vida normal tan normal sea posible. Para alcanzar a lograr
estas metas, el medico debería identificar un nivel normal basal de control de
glucemia para cada paciente, proveer al paciente con los recursos educativos y
farmacológicos necesarios para que estos alcancen este nivel. Debe percatarse
uno que no solamente los fármacos ayudan a controlar la hiperglucemia, sino
también debería tomarse precaución de las actividades dietéticas y físicas en el
estilo de vida diario.3
2.8.2.1. Tratamiento farmacológico en la Diabetes Mellitus tipo 1
La insulina es la base para el tratamiento de casi todos los individuos con Diabetes
1; puede administrarse por vía intravenosa, intramuscular o subcutánea. El
tratamiento a largo plazo depende principalmente de inyecciones subcutáneas. La
administración subcutánea de insulina difiere de la secreción fisiológica de la
hormona en dos formas principales:
 La cinética de absorción no reproduce el incremento rápido y disminución

de la insulina endógena en respuesta a la administración de glucosa
después de la administración oral o intravenosa.
 La insulina inyectada se administra a la circulación periférica en lugar de
liberarse hacia la circulación portal. Así, la proporción de insulina
portal/periférica no es fisiológica y esto puede alterar la influencia de la
insulina en el metabolismo hepático.
No obstante, la insulina suministrada a la circulación periférica puede causar

glucemia normal o casi normal.
16
 Preparaciones de insulina
Las formulaciones de insulina actualmente son generadas a partir de la tecnología

de ADN recombinante y consiste en la secuencia de aminoácidos de la insulina
humana. La insulina de animales tales como de vacunos o porciones no son
usadas más.
Las preparaciones de insulina se clasifican con base en su duración: de acción

corta y de acción prolongada. En la categoría de acción corta, se diferencian la
insulina de acción muy rápida (aspártica, glulisina, lispro) de la insulina regular. De
la misma forma, algunos diferencian las preparaciones de acción prolongada
(detemir, glargina) de la insulina NPH.
Tabla 2. Propiedades de las preparaciones de insulina3
Tiempo de acción
Inicio (h) Efecto Duración (h)

Preparación
máximo (h)
Acción Aspártica <0.25 0.5-1.0 3-4
corta Glulisina <0.25 0.5-1.0 3-4
Lispro <0.25 0.5-1.5 3-4
Regular 0.5-1.0 2-3 4-6
Acción Detemir 1-4 ---(*) 20-24

prolongada Glargina 1-4 ---(*) 20-24
NPH 1-4 6-10 10-16
Combinacio 75/25-75% lispro protamina, 25% <0.25 1.5 10 a 16

nes de lispro <0.25 1.5 10 a 16
insulina 70/30-70% aspártica protamina, 30%
aspártica <0.25 1.5 10 a 16
50/50-50% lispro protamina, 50% 0.5-1.0 Dual (**)
10 a 16
lispro
70/30-70% NPH, 30% regular
(*)Las insulinas glargina y detemir tienen poca actividad máxima.
(**)Acción máxima dual: dos puntos con concentraciones máximas, el primero en 2 a 3 horas; el
segundo varias horas más tarde.
17
2.8.2.2. Tratamiento farmacológico de la Diabetes Mellitus tipo 2
El tratamiento farmacológico para el manejo de la Diabetes Mellitus tipo 2 incluyen

agentes farmacológicos orales e insulina, muchos de los médicos prefieren a los
agentes farmacológicos orales hipoglucemiantes como la opción inicial.3
Tabla 3. Comparación de los fármacos orales utilizados para el tratamiento

de la Diabetes Mellitus
FÁRMACOS MECANISMO DE EJEMPLOS VENTAJAS DESVENTAJAS

ORALES ACCIÓN ESPECÍFICAS ESPECÍFICAS
Biguanidas (**) Disminuye producción Metformina Neutral en cuanto al Diarrea, náuseas,

glucosa hepática peso, no causa acidosis láctica
hipoglucemia
Inhibidores Disminuye absorción Acarbosa, Reduce glucemia Flatulencia,

α-glucosidasa (**) de glucosa en tubo miglitol postprandial alteraciones de
digestivo pruebas de función
hepática
Inhibidores de Prolongada acción de Saxagliptina, No causa -
dipeptidil peptidasa- GLP-1 endógena Sitagliptina, hipoglucemia
4 vildagliptina
Sulfonilureas (**) Incremento de Glibenclamida Inicio de acción en Hipoglucemia, aumento

secreción de insulina corto tiempo, de peso
disminuye glucosa
postprandial
Tiazolidinedionas Disminuye resistencia a Rosiglitazona, Reduce Edema periférico,
(**) insulina, aumento en pioglitazona necesidades de insuficiencia cardiaca
utilización de glucosa insulina congestiva, aumento
de peso, fracturas,
edema macular.
(*) Utilizados en combinación con insulina para el tratamiento de Diabetes Mellitus tipo 1
(**) Utilizados para el tratamiento de Diabetes Mellitus tipo 2
18
2.9. Modelo de inducción de Diabetes con estreptozotocina
La estreptozotocina (STZ) es un antibiótico de amplio espectro de la Streptomyces

achromogenes. Desde el hallazgo que la estreptozotocina posee propiedades
diabetogénicas mediadas por la destrucción de las células β pancreáticas, este
componente ha sido extensamente utilizado para inducir Diabetes en modelos
experimentales. La toxina estreptozotocina, especifica en células β, un análogo de
GlcNAc, ha sido utilizada en modelos animales de Diabetes, a pesar de una
comprensión incompleta de como la estreptozotocina realmente causa la
destrucción de células β45.
La habilidad de la estreptozotocina para actuar como un donador de NO ha

conllevado a muchos investigadores a postular que el NO está involucrado46, pero
el efecto diabetogénico de la estreptozotocina in vivo no puede ser fácilmente
duplicada con N-metil-N-nitrosourea (porción de la estreptozotocina que en
realidad dona NO) 47.
Figura 3. Estructura molecular de la estreptozotocina
Recientemente, se ha demostrado la capacidad de la estreptozotocina para inhibir

la enzima o-GlcNAc-selectiva, N-acetil-b-d-glucosaminidasa, la cual remueve el o-
GlcNac de la proteína, y por tanto la enzima final en la vía de la o-glicosilación en
la célula β48. La vía de la o-glicosilación de proteínas en células beta inicia con la
conversión de glucosa en glucosa 6-fosfato y luego a fructosa 6-fosfato. La enzima
glutamina fructosa 6-fosfato aminotransferasa convierte la fructosa 6-fosfato a
19
glucosamina 6-fosfato49, proporcionando la UDPGlcNAc, la cual es necesaria para
la glicosilación de proteínas50. En las células beta, la o-glicosilación de proteínas
citosólicas y nucleares ocurre con el vínculo del monosacárido GlcNAc a las
proteínas en los residuos de serina y treonina. Las células beta pancreáticas han
sido propuesta por ser selectivamente sensible a la estreptozotocina debido a que
la enzima responsable de transferir o-GlcNAc a las proteínas, la o-GlcNAc
transferasa, esta expresada a niveles altos en las células beta que en otra célula48,
51, aunque este punto de vista ha sido cuestionada por al menos un grupo de
investigación52.
2.10. Aspectos taxonómicos generales de la planta de camu-camu

2.10.1 Clasificación botánica
La clasificación botánica53 de la especie Myrciaria dubia (HBK) Mc. Vaugh

es:
Reino: Vegetal
División: Fanerógamas
Clase: Dicotiledóneas
Orden: Myrtales
Familia: Myrtaceae
Género: Myrciaria
Especie: M. dubia (HBK) Mc. Vaugh
Nombre vulgar: “Camu-camu”, “camo-camo”, “caçari”, “arazá de agua”.
Sinónimos: Myrciaria divaricata (Bentham) O. Berg, Myrciaria paraensis O.

Berg, Myrciaria spruceana O. Berg, Psidium dubium H.B.K.
20
2.10.2. Hábitat y descripción
La planta es un arbusto arborescente perenne de crecimiento
indeterminado. Al estado natural se encuentran plantas con alturas mayores
de 8 metros. Por su arquitectura se distinguen tres tipos de plantas:
columnar u ortotrópica, que se caracteriza por tener poca o nula
ramificación; intermediaria, caracterizada por presentar un pie de planta o
pequeño tallo principal, con ramificación a una altura de 50 a 70 cm del
nivel del suelo; y cónica, ramificada o plagiotrópica con ramificación basal 53.
Desde el punto de vista agronómico, este último tipo de planta es la
deseada en las plantaciones por presentar gran número de ramas que son
el sostén de los frutos.
Presenta un sistema radicular conformado por una raíz principal pivotante,
de poco crecimiento y un gran número de raíces secundarias horizontales
que cumplen además, la función de fijación de la planta en el suelo.
Los tallos son leñosos, ramificados, crecen de 4 a 8 metros de altura y 15
cm de diámetro, bastante ramificados desde la base. Cortezas externas de
colores pardo-claro a pardo-bronceado, con ritidomas que se desprenden
como pequeñas placas laminares; cortezas vivas lisas de colores pardo-
verdosos53.
Figura 4.- Frutos de Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu)
21
Las hojas son simples y opuestas, sin estípulas, con glándulas secretoras
oleíferas al igual en los tallos tiernos, lanceoladas u ovoides, de 3 a 12 cm
de largo y de 1.5 a 4 cm de ancho, márgenes ligeramente ondulados,
ápices caudado-acuminados, bases subobtusas a redondeadas, haz verde
oscuro ligeramente lustroso, envés, verde opaco con nerviación
prominente. Presenta abundantes puntos translúcidos, peciolo corto de 3 a
8 mm53.
Los botones florales aparecen agrupados en un eje floral principal, y una
misma yema floral puede sostener desde 1 hasta más de 20 botones. Las
flores son perfectas o completas, por su sistema reproductivo son
hermafroditas y por su sistema de apareamiento son alógamas
(xenogamia), además de cierto grado de alogamia por geitonogamia. El
cáliz tiene 4 sépalos de color verde, la corola 4 pétalos de color blanco que
luego de la fecundación se tornan de color marrón; androceo con
aproximadamente 125 estambres y un gineceo cuyo estigma se ubica en un
plano superior al que ocupan los estambres (hercogamia-monomorfismo
longistílico). También presentan dicogamia-protoginia; es decir primero
aparece el gineceo, luego el androceo. La hercogamia y la dicogamia; son
condiciones de incompatibilidad53.
Los frutos son bayas de forma globular, color rojo oscuro, de tamaños y
pesos variados: pequeños, aquellos menores de 2.5 cm de diámetro y
menores de 9 g, hasta grandes mayores de 3 cm de diámetro y mayores de
13 g. Las semillas son reniformes, de color marrón, aplanadas, cubiertas
por fibrillas de color blanco. El peso de las semillas varía desde menos de
0.5 g hasta más de 1.0 g. Se encuentran en número de 1 a 4 por fruto 53.
2.10.3. Origen
El camu-camu es una planta arbustiva riparia de los ríos de aguas negras

de la Amazonía peruana, aunque también se encuentra en zonas con
aguas claras. La colección de germoplasma efectuada por INIA (Instituto
22
Nacional de Investigación Agraria) en el Perú, indica que las mayores
concentraciones de poblaciones naturales se encuentran en los ríos
Amazonas y Ucayali54 (entre las localidades de Pucallpa e Iquitos), en el
curso inferior del río Marañón (cerca de su confluencia con el río Ucayali) y
del Napo (cerca de su unión con el Amazonas), así como sus afluentes y
lagos de aguas oscuras. La concentración de poblaciones naturales de
camu-camu tiende a disminuir en el curso del río Amazonas del Perú hacia
el Brasil54.
2.10.4. Ecología y adaptación
En hábitat natural del camu-camu es el bosque aluvial inundable, siendo

una especie ribereña, crece y desarrolla bien en condiciones características
de un medio ambiente tropical. Es tolerante a la inundación y puede quedar
totalmente sumergido en el agua cuatro a cinco meses. En estas zonas la
precipitación pluvial está entre 1700 y 4000 mm/año bien distribuidas sin
periodo seco, humedad relativa mayor de 85 %, la temperatura promedio en
25 °C o más, con mínimas medias anuales superiores a 20 °C y los suelos
inundables reciben limo anualmente74.
Sin embargo, se adapta a suelos con buen drenaje y regímenes hídricos

con sequías de hasta dos meses, como los que ocurren en la zona de
Pucallpa, Perú. Se han efectuado ensayos con buenos resultados en zonas
con 1500 hasta 4000 mm de precipitación por año, tanto en suelos con
buen como con mal drenaje. Tolera bien los suelos ácidos de baja fertilidad,
aunque sus rendimientos son mayores cuando la distribución de las lluvias
y la fertilidad del suelo son mejores74.
El camu-camu es una planta heliófita, es decir, que requiere de abundante

luz para favorecer los procesos de fotosíntesis; bajo condiciones de
sombra, se detiene el metabolismo y las plantas no crecen.
La condición de sumersión temporal de las plantas, favorece la uniformidad
en las diferentes etapas fenológicas del cultivo, pero se corre el riesgo de
23
perder los frutos debido a que la fructificación coincide con la época de
creciente de los ríos amazónicos74.
2.10.5. Importancia y usos
La importancia del camu-camu radica, en que sus frutos tiene alto contenido
de ácido ascórbico, más que cualquier otro vegetal o especie silvestre
(2000 a 3000 mg/100 g de pulpa), es decir, es su mayor potencial. La fruta
genera una pulpa de color rosado natural cuando se extrae de frutos
maduros, cuanto más maduro este el fruto, más intenso el color.
Contrariamente a otros frutales, el contenido de ácido ascórbico en el camu-
camu aumenta hasta que la fruta está pintona o semimadura, después de lo
cual disminuye solamente 5 a 10 % cuando la fruta madura
completamente54.
La pulpa de camu-camu, por su alto contenido de ácido ascórbico, se ha

constituido como la principal materia prima de la industria alimentaria y
farmacéutica. La pulpa es empleada en consumo directo para la
preparación de refrescos y cócteles; en agroindustria se elaboran helados,
néctares, yogurt, mermelada, vinos, vinagre, entre otros. En la industria
farmacéutica principalmente se elaboran grageas y cápsulas que se
consumen por las bondades de la vitamina C como poderoso antioxidante
en general55.
2.10.6. Composición química y valor nutricional
La principal característica de la pulpa de camu-camu es su alto contenido

de ácido ascórbico.
La pulpa constituye entre 50 y 55 % del peso del fruto 56. Análisis efectuados
con la cáscara indican que ésta tiene hasta 5 % de ácido ascórbico, pero
constituye una proporción muy baja del peso del fruto y normalmente se
descarta en el proceso de pulpeado.
24
Comparativamente con otros frutales tropicales, el camu-camu es,
realmente, una fuente con alta concentración de vitamina C (ácido
ascórbico)
En el Perú se ha iniciado la siembra de plantaciones comerciales en la zona

de Pucallpa. El precio del ácido ascórbico natural es varias decenas de
veces superior al precio del producto sintético, por lo que puede ser un
cultivo rentable para los agricultores.
El mercado local está dado básicamente por su consumo en las

poblaciones de Pucallpa e Iquitos, para la fabricación de refrescos, helados,
mermeladas y vinagre.56
2.10.7. Fenología
El camu-camu es una planta perenne, y como todas las plantas superiores

tiene dos grandes fases en su ciclo biológico: fase vegetativa y fase
reproductiva.La fase vegetativa, se inicia con la germinación de la semilla
(10 a 12 días), emergencia de la plántula (20 días), brotamiento de ramas
basales y brotamiento de ramas a lo largo del tallo, crecimiento y
engrosamiento de tallo y ramas. La duración de esta fase es
aproximadamente 3 años en plantas francas y 1 año en plantas propagadas
vegetativamente por acodo aéreo. Durante estos tres primeros años de la
plantación se debe hacer el manejo de las plantas como las podas de
formación y aporque, para favorecer y estimular la salida de ramas basales
y obtener el ideotipo ramificado deseado en menor tiempo.55
La fase reproductiva, se inicia a los 3 años de edad de la planta. En esta

fase se distinguen las siguientes etapas fenológicas: Defoliación (caída de
las hojas), puede ser en forma natural o por efecto de factores externos
como el agua de la creciente. La foliación ocurre a los 25 días después de
la defoliación, los botones florales aparecen a los 105 días, la floración
ocurre a los 120 días, fructificación e inicio de cosecha de fruto se da 210
25
días y el fin de cosecha a los 240 días. En total la planta de camu-camu
adulta, necesita 8 meses para cumplir su ciclo productivo, 4 meses está en
etapa de reposo. La defoliación inmediata después de la cosecha, evita la
fase de reposo y permite obtener una producción continua55
2.11. Liofilización de la pulpa de camu-camu y sus ventajas
Actualmente, existe una necesidad de conservar alimentos mediante

métodos que además de prolongar la vida útil de los productos, se
conserven sus cualidades organolépticas y posibles componentes activos.
Para esto se desarrollan diversas técnicas y las actuales siguen
evolucionando a fin de aumentar el rendimiento, reducir costos, lograr
mejoras en determinados parámetros de calidad de los alimentos (textura,
sabor, color), entre otros.15, 66
Uno de estos métodos es la llamada liofilización, que se basa en el

desecado de determinados materiales por medio de la sublimación del agua
contenida en estos. Se realiza congelando el producto y se remueve el hielo
aplicando calor en condiciones de vacío, de forma que el hielo se sublime
evitando el paso por la fase liquida58. En ciertos estudios realizados con
camu-camu, se han observado que las muestras sometidas a liofilización
entre -50 oC y -70 oC tienen una pérdida total de ácido ascórbico en 4
meses aproximadamente del 18.4 % de la concentración inicial de la
materia prima, a comparación del método de congelamiento rápido (-22.8
%) y la conservación a -22 °C (-24.6%)15.
Tabla 4. Pérdida acumulada de vitamina C en los mejores tratamientos

por ensayo al término de la evaluación15
26
Se ha determinado además que en las evaluaciones organolépticas se
observa que el tratamiento que preserva el sabor y olor de la materia prima
es la de la liofilización59. Por lo tanto se había concluido que el mejor
tratamiento por concentración es el de liofilización, ya que se observa una
aceptable perdida de ácido ascórbico durante el almacenamiento, mantiene
el sabor, color, aroma de la pulpa de camu-camu, además que es
sumamente sencillo transportarla por largas distancias y una concentración
del contenido de vitamina C en 16 veces59, por lo el diseño de productos
nutracéuticos sería mucho más sencillo. Considerando el hecho que la
perdida de ácido ascórbico y compuestos antioxidantes en pulpa liofilizada
de camu-camu se debe principalmente a la humedad absorbida y no al
tiempo de conservación, se decidió que la forma de conservación fuese en
envases de vidrio empacadas al vacío, con cobertura de papel aluminio a -
10 oC59. Considerando ello, se plantea el análisis de los compuestos
antioxidantes, tales como ácido ascórbico, polifenoles totales y de
determinación de la actividad hipoglicemiante a partir del liofilizado de
camu-camu, puesto que debido a las características de este insumo, se
puede proyectar a diseñar productos nutracéuticos que presenten estos
compuestos con actividad biológica.
3. HIPÓTESIS
- El liofilizado de la pulpa de Myrciaria dubia Mc Vaugh (Kunth) (camu-camu)

en las dosis de 5.74, 28.7 y 57.4 mg/kg, presenta un efecto significativo
(p<0.05) en la glucosa sérica, el peso corporal, perfil lipídico y actividad
antioxidante in vivo en ratas diabéticas inducidas por estreptozotocina.
27
4. OBJETIVOS
4.1. General
Realizar el análisis químico-proximal, cuantificación de los componentes bioactivos

(polifenoles totales, ácido ascórbico) del liofilizado de la pulpa del fruto de
Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) y evaluar el efecto en la glucosa
sérica, peso corporal, perfil lipídico y actividad antioxidante in vivo (ABTS+) en
ratas normoglucémicas y ratas diabéticas inducidas por estreptozotocina.
4.2. Específicos
- Realizar el análisis químico-proximal del liofilizado de la pulpa del fruto de

Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu).
- Cuantificar los componentes bioactivos del liofilizado de la pulpa del fruto de

Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu): ácido ascórbico y
polifenoles totales mediante HPLC y espectrofotometría UV-visible
respectivamente.
- Cuantificar, a través de la prueba DPPH, la actividad antioxidante in vitro

del extracto metanólico obtenido a partir del liofilizado de la pulpa del fruto
de Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu).
- Evaluar el efecto del liofilizado de la pulpa del fruto de Myrciaria dubia

(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en el peso corporal de
ratas normoglucémicas y al inicio, durante y después del tratamiento.

(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en el peso corporal de
ratas diabéticas al inicio, durante y después del tratamiento.
28
(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en los niveles de
glucosa sérica de ratas normoglucémicas al inicio, durante y después del
tratamiento.

(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en los niveles de
glucosa sérica de ratas diabéticas al inicio, durante y después del
tratamiento.

(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en el perfil lipídico de
ratas normoglucémicas.

(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en el perfil lipídico de
ratas diabéticas.

(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en la actividad
antioxidante in vivo (ABTS+) de ratas normoglucémicas.

(H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) en diferentes dosis en la actividad
antioxidante in vivo (ABTS+) de ratas diabéticas.
29
5. MATERIALES Y MÉTODOS
5.1. Materiales
5.1.1. Equipos de laboratorio
Potenciómetro (Oakton Instruments Modelo Económico Serie 25375, USA);

Espectrofotómetro UV-Visible (Hewlett Packard Modelo HP-8453 Serie
US74901456, USA); Balanza Analítica (Mettler Toledo Modelo AB54 Serie
P23502, Suiza); Mufla (NEY Vulcan Modelo A-550, USA); Destilador Kjeldahl,
HPLC-DAD-RID-FLD (Agilent Technologies Modelo 1260 Infinity, USA); Baño
María (Precision Scientific Modelo 283-230, USA); Agitador Magnético (Cimarec®
3 Modelo SP47230, USA); Baño Ultrasónico (Bransonic Modelo CPX5800H-E,
USA); Refrigeradora-Congeladora (Moraveco); Cocinilla de Digestión; Liofilizador;
Medidor de glucosa; Estufa; Balanza electrónica; Rotavapor; Equipo GPS móvil
(Garmin)
5.1.2. Reactivos de laboratorio
Ácido Bórico (Merck), Verde de Bromocresol (Fisher Scientific), Estreptozotocina

(Sigma-Aldrich), Hidróxido de sodio (J.T. Baker), Sulfato de cobre pentahidratado
(Merck), Sulfato de Sodio (J.T. Baker), Antrona (Merck), Rvo Folin Ciocalteau
(Sigma-Aldrich), Carbonato de calcio (Merck), Metanol (J.T. Baker), Ácido
Sulfúrico (Merck), Ácido Clorhídrico (Merck), Ácido Perclórico (Merck), Éter etílico
(Tedia), Ácido Gálico Monohidratado, Etanol (J.T. Baker), Rvo DPPH (Sigma-
Aldrich), Acetonitrilo (J.T. Baker), Ácido Acético Glacial (J.T. Baker), Ácido
Ascórbico (Merck), Hexano Sulfonato de Sodio (J.T. Baker)
5.1.3. Muestras vegetales
En el presente estudio se emplearon frutos de camu-camu, los cuales fueron

recolectados en los terrenos de la Empresa FRUSELVA S.A.C, la cual cuenta con
dos áreas de siembra y producción permanente de las plantas de camu-camu, las
cuales fueron ubicadas utilizando sistema de GPS. Estos frutos fueron
30
recolectados tomando en consideración el estado de madurez (pintón maduro), las
muestras fueron tomadas durante el mes de diciembre del 2014.
5.1.3.1. Ubicación de los sembríos de camu-camu
Estos terrenos se encuentran cerca al distrito de Campoverde, en la provincia de

Coronel Portillo departamento de Ucayali (Anexo 1). La zona de muestreo fue
marcada con los puntos siguientes:
Por el lado derecho, punto inicial: 08o 27’ 04.4’’ S//74o 46’ 54.2’’ W
Punto final: 08o 27’ 03.8’’ S//74o 46’ 53.7’’
Por el lado izquierdo, punto inicial: 08o 27’ 04.2’’ S//74o 46’ 54.3’’ W
Punto final: 08o 27’ 03.7’’ S//74o 46’ 53.8’’
5.1.3.2. Cantidad de frutos obtenidos
Por motivos de transporte, preservación y disponibilidad de muestra, se recogió

por triplicado 1.5 kg de frutos fresco de camu-camu.
5.1.3.3. Procesamiento de frutos obtenidos
Los frutos fueron lavados con agua potable y luego con agua destilada,
posteriormente fueron secados individualmente. Se procedió a utilizar una cuchilla
para retirar la cáscara y las semillas de cada fruto, evitando que en éstas se
presenten residuos de pulpa del fruto y viceversa.
5.1.3.4. Liofilización de pulpa de camu-camu
La pulpa de camu-camu obtenida a partir de frutos en estado de maduración

(pintón maduro) fue obtenida de frutos seleccionados maduros; la cual fue
uniformizada para obtener la muestra de pulpa de camu-camu.
Acorde con la metodología dada por Vega et al. 15, la pulpa de camu-camu fue
envasada en bolsas de polietileno de media densidad, color transparente. Fueron
31
pesadas en una balanza con escala de 0 a 2500 g. La pulpa envasada, fue
almacenada en congeladores a temperaturas de -20 °C durante 48 horas, luego
fue llevado al centro de procesamiento.
La pulpa fue descongelada para ser distribuida en las bandejas del liofilizador y
ser procesadas con una temperatura de -40 °C y una presión de vacío de ocho
mbars por 24 horas. El proceso fue efectuado en un liofilizador de tamaño piloto,
usando amoniaco como refrigerante.
Las muestras liofilizadas fueron envasadas en frasco de vidrio, selladas

herméticamente y almacenadas a -20 °C.
5.1.3.5. Preparación del Extracto metanólico
Para la preparación del extracto metanólico se tomó 1.5 g de la muestra liofilizada

en un recipiente de 200 mL, se diluyo con 125 mL de solución de metanol al 80%.
Se mantuvo almacenado en un ambiente protegido de la luz y aire por 24 horas,
en constante agitación con un agitador orbital, según Pascal et. al 60.
El extracto obtenido fue centrifugado a 3500 rpm a temperatura ambiente por 15

minutos, se tomó el sobrenadante y se filtró con un filtro de 0.45 µm de porosidad.
El filtrado se almacenó herméticamente a 8 °C y fue protegido de la luz por 24
horas.
5.1.4. Animales de Laboratorio
Se utilizaron 54 ratas Holtzman machos en total (entre 120 g-200 g.). Las cuales
fueron resguardadas en jaulas tipo IV (380 cm x 200 cm x 590cm) con
alimentación y agua ad libitum.
5.1.4.1. Condiciones de hábitat y alimentación
La temperatura en la sala de experimentación para los animales fue de 22 °C (±3

°C). Con respecto a la humedad relativa, se mantuvo por encima 30 % y por
debajo de 60 %. La iluminación fue artificial, con una secuencia de 12 horas de luz
32
y 12 horas de oscuridad. Considerando la alimentación, se consideró la dieta
convencional del bioterio con una suplementación ilimitada de agua potable, y con
el alimento medido, administrado durante las tardes. Los animales fueron divididos
en jaulas en función de su tratamiento.
5.1.4.2. Preparación de animales
Los animales fueron seleccionados, presentando pesos similares, marcados para

permitir identificación individual, y ocupando sus respectivas jaulas, 5 días
anteriores al inicio del tratamiento para permitir aclimatación a las condiciones del
medio.
5.1.4.3. Diseño experimental
Se utilizaron 54 ratas machos, las cuales se dividieron en 9 grupos:
 GRUPO 1 (G1-Control 0): 6 ratas normoglucémicas sin tratamiento (agua

destilada) durante 21 días.
 GRUPO 2 (G2- Normoglicémicas+5.74 mg/kg): 6 ratas normoglucémicas,
administración de liofilizado de pulpa de Myrciaria dubia, dosis de 5.74
mg/kg (equivalente a dosis de 100 mg/kg de pulpa fresca de camu-camu104)
durante 21 días.
 GRUPO 3 (G3-Normoglicémicas+28.7 mg/kg): 6 ratas normoglucémicas,
administración de liofilizado de pulpa de Myrciaria dubia, dosis de 28.7
mg/kg (equivalente a dosis de 500 mg/kg de pulpa fresca de camu-camu104)
durante 21 días.
 GRUPO 4 (G4- Normoglicémicas+57.4 mg/kg): 6 ratas normoglucémicas,
administración de equivalente de pulpa de Myrciaria dubia, dosis de 57.4
mg/kg (equivalente a dosis de 1000 mg/kg de pulpa fresca de camu-
camu104) durante 21 días.
 GRUPO 5 (G5-Control Negativo): 6 ratas hiperglucémicas sin tratamiento
(agua destilada) durante 21 días.
33
 GRUPO 6 (G6-Hiperglicémicas+5.74 mg/kg): 6 ratas hiperglucémicas a
las que se les administrará liofilizado de pulpa de Myrciaria dubia en dosis
de 5.74 mg/kg (equivalente a dosis de 100 mg/kg de pulpa fresca de camu-
camu) durante 21 días.
las que se les administrará equivalente de pulpa de Myrciaria dubia en
dosis de 28.7 mg/kg (equivalente a dosis de 500 mg/kg de pulpa fresca de
camu-camu) durante 21 días.
las que se les administrará equivalente de pulpa de Myrciaria dubia en
dosis de 57.4 mg/kg (equivalente a dosis de 1000 mg/kg de pulpa fresca de
camu-camu) durante 21 días.
 GRUPO 9 (G9-Control Positivo): 6 ratas hiperglucémicas, dos
administraciones de Glibenclamida en dosis de 40 mg/kg104, en el día 1, 7 y
14 del tratamiento.
El estudio presentó una duración de 21 días y siguió las pautas establecidas. Al

final del ensayo los animales fueron pesados y sacrificados por dislocación
cervical.
5.1.4.4. Preparación de dosis
En general las sustancias u extractos fueron administradas en un volumen

constante en función de las dosis a analizar. Se consideró un volumen de dosis
máximo que pudo ser administrada dependiendo del tamaño del animal de
experimentación. Generalmente en roedores, el volumen no debía exceder 1 mL
por el peso corporal, ello con respecto a la administración por vía oral. Con
respecto a la administración del estreptozotocina por vía intraperitoneal, se tuvo en
cuenta un volumen de dosis máximo menor, aproximadamente 0.5 mL.
34
5.1.4.5. Administración de drogas y extractos
 Estreptozotocina: La estreptozotocina fue administrada por vía
intraperitoneal, por tanto, el volumen de administración máximo fue de 0.5
mL., en función de la dosis de 55 mg/kg de peso corporal, disueltas en una
solución de buffer citrato de sodio 0.1M estéril. Posterior a las 72 horas de
administración, se tomaron muestras sanguíneas de los animales para
determinar sus niveles de glucosa basal. Si se presentaba una glicemia de
180-200 mg/dL de glucosa o más, se consideraba como una Diabetes
química positiva. No obstante, si presentaba un nivel inferior al mencionado,
se le administraba una dosis adicional de la misma concentración del
componente.87
 Glibenclamida: La glibenclamida fue administrada por vía oral, por tanto, el
volumen de administración máximo es de 1 mL, en función de la dosis de
40 mg/kg de peso corporal, en el día 7, 14 y 21 de la experimentación.
 Extracto acuoso de Myrciaria dubia: Los extractos acuosos (reconstituido
del liofilizado) fueron administrados por vía oral, por tanto, el volumen de
administración máximo fue de 1 mL. de peso corporal en función de las
dosis establecidas (5.74, 28.7 y 57.4 mg/kg de peso corporal), durante los
21 días de la experimentación.104
5.1.4.6. Medición del peso corporal
Los pesos individuales de los animales fueron determinados poco antes de la

administración del estreptozotocina y las demás sustancias y finalizando cada
semana de tratamiento. Los cambios en los pesos corporales fueron calculados y
reportados.
35
5.2. Métodos Analíticos
5.2.1. Determinación de humedad de pulpa fresca de camu-camu
Considerando la cantidad de pulpa fresca de camu-camu sometida a

liofilización y la cantidad de pulpa liofilizada de camu-camu final, se calculó el
porcentaje de humedad.
5.2.2. Análisis proximal del liofilizado de camu-camu
Se cogió aproximadamente 10 g de muestra de liofilizado por cada lote. Se

tomaron sub-muestras por triplicado por cada proceso analítico.
5.2.2.1. Determinación de humedad de la pulpa liofilizada de camu-camu
Para la determinación del contenido de humedad se usó el método normalizado de

la AOAC (2003) para humedad. Las muestras de camu-camu liofilizado, se
calentaron bajo condiciones específicas en una estufa y la pérdida de peso de las
muestras se utilizó para calcular el contenido de humedad de las mismas. El
análisis de humedad se realizó en 3 repeticiones por cada lote, utilizándose 5 g de
muestra para cada replica. Para el cálculo de humedad se usó el peso inicial
registrado reportando el contenido de humedad en porcentajes. El análisis se
realizó por desecación en estufa a 40 oC hasta peso constante.61
5.2.2.2. Determinación de Proteínas totales
Para la determinación del contenido de proteínas se usó el método normalizado de

la AOAC (2003)61 para proteínas. Una cantidad de 0.6 g de muestra liofilizada fue
digerida en ácido sulfúrico (H2SO4), posteriormente el amoniaco (NH3), que se
encuentra como sulfato de amonio fue destilado sobre ácido bórico 4 % (H3BO4) y
posteriormente este fue titulado con ácido clorhídrico (HCl) 0.1 N. El contenido de
nitrógeno total fue convertido a contenido proteico utilizando el factor de
conversión 6.25. El análisis se realizó por triplicado.
36
5.2.2.3. Determinación de Grasas totales
Para la determinación de contenido de grasa se usó el método normalizado de la

AOAC (2003)61 para grasas, utilizándose un aparato Soxhlet. La grasa cruda fue
determinada mediante la extracción de 1.0 g muestra liofilizada con éter de
petróleo, realizándose con un mínimo de 4 horas. Los balones con la grasa cruda
serán sometidos a rota evaporación para la eliminación de restos de éter, secados
y posteriormente pesados.
5.2.2.4. Determinación de Carbohidratos disponibles totales (TAC)
El análisis de TAC fue llevado a cabo por un método colorimétrico utilizando el

reactivo de antrona, utilizando 1.0 g de muestra liofilizada. Las muestras fueron
pre-tratadas con 15 mL de ácido perclórico (HClO4) 52 % (v/v) y 10 mL de agua
destilada y almacenado por 18 horas en la oscuridad. Después de este periodo,
las muestras fueron filtradas y el volumen del filtrado fue ajustado a 250 mL.
Finalmente, la solución fue diluida al 4 % (v/v), y 5 mL de solución de antrona 0.1
% (p/v) fue añadido a 1 mL de extracto. Las muestras fueron sometidas a baño
maría a 80 0C por 12 minutos donde la reacción entre la antrona con los azúcares
generó un color verde, y la absorbancia fue medida a 630 nm en un
Espectrofotómetro UV/Vis, La absorbancia de la muestra fue comparada en una
curva de calibración de glucosa con un rango de concentración de 0.1-0.5 mg/mL.
5.2.2.5. Determinación de Cenizas totales
La determinación de cenizas es referida como el análisis de residuos inorgánicos

que quedan después de la calcinación completa de la materia orgánica de un
alimento. Se utilizó el método 930.05 de los procedimientos de la AOAC (2003).
Una muestra liofilizada de 1 g fue incinerada en una mufla por 24 horas a 550 oC y
las cenizas fueron gravimétricamente cuantificadas.
37
5.2.2.6. Determinación de Fibra cruda
Para la determinación del contenido de fibra se utilizó el método normalizado de la

AOAC (2003) para fibra. La fibra cruda es el residuo orgánico lavado y seco que
queda después de hervir sucesivamente la muestra desengrasada con ácido
sulfúrico e hidróxido de sodio diluidos. El análisis de fibra bruta se realizó por
triplicado.
5.2.2.7. Valor calórico
Se determinó multiplicando los porcentajes de los principios nutritivos por el factor

Ribner, procediendo luego a la sumatoria.
1g de grasa equivalente a 9 calorías
1g de carbohidratos equivalente a 4 calorías
1g de proteínas equivalente a 4 calorías
5.2.3. Cuantificación de componentes bioactivos del liofilizado de camu-

camu
5.2.3.1. Determinación de los Polifenoles Totales
El método de lectura se hizo con modificación del método de Folin-

Ciocalteu76. 0.2 mL de la muestra fueron mezcladas con 1 mL del reactivo
de Folin-Ciocalteu y 0.7 mL de una solución de Carbonato de sodio
(Na2CO3) 7.5 % p/v. Esta mezcla fue agitada y luego dejada en reposo por
30 minutos a temperatura ambiente. La absorbancia fue determinada a una
longitud de onda de 765 nm. Se preparó una curva de calibración a base de
ácido gálico con concentraciones de rango entre 100-400 µg/mL. Los
resultados se expresan como microgramos equivalentes a ácido gálico en
100 g de muestra liofilizada. Todas las muestras fueron evaluadas por
triplicado.
38
5.2.3.2. Determinación de la capacidad antioxidante por captura del radical
DPPH
La determinación de la capacidad antioxidante usada es una modificación

del método general de DPPH80. 250 µL de cada uno de los extractos de las
muestras de camu-camu fueron mezcladas con 1250 µL de DPPH (6 uM en
etanol). Luego de 30 minutos de reacción a temperatura ambiente, se
midieron las respectivas absorbancias a una longitud de onda de 517 nm en
un espectrómetro UV-visible. Para el análisis se utilizó como blanco etanol
al 95 %.
Tabla 5. Procedimiento para la estimación de la capacidad antioxidante por

captura del radical DPPH
Tipo de muestra Volumen de Volumen de Volumen de

muestra (µL) DPPH (µL) etanol al 95 %
(µL)
Blanco reactivo - 1250 250
Blanco muestra 250 - 1250
Extracto metanólico 250 1250 -
de camu-camu
El cálculo del porcentaje de actividad antioxidante se determinó empleando la

siguiente fórmula:
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑐𝑖ó𝑛 = ∗ 100
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝐶𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙
Donde:
Absorbanciacontrol= Absorbancia del blanco a 517 nm.
Absorbanciamuestra=Absorbancia de las muestras a 517 nm.
39
5.2.3.3. Determinación de Ácido Ascórbico
En el caso de la cuantificación de ácido ascórbico en el liofilizado de camu-camu,

se empleó una modificación de la técnica basada en el ensayo utilizado por
Bouchafra et al.62
 Fase móvil: Solución PIC: Acetonitrilo (90:10)

 Diluyente: Agua: Acetonitrilo: Ácido acético glacial (94: 5: 1)
 Preparación del estándar: Se pesó aproximadamente 10 mg del estándar,
diluyendo en una fiola de 25 mL y haciendo una dilución de 5 en 10.
 Preparación de la muestra: En el caso de muestra de pulpa liofilizada se
procedió a pesar alrededor de 0.5 g. Se enrasaron las muestras con
diluyente en una fiola de 50 mL y se procedió a realizar una dilución de 1 en
25 mL.
 Sistema Cromatográfico: Se utilizó el HPLC acoplado a un detector DAD
a una longitud de onda de 280 nm, con un flujo de 1 mL/min y fase móvil
isocrática. Se utilizó una columna L1-5 µm 4.6x150 nm, inyectándose 1 µL,
tanto para estándar como para la muestra.
5.2.4. Evaluación de la Glicemia, Perfil lipídico y Actividad antioxidante in
vivo
5.2.4.1. Obtención de muestra sanguínea
Las muestras de sangre de los animales de experimentación se obtuvieron por

utilización del método de Sangrado del seno venoso orbital63.
La técnica del sangrado del seno venoso orbital implicó aguijonear el seno venoso
detrás del globo ocular. El sangrado del seno venoso orbital es un método útil para
obtener óptimas muestras ya que se requirió volúmenes mayores de los que se
pueden recoger de la vena de la cola. Debido a que esta técnica es una que
puede tener severas consecuencias para el animal, no se recomienda el uso del
sangrado retro orbital con recuperación del animal más que en circunstancias
excepcionales cuando no haya ningún otro método disponible. Se consideró
40
realizarse bajo anestesia (si el animal se muestra agresivo) y debe utilizarse una
sola orbita. Las muestras sanguíneas fueron almacenadas en tubos vacutainer sin
anticoagulante, debidamente identificado en función de cada animal de
experimentación.
5.2.4.2. Obtención de suero sanguíneo
La muestra sanguínea obtenida fue sometida a centrifugación a 2500 rpm por 15

minutos, posteriormente guardándolos en tubos identificados por cada individuo y
almacenándolos a temperatura de -20 oC.
5.2.4.3. Estimación de Glucosa sérica (Método GOD/POD)

 Fundamento
La glucosa es oxidada por la glucosa oxidasa (GOD) para producir gluconato y

peróxido de hidrogeno. Éste es luego oxidado junto con 4-aminoantipireno (4-AAP)
y fenol en presencia de peroxidasa (POD) para generar un tinte quinonaimina. La
intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentración de glucosa en
la muestra y esta es medida a 505 nm. El color final es estable por 2 horas.
D-glucosa+H2O+O2 D-ácido glucónico+H2O2
H2O2+4-aminoantipirina+Fenol Compuesto quinonaimina rojo+ 2 H2O
 Procedimiento
El estándar de glucosa presentó una concentración de 100 mg/dL. Los tubos

fueron rotulados en función de la muestra (Mx), estándar (Std) y blanco (B).
41
Tabla 6. Procedimiento para la cuantificación de la glucosa sérica
Blanco (B) Estándar (Std) Muestra (Mx)

Reactivo Enzima de 1 mL 1 mL 1 mL
Trabajo
Std Glucosa --- 10 µL ---
Muestra de suero --- --- 10 µL
Estos fueron mezclados e incubados a temperatura ambiente por 30 minutos
(punto final de la reacción). La absorbancia del tubo de la muestra (Mx) y estándar
(Std) fueron medidos contra el blanco a 505 nm utilizando espectrómetro UV-
visible.
 Cálculo
𝑚𝑔 𝐴𝑏𝑠 𝑀𝑥
𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑠é𝑟𝑖𝑐𝑎 ( )= ∗ 100
𝑑𝐿 𝐴𝑏𝑠 𝑆𝑡𝑑
5.2.4.4. Estimación de Triglicéridos séricos (Método enzimático)

 Fundamento:
Los triglicéridos son hidrolizados por una lipasa específica liberando ácidos
grasos y glicerol. El glicerol es fosforilado por la enzima gliceroquinasa y
posteriormente, el glicerol-1-fosfato es oxidado a dihidroxiacetona fosfato por la
enzima glicerol-fosfato oxidasa, generándose peróxido de hidrogeno.
Posteriormente, en una reacción de tipo Trinder, el peróxido de hidrogeno
reacciona con 4-aminoantipirina y el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxi-
bencensulfonico para producir por medio de la enzima peroxidasa un
compuesto coloreado en cantidad proporcional a las concentración de
triglicéridos presente en la muestra, midiéndose la absorbancia a 520 nm.
Triglicéridos + H2O Glicerol + Ácidos grados libres
Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato + ATP
Glicerol-3-fosfato + O2 DHAP+H2O2
42
2 H2O2 + 4 AAP Quinonaimina (rojo) + 4 H2O
La intensidad del cromóforo quinonaimina formado fue proporcional a la

concentración de triglicéridos totales en la muestra cuando fue medida en UV-
visible a 520 nm.
 Procedimiento
Tabla 7. Procedimiento para la cuantificación de los triglicéridos séricos
Blanco (B) Estandar (Std) Muestra (Mx)

Muestra --- --- 10 µL
Estándar --- 10 µL ---
Reactivo 1 mL 1 mL 1 mL
Trabajo
Se procedió a mezclar e incubar 5 minutos a 37 oC. Posterior a ello, se procedió a
leer las absorbancias llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco del
reactivo. El color resultante fue estable por lo menos treinta minutos.
 Cálculo
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑆𝑡𝑑
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 =
𝐴𝑏𝑠 𝑆𝑡𝑑
𝑚𝑔
𝑇𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐é𝑟𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑠é𝑟𝑖𝑐𝑜𝑠 ( ) = 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 ∗ 𝐴𝑏𝑠 𝑀𝑥
𝑑𝐿
5.2.4.5. Estimación de Colesterol total (Método CHOD-PAP)
 Fundamento
El colesterol se determinó por acción de las enzimas Colesterol éster hidrolasa y

Colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los esteres de colesterol, y la
segunda oxida el colesterol libre produciéndose peróxido de hidrogeno, el cual en
presencia de la enzima peroxidasa reaccionó con el sistema cromogénico dando
origen a un compuesto coloreado que absorbe a 505 nm.
43
CEH
Colesterol éster Colesterol + Ácidos grasos
CHOD
Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H2O2
PAP
2H2O2+4-AAP + p-HBA Comp. Coloreado + 4H2O
 Procedimiento
Tabla 8. Procedimiento para la cuantificación del colesterol total
Blanco (B) Estandar (Std) Muestra (Mx)

Muestra --- --- 10 µL
Trabajo
Se procedió a mezclar e incubar por 5 minutos a 37 oC. Se midieron las
absorbancias llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. El
color resultante fue estable por lo menos 30 minutos.
 Cálculo
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑆𝑡𝑑
𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 ( ) = 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 ∗ 𝐴𝑏𝑠 𝑀𝑥
𝑑𝐿
5.2.4.6. Estimación de Colesterol HDL
El HDL-Colesterol fue obtenido precipitando selectivamente las lipoproteínas LDL

y VLDL, quedando el primero en solución.
El HDL-Colesterol en solución se determinó por acción de las enzimas Colesterol

éster hidrolasa y Colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los esteres
de colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre produciéndose peróxido de
hidrogeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa reacciona con el sistema
cromogénico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe a 505 nm.
44
CEH
Colesterol éster Colesterol + Ácidos grasos
CHOD
Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona+H2O2
PAP
2H2O2+4-AAP+p-HBA Comp. Coloreado+4H2O
 Procedimiento
- Precipitación
Se agregó en un tubo de centrífuga 0.5 mL de reactivo precipitante y 0.2 mL de

muestra, mezclar y se esperó 15 minutos a temperatura entre 20 y 30 oC.
Posterior a ello se centrifugó por 15 minutos a 3 000 r.p.m.
- Colorimetría
Llevar el reactivo Colesterol Total a la temperatura que se realizará el ensayo.
Tabla 9. Procedimiento para la cuantificación del colesterol HDL
Blanco (B) Estándar (Std) Muestra (Mx)

Sobrenadante --- --- 10 µL
Colesterol
Se procedió a mezclar e incubar 10 minutos a 37 oC. Leer las absorbancias
llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. El color resultante
es estable por lo menos 30 minutos. Se utilizó como Estándar el provisto para el
ensayo de análisis de Colesterol Total.
 Cálculos
76.5
𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝐻𝐷𝐿 ( ) = 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 ∗ 𝐴𝑏𝑠 𝑀𝑥
𝑑𝐿
45
5.2.4.7. Estimación de Colesterol LDL
𝑚𝑔
𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑇𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐é𝑟𝑖𝑑𝑜𝑠 ( )
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝐿𝐷𝐿 ( ) = 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 ( ) − 𝐻𝐷𝐿 ( ) − 𝑑𝐿
𝑑𝐿 𝑑𝐿 𝑑𝐿 5
5.2.4.8. Evaluación de la Capacidad Antioxidante por ABTS+
La determinación de capacidad antioxidante se realizó por el método ABTS +

descrita por Kuskoski et al64.
 Procedimiento
El radical ABTS+ se obtiene tras la reacción de ABTS+ (7 mM) con persulfato

potásico (2.45 mM) y se incuban a temperatura ambiente (aproximadamente 25
oC) y en la oscuridad durante 16 horas. Al formarse el radical ABTS+, se diluye con
etanol hasta obtener una absorbancia de 0.70 (±0.1) a 754 nm (longitud de onda
de máxima absorción). Las muestras son diluidas con etanol hasta que se
produzca una inhibición del 20 al 80% en comparación con la absorbancia del
blanco, tras añadir 20 µL de la muestra. A 980 µL de dilución del radical ABTS+
generado se determina la absorbancia a 754 nm a 30 oC y se añade 20 µL de la
muestra y se mide de nuevo la absorbancia a la misma longitud de onda pasado 1
minuto. Luego se mide la absorbancia transcurridos 7 minutos. El antioxidante
Trolox, se ensayó a una concentración de 0-15 µM (concentración final) en etanol,
en iguales condiciones. Los ensayos se expresan en TEAC (actividad
antioxidante equivalente a Trolox).
 Cálculo del porcentaje de inhibición
%𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒄𝒊ó𝒏 𝑨𝑩𝑻𝑺 = [𝟏 − (𝑨𝒃𝒔𝑴𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 − 𝑨𝒃𝒔𝑩𝒍𝒂𝒏𝒄𝒐 )/𝑨𝒃𝒔𝑺𝒕𝒅 ] ∗ 𝟏𝟎𝟎
46
5.3. Análisis estadístico
Todos los datos están expresados como la media ± desviación estándar (DS). En
el caso del análisis de humedad, análisis proximal y cuantificación de ácido
ascórbico, polifenoles y capacidad antioxidante, los datos fueron trabajados por
triplicado. En lo que respecta a la medición de peso corporal se hizo una medición
por cada animal de experimentación. Con respecto a la glucosa sérica, colesterol
total, triglicéridos totales, colesterol HDL, colesterol LDL y capacidad antioxidante
in vivo (ABTS+), los datos fueron trabajados por triplicado. Las comparaciones
estadísticas fueron realizadas empleando la prueba ANOVA de un factor y la
Prueba de Comparación de Tukey-HSD. Todos los análisis fueron realizados
utilizando el paquete estadístico SPSS (22.0), considerando las diferencias
estadísticamente significativas a una p<0.05 en caso de ANOVA de un factor y la
Prueba de Comparación de Tukey.
47
6. RESULTADOS
6.1. Liofilización de pulpa de camu-camu
El producto obtenido de la liofilización de la pulpa de camu-camu, fue un producto

seco, granulado, de color rosa intenso. El envasado se efectuó en frascos de
vidrio, selladas herméticamente al vacío para luego almacenarlas a temperatura
de congelamiento -20 oC.
Figura 5. Liofilizado de camu-camu
6.2. Determinación de humedad de la pulpa fresca de camu-camu
Se determinó el porcentaje de humedad de la pulpa fresca de camu-camu con el

fin de calcular las cantidades de liofilizado a utilizar para la preparación del
extracto acuoso (reconstituido del liofilizado) de camu-camu para la administración
a los animales.
48
Tabla 10. Porcentaje de Humedad en pulpa de camu-camu y porcentaje de
liofilizado obtenido
Pulpa Fresca Camu-camu Porcentaje de Liofilizado obtenido (%)

Humedad (%)
Lote 1 94.2616±1.08 5.7384±1.08
Lote 2 94.35±0.92 5.65±0.92
Lote 3 94.143±0.86 5.857±0.86
Los valores están expresado como la media ± DS (n=3)
6.3. Análisis proximal del liofilizado de camu-camu

6.3.1. Determinación de la humedad
Se determinó el porcentaje de humedad para los lotes de camu-camu obtenidos y
los resultados se observan en la tabla 11, en la cual se puede apreciar que no hay
diferencia estadística entre las muestras.
Tabla 11. Porcentaje de Humedad Residual en el liofilizado de camu-camu
Lotes Porcentaje de Humedad (%)

Lote 1 3.2417 ± 0.0815
Camu-camu
Liofilizado
Lote 2 3.2020 ± 0.117
Lote 3 3.26 ± 0.1727
Los resultados que se observan en la siguiente tabla son el promedio de los

resultados de cada ensayo realizado por triplicado.
49
Tabla 12. Composición química proximal del liofilizado del camu-camu
Determinación Camu-camu (Pulpa liofilizada)

Proteínas totales (g%) 3.965 ± 0.16
Grasas totales (g%) 1.5106 ± 0.093
Carbohidratos (g%) 80.15 ± 1.065
Fibra total (g%) 2.96 ± 0.066
Cenizas totales (g%) 2.67 ± 0.1223
Valor calórico (cal/g) 3500.5 ± 2.87
Figura 6. Composición química proximal del liofilizado de camu-camu
90
80
70
60
PORCENTAJE (%)
50
40
30
20
10
0
PROTEINAS GRASAS TOTALES CARBOHIDRATOS FIBRA TOTAL CENIZAS
TOTALES
COMPONENTES
50
6.4 Cuantificación de componentes bioactivos del liofilizado de camu-camu
6.4.1. Determinación de los Polifenoles Totales
En la figura 7 se observa la curva de calibración obtenida para el ácido gálico. De

la misma se obtuvo una regresión lineal de 0.998 y una desviación estándar de
0.005.
Tabla 13. Valores de concentración de ácido gálico y absorbancia obtenida

para la curva de calibración
Concentración Ácido gálico

Absorbancia (UA)
(µg/mL)
0 0
50 0.272
100 0.58227
125 0.665
150 0.83
200 1.11
Figura 7. Curva de Calibración del Ácido Gálico
1.2
y = 0.0055x + 0.0006
1 R² = 0.998
0.8
ABSORBANCIA
0.6
0.4
0.2
0
0 50 100 150 200 250
CONCENTRACIÓN
51
En la tabla 14 se muestran la aproximación de la determinación de polifenoles
totales obtenidos, los cuales se expresaron en base a gramos de ácido gálico.
Tabla 14. Contenido de Polifenoles totales, expresados en miligramos de

ácido gálico
Muestra Concentración mg Ácido RSD %

gálico/g de liofilizado
camu-camu (n=3)
Mx1 150.82±1.587 1.0525
Mx2 155.58±1.68 1.0799
Mx3 153.59±1.58 1.029
6.4.2. Determinación de la capacidad antioxidante por captura del radical

DPPH
En la tabla 15 se muestra el porcentaje de inhibición de la oxidación aproximado

de los extractos metanólicos de liofilizado de camu-camu previamente preparados.
Se observa que entre los tres lotes no existe diferencia significativa en su actividad
antioxidante.
Tabla 15. Capacidad inhibitoria de la oxidación
Concentración Muestra %Actividad RSD %

antioxidante
(n=3)
1.104 mg/mL Mx1 94.02±0.384 0.404
1.36 mg/mL Mx2 96.72±0.329 0.3459
1.215 mg/mL Mx3 94.05±0.115 0.12148
52
6.4.3. Determinación de Ácido Ascórbico
En la tabla 16 se muestra los valores de numero de platos teóricos (N), el factor de

asimetría (T), el área de pico y la desviación estándar relativa (RSD %) a partir de
las inyecciones de estándar de ácido ascórbico.
Tabla 16. Áreas (mAU) obtenidas de las inyecciones de los estándares de

Ácido ascórbico
# tR (min) N=16*(t/W)^2 T=W 0.05/2f Área de RSD %

Inyección pico (mAU)
1 1.146 1916.88 1.33 553.43
2 1.147 1968.8 1.33 549.85
3 1.147 1968.8 1.33 539.73 1.87 %
4 1.147 1942.43 1.33 531.93
5 1.148 1876.7 1.33 531.2207
PROM 1.147 1930.944 1.33 541.2318
En la figura 8 se observa uno de los cromatogramas obtenidos de las inyecciones

realizadas de Ácido ascórbico. Los tiempos de retención oscilan entre 1.146 a
1.148 minutos.
53
Figura 8. Cromatograma del estándar (Std) de Ácido ascórbico
En la tabla 17 se muestran las concentraciones aproximadas de ácido ascórbico

obtenidas mediante el análisis con HPLC.
Tabla 17. Concentración de Ácido ascórbico en el liofilizado de camu-camu
Mx Concentración mg Ác. RSD %

Ascórbico/g liofilizado camu-
camu (n=3)
Mx 1 186.97±4.73 0.34
Mx 2 199.54±5.09 0.284
Mx 3 187.33±0.502 0.27
54
6.5. Evaluación del Peso corporal, Glicemia, Perfil lipídico y Actividad
antioxidante in vivo
En la presentación de resultados, se consideró lo siguiente:
 Semana 0: Semana de pre-tratamiento, se midió el peso corporal y glucosa

sérica basal de los animales de experimentación.
 Semana 1: Semana Post STZ, se midió el peso corporal y glucosa sérica
de todos los animales de experimentación, tanto a los que se les administró
estreptozotocina como a los que no. En el inicio de la semana, comenzó la
primera semana de tratamiento con los extractos del liofilizado de camu-
camu y se administró la dosis unitaria de glibenclamida al grupo
correspondiente.
 Semana 2: Semana Post STZ y 1era semana de tratamiento, se midió el
peso corporal y la glucosa sérica de todos los animales de experimentación.
Finalizando esta, se comenzó la segunda semana de tratamiento con los
extractos del liofilizado de camu-camu y se administró la dosis unitaria de
glibenclamida a los grupos correspondientes.
 Semana 3: Semana Post STZ y 2da semana de tratamiento, se midió el
peso corporal y la glucosa sérica de todos los animales de experimentación.
Finalizando esta, se comenzó la tercera y última semana de tratamiento con
los extractos del liofilizado de camu-camu y se administró la dosis unitaria
de glibenclamida a los grupos correspondientes.
 Semana 4: Semana Post STZ y 3era semana de tratamiento, al finalizar
esta semana, se midió el peso corporal y la glucosa sérica de todos los
animales de experimentación. Se procedió a sacrificar a todos los animales,
con el fin de obtener muestras sanguíneas suficientes para realizar los
análisis de perfil lipídico y actividad antioxidante in vivo (ABTS+).
6.5.1. Peso corporal
El peso corporal de todos los animales fue registrado semanalmente y el cambio

del peso corporal (expresado en porcentaje) fue calculado, tal como se indica en la
55
Tabla 18. El peso corporal de la semana 4 de todos los grupos fue comparado con
el peso corporal de la semana 1 del mismo grupo respectivo.
Tabla 18. Efecto del liofilizado de camu-camu en el peso corporal en ratas

Holtzman
Peso Corporal Normalizado (%) Cambio en

Grupo peso corporal
Sem 0 Sem 1 Sem 2 Sem 3 Sem 4
(%) Tx
*
G1 (Control 0) 100 119.42 141.02 143.91 148.62 +29.2
G2 (N+5.74 100 121.71 145.07* 149.61 154.02 +32.31

mg/kg)
G3 (N+28.7 100 114.59 112.19ns 114.66 116.35 +1.76
mg/kg)
G4 (N+57.4 100 107.04 117.37ns 113.83 115.20 +8.16
mg/kg)
G5 (Control -) 100 72.15* 91.40* 89.79 87.67 +15.52
G6 (H+5.74 100 71.57* 123.04* 125.89 125.98 +54.41

mg/kg)
G7 (H+28.7 100 72.96* 91.44* 97.99 100.36 +27.39
mg/kg)
G8 (H+57.4 100 72.34* 105.53* 103.05 100.98 +28.64
mg/kg)
G9 (Control +) 100 71.25* 100.15* 97.14 95.04 +23.8
Los valores son expresados como la media (n=6). Prueba de Tukey HSD (α=0.05)
* = significativo (p<0.05), ns = no significativo (p>0.05).
Los cambios más notorios en el peso corporal registrados son del grupo 6
(Hiperglicémicos+100 mg/kg), quien presento un incremento significativo de 54.41
% (p<0.05), el cual fue el mayor incremento observado. Los demás grupos,
exceptuando el grupo 3 y 4 presentaron incrementos significativos (p<0.05)
56
aunque de menor magnitud que el grupo 6, aunque no hubo diferencia significativa
entre ellos (p>0.05), es decir, incrementaron de peso a una velocidad similar.
Los grupos 3 y 4 presentaron incrementos no diferentes significativamente

(p>0.05), presentando menor velocidad de incremento de peso corporal. Todo ello
se analizó entre los valores promedio del peso corporal al final e inicio del
tratamiento con liofilizado de camu-camu.
Figura 9. Efecto del liofilizado de camu-camu sobre el peso corporal en ratas

Holztman.
180
160
140
PESO CORPORAL (%)
120
100
80
60
40
20
0
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9
GRUPOS
PROM (Sem 0-Pre STZ) PROM (Sem1-Post STZ) PROM (Sem 2-Post STZ-
1era Semana Tx)
PROM (Sem 3-Post STZ- PROM (Sem 4-Post STZ-
2da Semana Tx) 3era Semana Tx)
6.5.2. Estimación de glucosa sérica
Los niveles de glucosa sérica de los animales de todos los grupos fueron
registrados semanalmente y el cambio de la glucosa sérica (expresado en
porcentaje) fue reportado, como se observa en la Tabla 19.
57
Tabla 19. Efecto del liofilizado de camu-camu en el nivel de glucosa sérica en
ratas
Glucosa sérica (mg/dL) Cambio en

Grupo glucosa
Sem 0 Sem 1 Sem 2 Sem 3 Sem 4
sérica (%) Tx
G1 (Control 0) 96.42±8.18 96.58±8.32 96.18±8.3 101.55±2.9 114.98±10. +19.05

68
G2 (N+5.74 96.52±5.4 95.63±5.2 96.52±5.4 100.58±4.05 116.15±5.6 +21.45
mg/kg) 9
G3 (N+28.7 93.5±5.98 98.17±283 93.5±5.9 105.5±6.54 114.88±3.7 +17.02
mg/kg) 8
G4 (N+57.4 96.57±8.9 96.35±9.62 96.57±8.9 109.98±7.17 116.97±5.6 +21.39
mg/kg) 9
G5 (Control -) 102.43±9.2 388.92±16.09* 389.12±9.9ns 376.62±9.82 377.2±12.8 -3.013
NS
G6 (H+5.74 124.3±11.6 394.4±18.25* 394.0±4.6ns 382.57±8.78 362.21±8.4 -8.16

mg/kg) ns 8*
G7 (H+28.7 100.72±11. 382.2±23.36* 319.32±7.3* 311.48±6.61 289.22±4.3 -24.33
mg/kg) ns 9*
5
G8 (H+57.4 113.67±11. 388.2±10.9* 309.78±12.4 294.6±15.9ns 281.49±11. -27.489
mg/kg) 3 * 87*
G9 (Control +) 110.43±13. 391.92±16.78* 285.76±48.1 251.98±38.6 241.76±38. -38.314
5 7* * 86*
Se encontró un aumento progresivo en los animales normoglucémicos (G1, G2,

G3, G4), pero no hubo diferencia significativa (p>0.05) entre la media de los
valores de glucosa sérica al final del tratamiento y al inicio del tratamiento.
Además se encontró un decrecimiento progresivo del nivel de glucosa sérica en
los grupos con animales hiperglucémicos con tratamiento durante el estudio,
observándose una disminución significativa (p<0.05) en los 3 tratamientos con
camu-camu (G6, G7 y G8) y un decrecimiento mayor con la dosis de
glibenclamida (G9), teniendo la tasa de disminución de glucosa sérica más notoria,
tal como también se puede observar en el análisis de la Figura 10.
58
Figura 10. Efecto del extracto acuoso del liofilizado de camu-camu en el nivel
de glucosa sérica en ratas
450.00
400.00
CONCENTRACIÓN (mh/dL)
350.00
300.00
250.00
200.00
150.00
100.00
50.00
0.00
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9
GRIUPOS
PROM (Sem 0-Pre STZ) PROM (Sem1-Post STZ) PROM (Sem 2-Post STZ-
1era Semana Tx)
PROM (Sem 3-Post STZ- PROM (Sem 4-Post STZ-
2da Semana Tx) 3era Semana Tx)
6.5.3. Estimación de Perfil Lipídico (Colesterol total, Triglicéridos séricos,

Colesterol HDL y Colesterol LDL)
En los grupos G6, G7, G8 y G9, el colesterol total y el colesterol HDL

disminuyeron significativamente (p<0.05) en comparación con el grupo Control
negativo (G5). Con respecto a los triglicéridos totales, los grupos G7, G8 y G9
presentaron disminución significativa (p<0.05) en comparación con el grupo
Control negativo (G5). EL colesterol HDL se incrementó significativamente
(p<0.05) en los grupos G6, G7, G8 y G9, en comparación con el grupo Control
negativo (G5), tal como se puede observar en la tabla 20.
Con respecto a los grupos G2 y G3, estos no tuvieron cambio significativo

(p>0.05) en lo que se refiere a triglicéridos totales, colesterol total, colesterol HDL
y colesterol LDL, en comparación con el grupo Control 0 (G1). El grupo G4,
59
presento una disminución significativa (p<0.05) con respecto a todo el perfil
lipídico, comparando con el grupo Control 0 (G1).
Tabla 20. Efecto del liofilizado de camu-camu en el perfil lipídico en ratas
Grupo Colesterol Total Triglicéridos Colesterol HDL Colesterol LDL

(mg/dL) Totales (mg/dL) (mg/dL) (mg/dL)
G1 (Control 0) 153.03±5.025 89.73±3.07 42.57±2.47 92.50±5.5
G2 (N+5.74 mg/kg) 163.80±9.59ns 96.72±3.37ns 45.65±3.47ns 98.81±9.24ns
G3 (N+28.7 mg/kg) 166.23±5.47ns 84.09±4.38ns 44.84±2.92ns 104.57±4.7ns
G4 (N+57.4 mg/kg) 136.47±9.89a* 60.92±4.89a* 50.92±2.417a* 73.36±11.53a*
G5 (Control -) 235.16±11.32c 214.72±9.41c 25.43±3.64c 166.80±16.34c

G6 (H+5.74 mg/kg) 186.30±5.24b* 222.30±5.25ns 32.90±2.2b* 108.95±6.87b*
G7 (H+28.7 mg/kg) 164.41±4.23b* 184.47±5.75b* 39.74±2.09b* 87.78±6.25b*
G8 (H+57.4 mg/kg) 137.17±4.81b* 150.08±9.3b* 63.6±3.514b* 43.55±7.93b*

G9 (Control +) 96.79±4.725b* 136.27±8.03b* 41.6±2.99b* 27.93±4.3b*
aGrupo tratado vs Control 0
bGrupo tratado vs Control Negativo
cControl Negativo vs Control 0
Los resultados obtenidos también fueron representados en la figura 11, en la cual

se observan las diferencias del perfil lipídico de todos los grupos.
60
Figura 11. Efecto del liofilizado de camu-camu en el perfil lipídico en ratas
250
200
CONCENTRACIÓN (mg/dL)
150
100
50
0
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9
GRUPOS
TG CT HDL LDL
6.5.4. Evaluación de la actividad antioxidante in vivo (ABTS+)
En la evaluación de la actividad antioxidante in vivo, se ha encontrado que en el

grupo Control negativo (G5), el porcentaje de inhibición decrece significativamente
(p<0.05), mientras que en los grupos con animales diabéticos pero con tratamiento
de lioflizado de camu-camu se incrementa significativamente (p>0.05), además de
existir diferencia significativa entre ambas, tal como se observa en la Tabla 21.
61
Tabla 21. Efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad antioxidante in
vivo (ABTS+)
Grupo Inhibición ABTS+ (%) Capacidad antioxidante(mmol

eq-Trolox/mLplasma)
G1 (Control 0) 5.04±0.56 19.23±2.22
G2 (N+5.74 mg/kg) 15.7±1.13a* 129.4±4.17a*
G3 (N+28.7 mg/kg) 29.98±1.52a* 276.9±3.24a*
G4 (N+57.4 mg/kg) 47.10±0.98a* 453.5±5.61a*
G5 (Control -) 0.70±0.12c* 3.84±0.27c*
G6 (H+5.74 mg/kg) 3.39±0.22b* 16.7±1.03b*
G7 (H+28.7 mg/kg) 17.85±1.04b* 151.83±2.33b*
G8 (H+57.4 mg/kg) 34.20±2.25b* 320.35±5.24b*
G9 (Control +) 9.45±1.24b* 65.01±1.56b*
aGrupo tratado vs Control 0
bGrupo tratado vs Control Negativo
cControl Negativo vs Control 0
En la figura 12, se reporta los valores de la capacidad antioxidante expresados en

porcentaje de inhibición del radical ABTS+.
Figura 12. Efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad antioxidante

in vivo (ABTS+) expresada por el porcentaje de inhibición de radicales libres
50
45
40
35
INHIBICIÓN (%)
30
25
20
15
10
5
0
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9
GRUPOS
62
Se ha reportado también los valores de capacidad antioxidante expresados en
milimoles equivalente de trolox por mililitro de plasma (mmol eq-Trolox/mL
plasma), tal como se observa en la Tabla 21 y la Figura 13.
Figura 13. Efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad antioxidante

in vivo (ABTS+) expresada en milimoles equivalente de trolox por mililitro de
plasma (mmol eq-Trolox/mL plasma).
500.000
CONCENTRACIÓN (mmoles Trolox/mL plasma)
450.000
400.000
350.000
300.000
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0.000
G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9
GRUPOS
63
7. DISCUSIÓN
En el presente estudio, se tomó como punto de inicio el empleo del liofilizado de la

pulpa del camu-camu, para el cual se prefirió contar con frutos en estado pintón
maduro (70 % de maduración), ya que soportan mejor los procesos previos a la
liofilización, además que también se obtuvo un color rosa acentuado en la pulpa
obtenida, tal como lo observado por otros autores15, 59.
En la tabla 5, se observa que se obtuvo entre 94.2616% y 94.35% de humedad en

la pulpa de camu-camu (Tabla 10), valores que se asemejan con otros reportes de
93% a 94,4% de humedad13, 15. Es decir, que por medio de la liofilización se pudo
extraer más del 90% del agua contenida en el alimento, lo que se traduce en un
gran beneficio con relación al costo del transporte, ya que no se requeriría un
transporte con cadena de frio, ya que reportes anteriores determinan que se
obtiene productos más estables microbiológicamente, además que se mantienen
sus características organolépticas sui generis, es decir, tanto lo en lo que se
refiere al color, al sabor, al aroma y la consistencia-textura, el liofilizado mantiene
estas características estables durante el almacenamiento59, esto es explicable ya
que los componentes del aroma no se encuentra ni en el agua pura, ni en los
cristales y hielo, durante la sublimación no son arrastrados por el vapor de agua y
por tanto se quedan retenidos en la trama del alimento66.
El liofilizado de camu-camu presentó una humedad de 3.20% a 3.26% (Tabla 11),

lo cual difiere de otras investigaciones15, 59,65, que reportan valores entre 8-10 % de
humedad residual en los liofilizados de camu-camu obtenidos, probablemente a
que se utilizaron diferentes condiciones de presión en el liofilizador, tal como se
menciona en los estudios anteriores.
Un punto importante que se consideró en el presente estudio fue realizar un

análisis proximal del liofilizado de camu-camu, ya que existen pocos trabajos de
investigación que reportan el análisis proximal del mismo, solamente se reportan
los valores en base a muestra húmeda.
64
Tanto a lo que se refiere al análisis proximal y a los demás análisis cuantitativos
en el liofilizado, estos se realizan en base a este y no en base húmeda (pulpa
fresca) ya que en el presente estudio se concentra en determinar la actividad
hipoglucemiante del liofilizado, por ello es elemental considerar el análisis y
caracterización del liofilizado como materia prima principal.
Con respecto al análisis proximal, se ha encontrado que entre todos los

compuestos existentes en el liofilizado, los carbohidratos disponibles son los que
se encuentran en mayor cantidad en el producto (Tabla 12), con un valor de 80.15
g/100 g de liofilizado. Este valor hallado en el liofilizado es similar al valor
reportado por Rojas et al65, en el cual también se realizó un estudio preliminar del
liofilizado de camu-camu aunque utilizando un método analítico diferente (Método
de Ross). Cabe resaltar que el método de antrona para la determinación de
carbohidratos disponibles fue escogido para el análisis ya que se cataloga como
un método rápido, sencillo, es altamente sensible a bajos niveles de concentración
de carbohidratos y es específico para los mismos, evitando interferencias con
compuesto proteicos68 o compuestos con propiedades oxidativas o reductoras
(tales como el ácido cítrico)67.
El segundo compuesto de mayor cantidad encontrado en el liofilizado fueron las

proteínas totales, con un valor de 3.965 g/100 g de liofilizado (Tabla 12). En este
caso, el valor obtenido difiere al valor reportado por Rojas et al.65 (8.89 g/100 g de
liofilizado), en el cual se utilizó la misma técnica de análisis proteico (Método de
Kjeldahl). Una explicación razonable es que las plantas y sus frutos no tienen una
composición única y fija, sino una composición que varía enormemente
dependiendo de la variedad, lugar de siembra y año en que fue cultivado. A
diferencia del presente estudio, el estudio realizado por Rojas et al. no se
menciona el lugar de recolección de la muestra de Myrciaria dubia estudiada.
Acorde con ciertas investigaciones, el contenido proteico de un fruto puede variar

en función de su estado de maduración, debido probablemente a la síntesis de
proteínas y enzimas que actúan en el proceso de maduración 70, especialmente en
65
etapas iniciales del proceso. Tal como se ha mencionado anteriormente, se ha
determinado que los frutos obtenidos para el presente estudio se encontraban en
estadio pintón maduro, no obstante, en la investigación realizada por Rojas et al.
no se ha reportado el estadio de maduración de los frutos con los que trabajaron,
que acorde con la bibliografía revisada son frutos en un estadio de maduración
inferior al pintón maduro, por lo que no se pueden realizar más observaciones del
tema respecto a los resultados. Considerando que haya diferencias en el proceso
de liofilización, se ha determinado que este proceso no involucra inestabilidad en
las proteínas del producto72.
La fibra total fue el tercer compuesto con mayor cantidad encontrado en el

liofilizado, presentando un valor de 2.96 g/100 g de liofilizado (Tabla 12), el cual se
asemeja al valor obtenido reportado por Rojas et al. (2.87 g/100 g de liofilizado).
En diversos reportes56,73 se menciona que la fibra total es uno de los atributos más
interesantes que presenta el camu-camu (después del contenido de ácido
ascórbico y antioxidantes).
Las cenizas totales, aquel parámetro del análisis proximal que determina el
residuo inorgánico presente en el producto analizado. El valor que se ha hallado
en el presente estudio fue de 2.67 g/100 g de liofilizado (Tabla 12), teniendo
coincidencia con el valor que obtuvo Rojas et al. (2.65 g/100 g de liofilizado).
Respecto al contenido de grasas totales reportado en el estudio (1.51 g/100 g de

liofilizado), este valor es distinto al reportado por Rojas et. al ( 0.71 g/100 g de
liofilizado). Esta variación puede ser también explicada por la variabilidad
generada por la diferencia de cultivos69, tal como en el caso del contenido de
proteínas totales. Otra explicación razonable de la variación de grasas
probablemente sea las condiciones de almacenamiento, ya que posterior a la
liofilización de alimentos, se ha reportado que ante la estructura porosa que
adquieren los alimentos liofilizados, los hacen accesibles al oxígeno, lo que puede
provocar alteraciones por oxidación de sus lípidos, lo cual se pudo evitar en el
66
presente estudio envasando el producto en vacío, evitando el ingreso de la mayor
cantidad de oxígeno66.
En definitiva, se ha logrado definir en el presente estudio un análisis proximal a

grandes rasgos, lo que permitió determinar y cuantificar una gran parte de los
componentes que se administraron a los animales de experimentación y si alguno
de estos tuvo algún efecto en los parámetros bioquímicos analizados.
Para el análisis de polifenoles totales y actividad antioxidante in vitro (DPPH), se

decidió utilizar un proceso extractivo simple, que permitiera un mayor rendimiento
de extracción. Cierto estudio ha determinado que las soluciones hidroalcohólicas
que se encuentran entre 60-80 % v/v de etanol lograban una extracción
polifenólica y de otros compuestos antioxidantes de mayor eficiencia que las
conseguidas en concentraciones etanólicas de 80-100% v/v74. Adicionalmente,
dicha eficiencia podría ser comparada a la conseguida si se empleara como
solvente metanol, a las mismas concentraciones74.
Se emplearon 24 horas de maceración para la extracción, siguiendo a la

referencia brindada por Pascal et. al60. En el mencionado trabajo se menciona que
la extracción durante ese tiempo y con agitación permite una óptima extracción de
los polifenoles totales, ya que permite una degradación de la lámina media de las
paredes celulares y de sus estructuras para permitir que los compuestos fenólicos
presentes en las vacuolas celulares puedan ser extraidos75.
En lo que respecta a la cuantificación de polifenoles totales, mediante el empleo

del método de Folin-Ciocalteu, el cual está basado en la capacidad de los fenoles
para reaccionar con agentes oxidantes. El reactivo de Folin-Ciocalteu contiene
molibdato y tungstato sodio, que reaccionan con cualquier tipo de fenol, formando
complejos fosfomolibdico-fosfotungstico76. La transferencia de electrones a pH
básico reduce los complejos fosfomolibdico-fosfotungstico en óxidos, cromógenos
de color azul intenso, de tungsteno (W 8O23) y molibdeno (Mo8O23), siendo
proporcional este color al número de grupos hidroxilos de la molécula77.
67
Así mismo, en el presente estudio se observó que las concentraciones
aproximadas obtenidas, se encuentran ligeramente por encima a las presentadas
por Rufino et al78. En el mencionado estudio se obtiene 116.15 mg de ácido gálico
en 1 gramo de liofilizado, a diferencia de los 155.576 mg de ácido gálico en 1
gramo de liofilizado (Tabla 14) que se lograrían como máximo en el presente
estudio. No obstante, si se contrastan con los valores obtenidos por Sotero et.
al79, podemos observar que el valor obtenido en el presente estudio es menor a lo
reportado por ellos, 231.68 mg de ácido gálico en 1 gramo de liofilizado. Estas
diferencias pueden deberse principalmente a los diferentes lugares de recolección
de los frutos y por tanto diferente clima y diferente variedad. Acorde con Rufino et
al., ellos recolectaron los frutos de camu-camu en el estado de Pará en Brasil, y
los frutos estudiados por Sotero et al. fueron recolectados en la región de Loreto
en Perú. Otro factor determinante en la variación de los resultados, aunque en
diferente escala de probabilidad, es el método de extracción. Acorde con Rufino et
al., realizaron una extracción con metanol 50 % v/v y posterior a una
centrifugación, se sometió al residuo a una extracción con acetona: agua 70:30
v/v, para generar mayor rendimiento en la extracción de antioxidantes,
principalmente polifenoles, ya que en ciertos estudios se ha comprobado la
efectividad de la acetona para la extracción de polifenoles. Aun así, los valores de
polifenoles totales son menores a las reportadas por el presente estudio, así que
la variabilidad de los resultados probablemente no se deba a la diferencia de
métodos de extracción, ya que en el estudio realizado por Sotero et. al., realizaron
un método similar al del presente estudio.
Los valores de ácido ascórbico encontrados en el presente estudio (Tabla 17)

varían entre 199.54 mg/g liofilizado a 186.97 mg/g liofilizado, valores sumamente
diferentes a los reportados por Sotero et al. (143.37 mg/g liofilizado), a diferencia
de lo reportado por Rojas et al. (171.28 mg/g liofilizado) y por Vega et al. (203.83
mg/g liofilizado). Estas diferencias en la tendencia de contenido de ácido ascórbico
entre los diferentes estudios pueden ser justificadas por la existencia de
variabilidad de ecotipos y genotipos de camu-camu, factores ambientales de las
68
diferentes zonas de procedencia, pH del agua y del suelo, la temperatura y
nutrientes existentes que influyen en la biosíntesis del ácido ascórbico81. A
diferencia de Rojas et al., los estudios realizados por Sotero et al. y Vega et al.
reportaron los lugares de recolección, que fueron de Loreto y Pucallpa
respectivamente. Un hecho que debe ser resaltado es que los valores reportados
por Vega et al. son similares a los reportados por el presente estudio y que las
zonas de recolección se encuentren en la misma provincia (Coronel Portillo,
Ucayali), probablemente por los factores influyentes en la concentración de ácido
ascórbico mencionados anteriormente.
En el caso de la medición de la captura del radical DPPH, se utilizó el método de

Brand-Williams et al.80, mediante el cual se evalúa la capacidad antioxidante por el
uso de radicales libres. Esta prueba se basa en una reacción redox, en la que 2,2-
di (4-tert-octilfenil)-1-picrilhidrozil (DPPH) actúa como agente oxidante o radical
libre, captando un electrón que le dona el antioxidante, que para estos efectos
corresponderá a los extractos del liofilizado de camu-camu. Esto lo que ocasiona
es que la solución original de DPPH pase de color azul violeta al amarillo pálido de
acuerdo a la capacidad del antioxidante empleado.
Acorde con Sotero et al., a una concentración del extracto metanólico de liofilizado
de camu-camu de 1000 µg/mL, se obtuvo un porcentaje de 85.63 % de inhibición
de radicales libres. Si la concentración de los extractos en el presente estudio
fuera expresada en ug/mL (Tabla 15), a una concentración de 1104 µg/mL,
obtenemos un porcentaje de 94.021 % de inhibición de radicales libres. Esta
diferencia de porcentajes de inhibición puede explicarse a la diferencia de
concentración de extractos, en el que el del presente estudio presenta una
concentración mayor y por tanto es explicable que tenga mayor actividad
antioxidante. Los compuestos fenólicos y el ácido ascórbico pueden contribuir a la
actividad antioxidante en frutas, vegetales y gramíneas82, tal como se ha
corroborado en el presente estudio con el liofilizado de camu-camu, el cual
presente altas concentraciones de los componentes mencionados.
69
Los datos en el presente estudio indican que existe un efecto antidiabético y
antioxidante del liofilizado de camu-camu en la Diabetes tipo 2 inducida por
estreptozotocina en ratas Holtzman.
Con respecto al peso corporal, la pérdida significativa (p<0.05; Anexo 2) de peso

corporal en las ratas diabéticas comparadas con aquellas de los grupos
normoglucémicos en la semana 0 puede deberse a la demacración del musculo
esquelético, deshidratación y catabolismo de grasas y proteínas 83, 84, 85. Acorde
con el estudio realizado por Wohaieb et al. 86, el descenso de peso corporal
inducido por estreptozotocina se puede encontrar entre 30-35 % del valor basal.
Estos porcentajes de disminución del peso corporal son similares a los reportados
en el presente estudio (aproximadamente entre el 27-28% de pérdida de peso
corporal-Tabla 18), valores que también se reportan en otros estudios 88,89. No
obstante, durante la fase de tratamiento, se observó que el grupo de diabéticos sin
tratamiento presento un aumento de peso no significativo (p>0.05; Figura 8; Anexo
2), pero lo tuvo, tal como lo reportado por Al-Attar et al.87, en el cual el grupo
diabético sin tratamiento presento una recuperación del 16.1 % del peso corporal
comparado al 15.52 % del reportado en nuestro estudio (Tabla 18). Observamos
que las variaciones de peso más notorias durante el tratamiento se generaron
durante la primera semana de tratamiento con liofilizado de camu-camu (Anexo 2).
Durante la segunda semana de tratamiento se observó que las variaciones de
pesos no tenían diferencia significativa (p>0.05) entre ellas (Anexo 2) y durante la
tercera y última semana de tratamiento se observó una variación de pesos
corporales entre los distintos grupos, pero que no reflejaron diferencia significativa
(p>0.05; Anexo 2).
Uno de los parámetros para considerar la mejora del estado diabético es para
determinar el efecto del tratamiento en el peso corporal. Un incremento, aunque
sea leve en el peso corporal implica que posiblemente los efectos anabólicos han
anulado los catabólicos84.
70
Ante estos resultados, podemos determinar que el liofilizado de camu-camu fue
efectivo en ejercer protección contra la pérdida de peso en ratas
normoglucémicas, específicamente los grupos pertenecientes a las dosis de 28.7
mg/kg y 57.4 mg/kg (G3 y G4 respectivamente). En lo que respecta a los grupos
hiperglucémicos, era de esperarse que existiera una recuperación del peso
corporal, y a diferencia del grupo Control negativo (G5), los grupos 6,7, 8 y 9
presentaron una recuperación del peso mucho más rápida, basándonos en la
diferencia significativa (p<0.05) entre las variaciones del peso corporal (Anexo 3)
durante todo el tratamiento. No obstante, se observa que en los grupos 7, 8 y 9
presentaron una tasa menor de aumento de peso. Acorde con Al Attar et al., o
bien existe una protección contra la pérdida de peso o un incremento del peso
corporal con su propio rol distintivo de actuar. La normalización del metabolismo
de carbohidratos, proteínas y grasas aliviarían los síntomas diabéticos como
pérdida del peso corporal y fatigabilidad. Esto ciertamente mejoraría la calidad de
vida del individuo. Del presente estudio se puede concluir que el liofilizado de
camu-camu es obviamente efectivo no solo en prevenir la pérdida de peso sino
también en ayudar a ganarlo de una manera moderada. Estos efectos beneficios
pueden ser debidos a la combinación de las propiedades de los compuestos
fenólicos en altas concentraciones encontradas en el liofilizado del camu-camu.
Kwon et al.89 observó el efecto en el peso corporal del extracto de la soya negra,
en la cual se alimentaron a las ratas con una dieta conteniendo 10% de soya
negra, equivalente a 0.037% de compuestos fenólicos, el peso corporal y el tejido
adiposo blanco fue reducido significativamente cuando se comparó con ratas del
grupo control. Otro estudio (Song et al.90), evaluó el efecto del extracto del rizoma
Dioscoreae tokoronis en lípidos plasmáticos, peso corporal y enzimas lipogénicas
en ratas, ya que se reporta que este rizoma presenta altas concentraciones de
polifenoles totales, encontrándose que hubo reducción del peso corporal en el
tejido adiposo epididimal.
Con respecto al grupo 9 (tratamiento con glibenclamida), su comportamiento es

similar al tratamiento con liofilizado de camu-camu con relación al peso corporal.
71
Eso se debe que ante un aumento de la producción de insulina, esta tiene el
efecto estimulante metabólico de disminuir la lipolisis, incrementa la síntesis de
ácidos grasos, incrementa la captura de aminoácidos por los tejidos e incrementa
la síntesis de proteínas además de la replicación de ADN estimulada por insulina,
la modulación de varias actividades enzimáticas a través del incremento de la
traducción del ARNm y estimular al ribosoma para producir proteínas, todos estos
procesos dirigen la mejora del peso corporal91, la cual fue significativa (p<0.05;
Anexo 2 y 3)
Con respecto a la glucosa sérica, el aumento del nivel de glucosa sérica en las
ratas a las que se administró estreptozotocina se debe al hecho que la
estreptozotocina causa una reducción notable en la liberación de insulina por la
destrucción de células β-pancreáticas, es por ello que se observa una diferencia
significativa (p<0.05) en los valores de glucosa en los grupos 5, 6, 7, 8 y 9 entre la
semana 0 y la semana 1 (Anexo 4), debido a que el primer día de la semana 0 se
administraron las dosis de estreptozotocina a todos los animales de los grupos
señalados (Figura 9; Anexo 4).
Se ha observado en el presente estudio que los animales normoglucémicos con

tratamiento de liofilizado de camu-camu (G2, G3, G4) no presentaron variación
significativa (p>0.05) en su nivel de glucosa sérica durante todo el tratamiento
(Anexo 5). Esto es razonable, ya que en otros estudios92 se ha demostrado que la
administración de compuestos antioxidantes tales como el ácido elágico en
animales normoglucémicos, estos no tendrán variación significativa (p>0.05) en la
glucosa sérica. Esto podría sugerir que los efectos hipoglucemiantes del liofilizado
de camu-camu están enfocados en individuos con Diabetes.
Con respecto a los animales diabéticos sin tratamiento (G5), no hubo una
variación significativa (p>0.05) de la glucosa sérica durante todo el tratamiento
(Tabla 19; Anexo 5), es decir, se mantuvo en valores altos (aproximadamente
entre 376.62 mg/dL a 389.12 mg/dL), lo cual se reporta en distintos estudios
similares86, 87.
72
La glucosa sérica en los grupos hiperglucémicos tratados con liofilizado de camu-
camu (G6, G7 y G8) presentan un descenso significativo (p<0.05) y progresivo
(Anexo 4). No obstante, el tratamiento de menor dosis (G6) presentó la variación
significativa (p<0.05) de la glucosa sérica en la tercera y última semana de
tratamiento (Anexo 4). Tanto el tratamiento de mediana y mayor dosis (G7 y G8
respectivamente) presentan una variación similar durante las tres semanas de
tratamiento, además que a la tercera semana de tratamiento, se observó que los
grupos hiperglucémicos tratados con las tres dosis tuvieron similares
disminuciones de sus niveles de glucosa sérica (Figura 9; Anexo 4), por lo que se
podría sugerir que se encuentra un estado de efecto máximo del compuesto.
Se puede observar que según Malini et al.92, el posible mecanismo de la actividad

hipoglucemiante de los polifenoles totales (especialmente el ácido elágico, del cual
se reporta el camu-camu presenta altas concentraciones93) podría ser a través de
la potenciación de la secreción pancreática de insulina desde las células β de los
islotes de Langerhans o debido al mejoramiento del transporte de la glucosa
sanguínea al tejido periférico. También se ha reportado que la miricetina (también
reportado como parte de los flavonoides en camu-camu93) mejoraría la
sensibilidad a la insulina en la mejora de la actividad de los receptores IRS-1 y
GLUT-4 en ratas obesas Zucker93,99.
Otro factor importante reportado en la literatura es la concentración considerable

de fibra en la pulpa de camu-camu56,73. Esta concentración puede haber ayudado
a reducir los niveles de insulina y glucosa en las ratas de los grupos de
hiperglucémicos con tratamiento de liofilizado de camu-camu, ya que mejoraría el
control glicémico, el cual consecuentemente reduce la necesidad de insulina. Las
fibras solubles son las más efectivas en controlar la glucosa sérica y esta es
conocida ya que se sabe que existe una propiedad relacionada con la habilidad de
ralentizar el vaciamiento gástrico, proveyendo aperturas para la penetración de
carbohidratos dentro de la fibra por reducir la cantidad disponible para la
absorción, y que no haya contacto con la mucosa intestinal, reduciendo los niveles
de glucosa sanguínea, la cual promueve cambios hormonales 94. Se ha
73
demostrado en diversos estudios que la fibra soluble es efectiva en reducir la
glucemia postprandial89.
El grupo tratado con glibenclamida (G9) tuvo la mayor disminución significativa

(p<0.05) de glucosa sérica durante todo el tratamiento (Anexo 7). No obstante,
después de la primera semana de tratamiento, se observó que la disminución de
glucosa del grupo G8 no fue diferente significativamente (p>0.05) que la
disminución de glucosa del grupo de tratamiento con glibenclamida (G9) (Anexo
4), es decir, el efecto fue similar. Posterior a ello, después de la segunda semana
de tratamiento se observó que la glibenclamida genero una disminución de
glucosa mayor significativamente (p<0.05; Anexo 6) que los demás tratamientos
con liofilizado de camu-camu. Sin embargo, al final de la tercera semana de
tratamiento, se observa que la disminución de glucosa sérica en los grupos
hiperglucémicos con tratamientos de liofilizado de camu-camu y glibenclamida no
son diferentes significativamente (p>0.05; Anexo 4). Esto puede explicarse a que
se conoce que la glibenclamida podría tener diferentes efectos en las células β
pancreáticas distintos a su acción en los canales K+ ATP-dependientes. Acorde
con Patanè et al.95, las células β pancreáticas pasan a ser más sensibles a la
glucosa después de una corta exposición a la glibenclamida. Este efecto puede
contribuir al mecanismo de acción de este fármaco en la estimulación de liberación
de insulina. Ello se realizó en el presente estudio, ya que la dosis de glibenclamida
administrada al grupo correspondiente se realizó una vez por semana (al inicio de
cada semana de tratamiento).
La Diabetes inducida por estreptozotocina está asociada con una severa

dislipidemia96, 98. En ese sentido, tal como está expresado en la Tabla 20, el
colesterol total, los niveles de triglicéridos séricos y el colesterol LDL fueron
significativamente (p<0.05; Anexo 6, 7, 9) incrementados y el colesterol HDL
disminuido significativamente (p<0.05; Anexo 8) en las ratas diabéticas (G5).
Los grupos hiperglucémicos con tratamientos de liofilizado de camu-camu

presentaron efectos significativos (p<0.05; Anexo 6, 7, 8, 9) en todos los
74
parámetros del perfil lipídico, excepto el grupo con menor dosis de liofilizado de
camu-camu (G6), el cual no tuvo un efecto significativo (p>0.05) en los triglicéridos
séricos (Anexo 7). Ciertas hipótesis, las cuales pueden ser vistas como el
mecanismo por el cual el liofilizado de camu-camu es responsable por los niveles
disminuidos de variables del perfil lipídico, sugieren que algunos compuestos
fenólicos que se encuentran en el producto son los que aumentan la excreción del
colesterol en forma de ácidos biliares, debido a la redistribución de las
concentraciones en plasma y tejidos97; o el incremento de los receptores LDL
hepáticos, generando una disminución en las concentraciones plasmáticas. Esto
también sugiere que el liofilizado de camu-camu tiene el poder de inhibir la síntesis
en el hígado y/o acelerar el catabolismo del colesterol LDL y los quilomicrones,
incrementando la actividad de la enzima lipoprotein lipasa (LPL), la cual podría
resultar en una reducción de la concentración de triglicéridos séricos,
principalmente en la etapa postprandial97.
Se ha reportado que los polifenoles presentes en el té y la cacao, tales como, las

catequinas, quercetinas y proantocianidinas, podría inhibir la actividad de la lipasa,
una enzima responsable de la degradación lipídica en el intestino y entonces
reducir la absorción de esas moléculas100,101, debido a la interferencia en su
emulsificación, digestión y solubilización micelar. Cierto estudio mostro que la
toma oral de las proantocianidinas de las semillas de la uva bloquearon
significativamente el incremento de los niveles de triglicéridos séricos inducida por
ingestión de aceite de manteca de cerdo debido a la secreción reprimida de los
triglicéridos séricos y colesterol VLDL102.
Se sabe claramente que en la Diabetes Mellitus incontrolada, en la cual se ve

incrementado el colesterol total, los triglicéridos séricos y el colesterol LDL
asociado con la disminución del colesterol HDL, lo cual contribuye a la enfermedad
de las arterias coronarias. Tal como se conoce, la hiperlipidemia es una
complicación conocida27 de la Diabetes Mellitus y coexiste con la hiperglucemia y
es caracterizada por incremento de los niveles de colesterol total, triglicéridos
séricos y colesterol LDL, y todas las anormalidades lipídicas asociadas con la
75
Diabetes fueron significativamente normalizadas por el tratamiento con liofilizado
de camu-camu. Toda esta data del perfil lipídico sugiere que la Myrciaria dubia
como liofilizado pueda tener una acción protectora en la Diabetes Mellitus
relacionada a las complicaciones cardiovasculares.
Los modelos animales de Diabetes exhiben altos niveles de estrés oxidativo

debido a la hiperglucemia crónica y persistente, la cual merma el sistema de
defensa antioxidante y por ende promueve la generación de radicales libres. Estos
compuestos reactivos pueden causar la peroxidación de lípidos resultando en la
formación de hidroperóxidos de ácidos grasos103.
La tabla 21 muestra el efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad

antioxidante plasmática. Con respecto a la capacidad antioxidante (expresada en
% de inhibición y mmoles de trolox/mL de plasma), observamos un incremento de
ambos parámetros en los grupos tratados con liofilizado de camu-camu, tanto en
los hiperglucémicos (G2, G3 y G4) como en los hiperglucémicos (G6, G7, G8),
demostrando que los extractos fueron exitosos en revertir estrés oxidativo causado
por la Diabetes, principalmente en las dosis de 28.7 mg/kg y 57.4 mg/kg de
liofilizado (G7 y G8), ya que fueron diferentes significativamente (p<0.05, Anexo
10 y 11) en comparación con los valores en ratas diabéticas sin tratamiento.
Los antioxidantes que se encuentran en el liofilizado constituirían un sistema de

defensa que limita la toxicidad asociada con los radicales libres, tal como lo
reportado por otros estudios104, 105. Los niveles de estos mecanismos de defensa
esta alteradas en la Diabetes y por lo tanto la inhibición inefectiva de estos
radicales libres juegan un rol crucial en determinar el daño extenso en los tejidos 86.
Investigaciones anteriores ha demostrado que los individuos diabéticos tienen
bajos niveles de vitamina C y vitamina E y que la suplementación con estas
vitaminas puede ayudar a prevenir el desarrollo a la intolerancia de la glucosa y la
Diabetes, considerando que ambas se encuentran en altas concentraciones en el
camu-camu107. La vitamina C es un antioxidante hidrofílico en el plasma, debido a
esto desaparece rápidamente en comparación a otros antioxidantes cuando el
76
plasma está expuesto a especies reactivas de oxígeno106. La disminución
significativa observada en el nivel de vitamina C plasmático podría ser causada
por la utilización incrementada de la vitamina C como una defensa antioxidante
contra las especies reactivas de oxígeno106. Considerando que en el presente
estudio se ha demostrado que el liofilizado presenta altas concentraciones de
vitamina C en su composición, por lo que se explica que se haya encontrado la
actividad antioxidante in vivo en los animales de experimentación, tanto generando
un efecto regenerador en los animales hiperglucémicos como un efecto protector
por la disminución de radicales libres en los animales normoglucémicos.
8. CONCLUSIONES
- El análisis quimico-proximal (g%) del liofilizado de la pulpa del fruto de

Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (Camu-camu) fue: proteínas totales
3.965 ± 0.16, grasas totales 1.5106 ± 0.093, carbohidratos 80.15 ± 1.065,
fibra total 2.96 ± 0.066, cenizas (g%) 2.67 ± 0.1223 y el valor calórico
(cal/g) fue de 3500.5 ± 2.87.
- Se obtuvo una concentración de polifenoles de 153.3 mg equivalentes de
ácido gálico/g de liofilizado, el porcentaje de inhibición de la oxidación
utilizando DPPH fue de 94.021 %, a una concentración de 1.104 mg/mL y
la concentración de vitamina C fue de 191.28 mg/g de liofilizado
- Las ratas normoglucémicas e hiperglicemicas a dosis de 28.7 mg/kg y 57.4
mg/kg de liofilizado de camu-camu presentaron un aumento de peso más
lento que las ratas a dosis de 5.74 mg/kg.
- Las dosis de 28.7 mg/kg y 57.4 mg/kg de liofilizado de camu-camu
presentaron una reducción similar de la glucosa sérica en animales
hiperglucémicos durante todo el tratamiento, mientras que la dosis de 5.74
mg/kg presenta su efecto hipoglucemiante en la tercera y última semana de
tratamiento.
77
- El liofilizado de camu-camu redujo triglicéridos séricos, colesterol total y
colesterol LDL y aumento colesterol HDL en comparación con las ratas
diabéticas sin tratamiento.
- El liofilizado de camu-camu presenta un efecto protector contra los
radicales libres en animales normoglucémicos, se observa un mayor
porcentaje de inhibición de radicales libres y de capacidad antioxidante
(expresada en mmoles eq-Trolox/mL plasma) en las ratas normoglucémicas
con las 3 dosis de liofilizado de camu-camu ensayadas.
- El liofilizado de camu-camu tiene un efecto protector en animales de
experimentación con Diabetes Mellitus inducida, se observa que regula las
alteraciones causadas por esta patología en el perfil lipídico, llevando a
valores de colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL y triglicéridos
séricos a valores cercanos a los normales.
9. RECOMENDACIONES
 En el presente trabajo se ha reconocido que existe un insumo de gran

interés para la industria farmacéutica, alimentaria y nutracéutica; así como
la mención de actividad antioxidante in vitro. Es propio recomendar la
continua búsqueda de nuevas actividades biológicas; además de los
consecuentes estudios toxicológicos, clínicos y químicos, con el fin de
lograr una mayor caracterización del liofilizado de camu-camu si es que se
piensa en su aplicación en el campo de la salud.
 Se debe recordar que en el presente estudio se realizaron la cuantificación

de polifenoles totales, no obstante, sería interesante caracterizar cada uno
de los componentes que están clasificados dentro de estos y cuantificarlos,
ya que se ha demostrado que ciertos polifenoles presentan actividades
biológicas.
78
 Considerar el desarrollo de formulaciones que presente estabilidad para los
componentes bioactivos presentes en el insumo estudiado, con el fin de
preservar las actividades biológicas observadas en el presente estudio.
 Por otro lado, durante la preparación del liofilizado, dentro de los demás
componentes del fruto, no se tomó en cuenta la posibilidad del estudio del
liofilizado de cascara de camu-camu en las actividades biológicas
estudiadas, ya que se menciona en la bibliografía consultada que estos
residuos del fruto también presentan concentraciones importantes de
componentes bioactivos14, 15,81
79
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camu-camu (Myrciaria dubia). An Fac Med Lima 66(4).
89
ANEXOS
ANEXO 1. PLANTACION Y UBICACION DE RECOLECCION DE MUESTRAS

DE CAMU-CAMU
ANEXO 2. ANALISIS POR CONJUNTOS HOMOGÉNEOS: PRUEBA DE
TUCKEY HSD DE LAS VARIACIONES DE PESO CORPORAL ENTRE
SEMANAS DE TRATAMIENTO
Donde c se expresa con dos dígitos: el primer dígito señala la variación en el periodo de tratamiento y
el segundo dígito señala el tipo de tratamiento:
Primer dígito: (1)Variación entre Semana 0 y Semana 1; (2) Variación entre Semana 1 y Semana 2; (3)
Variación entre Semana 2 y Semana 3; (4) Variación entre Semana 3 y Semana 4
Segundo dígito: (1) G1; (2) G2; (3) G3; (4) G4; 5 (G5); 6 (G6); 7 (G7); 8 (G8); 9 (G9)
ANEXO 3. PRUEBA DE ANOVA DE UN FACTOR: COMPARACIÓN DE LOS
VALORES PROMEDIOS DE PESO CORPORAL AL INICIO Y AL FINAL DEL
TRATAMIENTO. ANÁLISIS POR CONJUNTOS HOMOGÉNEOS (PRUEBA DE
TUKEY HSD)
Donde c se expresa con dos dígitos: el primer dígito señala el periodo de tratamiento y el segundo dígito
señala el tipo de tratamiento:
Primer dígito: (1) Antes del iniciar el tratamiento; (3) Después de finalizar el tratamiento total (3 semanas)
ANEXO 4. ANÁLISIS POR CONJUNTOS HOMOGÉNEOS: PRUEBA DE
TUCKEY HSD DE LAS VARIACIONES DE GLUCOSA SÉRICA ENTRE
SEMANAS DE TRATAMIENTO
Donde c se expresa con dos dígitos: el primer dígito señala la variación en el periodo de tratamiento y
el segundo dígito señala el tipo de tratamiento:
Primer dígito: (1)Variación entre Semana 0 y Semana 1; (2) Variación entre Semana 1 y Semana 2; (3)
Variación entre Semana 2 y Semana 3; (4) Variación entre Semana 3 y Semana 4
ANEXO 5. Prueba de ANOVA de un factor: comparación de los valores

promedios de glucosa sérica al inicio y al final del tratamiento. Análisis por
conjuntos homogéneos (prueba de Tukey HSD)
Donde c se expresa con dos dígitos: el primer dígito señala el periodo de tratamiento y el segundo dígito
señala el tipo de tratamiento:
Primer dígito: (1) Antes del iniciar el tratamiento; (3) Después de finalizar el tratamiento total (3 semanas)
ANEXO 6. COMBINACIÓN DE TRATAMIENTO MÁS EFICIENTE
(COLESTEROL TOTAL). MÉTODO DE SUBCONJUNTOS HOMOGÉNEOS;
PRUEBA DE TUKEY HSD
(TRIGLICÉRIDOS SÉRICOS). MÉTODO DE SUBCONJUNTOS HOMOGÉNEOS;
PRUEBA DE TUKEY HSD
(COLESTEROL HDL). MÉTODO DE SUBCONJUNTOS HOMOGÉNEOS;
PRUEBA DE TUKEY HSD
(COLESTEROL LDL). MÉTODO DE SUBCONJUNTOS HOMOGÉNEOS;
PRUEBA DE TUKEY HSD
ANEXO 10. COMBINACIÓN DE TRATAMIENTO MÁS EFICIENTE (%
INHIBICIÓN-ABTS+). MÉTODO DE SUBCONJUNTOS HOMOGÉNEOS;
PRUEBA DE TUKEY HSD
ANEXO 11. COMBINACIÓN DE TRATAMIENTO MÁS EFICIENTE (mmoles
Trolox/mL plasma). MÉTODO DE SUBCONJUNTOS HOMOGÉNEOS; PRUEBA
DE TUKEY HSD

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Universidad Peruana Cayetano Heredia

Facultad de Ciencias y Filosofía

“Alberto Cazorla Talleri”

ANALISIS PROXIMAL, POLIFENOLES TOTALES, ACIDO ASCORBICO Y ACTIVIDAD

ANTONIO ENRIQUE TUCTO BELLO

Tesis para optar por el Título Profesional de Químico

M.Sc. León Faustino Villegas Vílchez

M.Sc. Ana Colarossi Salinas

M.Sc. Rocío Inga Peña

Presidente: Dr. José Aliaga Arauco

Secretario: MSc. César López Matayoshi

Vocal: MSc. Graciela Untiveros Bermúdez

- A mis padres, por el apoyo incondicional en todos los rubros

- A mis asesores, los profesores León Villegas, Ana Colarossi y

- Al profesor Camilo Díaz Santibañez, del cual obtuve la asesoría

- A los miembros del Servicio de Control de Calidad,

- A mis amigos, los cuales siempre con sus consejos permitieron

2. Propiedades de las preparaciones de insulina 17

3. Comparación de los fármacos utilizados para el 18

4. Pérdida acumulada de Vitamina C en los mejores 26

5. Procedimiento para la estimación de la capacidad 39

6. Procedimiento para la cuantificación de la glucosa 42

7. Procedimiento para la cuantificación de los 43

8. Procedimiento para la cuantificación del colesterol 44

9. Procedimiento para la cuantificación del colesterol 45

10. Porcentaje de humedad en pulpa de camu-camu y 49

11. Porcentaje de humedad residual en el liofilizado de 49

12. Composición química proximal del liofilizado de 50

13. Valores de concentración de ácido gálico y 51

15. Capacidad inhibitoria de la oxidación 52

17. Concentración de Ácido Ascórbico en el liofilizado de 54

18. Efecto del liofilizado de camu-camu en el peso 56

19. Efecto del liofilizado de camu-camu en el nivel de 58

20. Efecto del liofilizado de camu-camu en el perfil 60

21. Efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad 62

2. Casos notificados de Diabetes Mellitus según tipo 12

3. Estructura molecular de la estreptozotocina 19

4. Frutos de Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc Vaugh (camu- 21

6. Composición química proximal del liofilizado de camu- 50

7. Curva de calibración del Ácido Gálico 51

8. Cromatograma del estándar de ácido ascórbico 54

9. Efecto del extracto acuoso del liofilizado de camu-camu 57

10. Efecto del liofilizado de camu-camu en el nivel de 59

11. Efecto del liofilizado de camu-camu en el perfil lipídico 61

12. Efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad 62

13. Efecto del liofilizado de camu-camu en la capacidad 63

Ortotrópico: Que presenta crecimiento vertical.

Plagiotrópico: Que presenta crecimiento horizontal.

Alogamia: Polinización cruzada y fecundación entre individuos genéticamente

Geitonogamia: Polinización entre flores distintas del mismo individuo.

Xenogamia: Polinización entre flores de distintos individuos.

Riparia: Termino que describe a la vegetación típica de las riberas de ríos y

Heliofita: Cualquier especie de planta que requiere de plena exposición a la luz

Liofilización: Proceso en el que se congela el producto y posteriormente se

Radical libre: Molécula (orgánica o inorgánica), en general extremadamente

Estrés oxidativo: Desorden en el balance entre la producción de especies

Isocrático: El solvente conserva la misma concentración durante todo el tiempo

Dilución: Acción y efecto de diluir. Disminuir la concentración de una disolución

Calcinación: Es la accionar de calcinar o quemar la muestra.

ABTS+ Ácido 2,2'–azino–bis– (3–etillbenzotiazolin–6–

ADN Ácido Desoxiborronucleico

ATP Adenosin Trifosfato

CEH Colesterol ester hidrolasa

CHOD Colesterol oxidasa