MP5.

Microbiología clínica

UD 1. LA MICROBIOLOGÍA
1.1. Los microorganismos

Microorganismo proviene de “ser vivo diminuto”. Un microorganismo o microbio es un ser vivo que,
debido a su pequeño tamaño, solo es visible al microscopio.

Un microorganismo es cualquier entidad microbiológica capaz de reproducir-se o de transferir material

genético.

1.1.1. Clasificación de los microorganismos

Criterios taxonómicos

Taxonomía = taxos (ordenamiento) + nomos (norma)

Taxonomía de los seres vivos

Se ordenan en rangos taxonómicos, atendiendo a criterios morfológicos, genéticos, metabólicos y

ecológicos. Los seres vivos se organizan en tres taxones:

 EUKARYA: unicelulares o pluricelulares, núcleo diferenciado (eucariota), con membrana nuclear

y diversos orgánulos. Hay 4 reinos:
 Animalia: animales
 Plantae: plantas
 Fungi: hongos. Setas comestibles, hongos microscópicos patógenos, hongos que degradan
materia orgánica.
 Protista: son todos aquellos MO uni i pluricelulares que no pueden incluirse en los tres
reinos. Pueden ser uni y pluricelulares. Eucariotas: protozoos y algas.
 BACTERIA: procariotas unicelulares.
 ARCHAEAE: son parecidas a las bacterias con diferentes vías metabólicas. Procariotas
unicelulares. Pueden crecer en altas [sal] (halófilas) y altas temperaturas.

Taxonomía de virus y otras entidades

Los virus son entidades infecciosas que solo pueden multiplicarse dentro de células de otros
organismos. Tienen una estructura muy sencilla: 1 molécula de ácido nucleico, cápside. No están
incluidos en ninguno de los taxones puesto que no se consideran seres vivos.

Un prion es una proteína infecciosa que altera agregados moleculares y causar enfermedades
neurológicas degenerativas transmisibles. No producen respuesta inmune.

Criterios clínicos

 Microbiota normal o microflora. Conjunto de microorganismos que se localizan en distintas

zonas del cuerpo humano (piel, mucosas y en el tubo digestivo). No causan daño sino que tienen
acciones beneficiosas o necesarias para el organismo humano. Ej.: flora intestinal -> sintetizan
vitaminas (B8, K) y actúan en el metabolismo.
 Microorganismos patógenos. Agentes causantes de enfermedades. Virus, bacterias, toxinas…
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 Microorganismos patógenos oportunistas. No provocan enfermedades en condiciones

normales y se producen cuando el sistema inmunitario de la persona infectada no funciona
correctamente (inmunodepresión). Aparecen en reacciones alérgicas.

1.1.2. La cadena epidemiológica

Son los pasos (“eslabones”) que conducen a la aparición de una enfermedad transmisible. Estos
eslabones esenciales de la cadena epidemiológica, están influidos por un gran número de factores
epidemiológicos con los que interaccionan para determinar la aparición o no de la enfermedad.

ESLABONES DE LA CADENA

1. Agente Causal
Todo agente biológico que por su presencia puede dar origen a una enfermedad transmisible.
 AGENTE BIOLÓGICO: Bacterias o sus toxinas. Virus. Parásitos animales (protozoarios y
metazoarios). Hongos.
2. Reservorio
Es el hábitat natural del agente causal (biológico), donde vive, se multiplica y del que depende
esencialmente para su subsistencia. Normalmente constituyen la fuente de infección.
 FUENTE DE INFECCION: Es el espacio físico (agua y suelo) o el elemento animado
(personas y animales) desde el cual se encuentra el microorganismo (el agente
patógeno) que pasa al huésped y producir enfermedades.
 RESERVORIOS:
ANIMADOS: SERES VIVOS
o Ser humano: hombre enfermo al toser. Enfermos convalecientes, enfermos en
período de incubación (no sabe que tiene el agente, pero pueden contagiar a
otros.).
o Individuos sanos o portadores: (tienen en el agente causal pero a ello no les
afecta).
o Animales ratas, perros. Portadores de parásitos, no propios del humano.
INANIMADOS
Fómite es cualquier objeto carente de vida o sustancia que es capaz de transportar
el agente infeccioso; y transferir el patógeno a un individuo. Ej.: Batas, catéteres,
mascarillas de oxígeno, camillas, pinzas también son reservorios.
o Ambiente
Agua: cólera
Aire: virus de la gripe
Suelo: hongos, protozoarios y esporas
Alimentos: salmonella
Pueden o no ser la fuente de infección de la cual es transferido el microorganismo a
un huésped.
Ej.: Reservorio de la bacteria Clostridium botulinum que produce la toxina
botulínica, está en el suelo, en el agua, intestino de animales pero la fuente de
infección son los alimentos indebidamente enlatados que contienen la toxina
bacterianas.
Toxina botulínica es un veneno biológico muy potente. Posee la capacidad
de producir parálisis muscular. Puede actuar de forma local produciendo parálisis
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muscular temporal. Después de inyectar el Botox empieza hacer efecto entre las 48
y 72 horas. El paciente nota que no puede contraer el músculo por más que lo
intente. Ese efecto se vuelve total o completo entre los 7 y 10 días después de que
se inyectó.

3. Puerta de Salida
Es el camino de salida por el cual el agente causal deja al huésped. Coincide con los orificios
naturales del hombre.
 VÍA RESPIRATORIA: a través de la secreción nasal o bucal.
 VÍA DIGESTIVA: a través de las heces.
 VÍA GÉNITO-URINARIA: semen, orina, secreción vaginal, todas las enfermedades de
transmisión sexual.
 PIEL Y MUCOSA: solución de continuidad (sangre). A través de las agujas, por succión de
los mosquitos.

4. Vía de Transmisión
Es el canal por donde pasa el agente causal desde el reservorio al huésped o desde la puerta de
salida a la puerta de entrada.
DIRECTA:
Por contacto físico
 Relaciones sexuales, un beso, contacto piel-piel. Ej.: sida o mononucleosis
infecciosa.
 Mordeduras. Ej.: rabia
 Arañazo de gato. Ej.: Linforreticulosis benigna.
Sin contacto físico
 La propagación de gotitas de Flügge.
 Gotitas de Flügge son los aerosoles producidos al estornudar, toser o en una
conversación. Las gotitas llevan microrganismos en suspensión que por el aire
llegan a la puerta de entrada.
INDIRECTA:
 Fómites: instrumentos inanimados contaminados (batas, jeringas). Lanas o
pieles de animales que transmiten el carbunco.
 Agua: puede ser vehículo directo de la infección. Ej.: Fiebre tifoidea, el mosquito
Anopheles que el agua le sirve de soporte. En piscinas aparición de hongos.
 Vectores: como mosquitos, pulgas, chinches (el M.O. hace parte del ciclo en el
huésped. Ej.: Dengue, Chagas, malaria. Esta última, la hembra del mosquito
Anopheles transmite el plasmodium, al picar un huésped infestado y después al
picar un individuo sano le inyecta el plasmodium.
 Suelo: parásitos que precisan el paso por el suelo para que su ciclo se complete,
(áscaris) el microorganismo se introduce en el huésped con su ciclo listo.
 Aire polvo o aire: aparatos de aire acondicionado: legionela. Esporas
suspendidas.
 Alimentos: Productos de lácteos: brucelosis.
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5. Puerta de Entrada
El agente causal se introduce en el huésped susceptible a través de la puerta de entrada.
Muchos organismos usan la misma puerta de entrada y de salida. El bacilo de la tuberculosis,
por ejemplo, entra y sale a través de las vías respiratorias.
Vía respiratoria: por inhalación por secreción nasal o bucal.
Vía digestiva: al comer alimentos infectados.
Piel y mucosa: penetración al huésped por la piel a través de las agujas, por succión de sangre
de los mosquitos.
Otros usan diferentes lugares del tracto intestinal para entrar y salir, como la transmisión oral-
fecal de muchas bacterias.

6. Huésped Susceptible
La conexión final en la cadena de la transmisión es el huésped susceptible.
 SUSCEPTIBILIDAD
Es la condición necesaria para que el hombre se convierta en huésped y sea infectado
por un agente causal. Es lo opuesto a la resistencia o inmunidad. Los factores que
influyen sobre la susceptibilidad son:
o Edad.
o Ocupación. Silicosis en la minería.
o Estado inmunitario.
o Patología de base.

Conceptos generales

AGENTE CAUSAL: es aquel elemento que debe estar presente en una enfermedad para que así esta se
desarrolle. Puede ser biológico, físico o químico.

ENFERMEDAD INFECCIOSA: cualquier enfermedad del hombre y/o animal, que se produce como
consecuencia de una infección provocada por un agente biológico.

DOSIS INFECTANTE MÍNIMA (DIM): es el número mínimo de microorganismos necesarios para producir
la infección.

INFECCIÓN: es la capacidad de los microorganismos de entrar, instalarse, multiplicarse en los tejidos

produciendo o no la enfermedad.

PATOGENICIDAD: es la capacidad para producir enfermedad en los infectados.

VIRULENCIA: supone gravedad. Es el grado de patogenicidad del agente causal.

Dinámica de la transmisión de la enfermedad

PERIODO TRANSMISIBLE DE LA ENFERMEDAD: es el intervalo de tiempo durante el cual el

microorganismo puede ser capaz de producir enfermedad en otro huésped distinto a aquel en el que se
encuentra.

El intervalo de tiempo de transmisión de la enfermedad es variable según el tipo de microorganismos.

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INTERVALOS DE TIEMPO DE LA DINÁMICA DE LA ENFERMEDAD

 Periodo de incubación
Intervalo de tiempo comprendido entre la entrada del microorganismo y la aparición de
los primeros síntomas. En este periodo se elimina el microorganismo, antes de que
aparezca la enfermedad que se está incubando. Cada enfermedad tiene un periodo de
incubación característico. Depende de los siguientes factores:
o Número de microorganismos que penetraron.
o Tasa de replicación de los microorganismos.
o Lugar de multiplicación de los microorganismos.
o Respuesta inmunitaria.
 Periodo clínico
Aparecen los signos y síntomas que definen a la enfermedad y que con los datos
analíticos nos permiten hacer el diagnóstico.
o SIGNO: son manifestaciones observadas en la exploración física. Ej.: Hinchazón
de dedos, desnutrición, fiebre.
o SÍNTOMA: percepción del enfermo. Ej.: mareos, dolor intestinal, mal estar
general.

Tratamientos

 Antibióticos
 Anti fúngicos o antimicóticos.
 Antivíricos.
 Anti protozoarios.
 Antiparasitarios.
La aparición de cepas (células bacterianas provenientes de una sola especie) resistentes a ciertos
antimicrobianos se da por prescripción abusiva y uso de antibióticos inadecuados en explotaciones
ganaderas.

1.2. El estudio de los microorganismos

1.2.1. Los cultivos de microorganismos

Un cultivo de microrganismos es una población de esos microrganismos conseguida en el laboratorio

mediante una siembra sobre un medio adecuado y una incubación en condiciones controladas.

 Cultivos puros: formados por un solo tipo de microorganismos.

 Cultivos mixtos: formados por más de un tipo de microorganismos.

Condiciones de crecimiento de MO

 El medio de cultivo debe tener los nutrientes que necesita el MO para desarrollarse.
 La incubación debe tener unas condiciones de temperatura, pH, humedad ambiental,
luminosidad, etc. adecuadas.
Cuando una célula bacteriana comienza a crecer forma una colonia.
 UFC (unidad formadora de colonia) de una bacteria viva aislada, que en condiciones ambientales
adecuadas, produce una colonia en un breve lapso de tiempo.
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Se pueden realizar las principales operaciones que se aplican en el laboratorio de microbiología:

 Aislamiento: separar uno de los tipos de microorganismos de un cultivo mixto.

 Identificación: a partir de una o varias colonias aisladas, se aplican distintas técnicas (tinciones,
siembra en medios de cultivo selectivo) para identificar el género y la especie a que pertenece el
microorganismo.
 Recuento: en algunos casos en algunos casos no hay identificación sino se calcula UFC/ml la
unidad formadora de colonias.

1.2.2. Medidas de prevención

Precauciones o medidas de prevención universales

1.1. NIVEL LOCAL: Asepsia es la ausencia absoluta de MO.

Condiciones para la asepsia

1. A nivel local: mantener superficies de trabajo y equipos en condiciones de higiene absoluta.

2. Utilizar instrumental y recipientes esterilizados.
3. Utilizar soluciones, medios, reactivos esterilizados.
4. Realizar todas las operaciones siguiendo procedimientos de asepsia.

El laboratorio de microbiología se basa en la combinación:

 De las características del diseño (aire filtrado, ventanas herméticamente cerradas)

 De la construcción (perfiles de unión entre pared y suelo se eliminan forman curvas
cóncavas.
 De los medios de contención que son los equipos que hacen seguro el manejo de materiales
infecciosos para evitar su dispersión.

1.2. NIVEL PERSONAL

 Lavado de manos: higiénico o quirúrgico. Es la medida de higiene más eficaz para limitar la
transmisión de enfermedades en el hospital.
 Taparse las heridas con apósitos
 La vacunación.
 El tratamiento de los objetos punzantes y cortantes adecuado. Ej.: no se han de tocar las agujas
con las manos, ni re encapucharlas.

Medidas de prevención: físicas

Guantes:

 El hecho de utilizar guantes no reemplaza la necesidad del lavado de manos. Hay que hacerlo
antes y después de su uso.
 Los guantes serán estériles si se manipulan en espacios estériles sino no es necesario.
 Cuando se utilizan elementos punzantes hay que usar doble guantes.
 Los guantes no protegen de cortes ni pinchazos.
 Con los guantes evitar tocarse ojos, nariz y piel.
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 No pasearse con los guantes fuera del lugar trabajo.

Gafas protectoras: se usarán cuando previsiblemente se hagan maniobras que pueden originar la
formación de gotitas de sangre o de los líquidos orgánicos o aerosoles.

Medidas de prevención: químicas

Limpieza: Empleo de un procedimiento fisicoquímico encaminado a arrastrar cualquier material ajeno al

objeto que se pretende limpiar. Ej.: lavavajillas

Desinfectante: Sustancia química que destruye los microorganismos y que se aplica sobre material
inerte sin alterarlo de forma sensible. Ej.: lejía

Antiséptico: Sustancia química de aplicación tópica sobre tejidos vivos (piel intacta, mucosas, heridas,
etc.), que destruye o inhibe los microorganismos sin afectar sensiblemente a los tejidos donde se aplica.
Povidona yodada.

Medidas de prevención: biológicas

 Protección frente a agentes biológicos

 Impedir la presencia de agentes biológicos fuera del lugar de confinamiento.
 Evitar la formación de aerosoles.
 Protegerse del contacto con los aerosoles, principalmente por inhalación.

1.2.4. El uso de cabinas de seguridad biológica

Tipos de cabinas
Existen distintos tipos de cabinas de seguridad biológica, con filtros especiales para retener
microorganismos (filtros HEPA):
 Clase I. Similar a una campana de humos, trabaja a presión negativa y está abierta frontalmente.
El aire que se expulsa atraviesa un filtro HEPA. No proporcionan protección al producto
manipulado. Se trabaja con agentes clasificados de nivel de bioseguridad 1, 2, 3.
 Clase II. Protege a los trabajadores de los materiales manipulados y, a los materiales de la
contaminación externa. Dispone de un ventilador que hace entrar aire (lo cual evita que el aire
interior pueda salir hacia el trabajador). El aire circula y pasa por un filtro HEPA.
 Clase III. La cabina esta herméticamente sellada, separando completamente al trabajador del
trabajo que esté realizando mediante barreras físicas. Las manipulaciones se realizan a través de
guantes de goma unidos al panel que la cierra.
Los criterios que se adoptan ara elegir el tipo de cabina apropiada son:
 Los riesgos que presenta e material manipulado.
 La posible generación de aerosoles debidos a las técnicas manipulativas que se deberán aplicar.
 El grado de protección que se busca para el producto frente a la contaminación ambiental.
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1.3. El nivel de bioseguridad

Nivel de bioseguridad 1: Este nivel hace referencia a los laboratorios para prácticas estudiantiles y
deben seguir protocolos para el diseño, construcción de laboratorios y equipos. Es el nivel básico en el
cual los agentes biológicos no causan enfermedades en los seres humanos, pero se deben tener
precauciones en el manejo de estos agentes para evitar la contaminación del medio ambiente.

Microorganismos con los que se trabaja en este laboratorio tienen la improbabilidad de causar
enfermedad en personas sanas. Los agentes biológicos no causan enfermedades: Escherichia coli,
Staphylococcus epidermidis, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus lactis, Sacharomyces cerevisiae,
Penicillium roqueforti.

Nivel de bioseguridad 2: Dispone de cabinas de seguridad biológica tipo I y II. Debe disponer de manual
de seguridad biológica. El personal debe conocer los riesgos a que se expone, las medidas de protección
que debe aplicar y la forma en que se debe actuar ante un accidente.

Generalmente se aplica en laboratorios clínicos y de diagnósticos, y algunos laboratorios de

universitarios donde se manipulan sangre, fluidos corporales (líquido cefalorraquídeo, secreción
vaginal), tejidos o células humanas.

Este nivel hace referencia a agentes biológicos que causan enfermedad de buen pronóstico, frente a los
que existe tratamiento y que en general no se transmiten por vía aérea.

Tienen centrifuga que está herméticamente cerrada y tienen un sistema de cobertura para evitar que
los aerosoles con microorganismos vayan al ambiente.

Local y accesos:

 Las puertas del laboratorio deben estar cerradas durante las manipulaciones.
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 En las puertas de acceso al laboratorio debe colocarse la señalización internacional de riesgo

biológico.
 Deben señalizarse los congeladores y refrigeradores utilizados para guardar microorganismos
del tipo de riesgo 2.
 Debe haber un contenedor apropiado para depositar los materiales contaminados.

Nivel de bioseguridad 3: Riesgo individual elevado y comunitario escaso. Tienen un sistema de

ventilación con presión negativa, filtros HEPA, cabinas de seguridad biológica tipo I, II y III.

 Los accesos deben estar señalizados con la señal de Riesgo Biológico 3, y en la puerta se debe
exponer la lista de personas autorizadas para entrar.
 Aplicar la regla de trabajo en trabajo en parejas, nadie debe trabajar solo.
 La ropa de trabajo se debe descontaminar antes de lavarla.
 Todo material contaminado se debe desinfectar –con la autoclave o por medios químicos–.

Nivel de bioseguridad 4: Se utilizan las cabinas de tipo III y trajes especiales de una sola pieza. En Europa
solo hay 9 laboratorios de bioseguridad 4. Tratan con: virus de la viruela, virus de la fiebre hemorrágica
de Crimea, virus de Marburgo, virus Ébola. Microorganismos que causan infecciones graves o muy
graves, muchas de transmisión aérea, que pueden pasar a la comunidad y frente a las que no hay
tratamiento eficaz.

Grupos de riesgo en que se clasifican los MO

Grupo Riesgo infeccioso Riesgo de propagacion a la Profilaxis o tratamiento eficaz

de poblacion
riesgo

Poco problable No Innecesario

1 que cause
enfermedad

Puede causar una Poco probable Posible generalmente

2 enfermedad

Puede causar una Probable Posible generalmente

3 enfermedad grave

Puede causar una Elevado No conocido en la actualidad

4 enfermedad grave
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1.3.2. Residuos

1. Definir los tipos de residuos que se generan (No específicos (papel, cartón, embalajes) o químicos
(contaminados o no contaminados)

2. Realizar una correcta separación de los residuos y la eliminación de forma segura.

3. El personal sea consciente de los riesgos asociados a los residuos.

Cada laboratorio tiene definido el tipo de residuos que genera y la forma de tratarlos, almacenarlos y
eliminarlos.

Algunos líquidos se vierten al desagüe, otros se les añaden previamente lejía y han de eliminarlos por el
desagüe. Otros se los llevan una empresa especializada previo cobro. La incineración y la reducción a
cenizas es para residuos orgánicos o material biológico. A veces al residuo se le añade una sustancia
para que absorba.

Algunos residuos antes de eliminarlos se esterilizan con autoclave o horno Poupinel. Los residuos
peligrosos que no se neutralizan en laboratorio, lo recoge una empresa autorizada.

La eliminación, el sistema de almacenaje, forma y la periodicidad de retirada estará detallada en el

programa de gestión de residuos del laboratorio.