Unidad 3 Transcripcion

Apuntes de Genética Molecular
M.C. Delia Cuevas Aguirre
Unidad 3
TRANSCRIPCIÓN DEL DNA
La información codificada en el DNA no fluye directamente de este a las proteínas,
por tanto se necesita de otra molécula como intermediaria, esta molécula es el
RNA.
La transcripción es la síntesis de RNA utilizando el DNA como molde, en las
células existen tres tipos principales de RNA, el mensajero, el ribosomal y el de
transferencia, estos son sintetizados a partir de las instrucciones escritas en
porciones de DNA que codifican esta información (gen), además solo se transcribe
una de las cadenas, esta cadena se conoce como cadena con sentido, la enzima
RNA polimerasa cataliza la adición de nucleótidos trifosfato (NTPs) en dirección 5´
→3´, sin necesidad de moléculas iniciadoras, se forma un heteroduplex transitorio
DNA-RNA, el RNA recién sintetizado pronto se separa de la cadena con sentido,
la estructura del heteroduplex se mantiene sólo en la región de alargamiento del
RNA (12 pb aproximadamente), como resultado, varias RNA polimerasas pueden
transcribir simultáneamente el mismo gen.
El paso de información del DNA hasta proteínas se lleva a cabo en 2 etapas.

La transcripción y la traducción de acuerdo a lo que se ha dado en llamar “el
dogma central de la Biología Molecular”. Todos los RNA celulares se originan por
la transcripción del DNA.
El dogma central de la Biología Molecular, 1) replicación del DNA, 2)transcripción

del DNA y 3) traducción del RNA.
DNA RNA PROTEINA

2 3
Gen: secuencia DNA que codifica para una proteína o una función.
La transcripción de DNA a RNA se realiza conservando la polaridad de las
cadenas y la complementariedad de bases. La transcripción siempre ocurre en
dirección 5´ → 3´ (al igual que la replicación del DNA.) Las enzimas que realizan
la transcripcion se llaman RNA polimerasas.
En eucariotes hay tres tipos o familias de genes:

 Familia 1: Estos genes se encuentran repetidos varias veces en el
genoma, por Ej. En Drosophila melanogaster están repetidos 130 veces y
se disponen en tandem en los cromosomas sexuales X e Y, codifican para
RNA ribosómico, son grandes y normalmente son precursores del que
después se parte y da lugar a distintos RNAr.
 Familia 2. -codifican para preRNA mensajeros, que contiene intrones y
exones, además codifica para la cola poli A.
 Familia 3: Codifican preRNAt y para uno ribosómico pequeño (RNAr 5s).
La transcripción se realiza por la RNA polimerasa, constituida por varias cadenas

polipeptídicas, en eucariotes existen 3 clases de RNA polimerasas, según el tipo
de RNA que se va a transcribir.
La enzima RNA polimerasa

La transcripción de los genes siempre ocurre en dirección 5´→ 3´ y es catalizada
por enzimas dependientes de DNA que se conocen como RNA polimerasas, la
cual presenta los siguientes requerimientos y características:
 Un molde de DNA de doble cadena.
 Las RNA polimerasas son enzimas multiméricas, es decir, están
constituidas de varias subunidades.
 La RNA polimerasa necesita de precursores activados, son requeridos los 4
ribonucleótidos trifosfato (ATP, GTP, UTP y CTP).
 La reacción de polimerización es muy similar a la del DNA.
 La enzima no requiere de un cebador o RNA primer, como es el caso de la
DNA polimerasa.
 Una sola cadena del DNA funciona como molde.
 La enzima requiere de un ion metálico divalente. Son efectivos Mg2+, Mn2+.
 No corrige los errores que comete (tasa de error 1/100,00).Debido a que no
tiene una actividad exonucleasa de corrección de errores.
LA RNA polimerasa PROCARIOTA

2β´σω 2β´ω
Holoenzima RNA pol APOENZIMA de la RNA pol
Inicia transcrip participa fase elongación del RNA
En procariotes existe una sola RNA polimerasa.Esta enzima se presenta en 2

formas funcionales: como la HOLOENZIMA y como la APOENZIMA (enzima
mínima). La HOLOENZIMA es una enzima multimérica que consta de 6
subunidades de 5 tipos diferentes, con PM de 480 000, las subunidades se
combinan en la estequiometria 2β´σω para formar la holoenzima, esta enzima
participa en el reconocimiento de sitios de inicio de la transcripción o promotores.
La subunidad ω existe en cantidades menores y no se conoce su función dentro
de la holoenzima. La apoenzima es la holoenzima que carece del factor sigma
(σ), y es la encargada de la elongación y término de la transcripción.
La RNA polimerasa es sumamente selectiva, solamente puede usar moldes de
DNA que sea necesarios para la célula en ese momento. La RNA polimerasa debe
ser capaz de reconocer el inicio y el final de los genes con el objetivo de iniciar y
terminar la transcripción de manera correcta. Esto se consigue mediante el
reconocimiento por la RNA polimerasa de ciertas señales de arranque y parada en
el DNA, llamadas respectivamente secuencias de iniciación y de terminación.
CARACTERISTICAS GENERALES DE RNA POL
No corrige errores
No requiere un extremo 3ÓH (primer) para iniciar la cadena
Son enzimas multimericas
Transcriben solo una cadena molde del DNA
Requieren de los 4 NTP
Requieren Mg2+ o Mn2+
Polimerizacion en sentido 5á 3´´
RNA polimerasas EUCARIOTAS

en células eucariotes existe
además de DNA nuclear, DNA
mitocondrial, por lo que es
importante distinguir las RNA
polimerasa eucariotas según su
localización.
NUCLEO RNA
polimerasa I.
RNA
polimerasa II
RNA
polimerasa III
MITOCONDRIA RNA
polimersa γ
Cada RNA polimerasa tiene

propiedades diferentes. Las 3
polimerasas tienen PM por arriba
de 500 000 daltones, formadas por 2 subunidades con PM mayores de 100 000 y
12 subunidades de menor tamaño, algunas de las cuales son comunes para las 3
polimerasas.
 RNA polimerasa I. Transcribe genes del DNA nucleolar, que codifica para el
pre-RNAr (45S), en el nucléolo, posteriormente se cortará para dar RNAr 28S,
5.8S y 18S , esta enzima está encargada del 50-70% de la transcripción.
 RNA polimerasa II. Trancribe genes que codifican para: a) RNAhn b) La
mayoría de los RNApn, sintetiza del 20-40% del RNA total, el RNAm sintetizado
es monocistronico, a diferencia del RNAm policistronico de los procariotas. Su vida
media es aprox. 30 min. (10 veces mas del procariote).
 RNA polimerasa III. Transcribe genes que codifican para los RNAt, el RNAr
5S, los RNApc y el resto de los RNApn

Enzima Localización Producto % actividad Moleculas Transcrito
relativa por celula primario
RNA polimerasa I Nucleolo RNAr 50-70 40000 preRNAr
RNA polimerasa II Nucleoplasma RNA hn 20-40 40000 RNAhn
RNA polimerasa III Nucleoplasma RNAt 5-10 20000 preRNAt,

preRNAr
No hay
RNA polimerasa Mitocondria y RNAr, RNAt y maduracion
organelos cloroplasto RNAm
SEÑALES DE INICIO Y TERMINACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN.
1. -Señales de inicio. Promotores.

Los promotores de los genes contienen señales que indican a la RNA polimerasa
el sitio donde debe comenzar la transcripción.
La secuenciación de muchos promotores han demostrado que tienen secuencias
comunes, algunas regiones que contienen exactamente la misma secuencia, se
dice que este segmento es invariable y constituye una secuencia conservada.
Cuando hay variaciones en la secuencia, pero ciertos nucleótidos están presentes
en una frecuencia alta, se trata de una secuencia consenso.
En procariotes y eucariotes, los promotores de genes diferentes tienen una
secuencia de bases similares. En bacterias se transcriben diversos genes a partir
de un solo promotor; en eucariotes cada gen tiene su promotor.
Posición del promotor

En procariotas, por Ej. Un promotor tiene poco mas de 35 pb y se localiza
inmediatamente antes de la base donde se inicia la transcripción (posición +1),
las bases situadas antes, es decir, hacia el extremo 5´, se marcan con números
negativos y se dice que están “hacia arriba”, las bases que se encuentran hacia el
extremo 3´ del gene se identifican con números positivos partir de este punto +1 y
se dice que se encuentran “hacia abajo” . La comparación de secuencias de
promotores diferentes reveló secuencias conservadas en la región hacia arriba del
sitio de inicio de la transcripción, una situada alrededor de la posición –10 y otra
alrededor de la posición –35 (Fig 4.3), esto en los promotores de E. coli Ambas
cajas están separadas óptimamente por 17pb, en procariotes, es el factor sigma
de la RNA polimerasa la encargada de reconocer las secuencias consenso de los
promotores y unirse
a ellos.
El promotor se encuentra “hacia arriba”, es decir, hacia el extremo 5´del gene con
respecto a la posición +1, de inicio de la transcripción. Dentro de los promotores
bacterianos se encuentran 2 secuencias consenso, la caja de Pribnow, situada
alrededor de –10 y la región –35.
Dado que los promotores difieren en secuencias, los niveles de transcripción

también son diferentes, de hecho ningún promotor de E. coli presenta la secuencia
consenso al 100% con 17 pb de distancia entre cajas perfectas en las regiones –

10 y –35. Las secuencias están ordenadas detal manera que sus regiones +1, -10
y –35 estén alineadas, debe tomarse en cuenta ningún promotor se correlaciona
exactamente al 100% con la secuencias consenso y las posiciones, la secuencia
consenso para la región de –10 y –35 se ha derivado de una muestra mucho más
grande.
SECUENCIA DE DIFERENTES PROMOTORES
Promotores fuertes: Promotores en los que la RNA polimerasa inicia la

transcrpcion con alta frecuencia.
Promotores débiles: baja frecuencia.
La frecuencia esta en función de la afinidad por la secuencia promotora de la RNA
pol.
Los promotores de E. coli tienen 2 secuencias (cajas) importantes para el
reconocimiento DNA-RNA polimerasa
En E. coli puede haber cerca de 2000 promotores, las secuencias consenso

encontradas en promotores bacterianos son principalmente.
a) Una secuencia consenso a nivel de –35: TTGACA
b) Una secuencia consenso en el ámbito de –10: Llamada caja de PRIBNOW

o caja -10 (secuencia consenso TATAAT, tiene 7 pares de bases unidas por 2
puentes de hidrógeno cual lo facilita la apertura de la doble hebra).
En eucariotes los promotores son más largos.

a) Los promotores reconocidos por la RNA polimerasa II eucariótica tienen

una secuencia llamada caja TATA ó caja de Hogness, localizada generalmente
alrededor de –30 (o –20) del inicio y tiene la secuencia consenso TATAAAAG y
presenta notable homología con la caja de Pribnow (TATAATG), esta secuencia
puede variar a TATATAT o CATAAAA, como en el caso del gen de la β-globina. La
posición de la caja TATA en levaduras es más variable y puede estar entre –30 y –
120. La secuencia TATA funciona mejor si existen otras 2 secuencias, CCAAT y
un segmento rico en GC, situadas a 40 y 110 pb aguas arriba respectivamente del
sitio de inicio de la transcripción .
La caja de Hogness puede estar ausente en algunos genes, cuando están

ausentes son otros elementos del promotor los que permiten la unión de proteínas
reguladoras de la transcripción (TBP de TATA binding protein). A diferencia de los
promotores procariotes, los eucariotes no contienen suficientes señales de
reconocimiento para la RNA polimerasa, por ello, las secuencias consenso (caja
de Hogness, caja CAT) deben ser reconocidas por proteínas reguladoras,
llamadas Factores de transcripción (TF), los TF son esenciales por que la RNA
polimerasa II no puede unirse directamente a su promotor. En humanos han sido
bien caracterizados y se denominan TFIIA, TFIIB, etc, aquellos que se unen a la
caja TATA se denomina TBP , por Ej.. TBP es el TFIID. El factor de transcripción
TFIID (TBP) se une a la caja TATA, después se unen otros 7 factores
transcripcionales (TF), formándose un complejo de pre-inicio, posteriormente se
une la RNA polimerasa II. Estos factores estarían realizando la función del factor
sigma procariote.
b) Existe otra secuencia alrededor de –80(-70) llamada caja CAT,

corresponde a la secuencia consenso GGCAATCT.
c) Cajas ricas en GC. Tiene secuencias consenso GGGCGG pueden estar
ubicadas en ambas cadenas del DNA, se ubica alrededor de –80 y –100.
Existen además de estas secuencias regiones intensificadoras de la transcripción

(enhancers, aumentadores o intensificadores) que no presentan actividad
propia del promotor pero que estimulan la transcripción hasta 100 veces y que
actúan a distancia ya que se encuentran muy alejadas de las regiones promotoras

que son esenciales para un inicio eficiente de la transcripción.
Lospromotores de la RNA polimerasa I eucariótica tiene secuencias consenso

alrededor de –45, pero su eficiencia aumenta con la presencia de secuencias de
control de la transcripción denominado UCE (Upstream Control Element) que se
extiende de –107 a –180, éste elemento contiene gran proporción de bases GC y
es muy parecido (hasta un 85%) al promotor mismo.
Terminadores identificados en E. coli

La RNA polimerasa se desplaza por el DNA hasta que se encuentra una señal de
parada o secuencia terminadora. Hay 2 tipos de secuencia terminadora:
Terminadores dependientes de rho y las secuencias terminadoras independientes
de rho. Una secuencia de bases repetidas e invertidas caracteriza las regiones
terminadoras del gen, formando una estructura de tallo, que detiene a la RNA
polimerasa.
1)Señales de terminación dependientes de una proteína citosolica llamada Rho

2)Señales de terminación ricas en GC, que forman estructuras de asa o tallo y son
independientes de Rho.
Los terminadores independientes del factor rho una secuencia rica en bases G-C,
en donde puede ocurrir apareamiento de ellas, formando estructuras de
seudohélice llamadas de tallo, seguida de una secuencia corta de A, cuando está
ausente la estructura característica se necesita del factor rho.
Factores proteicos que intervienen en la transcripcion:

En el paso de información del DNA al RNA intervienen además de la RNA
polimerasa factores de origen proteico, llamados:
Factores de transcripción: Son diversas proteínas que se unen al sitio promotor
del DNA, convirtiéndolo en funcional, lo que atrae a las RNA polimerasas, hay un
factor específico para cada tipo de RNA polimerasa ( factor sigma para la RNA
polimerasa procariote y los TF para las RNA polimerasas eucarióticas).
Factores de iniciación: es la subunidad sigma de la RNA polimerasa procariote,
y los factores IF en eucariotes, estos factores se liberan tras la síntesis de los ocho
primeros nucleótidos. De RNA.
Factores de elongación: Se incorporan a la polimerasa tras la liberación del
factor de iniciación, sirven para la elongación o alargamiento y para la terminación
de la cadena de RNA.
Semejanzas y Diferencias entre Replicación y transcripción
Replicación Transcripción
Igual mecanismo y sentido de Igual mecanismo y sentido de
Polimerización 5´→3 Polimerización 5´→3
La energía la aporta la hidrólisis del La energía la aporta la hidrólisis del
pirofosfato pirofosfato
La DNA polimerasa requiere de un La RNA polimerasa no requiere
primer primer
La DNA polimerasa tiene actividad La RNA polimerasa no tiene actividad
exonucleasa de corrección de exonucleasa y no corrige errores
pruebas Se copia una sola cadena a la vez
Se copian las 2 cadenas al mismo Un RNA (preRNAm; preRNAt;
tiempo. preRNAr)
El producto son 2 moleculas de DNA
hijas identicas
ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIÓN.
 Inicio de la transcripción
 Alargamiento o Elongacion del RNA
 Terminacion de la transcripción
¿En donde empieza y donde termina de transcribirse un gen?

 Señales de inicio→ Promotor
 Señales de termino→ Secuencias de terminacion
¿Qué GENES SE TRANSCRIBEN?

La expresión diferencial de los genes determina el tipo celular y por supuesto su

función.
No todos los genes son expresados en todas las células, existe regulación de la
expresión genética. La transcripción se puede regular por proteínas llamadas
activadores o represores, se unen a sitios cercanos a los promotores de los genes
cuya expresión regulan.
TIPOS DE RNA
RNAm RNA mensaje, codifica para proteínas, 4-10% RNAtotal
RNAr RNA ribosomal, se asocia con proteínas para formar ribosomas.
80% del RNAt
RNAsn RNA pequeño nuclear, varios procesos nucleares, incluyendo el

procesamiento del pre RNAm
RNAt RNAtransferencia,Traduce el RNAm y transporta los aa durante la
síntesis proteica. 5-10% RNAtotal
RNAsno RNA pequeños nucleolares, usados para procesar y modificar
químicamente los RNAr
Otros Funcion en procesos celulares diersos, incluyendo la síntesis de
RNAs no telomeros, inactivación del cromosoma X y el transporte de las
codificantes proteínas al RE
a) Inicio de la transcripcion
i. Reconocimiento del punto de iniciación y asociación de la RNA
polimerasa a una cadena molde de DNA.
Para que la RNA polimerasa inicie la transcripción de un gen, se requiere:
1.- una secuencia señal en el DNA, llamado el promotor.

2.- una o varias proteínas que reconozcan esta señal y “guíen” a ese lugar a la
RNA polimerasa, llamados factores de transcripción (factor sigma para procariotes
y factores de transcripción /TFIIA,TFIIB,TFIIC;TFIID (TATA binding protein; TBP)
en eucariotes)
En procariotes:
1) La RNA polimerasa se une al

DNA en cualquier sitio.
2) Busca al promotor deslizándose
rápidamente hasta encontrarlo,
órdenes externas le indican el
promotor correcto, este proceso no precisa desenrollar al DNA, el factor

sigma, componente de la RNA polimerasa se encarga de reconocer el
promotor y “lee” las bases del DNA a través del surco mayor
3) Se establecen puentes de hidrógeno entre la RNA polimerasa y el sitio
promotor, El factor sigma de la RNA polimerasa reconoce la región de –35
y forma un complejo binario cerrado (complejo cerrado)
4) Luego reconoce la polimerasa interaccióna con la caja de Pribnow (-10) y

forma un complejo binario abierto (complejo abierto), 18 pb del DNA son
desnaturalizadas, es decir, los puentes de hidrógeno se rompen, formando
una burbuja de transcripción. Cuanto más fuerte sea el promotor más
interacciones podrá formar.
Esta etapa puede ser bloqueada por el antibiótico actinomicina D, la cual

interacciona fuertemente con bases G del DNA impidiendo la transcripción en
bacterias.
En eucariotes:RNA pol I; II y III

La RNA polimerasa II no reconoce al promotor, requiere de proteínas
especializadas llamadas
factores de factores de
transcripción (TF), los
cuales se unen al
promotor formando un
complejo TF-Promotor al
cual se une la RNA
polimerasa.
1)Los factores TF
reconocen al sitio
promotor, uniéndose a él,
formando un complejo
binario cerrado,
complejoTF-promotor (doble cadena).
2)Luego la RNA polimerasa reconoce el complejo binario cerrado, produciendo un
cambio conformacional que da lugar al complejo abierto (DNA desenrollado), se
separan las 2 cadenas del promotor, lo que da lugar a una burbuja de
transcripción.
ii) Iniciación de la cadena de RNA
Se define como la formación del primer enlace fosfodiéster entre el grupo 3ÓH del
primer ribonucleótido y el grupo 5´P del segundo ribonucleótido, la síntesis ocurre
en sentido 5´→3´, el diribonucleótido formado permanece unido por
complementariedad de bases y de manera antiparalela con la hebra de DNA que
actúa como molde .
En bacterias esta reacción puede bloquearse con el antibiótico rifampicina, el cual
se une a la subunidad β de la RNA polimerasa.
b)Alargamiento o elongación de la cadena de RNA.
1) Separación de los factores de transcripción del DNA (σ, en procariotes y los

factores TF en eucariotes) se separan por el cambio conformacional que
ocurre
2) RNA polimerasa (en el caso de procariotes la apoenzima de la RNA
polimerasa) polimerisa nucleótidos en sentido 5´→3´ .La cadena de RNA
naciente se alarga por adición secuencial de nucleótidos al extremo 3ÓH
del nucleótido previamente incorporado, definido por la plantilla de DNA.
3) El RNA recién sintetizado permanece unido a la plantilla de DNA sólo en

una corta secuencia, el extremo 5´ del RNA creciente va quedando libre. Al
avanzar la RNA polimerasa, se vuelve a unir la secuencia de DNA que va
quedando detrás de ésta.
La reacción se puede resumir:
RNAn-OH + NTP → RNAn+1-OH + PPi ΔG=-2.2 Kcal/mol.
La velocidad de transcripción es menor que la velocidad de replicación del DNA,

se adicionan de 30-85 nucleotidos/seg (Menor que un décimo de la velocidad de
replicación del DNA)
En esta etapa la RNA polimerasa puede ser inhibida por el antibiótico
estreptolidigina.
c) Terminación de la transcripción
La terminación de la transcripción es un evento preciso y finamente regulado,

tanto en eucariotes como en procariotes.
En procariotes:
a) Terminacion independiente de Rho

En el caso de la terminación independiente de rho, al final del gen existe una
secuencia palindromica de A, al transcribirse estas secuencias, el producto RNA
queda unido al molde de DNA a través de heteroduplex poli U - poli A el que
precede a una estructura tipo horquilla en el RNA, este complejo es inestable y se
desensambla. Se libera el RNA, la polimerasa y se reforma el duplex de DNA.
b) Terminacion
dependiente de
Rho
La proteína reguladora rho

se encuentra en el citosol,
es un hexamero de
subunidades idénticas. Es
una ATPasa y también
helicasa RNA-DNA.
Rho se fija al RNA de
cadena sencilla, y se
desplaza conforme el RNA
se va alargando, cuando
este factor “alcanza” a la
polimerasa el proceso de
transcripción se detiene,
liberándose el RNA, la
polimerasa y
reformándose el duplex de DNA, acoplado con la hidrólisis del ATP.
Eucariotes
El RNAm recién sintetizado, se le denomina transcrito primario ( o RNAhn,
RNA nuclear heterogéneo), en eucariotes sufre modificaciones o procesamiento.
Los RNAt y RNAr no tienen diferencias entre procariotes y eucariotas.
PROCESAMIENTO DEL RNA

Los RNAs se sintetizan como precursores que tienen que sufrir modificaciones
postranscripcionales para permitir que las moléculas de RNA adopten las
estructuras secundarias y terciarias necesarias para obtener moléculas
funcionales maduras.
¿Qué RNAs se procesan?

 Procariotes: RNAt; RNAr
 Eucariotas: RNAm; RNAt; RNAr
PROCESAMIENTO RNAm eucariote

El RNAm recién sintetizado, se le denomina transcrito primario ( o RNAhn,
RNA nuclear heterogéneo), en eucariotes sufre modificaciones o procesamiento.
En procariotes las moléculas de RNAm no sufren procesamiento o modificacio-

nes, son funcionales tal y como son sintetizados, participan en la síntesis de
proteínas aún antes de acabarse de sintetizar.
Procesamiento del RNAm eucariótico.

El RNAm eucariótico es el producto de un complejo proceso que incluye
La transcripción del gen, por la RNA polimerasa II, para dar como resultado un
transcrito primario (RNAm hn), llamado RNAm heterogéneo nuclear, éste
transcrito tiene desde 8,000 hasta 20,000 nucleótidos.
Procesamiento del RNAm hn, para dar el RNAm maduro, dentro del núcleo.
Transporte del RNAm maduro hacia el citoplasma y su utilización en la traducción.
Este procesamiento del RNA es importante para que la traducción del mensaje se
lleve a cabo en forma eficiente y para modular la estabilidad del RNA.
Las moléculas de RNAm maduras pasan al citoplasma por los poros nucleares.
Proteínas del complejo del poro reconocen estas partículas y las transportan por
transporte activo. Una vez en el citoplasma se traducen.
Los genes bacterianos están organizados en operones, un operón (unidad
genética de expresión) es un locus genético que contiene varios genes que están
relacionados funcionalmente (cuyos productos génicos pudieran ser enzimas
pertenecientes a una misma ruta metabólica), por lo tanto, se transcriben al mismo
tiempo bajo la acción de un solo promotor, produciéndose así un RNAm

policistronico que da origen a varias proteínas relacionadas funcionalmente. En
cambio los RNAm eucarióticos son monocistrónicos, es decir, sus mensajes son
únicos, cada gen tiene su propio promotor, existen excepciones como los
operones ribosomales.
PROCESAMIENTO DEL RNAm de la β-globina

Los eventos postranscripcionales, comúnmente llamado procesamiento del RNA,

comprenden:
1)Adición de cap o casquete = capping: La mayor parte de los RNAm

eucarióticos se modifica en el
extremo 5´, por adición de 7-
metilguanosina trifosfato(Gppp),
estructura llamada CAP,
casquete,gorra o caperuza .Este
cap se le añade cuando se llevan
sintetizados unos 30 nucleótidos.
Casi todos los RNAm celulares y
virales tienen caps, se conocen 3
tipos de cap:
1. Cap 0: m7GpppX
2. Cap 1: m7GpppXm
3. Cap 3: m7GpppXmXm
Donde m7G es 7 metil
Guanosina y Xm es un
nucleótido con una ribosa
metilada, el cap se añade
poco después de haberse
iniciado la transcripción por la
enzima Guanilil transferasa,
se cree que su función es
importante por las siguientes
razones:
El cap protege al RNAm
contra la acción de fosfatasas
y nucleasas que pudieran
degradar la molécula por el
extremo 5´.
El cap puede facilitar la
traducción, sirve para que la
subunidad menor del
ribosoma reconozca al
RNAm y se una a él durante
la traducción.
El cap puede participar en
otros pasos del
procesamiento y transporte
del RNAm ó en la
regulación de la traducción.
2)Adición de cola de poli A = poliadenilacion: Al término de la transcripción, en

el extremo 3´ se adicionan varios residuos de adenina ,llamada cola de poli A , la
longitud de la cola de poli A disminuye con la edad del RNAm y varía de cero
hasta 200 a 250 adeninas). La poliadenilación ocurre paso a paso, es decir,
nucleótidos de Adenina se adicionan uno a uno por la enzima poliA polimerasa en
el núcleo de la célula.
La característica principal en el extremo 3´ de los RNAm eucarióticos es la
secuencia AAUAAA, a la cual se le llama señal de poliadenilación, localizada de
10-15 bases antes de la adición de la cola de poliA, la señal de poliadenilación
parece ser necesaria para que ocurra la poliadenilación.
Esta cola de poliA tiene varias funciones a).-interviene en la exportación del RNAm
al citoplasma, b).-contribuye a la estabilidad del RNAm en el citoplasma y c).-
sirve de señal de reconocimiento al ribosoma.
3)Splicing= Corte y EmpalmePosteriormente a la adición de cap o casquete y la

cola de poliA ocurre el empalme (splicing, en inglés ), el transcrito primario del
gen, el RNAm hn, contiene intrones (secuencias que no codifican) y exones
(secuencias que codifican), el número de intrones varía mucho de un gen a otro,
algunos genes tienen docenas de intrones, otros genes, como los de las histonas,
no contienen intrones. Los intrones se eliminan del RNA por una serie de procesos
llamados colectivamente corte y empalme (Splicing) de exones del RNA en el
núcleo.
Existen 2 formas de
eliminación de
intrones:
a).- El autosplicing: es
realizado sin proteínas,
los intrones se
autoeliminan, al
adquirir formas
tridimensionales,
torciéndose y
finalmente
desprendiéndose.
b)Splicing que requiere
de una maquinaria de
escisión compleja
constituida por
proteínas y
ribonucleoproteínas
que conforman el
spliceosoma o
edisoma, en ellos se
encuentran RNApn
(RNA pequeño
nuclear) asociados a
20 proteínas formando
RNPpn o
ribonucleoproteínas
pequeñas nucleares,
que a su vez forman
parte del spliceosoma,
el spliceosoma es una estructura inestable.
Procesamiento alternativo del RNAm

La mayoría de RNAhn produce un único RNAm maduro y, por tanto, una única
proteína. Sin embargo, algunos pueden ser procesados de diferentes maneras
para producir distintos RNAm maduros y proteínas. Estos transcritos complejos
pueden tener:
a) Más de un sitio de corte y poliadenilación.
b) Patrones de corte y empalme alternativos.
Splicing alternativo tejido especifico
Procesamiento de albumina
Modificaciones químicas de los nucleótidos. Algunos residuos de nucleótidos

sufren un proceso de metilacion.
ESTRUCTURA GENERAL DE UN RNAm maduro

PROCESAMIENTO DEL RNAt

Se sintetizan como preRNAt
mas largos que sufre las
siguientes modificaciones:
1) Eliminacion de nucleótidos
en los extremos 3ý 5´
a) Eliminacion extremo
5´por la nucleasa RNAsa
P (RNA catalítico)
b) Eliminacion extremo 3´
por una exonucleasa
denominasa RNAsa D
2) Adicion de nucleótidos al
extremo 3´: CCA por la
enzima
nucleotidiltransferasa
3) Modificacion de bases
a) Metilacion
b) Desaminacion
4) Splicing de intrones
PROCESAMIENTO DEL RNAr eucariote y procariote

Los RNAr tanto de bacterias como de células eucariotas se forman a partir de
precursores más largos llamados pre RNAr.
En los eucariotas un preRNAr
45S es procesado en el
nucleolo para dar los RNAr
18S, 28S y 5,8S (en
proporción 1:1:1),
característicos de los
ribosomas de tipo eucariota.
Primeramente, el precursor
45S es metilado en más de
100 de sus 14.000
nucleótidos. Posteriormente, una serie de cortes enzimáticos producen los RNA

maduros. El ARNr 5S se produce independientemente.
Procesamiento RNAr procariote
Procesamiento RNAr eucariote

En eucariotes el precursor del RNAr da como resultado al RNAr 28S, 5.8S y 18S,
el RNAr 5S es codificado en otro gen.
Inhibidores de la síntesis de RNA

Muchos antibióticos y análogos de los nucleótidos inhiben la síntesis de RNA,
estos son usados en como herramienta de investigación del proceso de
transcripción y además tienen aplicación clínica, en la tabla se muestra una lista
de estos compuestos.
Inhibidores de la síntesis de RNA

Tipo de inhibición Inhibidor Mecanismo
Unión a la cadena molde Actinomicina D Se intercala entre G-C e impide el
de DNA. No covalente alargamiento de la cadena de RNA
Antraciclinas Se une y se intercala en secuencias
A-T e impide el alargamiento de la
Unión a la cadena molde cadena de RNA
de DNA. No covalente
Unión a la cadena molde Antramicina Inhibe la síntesis de RNA
de DNA. Covalente
Análogos de nucleótidos. 3´desoxi ATP Se incorpora en la cadena naciente
Terminadores de cadena de RNA e inhibe el crecimiento de la
misma
Análogos de nucleótidos. 3ámino-ATP Igual que la anterior.
Terminadores de cadena
Unión a la RNA polimerasa Rifampicina, Se une a la subunidad β ,

estreptovaricina impidiendo la iniciación del RNA
Unión a la RNA polimerasa Estreptolidigina Se une a la subunidad β ,
impidiendo la elongación del RNA
Unión a la RNA polimerasa α-amanitina Inhibe a la RNA polimerasa nuclear
de mamífero
Unión a la RNA polimerasa Kancanomicina Inhibe a la RNA polimerasa de E.
coli

Unidad 3 Transcripcion

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Unidad 3 Transcripcion

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Apuntes de Genética Molecular

M.C. Delia Cuevas Aguirre

El paso de información del DNA hasta proteínas se lleva a cabo en 2 etapas.

El dogma central de la Biología Molecular, 1) replicación del DNA, 2)transcripción

DNA RNA PROTEINA

En eucariotes hay tres tipos o familias de genes:

La transcripción se realiza por la RNA polimerasa, constituida por varias cadenas

La enzima RNA polimerasa

LA RNA polimerasa PROCARIOTA

En procariotes existe una sola RNA polimerasa.Esta enzima se presenta en 2

RNA polimerasas EUCARIOTAS

Cada RNA polimerasa tiene

RNA polimerasa II Nucleoplasma RNA hn 20-40 40000 RNAhn

RNA polimerasa III Nucleoplasma RNAt 5-10 20000 preRNAt,

SEÑALES DE INICIO Y TERMINACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN.

1. -Señales de inicio. Promotores.

Posición del promotor

Dado que los promotores difieren en secuencias, los niveles de transcripción

consenso al 100% con 17 pb de distancia entre cajas perfectas en las regiones –

Promotores fuertes: Promotores en los que la RNA polimerasa inicia la

En E. coli puede haber cerca de 2000 promotores, las secuencias consenso

a) Una secuencia consenso a nivel de –35: TTGACA

b) Una secuencia consenso en el ámbito de –10: Llamada caja de PRIBNOW

En eucariotes los promotores son más largos.

a) Los promotores reconocidos por la RNA polimerasa II eucariótica tienen

La caja de Hogness puede estar ausente en algunos genes, cuando están

b) Existe otra secuencia alrededor de –80(-70) llamada caja CAT,

Existen además de estas secuencias regiones intensificadoras de la transcripción

actúan a distancia ya que se encuentran muy alejadas de las regiones promotoras

Lospromotores de la RNA polimerasa I eucariótica tiene secuencias consenso

Terminadores identificados en E. coli

1)Señales de terminación dependientes de una proteína citosolica llamada Rho

Factores proteicos que intervienen en la transcripcion:

Semejanzas y Diferencias entre Replicación y transcripción

¿En donde empieza y donde termina de transcribirse un gen?

¿Qué GENES SE TRANSCRIBEN?

La expresión diferencial de los genes determina el tipo celular y por supuesto su

RNAsn RNA pequeño nuclear, varios procesos nucleares, incluyendo el

Para que la RNA polimerasa inicie la transcripción de un gen, se requiere:

1.- una secuencia señal en el DNA, llamado el promotor.

1) La RNA polimerasa se une al

promotor correcto, este proceso no precisa desenrollar al DNA, el factor

4) Luego reconoce la polimerasa interaccióna con la caja de Pribnow (-10) y

Esta etapa puede ser bloqueada por el antibiótico actinomicina D, la cual

En eucariotes:RNA pol I; II y III

ii) Iniciación de la cadena de RNA

b)Alargamiento o elongación de la cadena de RNA.

1) Separación de los factores de transcripción del DNA (σ, en procariotes y los

del nucleótido previamente incorporado, definido por la plantilla de DNA.

3) El RNA recién sintetizado permanece unido a la plantilla de DNA sólo en

RNAn-OH + NTP → RNAn+1-OH + PPi ΔG=-2.2 Kcal/mol.

La velocidad de transcripción es menor que la velocidad de replicación del DNA,

La terminación de la transcripción es un evento preciso y finamente regulado,

a) Terminacion independiente de Rho

La proteína reguladora rho

PROCESAMIENTO DEL RNA

¿Qué RNAs se procesan?

PROCESAMIENTO RNAm eucariote

En procariotes las moléculas de RNAm no sufren procesamiento o modificacio-

Procesamiento del RNAm eucariótico.

tiempo bajo la acción de un solo promotor, produciéndose así un RNAm

PROCESAMIENTO DEL RNAm de la β-globina

Los eventos postranscripcionales, comúnmente llamado procesamiento del RNA,