LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR

MICROSCOPIA

EDITDTH CORTES CARILLO

KATHERINE GÓMEZ JIMENEZ

NOTAS DEL AUTOR

EDIDTH CORTES CARILLO, KATHERINE GÓMEZ JIMENEZ

CEAD BUCARAMANGA – (151009A_614)

LA CORRESPONDENCIA RELACIONADA CON ESTA INVESTIGACION VA

DIRIGUNADA A:

ALVARO DANIEL SIERRA LOPEZ

 INTRODUCCION

En el siguiente trabajo se realizará la práctica virtual del microscopio, con el fin de

familiarizarnos con este, conociendo las normas de seguridad que debemos tener en un laboratorio

y posteriormente el conocimiento de los reactivos a utilizar y los aparatos. Adquirir la destreza de

cómo manejarlo conociendo sus partes y como son empleadas en cada una de las practicas que se

realizan con dicho objeto.

Desde hace mucho tiempo se ha venido desarrollando distintos equipos de investigación

científica dentro de los cuales, destaca un aparato óptico auxiliar que con el paso del tiempo ha

adquirido una importancia trascendental, sin precedentes en la historia de los grandes progresos

de las ciencias, de la biología en particular, llamado Microscopio.

 OBJETIVOS

Objetivo General:

Adquirir conocimiento de temas específicos tales como: el uso correcto del microscopio,

mediante la realización de simuladores con el material propuesto por el tutor, para comprender

los temas mencionados y llevar a cabo una buena práctica.

Objetivos específicos:

Brindar herramientas para comprender las interacciones bioquímicas, genéticas que se lleven

a cabo y desarrollar un pensamiento científico y critico respecto a las relaciones que se dan en la

biología.

● Conocer las normas de bioseguridad en el laboratorio

● Identificar las partes del microscopio y su funcionamiento.

● Comprobar las propiedades o capacidades que posee el microscopio.

● Simular el manejo del microscopio óptico

● Calcular el diámetro del campo de visión

● Simular la preparación de montajes húmedos y observación de muestras.

● Comprobar los principios en que se basa la microscopía óptica.

● Desarrollar en trabajo colaborativo el informe de laboratorio.

1. Observar en el Menú Normas: el video Normas generales de seguridad en el laboratorio

y responder al siguiente cuestionario:

1.1 ¿Qué es bioseguridad?

Según la OMS (2005) es un conjunto de normas, medidas y protocolos que son aplicados en

múltiples procedimientos realizados en investigaciones científicas con el objetivo de contribuir a

la prevención de riesgos o infecciones derivadas de la exposición a agentes potencialmente

infecciosos o con cargas significativas de riesgo biológico, químico y/ físicos, asegurando que

el desarrollo de dichos procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de

trabajadores y el medio ambiente como por ejemplo el manejo de residuos especiales,

almacenamiento de reactivos y uso de barreras protectoras entre otros.

1.2 ¿Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de

biología?

● El uso de los elementos de protección personal como lo son bata, guantes, tapabocas,

gafas, gorro, zapato cerrado.

● Mantener el área de trabajo despejada para evitar accidentes.

● No utilizar pulseras colgantes tener la puerta del laboratorio cerrada.

● Acatar y recibir la instrucción que se no den a la hora de realizar cualquier tipo de

procedimiento.

● No consumir alimentos, no fumar dentro del laboratorio.

● Hablar lo mínimo mientras se está trabajando en el laboratorio

● No pipetear con la boca

1.3 ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud?

● Emplear siempre el uso de elementos de protección personal.

● Usar con responsabilidad los elementos y sustancias que se utilizan en el laboratorio.

● Haciendo uso correcto de las normas de seguridad en el momento de utilizar los

materiales en el laboratorio.

● No trabaje en el laboratorio sin que a la menos otra persona tenga conocimiento de

ello.

● no llevar las manos ni elementos contaminados de sustancias químicas a la boca u

ojos.

● Teniendo los materiales y botellas debidamente marcados para su utilización correcta,

nombre de la solución, concentración, fecha de preparación y responsable.

● Asegurarse que al utilizar sustancias inflamables no se encuentren fuentes de calor o

de fuego cerca.

● Mantener el lugar de trabajo limpio en caso de que se derrame alguna solución limpiar

inmediatamente, todos los materiales que se utilicen dejarlos en su respectivo lugar.

1.4 Conclusiones

● Tener en cuenta las normas de bioseguridad de esta manera minimizamos los peligros

o accidentes en el laboratorio.

● Lograr disminuir los riesgos en el trabajador y el estudiante de infecciones u otros que

hay en un laboratorio llevando a cabo correctamente las normas de bioseguridad.

 ● Tener en cuenta la vida mía y de los demás compañeros usando con responsabilidad

todos los materiales y Elementos de Protección Personal (EPP).

● Conocer la utilización y manejo de equipos para realizar un buen trabajo.

2. Observar en el menú fundamentación las animaciones correspondientes a principios

ópticos y responder al siguiente cuestionario:

2.1 ¿Cuándo una imagen es aumentada, real e invertida?

● Una lente sencilla posee dos focos una a cada lado del microscopio, cuando los rayos

luminosos pasan a través de la lente se concentra en el foco.

● La distancia focal es la distancia entre el centro de la lente y el punto donde converge

el rayo, si un objeto se coloca a una distancia mayor en el foco se obtiene una imagen

real invertida a medida que se aleja el objeto del foco la imagen s e percibe más

pequeña.

2.2 ¿Cuándo una imagen es aumentada, virtual y derecha?

Cuando el objeto esta entre el foco y el centro óptico se obtiene una imagen virtual mayor y

derecha formada del lado donde se coloca el objeto.

2.3 ¿En qué consiste la refracción de la luz?

● Cuando los rayos de la luz se mueven en un medio homogéneo como el aire se

propaga en línea recta pero cuando cae sobre la superficie de un medio de diferente
 densidad, a la del medio del cual se venía prolongando, cambia de dirección y

velocidad a esos cambios se les conoce como refracción de luz.

● La refracción de la luz es cuando la luz pasa de un medio transparente a otro se

produce un cambio en su dirección a la distinta velocidad de propagación que tiene la

luz en los diferentes medios materiales, a este fenómeno se le llama refracción.

2.4 ¿Qué origina el fenómeno de refracción en la observación microscópica?

● Lo que origina el fenómeno de refracción son los medios por los cuales deben viajar

los rayos de luz.

● Al observar a través del microscopio, los rayos de luz tienen que atravesar distintos

medios y son refractados cambiando su dirección de acuerdo a sus índices de

refracción.

2.5 ¿Qué función cumple el aceite de inmersión?

● Los aceites de inmersión son sustancias transparentes, con las propiedades ópticas y

características necesarias para su uso en el microscopio.

● Los aceites típicos suelen tener un índice de refracción alrededor de 1,515 el aceite

tiene casi el mismo índice que el vidrio.

● El aceite de refracción entre la muestra y el lente mejora la resolución, los objetos

diseñados para este propósito son denominados como objetos de inmersión en aceite.

● La función que cumple el aceite de inmersión es eliminar casi por completa la

desviación de los rayos de luz, así se aumenta considerablemente la eficacia de los

objetos de los microscopios.

3. Realizar en el menú componentes, la ejercitación: Partes del microscopio

3.1 Realice la ejercitación: “Partes del microscopio”

“Una vez realizada la ejercitación en la siguiente representación gráfica de un microscopio,

reconozca y ubique cada una de las siguientes partes:

1. Ocular

2. Revolver

3. Objetivo

4. Platina

5. Diafragma

6. Fuente de luz

7. Base

8. Condensador

9. Tornillo micrométrico

10. Tornillo macrométrico

11. Tornillo carro

12. Brazo

13. Tubo

3.2 Con base en el paso previo, clasifique las partes mecánicas y ópticas del microscopio en

el siguiente cuadro:
 Partes mecánicas Partes ópticas

● Base ● Objetivo

● Revolver ● Ocular

● Brazo ● Condensador

● Tubo ● Diafragma

● Tornillo micrométrico ● Fuente de luz

● Tornillo macrométrico

● Tornillo carro

● Platina

3.3 Cuáles son los valores de cada uno de los objetivos?

● 4X

● 10X

● 40X

● 100X (Inmersión)

4.0. Observar en el Menú Demostración los videos microscopio primera parte y

microscopio segunda parte y responder al siguiente cuestionario:

4.1 ¿Cuál es el objetivo de esta práctica?

● Conocer las partes y el funcionamiento del microscopio

 ● Conocer donde están ubicados los objetivos y sus funciones

● Donde se colocan las muestras y como se debe ir graduando para su revisión

● Comprender las interacciones bioquímicas y genéticas

● Adquirir destrezas en el uso del microscopio

4.2 ¿Qué materiales necesita? ¿Los conoce todos? ¿Cuáles desconoce?

Tengo conocimiento de los materiales que voy a nombrar a continuación:

● Goteros o pipetas

● Láminas porta objetos

● Laminillas cubreobjetos

● Papel absorbente

● Aceite de inmersión

● Papel de arroz o de óptica

● Alcohol isopropílico

● Agua estancada

4.3 ¿Qué temas del módulo puede relacionar con esta experiencia? Justifique su respuesta

Se evidencia la existencia de vida en todo lo que nos rodea, el ser vivo se forma a partir de las

células.

4.4 ¿Qué habilidades cree que se pueden desarrollar al realizar esta práctica de

laboratorio?
Se puede desarrollar el conocimiento un pensamiento científico y crítico del correcto manejo del

microscopio, el manejo de las láminas, las distancias entre el microscopio y la muestra, el

conocimiento de los materiales para la limpieza del equipo y el aseo del mismo.

4.5 ¿Qué utilidad o aplicaciones prácticas puede derivar del conocimiento que se desarrolla

con estos laboratorios?

La utilidad es conocer las partes y el funcionamiento correcto observar cosas que no se pueden

ver a simple vista, investiga los objetos pequeños utilizado por este instrumento llamado

microscopio.

4.6 Después de observar el video ¿Cuál es la conclusión a la que llega?

Se puede concluir que el microscopio es una herramienta sumamente útil para la exploración de

componentes poco visibles o imperceptibles en la cual se pueden determinar componentes,

estructuras, particularidades de alguna sustancia u objeto.

5. Realice en el menú Ejercitación/las simulaciones

5.1 Realice en el menú Ejercitación/ las simulaciones Partes del microscopio

Una vez realizada la ejercitación pegue en el informe el pantallazo con la

imagen y sus respuestas.

5.2 Realice en el menú Ejercitación/Funciones la simulación

Una vez realizada la ejercitación pegue en el informe el pantallazo con la
imagen y sus respuestas.
5.3 Realice en el menú Ejercitación/la simulación Manejo
Registre las observaciones realizadas en el siguiente cuadro:

OBJETO AUMENTO DIBUJO/ ANÁLISIS Y

OBSERVADO UTILIZADO PANTALLAZO CONCLUSIONE
S
Se observan en
un campo de visión
amplio debido al
Agua estancada aumento con el que
4X se está mirando, a
la derecha una
larva y al lado
izquierdo un
protozoo.

Encontramos un
protozoo de forma
ovalada, en el
centro está la larva
10 X la cual es delgada y
 larga y a las 3 en
punto encontramos
otros protozoarios.

Encontramos en
mayor tamaño el
protozoo con sus
movimientos
ameboideo.
40 X Se observan mejor
y podemos ver su
estructura gracias
al aumento.
Ahora encontramos
un alga.

5.3.1 ¿Qué organismos pueden observarse en la gota de agua estancada?

Protozoos, algas y una larva.

5.3.2 ¿Son todos de igual tamaño y forma?

Se pueden observar organismos de diferentes tamaños.

5.3.3 ¿Se observan organismos móviles o estáticos?

Son móviles los organismos que se pueden observar.

5.3.1 Defina los tipos de montaje que se pueden hacer en el laboratorio.

Fresas: son montajes generalmente húmedos, la muestra se observa sin
modificar diluida o concentrada o concentrada. Permite observar la movilidad de los
microorganismos vivos. Se utiliza también para observar procesos como la mitosis,
meiosis y la formación de esporas.
Fijadas y teñidas: Se coloca una suspensión homogénea de microorganismos en
una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija, después se tiñen mediante
diferentes técnicas. Estas preparaciones se observas sin cubre el objeto, y
habitualmente con objetivos de inmersión.
5.3.2 Describa los pasos para la elaboración de un montaje húmedo.
● Tomar con un gotero una muestra de agua estancada.
● Coloque la gota de agua estancada sobre una lámina portaobjeto.
● Tome una laminilla cubreobjetos, en posición oblicua, (45 grados) y
apoyando una arista sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer
suavemente.
● Retire el exceso de agua por los bordes usando papel absorbente

5.3.3 ¿Qué debe hacerse para lograr una iluminación adecuada?

Girar el diafragma para obtener la iluminación adecuada.

5.3.4 ¿Cómo se enfoca el microscopio al iniciar la observación?

Girando el tornillo macrométrico en sentido contrario a las manecillas del reloj,
se sube la platina al tope.

5.3.5 ¿Con el objetivo de mayor aumento se necesita menor o mayor

iluminación de la que se necesita con el de menor aumento?
Con el objetivo de mayor aumento se necesita menor iluminación, mientras que
con el objetivo de menor aumento se necesita más iluminación.

5.3.6 ¿Qué función cumple el aceite de inmersión? ¿Con qué objetivo se utiliza?
Su función es aumentar la definición de la imagen y se utiliza con objetivo de
100x.

5.3.7 ¿Cuál es el poder de aumento cuando se estén utilizando cada uno de los
objetivos de 4X, 10X, 40X y el ocular de 10X?
Si estamos usando un objetivo de 40X y un ocular de 10X, el resultado final será
de 400X, es decir vemos la muestra, aumentada 400 veces. Usando microscopios
ópticos avanzados se consiguen unos 1000-1500 aumentos. Algunos microscopios
ópticos tienen lentes internas que producen aumentos adicionales que debemos tener
en cuenta para calcular la magnificación de la imagen que se observa.
5.4 Realice en el menú Ejercitación/la simulación poderes

5.4. 1 Para las muestras de la letra, la hebra de hilo y la tela de cuadros

observadas determine:

¿Cómo se manifiesta el poder de resolución?

Se hacen visibles detalles que no son posibles percibir con el ojo humano.

¿Cómo se manifiesta el poder de aumento?

Es cuando magnificamos con la combinación objetivo ocular la muestra a
observar esto hace que se vean más grandes los objetos de estudio.
Para conocer en el microscopio compuesto el aumento definitivo de una imagen
se aplica la siguiente formula:
AUMENTO TOTAL : aumento del objeto X aumento del ocular
¿Cómo se manifiesta el poder de definición?
Es cuando por medio de la graduación del tornillo micrométrico podemos
obtener imágenes más nítidas.

¿Cómo se manifiesta el poder de penetración o profundidad?

Es cuando podemos ver diferentes capas o planos que pueden estar traspuestas
las unas con las otras simultáneamente.
¿Cómo se manifiesta el poder de definición en las células de cebolla?
Observamos la célula y su forma hexaédrica y alargadas

OBJETO AUMENTO DIBUJO/ ANÁLISIS

OBSERVAD UTILIZADO PANTALLAZO
O
Logramos
diferenciar las
membranas y el
4X citoplasma.
Cebolla

Vimos en las
celdas que tenían
más proporción de
10X azul de metileno
unos diminutos
puntos (núcleo).

Aunque
visualizamos más
grandes las
40X células, no
pudimos ver el
núcleo en su
mayor proporción.
 5.4.2 ¿Con qué objetivo se logra un campo de visión más grande?
Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores,
hay que tener en cuenta, que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es
decir se verá menos de la muestra que estemos observando. Podemos decir entonces
que con el objetivo 4X se ve más el campo de visión.

5.4.3 ¿Con qué objetivo se observan mejor los detalles de una imagen?
Con el objetivo de 40x

5.4.4 Calcule el diámetro del campo de visión para aumentos de 10X, 40X del
mismo cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.
CALCULOS DE DIAMETRO:
10x= 16/10= 1,5
40x= 16/40= 0,4

5.4.1 Compare la anchura del campo visual con cada uno de los tres objetivos.
¿Con cuál objetivo el campo de visión es mayor? con el de mayor o menor
aumento

Mayor campo Menor campo

Con el visual visual es

de menor aumento, el campo de visión 40xmayor.

6. Realice4x
en el menú Ejercitación/la simulación principios
6.1 Cuándo se observa una letra o un objeto asimétrico cómo se observa su
posición en el ocular al compararlo con la visión en directa sobre la platina?
Se observa la imagen invertida.

6.2 ¿Al mover el portaobjetos de derecha a izquierda a qué lado se mueve la

imagen?
Se mueve hacia la derecha.

6.3 ¿Al acercar el portaobjetos hacia usted, hacia dónde se mueve la imagen?

Hacia adelante ósea se aleja.

7. Realice la simulación: comprobación de los poderes o capacidades del microscopio óptico

7.1 ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento al observar la letra?

Al magnificar la imagen que corresponde al aumento dado por la relación nos muestra el

objeto ampliado, esto nos permite una mejor observación de los detalles.

10X x 4X = A 40 números de veces que aumento el objeto

El poder de aumento se manifiesta al permitir ampliar la imagen, agrandando así el tamaño de

los objetos. La ampliación es igual al reproductor del aumento del lente ocular por el objetivo.

Cada objetivo y ocular tienen gravado el número de veces que aumenta la imagen.
7.2 Calcule el diámetro del campo de visión para un aumento de 4x en un cuadrado de 1 cm

de lado de papel milimetrado. Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la

distancia entre dos líneas es un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción

sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para ese aumento

(objetivo x ocular).

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguir los

siguientes pasos:

1. Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

2. Ponerlo sobre la abertura central del porta objetos.

3. Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la

línea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual.

4. Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la

preparación quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observación

nítida. Esta distancia se conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor

es el poder de aumento del objetivo.

5. Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado con el

borde del campo de visión.

6. Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos líneas es

un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será

el diámetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular).

 7. Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay que

tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verá

menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el

campo será la mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será la tercera parte, etc.

(inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo cálculo

matemático para saber el nuevo diámetro.

Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos.

Recuerde que, aunque la escala está marcando mm usted lo leerá en micras.

Tabla 1 equivalencia mm en micras

Medida en mm (escala Equivalencia e µm Tamaño de las marcas

del portaobjetos) (divisiones)
1 mm 1000 µm Grandes
0.1 mm 100 µm Medianas
0.01 mm 10 µm Pequeñas

7.3 ¿Cuál es la utilidad del microscopio?

El microscopio es sin duda el elemento más importante en cualquier laboratorio.

● Permite la observación de células, virus, bacterias, o saber tipos de sangre.

● Juega un papel fundamental para el estudio y el descubrimiento de las enfermedades

● Por medio del microscopio podemos aprender y conocer sobre los seres vivos

● Proporciona información para los avances científicos en ramas como biología,

medicina y química

● Es uno de los instrumentos más importantes del laboratorio debido a que permite

observar cosas que no están a simple vista

7.4 ¿En qué montaje se observó mejor el poder de penetración?

Con los hilos de color se observa toda la estructura de la hebra, hasta partículas del mismo

tejido que sin el microscopio no se pueden observar, esto hace referencia a los tres contextos: 4X

,10X, 40X, siendo este último donde más penetración se tiene.

8. Realice la simulación: comprobación de los principios ópticos del microscopio

Conteste las siguientes preguntas:

8.1 ¿Al observar la letra asimétrica e: ¿Se ve invertida, o en la misma posición en que

estaría si se viera a simple vista? ¿Parece como si se viera por un espejo?

La letra se observa invertida, en posición contraria a la imagen real, por la reflexión

La letra se observa invertida, sale como si estuviéramos de frente hacia el lado opuesto del

microscopio: igualmente se ve como si estuviéramos en un espejo.

8.2 ¿Al mover la preparación hacia la derecha? ¿Hacia dónde se mueve la imagen?

Si se mueve el portaobjetos hacia la derecha, el objeto examinado se desplazará hacia la

izquierda. Si se mueve el portaobjetos hacia usted, el objeto examinado se alejará.

8.3 ¿Al alejar el portaobjeto o la muestra de usted hacia donde se nueve la imagen?

La imagen se mueve hacia abajo.

8.4 ¿Si la distancia focal es mayor el tamaño del objeto es mayor o menor?

El tamaño del objeto es menor.

 BIBLIOGRAFIA

http://ruv.unad.edu.co/laboratorio/index/main.html

Scheifler, G. R. (1989). Estudio al microscopio óptico de los ascos en algunas especies de"

Arthoniales" y" Opegraphales". In Anales del Jardín Botánico de Madrid (Vol. 46, No. 1, pp.

263-271). Real Jardín Botánico.