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Introdução
Os processos biotecnologicos variam quanto ao seu
grau de esterilização.
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Definições
Desinfetante : desinfecção = morte de muitos, mas não de
todos os microrganismos. Os desinfetantes variam em
relação à danificação dos tecidos : fenol - objetos
inanimados / etanol e iodo - superfícies cutâneas.
Critérios de escolha:
• Efetividade em alcançar um nível aceitável de
esterilidade;
• Efeitos positivos e negativos sobre os componentes
do meio;
• Custo de investimento operacional.
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Modos de ação
Ações - Morte celular por lesões
- Desnaturação de proteínas
- Deterioração de carboidratos (produtos tóxicos)
- Oxidação de constituintes
- Coagulação de proteínas
- Quebras e rearranjos de ácidos nucléicos
- Ionização de moléculas
- Alquilação de proteínas
- Interações nas membranas celulares
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Esterilização por agentes físicos
• Calor seco
• Calor úmido (mais comum)
• Radiação UV
• Radiação gama (ionizante)
• Ultrassom
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Calor úmido
- Mais freqüente: facilidade de obtenção, manuseio,
eficácia e custo baixo.
- Utilizado para tubulações e reatores vazios ou
carregados.
- Pode ser utilizada filtração com
cartuchos esterilizantes.
- Temperatura elevada associada
a elevado grau de umidade
- Desnaturação irreversível de
proteínas
Autoclave horizontal
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Calor úmido
-Em reatores vazios: injeção direta de vapor (até 121 oC e
1atm)
-Válvula de segurança
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Calor úmido
Detalhes da esterilização
-Durante o processo o meio de cultura deve ser agitado
-Fazer circular vapor pela serpentina até temperatura 96
97ºC; válvulas,filtros, tubagens são esterilizados por
vapor fluente.
-Injeção de vapor direto no meio de cultura até aos
100ºC
-Reator fechado até 121ºC .
-A injeção direta pode então ser cortada e controlada a
temperatura e pressão através da serpentina
- O resfriamento é conseguido com circulação de água.
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Calor seco
-Feita em fornos ou estufas (até 160oC).
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Esterilização por UV
• Utilizado mais para vidros, embalagens, utensílios
metálicos, etc.
• Raios UV agem
diretamente no DNA
e RNA.
• A esterilização é feita
expondo o material a radiação pelo t adequado.
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Esterilização por radiações gama
Irradiador de
alimentos
(fonte: Revista
Brasil Nuclear)
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Esterilização por agentes químicos
-Utilizados mais como desinfetantes do que como
agente de esterilização.
Acido peracético/peróxido de Não requer ativação . Odor e Compatibilidade com met. como
hidrogênio irritação insignificante chumbo, cobre zinco, etc
Glutaraldeído Muito estudado. Excelente Irritação respiratória. Odor
compatibilidade pungente. Atividade relativamente
lenta.
Peróxido de Hidrogênio No activation requiredMay Material compatibility concerns for
enhance removal of organic brass,zinc, copper, and nickel or
matter andorganismsNo disposal silver platingSerious eye damage
issues No odor or irritation issues if contacted
Compatible with metals, plastics,
and elastomers
Ortoftalaldeído Ação rápida. Alto nível de Mancha pele, roupas e ambientes.
desinfecção. Não requer ativação.
Excelente compatibilidade.
Ácido Peracético Ambientalmente inócuo (sub Potencial incompatibilidade
produtos ácido acético, O2, H2O). Utilizado para instrumentos
Sem efeitos adversos a saude. submersos
Sérios danos a olhos e pele
(quando concentrado).
Não possui longos períodos de
estocagem.
Adaptado de: RUTALLA W, WEBER D. Disinfection of endoscopes: review of new chemical sterilants used for high level disinfection.
Infect Control Hosp Epidemiol. 1999; 20: 69-76
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Esterilização por agentes químicos
-Agentes gasosos
• Quase não utilizado em indústrias de fermentação.
• Utilizado para assepsia de salas e laboratórios
(vapores de formaldeído).
• Sua ação depende da concentração do agente, da
umidade e da temperatura.
• Mais utilizados: óxido de etileno, óxido de
propileno, formaldeído e betapropiolactona.
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Cinética da destruição térmica
-A Velocidade de destruição pelo calor úmido
depende:
– Do MO;
– Do meio;
– Da temperatura
• As fases da esterili-
zação térmica descontí-
nua são:
I.Aquecimento
II.Esterilização
III.Resfriamento
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Cinética da destruição térmica
-A taxa de células vivas diminui com o tempo (T >
Tletal)
Taxa específica
dN = N - kN de morte
dt
Taxa específica
de crescimento
-Como na esterilização não há crescimento, a taxa de
células vivas decresce com o passar do tempo:
dN = - kN
dt
ln N = ln N0 – kt ou N = No e-kt
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Cinética da destruição térmica
-A dependência de k com a T é dada pela equação de
Arrhenius:
k = A e-E/RT
A = constante empírica
R = Constante universal dos gases
E = energia de ativação de destruição do
microorganismo
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Cinética da destruição térmica
-A dependência de k com a T é mostrada no gráfico
abaixo:
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