Laboratorio de Bioquímica.

Grupo H2

INFORME PRÁCTICA 5:
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA Y COLESTEROL EN SANGRE

Silvia Juliana Becerra Anaya. Código: 2080117

Andrea Katherine González. Código: 2080139

Universidad Industrial de Santander

Facultad de Ciencias Básicas
Escuela de Química

Recibido: Luis Oveimar Barbosa Jaimes. Aceptado: Octubre 3, 2012

RESUMEN
En la práctica se llevó a cabo la determinación de glucosa y colesterol en una muestra de sangre. Para
cual, se utilizaron los reactivos de Biosystems para uso in vitro en el laboratorio clínico. Los compuestos
de interés se cuantificaron por espectrofotometría a 505 nm.

INTRODUCCIÓN:
La glucosa es la principal fuente de energía para el
metabolismo celular, esta se almacena en el hígado
el cual tiene un papel importante en el
mantenimiento de la glucosa en sangre, su
determinación es útil para el diagnóstico de
numerosas enfermedades metabólicas
principalmente la diabetes mellitus.
Al igual que la glucosa, es necesario la
determinación del colesterol en sangre para la
prevención cardiovascular ya que se ha visto que
este contribuye a la formación de ateromas, lo cual
es debido a que es una sustancia cerosa que se
puede encontrar en todo nuestro cuerpo (tejidos
corporales y plasma sanguíneo). [1]
En la presente práctica se determina la
concentración de glucosa y colesterol en sangre
mediante complejos coloreados que se cuantifican
por espectrofotometría a una longitud de onda de
específica.
OBJETIVOS GENERALES:
 Determinación de glucosa y colesterol en
sangre mediante la formación de
complejos coloreados para su posterior
cuantificación por espectrofotometría a
una longitud de onda especifica.
 Analizar los resultados obtenidos de las
concentraciones de glucosa y colesterol,
por comparación con los niveles promedio
de estos.
MARCO TEÓRICO
La glucosa es un azúcar que es utilizada como
fuente de energía para el organismo, esta se
incrementa en la sangre al ingerir alimentos
diferentes al agua, lo que se consume desaparece
de la sangre mediante el empleo de una hormona
reguladora producida por el páncreas conocida
como insulina, cuando ocurre lo contrario se
secreta otra hormona llamada glucagón que
permite mantener los niveles de glucosa en sangre.
El análisis de la glucosa permite medir la
concentración de esta presente en la sangre para la
prevención o diagnóstico de una diabetes mellitus
o sacarina, esta enfermedad se caracteriza por
presentar valores superiores a 140 mg/dL, entre 70
y 110 mg/dL se consideran valores normales, pero
inferiores a 60 mg/dL desencadena una
hipoglicemia.
Su determinación se realiza después de la
oxidación enzimática en presencia de glucosa
oxidasa. El peróxido de hidrogeno formado
reacciona bajo la catálisis de peroxidasa con fenol

1
 Determinación de glucosa y colesterol en sangre

y 4-aminofenazona formando un complejo rojo- 1. Determinación de Glucosa

violeta usando la quinoneimina como indicador, el
cual es posible cuantificarlo por Las soluciones mostradas en la Tabla 1 se
espectrofotometría, a continuación se muestran las colocaron en tubos de ensayo, estos se incubaron
reacciones sucedidas: a 37 °C durante 5 minutos. Finalmente, se leyó su
absorbancia a =505 nm.
1
𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝑂2 + 𝐻2 𝑂 → 𝐺𝑙𝑢𝑐ó𝑛𝑖𝑐𝑜 + 𝐻2 𝑂2 (1)
2
Tabla 1. Parte experimental para la determinación
2 𝐻2 𝑂2 + 4 − 𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑎𝑛𝑡𝑖𝑝𝑖𝑟𝑖𝑛𝑎 + 𝐹𝑒𝑛𝑜𝑙 de glucosa.
→ 𝑄𝑢𝑖𝑛𝑜𝑛𝑎𝑖𝑚𝑖𝑛𝑎 + 4 𝐻2 𝑂 (2) Blanco Patrón Muestra
Patrón (S1) - 10 L -
Muestra - - 10 L
La reacción 1 se realiza en presencia de glucosa
oxidasa y la 2 en peroxidasa. Reactivo A1 1 mL 1 mL 1 mL

El colesterol es una sustancia que se encuentra en
todos los tejidos normalmente en la sangre, el
organismo necesita colesterol para la síntesis de
hormonas y sales biliares que desempeñan una
fuente importante en la absorción de las grasas
procedentes de los alimentos, si la cantidad de este
es grande puede contribuye a la formación de
ateromas.
A1. Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L, fenol 5
mmol/L, glucosa oxidasa > 10 U/mL,
peroxidasa>1 U/mL, 4-aminoantipirina 0,4
mmol/L, pH 7,5
S1. Patrón de Glucosa/Urea/Creatinina. Glucosa
100 mg/dL (5,55 mmol/L), urea 50 mg/dL,
creatinina 2 mg/dL. Patrón primario acuoso. [3]

Este es posible medirlo mediante un examen de 2. Determinación de Colesterol

triglicéridos en sangre, el cual se determina
después de la hidrólisis enzimática y la oxidación. Las soluciones de Tabla 2 se colocaron en tubos de
El indicador es la quinoneimina formada por el ensayo, estos se incubaron a 37 °C durante 15
peróxido de hidrogeno y 4-aminoantipirina en minutos. Posteriormente, se leyó su absorbancia a
presencia de fenol y peroxidasa, el principio de la =505 nm.
reacción se encuentra a continuación. [2]
Tabla 2. Parte experimental para la determinación
𝐸𝑠𝑡𝑒𝑟𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝐻2 𝑂 de colesterol.
→ 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑜𝑠 (3) Blanco Patrón Muestra
Patrón (S2) - 10 L -
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝑂2 Muestra - - 10 L
→ 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑛𝑒 − 3 − 𝑜𝑛𝑎 + 𝐻2 𝑂2 (4)
Reactivo A2 1 mL 1 mL 1 mL
2 𝐻2 𝑂2 + 4 − 𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑎𝑛𝑡𝑖𝑝𝑖𝑟𝑖𝑛𝑎 + 𝑓𝑒𝑛𝑜𝑙
→ 𝑞𝑢𝑖𝑛𝑜𝑛𝑒𝑖𝑚𝑖𝑛𝑎 + 4 𝐻2 𝑂 (5) A2. Reactivo. Pipes 35 mmol/L, colato sódico 0,5
mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol esterasa
La reacción 3 se realiza en presencia de lipasa, 4
> 0,2 U/mL, colesterol oxidasa > 0,1 U/mL,
en colesterol oxidasa (CHO) y la 5 en peroxidasa
peroxidasa > 0,8 U/mL, 4-aminoantipirina 0,5
(POD).
mmol/L, pH 7,0.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
S2. Patrón de Colesterol. Colesterol 200 mg/dL
(5,18 mmol/L). Patrón primario acuoso. [4]
Se extrajo el suero de una muestra de sangre para
realizar las respectivas determinaciones.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla 3. Datos experimentales Glucosa

2

Solución Absorbancia
Reactivo A1 + Patrón S1 0,325
Reactivo A1 + Muestra 0,272
Teniendo en cuenta los valores reportados en la
tabla anterior, se calcula la concentración de
glucosa en la muestra a partir de la siguiente
ecuación:
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑥 [𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛] = [𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎]
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛
0,272 100𝑚𝑔
[𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎] = 𝑥 = 83,69 𝑚𝑔/𝑑𝐿
0,325 𝑑𝐿
La concentración obtenida se encuentra dentro del
rango normal (70-110 mg/ dL) de glucosa, lo cual
quiere decir que el paciente no presenta síntomas
de hiperglicemia ni hipoglicemia, a pesar de que se
realizó un análisis al azar en donde se mide la
concentración de glucosa en una muestra de sangre
en cualquier horario habitual, otros análisis que se
pueden determinar para analizar los niveles de
glucosa en sangre corresponden a:
- Análisis de glucosa en ayunas: Este mide la
glucosa en una muestra de sangre obtenida cuando
la persona no ha comido ni tomado nada (excepto
agua) por al menos 8 horas.
-Análisis de tolerancia a la glucosa: Este comienza
con un análisis en ayunas de la glucosa. Luego el
paciente toma una bebida dulce con una cantidad
medida de glucosa. Los niveles de glucosa son
medidos en varias muestras de sangre obtenidas a
intervalos específicos de tiempo. [5]
Es importante destacar que para la determinación
de glucosa la muestra de sangre tomada del
paciente se realizó cuando este se encontraba
sentado, sin fumar ni ingerir alcohol durante las
anteriores 12 horas, además de resaltarse que este
análisis a diferencia de otros se puede medir en
cualquier momento del día.
Tabla 4. Datos experimentales Colesterol
Solución Absorbancia
Reactivo A2 + Patrón S2 0,024
Reactivo A2 + Muestra 1 antes de la prueba.
Determinación de glucosa y colesterol en sangre
Pese a los valores reportados en la tabla anterior se
procedió a calcular la concentración de colesterol
en la muestra.
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑥 [𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛] = [𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎]
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛
1 200𝑚𝑔
[𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎] = 𝑥 = 8333,33 𝑚𝑔/𝑑𝐿
0,024 𝑑𝐿
La concentración de colesterol obtenida no es un
valor válido, por tanto, se concluye que la
determinación no se pudo llevar a cabo. Esto se
observa en las absorbancias reportadas para el
patrón y la muestra; ya que para el primero se
obtuvo un valor prácticamente despreciable,
debido posiblemente a que durante el
procedimiento se utilizaron solamente 10 L,
cantidad que no fue suficiente para ser detectada.
Cabe mencionar que la muestra de sangre fue
tomada luego de que la persona ingiriera
alimentos, lo que pudo causar un alto contenido
lipídico en la misma; interfiriendo en la
determinación de colesterol.
El perfil lipídico lo constituye la cuantificación
analítica de una serie de lípidos que son
transportados en la sangre por los diferentes tipos
de lipoproteínas plasmáticas. La determinación de
estos parámetros es un procedimiento analítico
básico para el diagnóstico y seguimiento de
enfermedades metabólicas, primarias o
secundarias. Entre estos parámetros analíticos que
se pueden determinar están: el colesterol total, el
colesterol transportado por las LDL, el colesterol
transportado por las HDL, los triglicéridos totales,
ciertas apoproteínas particulares etc.
Condiciones para una determinación eficaz de
colesterol en sangre:
-El paciente debe encontrarse en un estado
fisiológico regular (sin ejercicio vigoroso) y bajo
su dieta ordinaria del día anterior a la prueba.
-La muestra debe recolectarse en ayuno total
excepto agua, durante un lapso de 12 a 14 horas
3

-La muestra debe recolectarse en tubo recolector al
vacío de tapón rojo el cual no contiene
anticoagulante.
-La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm para
separar el suero, si este se obtiene turbio, la
muestra es inaceptable. [6]
Debido a que no se tuvieron en cuenta varias de las
condiciones mencionadas anteriormente, no se
pudo determinar de manera efectiva la
concentración de colesterol en la muestra de
sangre.
CONCLUSIONES
 El colesterol es una sustancia lipídica
presente en todas las células del
organismo. Puede ser cuantificado por
métodos espectrofotométricos, ya que
según reacciones acopladas, forma un
complejo coloreado, el cual es detectado a
una longitud de onda específica.
 Para la determinación de colesterol total
se utilizan reactivos comerciales que
incluyen las enzimas y sustratos necesarios
para la cuantificación de todas las formas
de colesterol presentes en el suero.
 La glucosa es un azúcar que es utilizada
como fuente de energía para el organismo,
está puede ser cuantificada mediante la
formación de complejos coloreados por
métodos espectrofotométricos a una
longitud de onda determinada.
 El análisis de glucosa en sangre es posible
determinarlo en cualquier horario habitual
como no sucede con el colesterol, debido
a las posibles interferencias del material
lipídico generado por ingerir alimentos en
los momentos previos al análisis.
BIBLIOGRAFÍA
[1] THOMAS M. DEVLIN. Bioquímica. Cuarta
edición; ed. Reverté S. A., España.2004. pp: 1128-
1132.Disponible en:
Determinación de glucosa y colesterol en sangre
http://books.google.com.co/books?id=p3DCb9lTL
x8C&pg=PA1129&lpg=PA1129&dq=glucosa+y+
colesterol+bioquimica&source=bl&ots=Y_ZNSW
MjTQ&sig=jqN_12yt3uz2zqcA5hQfYHqX1UM&
hl=es&sa=X&ei=E2xsUJaoFrOH0QGVk4HIAg&
ved=0CDkQ6AEwAg <Septiembre 30 de 2012>.
[2]BRICEÑO VERONICA; OGOÑO CRISTIAN;
CHUQUIMARCA LENIN. Escuela de Bioquímica
y Farmacia, Laboratorio de Bioquímica Clínica.
Ecuador. Disponible en:
http://es.scribd.com/doc/45351469/bioquimica
<Septiembre 30 de 2012>.
[3] GLUCOSA. GLUCOSA OXIDASA/
PEROXIDASA. BioSystems S.A. Costa Brava 30,
Barcelona (Spain). Disponible en:
http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/
11538%20Glucosa.pdf <Septiembre 30 de 2012>.
[4] COLESTEROL. COLESTEROL OXIDASA/
PEROXIDASA. BioSystems, S.A. Costa Brava 30,
Barcelona (Spain). Disponible en:
http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/
11506-11539%20Colesterol.pdf <Septiembre 30
de 2012>.
[5] ÁVILA LUIS. Grupo de Diabetes de la
Sociedad Andaluza de Medicina Familiar y
Comunitaria.2010. Disponible en:
http://www.grupodiabetessamfyc.cica.es/index.php
/guia-clinica/guia-clinica/diagnostico.html
<Septiembre 30 de 2012>.
[6] MORÁN, V. Obtención de muestras
sanguíneas de Calidad analítica; 1ª ed; ed. Médica
Panamericana S.A. de C.V; México D.F. 2001.pp
65.