1.

Introducción a la cinética celular

a. Modelos de cinética celular
El modelo más simple es el modelo distribuido y no estructurado que se
basa en los siguientes dos supuestos:
1. Las celdas se pueden representar por un solo componente, como la
celda masa, número de células o la concentración de proteínas, ADN
o ARN
2. La población de masa celular se distribuye uniformemente a lo largo de la
cultura. La suspensión celular puede considerarse como Una
solución homogénea.

b. Definiciones relacionadas al crecimiento celular

Primero, definamos las terminologías que usamos para el crecimiento
microbiano. Si mencionamos la concentración celular sin ninguna
especificación, puede tienen muchos significados diferentes. Puede ser
el número de células, la humedad peso de la celda, o el peso de la celda
seca por unidad de volumen. En este texto, Se adopta la siguiente
nomenclatura:

Cx Concentración celular, peso seco de la celda por unidad de volumen

CN Densidad de número de celda, número de celdas por unidad de volumen
p Densidad celular, peso celular húmedo por unidad de volumen de masa
celular
En consecuencia, la tasa de crecimiento se puede definir en varios diferentes
formas, tales como:
dCx I dt Cambio de la concentración de células secas con el tiempo tasa de
crecimiento de las células en función del peso seco
dCNldt Cambio de la densidad del número de celda con tiempo Tasa de
crecimiento de células sobre una base numérica
8 Tasa de división de células sobre una base numérica, d logz CNIdt

2. Ciclo de crecimiento para cultivos por lotes (Batch).

Si inocula microorganismos unicelulares en un esterilizado fresco medio y
medir la densidad del número de células con respecto al tiempo y
trazarlo, puede encontrar que hay seis fases de crecimiento y muerte

a. Fases de crecimiento.
1. Fase de retraso: un período de tiempo cuando el cambio del número de
celda es cero.
2. Fase de crecimiento acelerado: el número de células comienza a aumentar y
la tasa de división aumenta para alcanzar un máximo.
3. Fase de crecimiento exponencial: el número de células aumenta
exponencialmente a medida que las celdas comienzan a dividirse. La
 tasa de crecimiento es aumentando durante esta fase, pero la tasa de
división que es proporcional a dlnCN1 / dt, es constante en su valor
máximo, como ilustrado en la Figura 6.1.
4. Fase de crecimiento desacelerado: después de que la tasa de crecimiento
alcanza un máximo, es seguido por la desaceleración de ambas tasas
de crecimiento y la tasa de división.
5. Fase estacionaria: la población celular alcanzará un máximo valor y no
aumentará más.
6. Fase de muerte: después de que los nutrientes disponibles para las células
son agotadas, las células comenzarán a morir y la cantidad de células
viables va a disminuir.

b. Factores que afectan a la velocidad específica de crecimiento

Concentración de sustrato: uno de los más empleados expresiones para el
efecto de la concentración de sustrato en J.1 es el Monod ecuación, que
es una expresión empírica basada en la forma de ecuación normalmente
asociada con cinética enzimática o gas adsorción

donde Cs es la concentración del sustrato limitante en el medio y Ks es un

coeficiente del sistema. Esta relación se muestra gráficamente en la
Figura 6.2. El valor de Ksis igual a la concentración. de nutrientes
cuando la tasa de crecimiento específica es la mitad de su valor máximo
(u max)

Otras condiciones: La tasa de crecimiento específico de

microorganismos es También se ve afectado por el pH medio, la
temperatura y el suministro de oxígeno. los El pH y la temperatura
óptimos difieren de un microorganismo a otro.

3. Fermentador de flujo pistón (PFF).

Se supone que un fermentador agitado ideal está bien mezclado para que el
los contenidos son uniformes en la composición en todo momento. Otro
ideal fermentador es el fermentador de flujo de enchufe, cuyo análisis es
análogo al fermentador por lotes ideal.

4. Fermentador de tanque agitado continuo (CSTF) ideal.

Las poblaciones microbianas pueden mantenerse en un estado de exponencial
crecimiento durante un largo período de tiempo mediante el uso de un
sistema continuo cultura. La figura 6.7 muestra el diagrama de bloques
para una agitación continua fermentador de tanque (CSTF). La cámara
de crecimiento está conectada a un depósito de medio estéril. Una vez
 que se ha iniciado el crecimiento, fresco el medio se suministra
continuamente desde el depósito

Los sistemas de cultivo continuo pueden funcionar como quimiostato o como

turbidostato En un quimiostato, el caudal se establece en un valor particular y
La tasa de crecimiento de la cultura se ajusta a este flujo. en un turbidostato la
turbidez se ajusta a un nivel constante ajustando el tasa de flujo. Es más
fácil operar el quimiostato que el turbidostato, porque el primero puede
se debe hacer ajustando la bomba a un caudal constante, mientras que
este último requiere
Un dispositivo sensor óptico y un controlador. Sin embargo, el turbidostato se
recomienda cuando es continuo la fermentación debe realizarse a altas
tasas de dilución cerca del punto de lavado, ya que puede evitar el
lavado regulando el flujo tarifa en caso de que la pérdida de celda a
través del flujo de salida exceda la celda crecimiento en el fermentador

a. Productividad de un CSTF
Normalmente, la productividad del fermentador se expresa como la cantidad de
un producto producido por unidad de tiempo y volumen. Si la entrada la
corriente es estéril (DO Xi = 0), la productividad de la masa celular es
igual a CX / Tm 'que es igual a la pendiente de la línea recta OAB de la
CX vs. T curva, como se muestra en la figura 6.10. La productividad en
el punto A es igual a eso en el punto B. En el punto A, la concentración
celular de la salida el flujo es bajo pero el tiempo de residencia es corto,
por lo tanto, más medio puede pasar Por otro lado, en el punto B la
concentración celular del flujo de salida es alto, pero el tiempo de
residencia es largo, por lo que menor a. el medio pasa a través. El punto
A es inestable región porque es muy cerca del punto de lavado D, y
porque un pequeña fluctuación en el tiempo de residencia puede
provocar un gran cambio en la concentración celular Como la pendiente-
.2 !. la línea aumenta, el metro la productividad aumenta y la longitud de
AB disminuye. La pendiente de la línea lo hará tiene su valor máximo
cuando es tangente a la CX curva. Por lo tanto, la valor de la
productividad máxima es igual a La pendiente de la línea OC. La
productividad máxima se alcanzará en el punto D
5. Comparación de un fermentador de tanque agitado continuo y un
fermentador por lotes
tanque agitado continuo: también conocido como reactor de tina o mezcla
posterior, o un reactor de tanque agitado de flujo continuo, es modelo
común para un reactor químico. Se refiere a menudo a un modelo utilizado
para estimar las variables de operación de la unidad clave cuando se utiliza
un reactor de tanque agitado continuo para lograr una producción
especificado.
Fermentado por lotes: reduce la capacidad requerida y el costo de los
equipos ascendentes y descendentes. Sin embargo, esto estaría
acompañado por un aumento en la inversión requerida en la sección de
biorreactores del proceso.

6. Múltiples fermentadores conectados en serie.

Con frecuencia surge una pregunta si puede ser más eficiente usar
múltiples fermentadores conectados en serie en lugar de uno grande
fermentador Elegir el sistema de fermentación óptimo para un
máximo la productividad depende de la forma de l / rX contra CX
curva y El requisito del proceso, como la conversión final.
En el 1 / rX contra CX curva, si la concentración celular final es menor que
Cx, optar por un fermentador es mejor que dos fermentadores
conectados en serie, porque dos CSTF conectados en serie
requieren más residencia hora de lo que hace un CSTF. Sin
embargo, si la concentración celular final es mucho más grande que
Cx, opte por la mejor combinación de dos fermentadores para un el
tiempo de residencia total mínimo es un CSTF operado en Cx, opt
seguido por un PFF, como se muestra en la (Figura 6.13a). Un CSTF
operado en Cx, opt seguido por otro CSTF conectado en serie
también es mejor que uno CSTF.

7. Evaluación de los parámetros cinéticos de MONOD

La igualdad de la tasa de crecimiento específica y la tasa de dilución de la
CSTF en estado estacionario mostrado en la ecuación. es útil para estudiar e
efectos de varios componentes del medio sobre el crecimiento
específico tarifa. Al medir la concentración de sustrato en estado
estacionario a
Se pueden probar varios caudales, varios modelos cinéticos y el valor de la
cinética
Los parámetros pueden ser estimados. Al reorganizar la ecuación.Se puede
obtener una relación lineal de la siguiente manera
 a. PFF y/o CSTF y en serie.
La figura 6.14 muestra el diagrama esquemático de los dos fermentadores
conectado en serie, CSTF siguió bv PFF. El resultado del material el
saldo para el primer fermentador es el mismo que el CSTF único que
Ya lo hemos desarrollado. Si la corriente de entrada es estéril (C= 0),
el Se pueden calcular las concentraciones de sustrato, célula y
producto. de las ecuaciones, como sigue:

b. Reciclaje celular.
Para la operación contigua de un PFF o CSTF, las células se descargan con la
corriente de salida que limita la productividad de los fermentadores. los
La productividad se puede mejorar reciclando las células de corriente de salida
al fermentador.

c. PFF y CSTF con reciclaje celular.

Un PFF requiere la presencia inicial de microorganismos en la entrada
La corriente como un fermentador por lotes requiere un inóculo inicial. Lo
mas La forma económica de proporcionar células en la corriente de
entrada es reciclar el parte de la corriente de salida de regreso a la
entrada con o sin celda Dispositivo de separación. La figura 6.17
muestra el diagrama esquemático de un PFF con reciclaje celular. A
diferencia del CSTF, el PFF no requiere la celda separador para
reciclar, aunque su presencia aumenta el productividad del
fermentador ligeramente como se mostrará más adelante. Los Se
puede escribir la ecuación de rendimiento del PFF con Monod Kintics
como

8. Fermentadores alternativos.
Se han propuesto y probado muchos fermentadores alternativos. Estas los
fermentadores fueron diseñados para mejorar las desventajas de la
movido fermentador del tanque: alto consumo de energía y daño por
 corte, o para cumplir un requisito específico de un determinado proceso
de fermentación, tales como una mejor aireación, eliminación efectiva
del calor, separación celular o retención, inmovilización de células,
reducción de equipos y costos operativos para productos a granel de
bajo costo e inusualmente grandes diseños
Los fermentadores suelen clasificarse según su tipo de embarcación, como
tanque, columna, o fermentadores de bucle. El tanque y la columna de
fermentadores son ambos construidos como vasos cilíndricos. Se
pueden distinguir basado en su relación altura-diámetro (HID) como:
HID <3 para el tanque y
HID> 3 para el fermentador de columna

a. Fermentadores de columna
El fermentador más simple es el fermentador de columna de burbujas (o
torre fermentador), que generalmente se compone de un vaso
cilíndrico largo con un dispositivo de lavado en la parte inferior.
El contenido del fermentador se mezcla con las burbujas ascendentes que
también
Proporcionar las necesidades de oxígeno de las células. Como no tiene
ninguna partes móviles, es energéticamente eficiente con respecto a
la cantidad de transferencia de oxigeno por unidad de entrada de
energía. A medida que las células se asientan, células altas las
concentraciones pueden ser mantenido en la parte inferior de la
columna sin ningún dispositivo de separación

b. Fermentadores de bucle.

El fermentador de bucle es un fermentador de tanque o columna con un

líquido bucle de circulación, que puede ser un tubo de aspiración
central o un bucle externo. Dependiendo de cómo se induzca la
circulación del líquido, puede ser clasificado en tres tipos diferentes:
elevación de aire, circuito agitado y circuito de chorro.

La circulación de líquido del fermentador de elevación de aire es

inducida por aire rociado que crea una diferencia de densidad entre
 la burbuja Rico parte del líquido en el tubo ascendente y la parte más
densa con burbujas del líquido en la bajante como se muestra en la
figura.

El líquido la circulación y la mezcla se pueden mejorar haciendo circular el

líquido externamente usando una bomba como se muestra en la
Figura 6.22 (b).

Sin embargo, agregar la bomba disminuye las ventajas reales de un

elevador de aire fermentador por ser simple y energéticamente
eficiente
El fermentador de ciclo de presión inferior (Imperial Chemical Industries
Ltd., Inglaterra) es un fermentador de elevación aérea con un bucle
externo, que fue desarrollado para la fermentación aeróbica que
requiere la eliminación de calor como como la producción de
proteínas unicelulares a partir de metanol. Medio y aire son
introducido en las partes superior e inferior del bucle como se
muestra en Figura 6.22 (c)
9. Modelo Estructurado.
Hasta ahora, los modelos cinéticos descritos en este capítulo han sido modelos
no estructurados y distribuidos basados en suposiciones de que las
células pueden estar representado por un solo componente, como masa
celular o célula número por unidad de volumen y la población de la masa
celular es distribuido uniformemente por toda la cultura. Estos modelos
no Reconocer el cambio en la composición de las células durante el
crecimiento. Los modelos distribuidos y no estructurados como la
ecuación de Monod pueden predecir satisfactoriamente el
comportamiento de crecimiento de muchas situaciones. Sin embargo,
ellos no puede dar cuenta de las fases de retraso, la absorción
secuencial de sustratos, o cambios en el tamaño celular promedio
durante el ciclo de crecimiento del cultivo discontinuo

a. Modelo estructurado general.

Definamos un sistema como una celda individual o múltiples celdas. El
sistema no contiene nada de la fase abiótica de la cultura. En
cambio, es el biótico 2 solo fase, que posee masa m Ofl en base
seca y volumen específico v. Supongamos que hay componentes c
en el ct; y la masa del componente j por unidad de volumen del
sistema es (ej.) También se supone que existen expresiones de
velocidad cinética para p reacciones que ocurren en el sistema y la
tasa de componente j formado a partir de la enésima reacción por
unidad de volumen del sistema.
b. Modelo de dos compartimientos
Uno de los modelos estructurados más simples es el de dos
compartimentos. modelo propuesto por Williams (1967) y se basa en
lo siguiente supuestos:
1. La celda comprende dos compartimentos básicos: una porción sintética
A tal como moléculas precursoras y ARN, y un estructural porción B tal
como proteína y ADN.
donde (Cx es igual a 1 v, y se supone que es constante

2. La porción sintética A se alimenta por absorción desde un sustrato Arena

La porción estructural B se alimenta a su vez de la porción sintética
Como:
S- ~ A- ~ B

3. La velocidad de la primera reacción en la ecuación. (6.75) es proporcional

al producto de sustrato y concentraciones celulares como: