CATÁLISIS HÍBRIDA: ESTUDIO DE UN MODELO DE REACCIÓN PARA UN

REACTOR DE UN RECIPIENTE QUE COMBINA UNA ENZIMA Y UN

CATALIZADOR HETEROGÉNEO
Abstracto
El objetivo de este trabajo es mostrar la viabilidad de una reacción de un recipiente en
catálisis híbrida trifásica, siendo un paso la oxidación. La reacción modelo propuesta es una
reacción de dos pasos: una isomerización enzimática catalizada de fructosa a glucosa
seguida de una oxidación heterogéneamente catalizada de glucosa a ácido glucónico. Se
demostró que el medio de reacción requerido para la etapa enzimática es compatible con el
catalizador de oxidación. Los parámetros cinéticos se estimaron a partir de datos
experimentales para ejecutar la simulación utilizando un modelo de suspensión isotérmica
de un recipiente. Finalmente, se realizó una prueba de un solo recipiente que mostró que es
posible combinar ambos pasos.

Introducción
El uso de enzimas para la producción química fina ha sido objeto de muchos trabajos
durante las últimas décadas. Entre ellos, surgió el concepto reciente de catálisis híbrida,
donde la catálisis química (homogénea o heterogénea) y la catálisis enzimática se combinan
[1 , 2 ]. Makkee et al. Informaron sobre uno de los primeros usos combinados de enzimas y
catálisis heterogénea. Quienes simultáneamente isomerizaron D-glucosa en D-fructosa y D-
fructosa hidrogenada en D-manitol [3]. Utilizaron dos catalizadores, una glucosa isomerasa
inmovilizada y un catalizador Pt / C en un enfoque de una sola olla. La evolución de este
nuevo campo llamado " síntesis quimioenzimática de un recipiente" desde que Gröger ha
revisado el trabajo pionero del grupo de van Bekkumet al. [4]
Aunque el concepto existía antes, la frase "catálisis híbrida" se mencionó por primera vez
en el trabajo de Dumeignil y su grupo en la Universidad de Lille [5–9], quienes enfatizaron
que tal combinación sinérgica de un solo recipiente abarca la novela
" catálisis híbrida " concepto. De hecho, la catálisis híbrida en un caso especial de la clase
de catálisis en tándem ortogonal definida por Fogg et al. [10] en el que uno de los
catalizadores es una enzima y el otro un catalizador heterogéneo. Los pros y los contras
de la combinación de quimioterapia e biocatalıticas reacciones han sido
pre tantes por Rudroff et al. en una revisión reciente [11]. Un informe reciente del Clúster
Europeo sobre Catálisis destaca entre otros temas emergentes en el diseño de catalizadores,
la combinación de diferentes áreas de catálisis [12].
La catálisis híbrida se ha aplicado a tres áreas: resolución cinética, resolución cinética
dinámica [1 , 13 ] y reacciones no estereoselectivas [14]. El objetivo del proyecto
GLYCYBRIDE es desarrollar una sinergia entre la catálisis enzimática y heterogénea en un
reactor de un recipiente para transformar el glicerol en productos químicos de valor
agregado (reacción objetivo). Nuestro objetivo es diseñar un reactor de un solo recipiente
capaz de realizar catálisis híbrida trifásica, siendo un paso la oxidación. Sabiendo que la
enzima y la catálisis heterogénea requieren diferentes condiciones de reacción, como la
temperatura, la velocidad de agitación, la concentración de oxígeno (el oxígeno
posiblemente inhibe la reacción enzimática) y para validar el diseño del reactor, decidimos
usar una reacción modelo con dos pasos conocidos (mecanismo, parámetros cinéticos). Un
paso que requiere una transferencia eficiente de oxígeno como la reacción
objetivo. Además, los medios de ambos pasos deberían ser compatibles. La figura 1
muestra el modelo de reacción seleccionado.
La primera reacción es una isomerización catalizada por enzimas equilibradas de fructosa a
glucosa. El equilibrio de la primera reacción se desplazará por
una oxidación heterogéneamente catalizada de glucosa a ácido glucónico. En el presente
trabajo, realizamos un estudio preliminar para verificar la compatibilidad de los medios de
reacción. Luego estudiamos por separado la cinética de ambos pasos para proporcionar un
modelo cinético de las reacciones para simular el reactor diseñado. Luego, utilizamos un
enfoque simple para construir un modelo de reactor de suspensión isotérmica de un
recipiente, que se considerará como un punto de partida para un modelo de reactor
compartimentado más elaborado.

2. Sección experimental
2.1. Procedimiento experimental
Como procedimiento general, todas las pruebas catalíticas se realizaron en un reactor de
vidrio revestido de 1 L con contracuchillas. La cantidad deseada de sustrato se disuelve en
una solución tampón de fosfato de potasio 0,3 M (pH 7,5) en un matraz volumétrico de 0,5
l. La solución de sustrato se alimenta en el reactor, ya calentada hasta 50 ° C, a una
velocidad de agitación de 300 rpm y tapa cerrada. Las cantidades deseadas de catalizador o
catalizadores se añadieron cuando la temperatura de la solución de sustrato alcanzó
50ºC. Se tomaron muestras hasta que la reacción alcanzó el equilibrio o se terminó y
se analizó mediante HPLC (columna Luna 5 NHm NH2 100 Å de Phenomenex) para
controlar el progreso de la reacción.
Para estimar los parámetros cinéticos de cada etapa de reacción, a saber, la isomerización y
la oxidación, se variaron dos parámetros para recopilar los datos experimentales requeridos:
la concentración inicial del sustrato o la cantidad de catalizador. Para la etapa
de isomerización , primero se varió la concentración inicial de fructosa de 0.1M a 0.75M
con 30 % en peso de enzima Sweetzyme IT extra isomerasa de Novozymes , luego la
cantidad de catalizador se varió de 10 % en peso a 30 % en peso con una fructosa inicial
concentración de 0.2 M. Para la etapa de oxidación, primero se varió la concentración
inicial de glucosa de 0.1M a 0.5M con 10 % en peso de 5 % en peso de Pt / C
de Engelhardt, luego la cantidad de catalizador se varió de 5 % en peso a 20 % en peso con
una concentración de glucosa inicial de 0.2 M.

2.2. Caracterización del catalizador

Se obtuvieron patrones de difracción de rayos X en polvo a temperatura
ambiente con un difractómetro D8 Advanced A25 r (Bruker) con una configuración Bragg-
Brentano y un detector lineal. La fuente de rayos X era un tubo de difracción de rayos X de
cobre fino y largo que funcionaba a 40 kV y 30 mA, con un paso angular de 0.015 ° y un
tiempo por paso de 0.1 s. La quimisorción de H2 se realizó con un analizador ASAP
2020 (Micromeritics).

2.3. Modelo cinético

Para establecer el modelo de reactor, combinamos el modelo de isomerización propuesto
por Dehkordi et al. [15] y el modelo de oxidación propuesto por Dirkx [16].

Dehkordi et al., A partir de la glucosa, establecieron una relación basada en Palazz i et

al. [17] trabajo, entre la tasa de isomerización observada r1 y las constantes de Michaelis -
Menten directa e inversa ( kmf , kmr ) y las tasas de reacción aparente máxima
correspondientes ( vmf , vmr ). El detalle de la derivación no se repetirá aquí, pero conduce
a las siguientes leyes de tasas:
El balance de masa, suponiendo que tenemos un reactor por lotes ideal se define mediante
las siguientes ecuaciones:

Dado que la constante de equilibrio puede derivarse de la fructosa y concentraciones de

glucosa medidas al final de la reacción de isomerización, solo se necesitan estimar tres
parámetros de los cuatro (kmf, kmr, vmf, vmr). El progreso de la composición de la mezcla
de reacción se simuló con un solucionador ODE15 usando Matlab®. Se ejecutaron dos
simulaciones: una primera con parámetros cinéticos de la literatura y una segunda con
parámetros cinéticos estimados a partir de nuestros datos experimentales (rutina
LSQNONLIN con Matlab®).

3. Resultados y discusión
3.1. Simulación de lodo en un recipiente (a partir de datos de la literatura)
Las simulaciones de cada paso basadas en el modelo informado se realizaron utilizando
parámetros cinéticos extraídos de la literatura. Se muestran en la Fig. 2 y los valores de los
parámetros utilizados se informan en la Tabla 1.
Una comparación de los resultados de la simulación con datos experimentales muestra que
para la Fig. 2 (a) y (b), las curvas simuladas están cerca de los puntos experimentales. Sin
embargo, la reacción de isomerización corre más rápido de lo esperado por la simulación y
el paso de oxidación más lento. Como resultado, la brecha entre los puntos simulados y
experimentales es más importante cuando ambos pasos se combinan en una simulación de
un solo recipiente. Esos resultados muestran claramente que es necesario un ajuste de los
parámetros cinéticos para lograr un acuerdo satisfactorio entre los datos experimentales y la
simulación de la mezcla en un recipiente.

3.2. Pruebas catalíticas

3.2.1. Caracterización del catalizador Pt / C
La difracción de polvo del catalizador Pt / C reveló una alta dispersión del metal ya que las
líneas de difracción del metal eran demasiado anchas para permitir la estimación del
tamaño de cristalito por la relación de Scherrer . Esta observación permaneció después de la
reacción evidenciando la ausencia de sinterización durante el curso de la reacción.

La dispersión metálica (~ 50%) medida por quimisorción de H2 , solo disminuyó muy

ligeramente después de la reacción, confirmando la conclusión previa .

3.2.2. Prueba preliminar

Antes de recopilar datos experimentales para estimar los parámetros cinéticos, se necesitan
una serie de pruebas preliminares, especialmente para garantizar la compatibilidad de las
condiciones de reacción requeridas para ambos pasos. Las pruebas en blanco realizadas
confirman que ni la isomerización ni la reacción de oxidación transcurren sin un
catalizador. Para la etapa de isomerización, una velocidad de agitación de 200–300 rpm es
suficiente para evitar la limitación de la difusión, ya que para la etapa de oxidación se
necesita una velocidad de agitación de 1000–1200 rpm. Los resultados de las pruebas de
compatibilidad se presentan en la figura 3.

La Fig. 3 (a), muestra que la enzima no necesita ser preactivada (rehidratación en solución
de MgSO4) como se informa en la literatura [18, 15] y que el uso de tampón fosfato para
asegurar un pH estable no tiene importancia efecto sobre la velocidad de reacción para
la etapa de isomerización. La figura 3 (b) muestra que la presencia de aire, necesaria para el
segundo paso (oxidación), no tiene un efecto negativo en el paso enzimático. La figura 3
(c) muestra que la presencia de MgSO4 no tiene un efecto significativo en la etapa
de oxidación. Mientras tanto, la presencia de tampón parece tener un efecto positivo en el
paso de oxidación. De hecho, sin tampón, la velocidad de reacción es la misma durante el
primer 40 min entonces la tasa disminuye y el aire versión casi deja de
aumentar. Donde como en presencia de buffer este fenómeno no se observa. La
desactivación de los catalizadores de oxidación como el platino está bien documentada en
la literatura [19-21], por ejemplo, se ha informado el envenenamiento de sitios activos por
productos secundarios directamente o por CO como resultado de la descarboxilación del
ácido carboxílico producido. Se ha informado que la presencia de bases como NaOH
previene tal envenenamiento. En nuestro caso, la presencia de tampón que mantiene un pH
estable parece tener un efecto similar.

3.2.3. Estimación de parámetros cinéticos.

En la Fig. 4 se presenta una comparación de datos experimentales y simulados para un
conjunto de experimentos de isomerización de fructosa a glucosa utilizados para realizar la
nueva estimación. Las curvas simuladas (Fig. 4) muestran un buen acuerdo con los datos
experimentales. Otra representación de datos experimentales y simulados a través de la
curva de paridad confirma esta observación; La diferencia entre los valores experimentales
y calculados del grupo de puntos presentados es inferior al 10%.
El nuevo conjunto de parámetros cinéticos estimados para nuestro modelo se presenta en
la Tabla 1. Para el paso de isomerización, los valores de k mr y V mf están en el mismo orden
de magnitud que los de la literatura mientras que kmf y νmr experimentaron un mayor
ajuste. Cambiando así los valores de Km y Vm. Vm aumenta de −9.6 × 10−6 mol kg − 1
cat s − 1 a −2.9 × 10−6 mol kg − 1 cat s − 1, lo que está en correlación con una velocidad
de reacción más rápida. Tenga en cuenta que en nuestro caso, los valores de Vm son
negativos, debido a la forma en que se construyó nuestra ley cinética. Para permitir
la comparación directa con los datos publicados por Dehkordi et al. [15, 17 ] que utilizaron
la misma enzima compatible ( Sweetzyme IT extra), revertimos la ley
que los autores utilizaron inicialmente para la isomerización de glucosa a fructosa .
Para la parte de oxidación, la reacción avanza más lentamente de lo estimado con Dirkx et
al. [16] parámetros, esto puede deberse a diferentes factores, primero el catalizador
utilizado es menos eficiente, lo que resulta en un valor más bajo de k1, que es el caso aquí.
Pero también se pueden considerar otros factores, como la desactivación por adsorción del
producto de reacción como se mencionó anteriormente, esto se puede traducir en la ley
cinética por un valor constante de adsorción más alto de KAG. La constante de adsorción
calculada es de hecho mayor con un valor de 84.5 m3 mol − 1 en nuestro caso contra 21 m3
mol − 1 reportado por Dirkx et al., Con una mayor adsorción de productos, la desorción es
más lenta y los sitios activos están menos disponibles para la oxidación de glucosa.
Además, el valor constante de adsorción para glucosa (KAG) es más bajo que el de la
literatura. Ambas observaciones son consistentes con una velocidad de reacción más lenta.
3.2.4. Reacción de suspensión de una olla
Una primera prueba de lodo de un recipiente mostró que ambos pasos podían
combinarse (Fig. 5). Sin embargo, las velocidades de reacción fueron más bajas de lo
esperado por el modelo de suspensión (Fig. 5 (a)). Esto puede deberse a la desactivación o
fuerte inhibición del catalizador por grupos de ácido carboxílico, un fenómeno
conocido. De hecho, se logra un mejor ajuste de la curva (Fig. 5 (b)) cuando se considera
una fuerte inhibición de los productos. Se necesita más investigación para excluir otras
causas adicionales (limitación de la transferencia de oxígeno, desactivación, inhibición
enzimática, etc.) y optimizar el acoplamiento de ambos pasos.
4. Conclusión
Durante el presente estudio, se propuso una reacción modelo que incluye un paso
de oxidación para la catálisis híbrida para la cual:
 se verificó la compatibilidad media para ambos pasos,
 El parámetro cinético para cada paso tomado inicialmente de la literatura,
se estimaron a partir de los experimentos realizados,
 Las leyes cinéticas obtenidas se utilizaron para construir un modelo de lodo de un
recipiente del reactor,
 Los experimentos de un solo recipiente mostraron que el paso de isomerización de
fructosa a glucosa y el paso de oxidación de glucosa a ácido glucónico se pueden
combinar como se propone,
 Se observó una velocidad de reacción más lenta de lo esperado del modelo, debido a
la inhibición por los productos.
Otras investigaciones están bajo progreso para optimizar el one-pot reacción. Como
perspectiva, se desarrollará un modelo más elaborado, que incluye
la compartimentación, para describir mejor el reactor de un punto desarrollado en el
proyecto.

Acuse de recibo
Este estudio se llevó a cabo en colaboración con SAS PIVERT, como parte del Instituto
para la Transición Energética (ITE) PIVERT (www.institut-pivert.com) seleccionado entre
las Inversiones del Futuro. Este estudio recibió el apoyo del Programa Inversiones del
Futuro (Referencia ANR-001-01).