EXTRACCIÓN DE ADN (SANGRE)

Luz Pacheco M, María Rivero C, Cristian Anaya, Sebastián Mogrovejo M.

Universidad de Córdoba, Facultad de Ciencias Básicas, Biología

* Luzpacheco0406(@gmail.com)

RESUMEN

El siguiente informe contempla una serie de pasos en los cuales describiremos detalladamente a
continuación el proceso de extracción de DN de sangre. Tras la sustracción de sangre a partir de
un tejido humano, se obtiene del ADN. Esta requiere un orden y etapas elementales de separación
en donde se retira material que se encuentra alrededor del AND para lograr su liberación en forma
de mota para su posterior observación.

La extracción de ADN animal requiere de varios pasos importantes y fundamentales, que además
facilita que la molécula sea liberada de la célula. Cada sustancia utilizada juega un papel
importante para que la extracción sea efectiva; esta se realizó tomando como muestra de sangre
extraída en el día anterior, llevando a cabo el procedimiento adecuado.

Palabras claves: Proceso, extracción, ADN, molécula, sangre.

ABSTRACT

The following report contemplates a series of steps in which we will describe in detail below the
process of extracting DN from blood. After the subtraction of blood from a human tissue, it is
obtained from DNA. This requires an order and elementary stages of separation where material
that is around the AND is removed to achieve its release in the form of a speck for later observation.

The extraction of animal DNA requires several important and fundamental steps, which also
facilitates the release of the molecule from the cell. Each substance used plays an important role
for the extraction to be effective; This was done taking as sample the buccal epithelium, carrying
out the appropriate procedure..

Keywords: Process extraction, DNA, molecule, blood.

INTRODUCCIÓN

Las células animales son más complejas que la

de los demás organismos, ya que están realizan
más funciones vitales. Además, el ADN se
encuentra empaquetado en el núcleo celular por
una serie de proteínas, rodeado por una
membrana la cual tiene otros orgánulos como
son ribosomas. Por esta razón para la extracción
de este se necesita una serie de pasos que van
desde la parte más superficial, es decir de la
membrana celular la cual sufrirá una lisis, hasta Fuente: Google Earth
llegar al núcleo y separar la doble hélice.
Fig.1. Localización del sitio donde se realizó la
Una de las formas que permiten obtener un práctica.
ADN, es mediante extracciones caseras, para
esto se puede utilizar la sangre extraída con 1. Lisis de glóbulos rojos
anterioridad. El fluido sanguíneo de un humano  Se tomó 900 µl de solución de
en el cuerpo es permanente esta circula por los Cell lysis y se depositó en un
vasos sanguíneos. Tiene una función lubricante tubo eppendorf, se adicionó 300
y facilitadora sobre el proceso de masticación y µl de sangre y se mezcló dos
deglución y también presenta una acción veces por inversión
enzimática de degradación de glúcidos. La  Se llevó a centrifugar a 13000
saliva en si no presenta componentes celulares rpm, 1 minuto a 25°C.
es por ello, es un fluido que en sí mismo carece
de ADN. Pero se encuentra en un medio con una
gran cantidad de células epiteliales, están se
desprenden y llegan a formar parte de la saliva
(Noriega, 2013). Esta práctica fue realizada con
el fin de obtener ADN optimo en calidad y
cantidad para ser utilizado en técnicas de
caracterización molecular.

METODOLOGÍA  Se descartó el sobrenadante y se

aplicó vortex al pellet 1min. a
Área de estudio 1500 revoluciones.
2. Lisis de núcleos y precipitación de
proteínas
El estudio fue realizado en el laboratorio de
biología molecular de la Universidad de  Se agregó 300 µl de Nudi Lysis ,
Córdoba con coordenadas geográficas se mezcló suavemente por
8°47´30.87¨ N ,75°51´45.91¨ O, en el inversión.
municipio de Montería, departamento de  Se adicionó 100 µl de solución
Córdoba. (Fig.1). de proteínas.

 Posteriormente se aplica vortex
por 20 seg.
 Se lleva a centrifugar a 13000
rpm por 4 minutos a 25°C.
3. Precipitación de ADN y rehidratación
 A continuación de transfiere el
sobrenadante a un tubo nuevo
que contenía 300 µl de
isopropanol, se mezcló por
inversión 1 vez.
 Se llevó a centrifugar a 13000
rpm por 2 minutos a 25°C
 Se descarta el sobrenadante y se
adiciona 300 µl de etanol al 70%
y se mezcló una vez.
 Se llevó a centrifugar a 13000
rpm por 2 minutos a 25º
 Se aspiró el etanol
 Por último, se agrega 100 µl de la
solución rehidratante, rotular y
llevar a conservar.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Durante el proceso de lisis las interacciones
entre las moléculas que conforman la pared, la
membrana celular y nuclear se modifican o
destruyen permitiendo que los ácidos nucleicos
se liberen. Se utilizan soluciones básicas, que
permiten disolver la membrana celular, así como
inhibidores para inactivar las enzimas que
degradan el ADN. Los componentes celulares
no solubles como el material fibroso y proteínas
que permanecen en solución se separan del
ADN por centrifugación.
Las proteínas celulares se eliminan
mediante una etapa de precipitación, la
unión con cationes como Na+ que reducen
las fuerzas repulsivas entre las cadenas de
nucleótidos y precipita las proteínas pero
deja el ADN genómico de alto peso
molecular en solución.
Se utiliza la fuerte tendencia hidrofílica de los
grupos fosfato para separarlos en medios
acuosos, mientras que las proteínas y los lípidos
se separan en solventes orgánicos (Sambrook et
al. 1989). La fase acuosa y la orgánica se
separan por centrifugación lo que permite aislar
al ADN. Los solventes que se usan
frecuentemente son el fenol, isopropanol entre
otros. Estos reactivos contaminan fácilmente el
ADN, por lo que se debe evitar acarrearlos en el
proceso de purificación.
Después de que son eliminados los lípidos y las
proteínas, se recupera el ADN. Para ello, se
adiciona etanol y soluciones con altas
concentraciones de iones de sodio o amonio que
se unen a los grupos fosfato, esta mezcla reduce
las fuerzas repulsivas entre las cadenas y
permite que el ADN se pliegue sobre sí mismo
haciéndolo insoluble.
Se hidrató el ADN con la solución DNA
Rehydratation.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. ¿Cuál es la fuente del ADN en la
sangre?
R/ La sangre es una fuente excelente de
ADN. Éste está presente en los glóbulos
blancos (o leucocitos), pero no en los
glóbulos rojos humanos (eritrocitos o
hematíes), pues éstos carecen de núcleo.
Una mancha de sangre del tamaño de una
moneda pequeña, correspondiente a unos 50
µl, tiene suficiente ADN para un análisis
típico.
2. ¿porque es importante la purificación
del ADN?
R/ El proceso de purificación del ADN tiene
el objetivo de separar al ADN de otras
moléculas constitutivas de la célula al
momento de la extracción y finalmente para
tener una utilización adecuada.
3. ¿Cuáles son los métodos para la
purificación del ADN?
 Existen diferentes formas de llevar a
cabo la purificación del ADN,
aunque el proceso en general es
como sigue:
 Se deben romper las membranas de
la célula lisándola.
 Se lleva a cabo un proceso de
centrifugación que permita obtener
sólo la fase acuosa del ADN y separa
las membranas.
 Se deben separar las proteínas con la
finalidad de obtener solamente los
ácidos nucleicos. Esto se lleva a cabo
tratando la muestra con fenol o con
proteasas.
 Es necesario separar el ARN del
ADN, esto se lleva a cabo mediante
un tratamiento con ribonucleasas.
 Finalmente, se comprueba la
purificación del ADN aplicándole
electroforesis de ADN.
CONCLUSIÓN
Se llevó a cabo esta práctica, con el fin de
obtener ADN optimo en calidad y cantidad para
ser utilizado en técnicas de caracterización
molecular, teniendo en cuenta la metodología
adecuada, que en primer lugar se debe realizar
un rompimiento de la membrana celular para
esto se logró a una solución de lisis celular,
posteriormente se da el rompimiento del núcleo
y la precipitación de proteínas que contiene el
ADN y por último se realiza la purifica del
ADN. finalmente, la purificación de ADN es
importante porque nos permite separar el ADN
de otras moléculas que componen la célula al
momento de la extracción.
REFERENCIAS:
 Alejos., L. Aragón ., M & cornejo,.
20089 Extracción y purificación de
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 Education.com: extraer ADN de la
espinaca Universidad de Utah:
cómo extraer ADN de cualquier ser
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https://cienciaybiolgia.com/extrac
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 PROYECTO: GENÉTICA DE LAS
ENCEFALOPATÍAS EPILÉPTICAS
EN LA INFANCIA (EEI) EN
AMÉRICA LATINA Universidade
Estadual de Campinas (UNICAMP) /
Laboratorio de Genética Molecular
 Claassen S, du Toit E, Kaba M,
Moodley C, Zar H, Nicol M. A
comparison of the efficiency of five
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kits for extraction of DNA from faecal
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 Yuan S, Cohen D, Ravel J, Abdo Z,
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