UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE HUANTA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA Y GESTION AMBIENTAL

CARACTERIZACIÓN MICROBIOLÓGICA DE LA CALIDAD DEL AIRE AL

INTERIOR DE LAS INSTALACIONES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL
AUTONOMA DE HUANTA (UNAH)

ASIGNATURA: REALIAD NACIONAL

DOCENTE:

ALUMNOS: Quispe Quintan, Joyway

Ayala Huaylla Alicia

Suarez Garcias, Gabriela

CICLO – II Huanta 2019

 CARACTERIZACIÓN MICROBIOLÓGICA DE LA CALIDAD DEL AIRE
ALINTERIOR DE LAS INSTALACIONES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL
AUTONOMA DE HUANTA (UNAH)

RESUMEN
La calidad del aire interior en ambientes de estudio importante para las personas
que se encuentran en ellos. Por normativa, los edificios son diseñados primando la
eficiencia energética, siendo por lo tanto cada vez más estancos. El aumento de la
estanqueidad deteriora la calidad del aire interior con el resultado de un aire interior
con una elevada concentración de contaminantes y/o microorganismos.

La contaminación, presente en diversas formas es responsable de la mala calidad

del aire en los espacios interiores. Los humanos somos sensibles a los efectos
olfativos e irritantes de cerca de medio millón de compuestos químicos presentes
en el aire. Esto provoca cambios en el estado de salud de las personas, pudiéndose
manifestar en síntomas agudos y/o crónicos.

Por tanto la siguiente investigación se propuso a caracterizar los microorganismos

presentes en el aula de estudio como también en las bibliotecas donde el estudiante
pasa la Mayor parte del día en el cumplimiento de las actividades educativas.

Una vez tomando las muestras de aire de los ambientes con la técnica de
sedimentación por gravedad se pasó a incubar, aislar e identificar bajo las técnicas
de tinción de Gram y azul de metileno pudiendo identificarse bacterias Gram
negativas e hifas de hongos.

Los objetivos fundamentales de este artículo caracterizar la carga microbiana del

aire de los ambientes de estudio y analizar los efectos en la salud a la que se
exponen los ocupantes del ambiente de estudio.
PALABRAS CLAVES

HIFAS: Son una red de filamentos cilíndricos que conforman la estructura del
cuerpo de los hongos pluricelulares. Están constituidos por una fila de células
alargadas y tubulares, envueltas por una pared celular compuesta de quitina. El
conjunto de estas hifas se denomina micelio.
TINCIÓN DE GRAM: Es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología
para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su
nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884.

AGAR NUTRITIVO: Es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para

todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente
altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la
superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas.

AGAR SABOURAUD: Es un medio de cultivo que por sus características funciona

como medio de enriquecimiento para hongos y que en caso de
contener cloranfenicol u otro antibiótico, se convierte en un medio selectivo para
los mismos

AGAR TSA: Es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de

microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y
anaerobias. ... Es un medio recomendado para la detección y recuento de una
amplia gama de microorganismos.

CEPARIUM: En microbiología, es una población de células de una sola especie

descendientes de una única célula, usualmente propagada clonalmente, debido al
interés en la conservación de sus cualidades definitorias. De una manera más
básica puede definirse como un conjunto de especies bacterianas que comparten,
al menos, una característica.

BACTERIAS GRAMNEGATIVAS: Son aquellas que no se tiñen de azul oscuro o

de violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ahí el
nombre de "gramnegativas" o también "Gram-negativas"
BACTERIAS GRAMPOSITIVAS: Son aquellas bacterias que se tiñen
de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram. Esta característica química está
íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo
natural de organización bacterian
BACILO: se usa para describir cualquier bacteria con forma de barra o vara, y
pueden encontrarse en muchos grupos taxonómicos diferentes tipos de bacterias.
Sin embargo el nombre Bacillus, se refiere a un género específico de bacteria. El
otro nombre Bacilli; hace referencia a una clase de bacterias que incluyen
dos órdenes, uno de los cuales contiene al género Bacillus.

INTRODUCCIÓN

Diversos estudios realizados por la Agencia de Protección Medio ambiental de los

Estados Unidos (EPA) sobre la exposición de humanos a los contaminantes del aire,
indican que los niveles de contaminación en ambientes cerrados son entre 2 a 5 y
en algunos casos 100 veces más concentrados que los niveles presentes en el aire
exterior. Lo cual asociado a las condiciones operativas no adecuadas de sistemas
de ventilación y recirculación de aire, refrigeración y/o calefacción, hacen prever un
problema potencial de la calidad del aire dentro de dichos espacios. Estos
resultados son de mucha importancia según lo mencionado anteriormente, ya que
la mayoría de las personas pasan cerca del 90% de su tiempo en el interior de
recintos cerrados (EPA, 2005).

Por ello la preocupación por el estudio y la caracterización de microorganismos

presentes en ambientes como las aulas de estudio o de esparcimiento ya que se
desarrollan actividades muy frecuentadas y por una gran cantidad de personas
recurrentes ya que además estos microorganismos pueden contribuir al deterioro
de infraestructuras y materiales, también son productores de toxinas y sustancias
volátiles, que en ocasiones causan enfermedades respiratorias, sistémicas y
alergias.
Ya que los microorganismo pueden ser transportados con mucha más facilidad en
espacios cerrados como un aula de estudio o de esparcimiento de universidad
debido a la alta recurrencia de los mismo estudiantes, el transporte puede ser en
forma de polvo, en gotas de saliva eliminadas al toser, estornudar, en las manos ya
que al tocar una computadora de uso común la siguiente persona se estaría
contaminando o simplemente al hablar

Crook y Burton (2010) mencionan que en los ambientes laborales, el problema

podría ser mayor debido a los factores del entorno propios del sitio de trabajo, tales
como niveles elevados de polvo, uso excesivo de computadores, altas
temperaturas, poca o ninguna ventilación de aire exterior, mala iluminación, falta o
inadecuado mantenimiento de los sistemas de aire acondicionado e insuficientes
regímenes de limpieza; estos factores pueden afectar directamente la capacidad
inmunológica de los trabajadores al ejercer un control sobre las amenazas del
entorno en su sitio de trabajo.

ÁREA DE MUESTREO:
Se realizaron dos puntos de muestreo en la Universidad Nacional Autónoma de
Huanta (UNAH):
o Salón N° 5 Ingeniería y Gestión Ambiental: gran afluencia de personas.
o Biblioteca: gran confluencia de personas.

Se realizó dos muestreos lunes 11 de noviembre (salón N°5) y miércoles 20 de

noviembre (biblioteca), sin tomar en cuenta las condiciones ambientales; se utilizó
el método de sedimentación en placa, en el cual utilizamos placas Petri con los
medios de cultivo Agar Nutritivo y Sabouraud de (24 ml en cada placa) el primero
para el recuento de bacterias y el segundo para hongos. Se colocaron cuatro placas
por punto de muestreo (2 por cada medio de cultivo a evaluar) a 100cm del nivel del
suelo se dejaron expuestas al ambiente durante 5 minutos. Todas las muestras se
trasladaron al laboratorio de Microbiología de la Universidad Nacional Autónoma de
Huanta, dejando las placas con Agar Nutritivo en la estufa a una temperatura entre
35° y 37° de 24 a 48 horas y las placas con Agar Sabouraud en la incubadora a una
temperatura entre 20 ° y 25 ° de 5 a 7 días para su crecimiento.

Proseguido con la Elaboración de ceparium, pesar Agar TSA 6 gr. Y Sabouraud

0.9615 gr., agregar 15 ml de agua destilada diluir en un matraz, luego homogenizar
en mechero bunsen, enseguida autoclavar a 121 ºc durante 15 minutos. Pasar a
viales 4 ml cada uno dejar recostado para que se solidifique en pico y después
seleccionar la colonia aislada, esterilizar el asa de siembra en el mechero tocar con
la punta del asa una colonia separada de los demás, inocular estriado en el vial
encobar por 48 horas a 37 ºc. Los viales con sabouraud incubar por 5 a 7 días a 20
a 25 ºc luego refrigerar a (4 – 8 ºc) cultivo puro.

Se seleccionaron las muestras a identificar tomando pequeñas muestras de los

ceparium con Agar Nutritivo (bacterias) para realizar la tinción Gram se puso una
gota de solución salina fisiológica en una lámina porta objeto tomando con la asa
de siembra las colonias del ceparium esparcirlo con cuidado en la lámina luego
dejar que se seque a temperatura ambiente, seguidamente agregar cristal violeta
dejarlo un minuto, lavar con agua corriente (siempre teniendo cuidado de no limpiar
la lámina) ,agregar Lugol por un minuto, lavar con agua corriente, agregar alcohol
cetona por 30 segundos, lavar con agua corriente, para ya agregar safranina y dejar
secar a temperatura ambiente y finalmente llevarlo al microscopio para saber si son
bacterias Gram positivas o gramnegativos.

IDENTIFICACION POR TINCION GRAM

La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está por tanto en su
resistencia a la decoloración; esta resistencia se debe probablemente al hecho de
que en el caso de bacterias gramnegativos, la mezcla de alcohol/acetona es un
solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula (y también
puede dañar la membrana citoplasma a la que se une peptidoglicano). La delgada
capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y
la célula se decolora. Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares
más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al
disolvente, provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado
dentro de la pared celular. Después de la decoloración las células Gram positivas
son todavía azules, pero los gramnegativos son incoloros. Para poner de manifiesto
las células gramnegativos se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es
un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la
coloración de contraste las células gramnegativos son rojas, mientras que las Gram
positivas permanecen azules.

En caso de los hongos se realizó la tinción con azul de metileno, el cual fue poner
una gota de solución salina fisiológica, en una lámina porta objeto tomar las asas
de siembra y esparcirlo (homogenizarlo), esperar a que seque a temperatura
ambiente o fijarlo en el fuego; agregar la solución azul de metileno por dos minutos
enjuagarlo con agua corriente dejar que seque a temperatura ambiente para
después observarlo en el microscopio.

RESULTADOS

Fotografía N° 1 de la estructura de la bacteria

Muestra obtenida de los interiores del aula 5 del

II ciclo de la carrera de Ingeniería y Gestión
ambiental (UNAH
 Fotografía N° 2 de la estructura del hongo
Muestra obtenida de los interiores del aula 5 del
III ciclo de la carrera de Ingeniería y Gestión
ambiental (UNAH)

 La técnica que utilizamos no nos permite cuantificarlo correctamente los

microrganismos, es un número aproximado, ya que la técnica es solo para
caracterizar.
 En sabouraud al fondo se pudo contar 5 hongos, mientras en entrada de la
puerta a la diagonal del fondo se contó 2.
 En el agar nutritivo al fondo se pudo contar 7 bacterias, y en entrada de la
puerta a la diagonal del fondo se contó 2.
 En los hongos se observaron forma circular poco amarillentos y centros
oscuros, elevación convexa y borde filamentosos. y las bacterias de forma
circular elevación convexa y de borde (entero, ondulado).
 Al realizar la coloración gram en las bacterias se obtuvieron de coloración
rosada tenue; esto hace que la bacteria sea gramnegativo. En los hongos
se observaron hifas con septus.
CONCLUSIÓN

 Se obtuvo mayor recuento de bacterias Gram negativas que de Gram

positivas
 Se logro identificar bacterias del genero bacilus y en hongos hifas con
septus.
 las bacterias identificadas no suponen riesgo elevado para la salud de los
usuarios sanos, pero que es necesario implementar medidas para disminuir
la carga bacteriana y disminuir posibles afecciones generales en la salud de
sus ocupantes.
 En el fondo del aula existen más microorganismos que en la entrada de la
puerta.

RECOMENDACIONES

1. En los ambientes de estudio se debe realizar una limpieza profunda según que muestren
el nivel de contaminación de acuerdo a la concentración de bacterias y hongos en el aire
2. Es de suma importancia y prioridad ampliar la investigación con respecto a la
identificación de bacterias y hongos en los ambientes de estudio contra los
microorganismos que son prejuiciosos para la salud humana. Puesto que presentan un
peligro para la salud y es necesario y preciso su identificación para su posterior control.
3. Implementar un plan de mejora continua de acuerdo al protocolo de descontaminación
microbiológica, que considere el aire interior, que constituya un plan de desinfección a
nivel de todo el UNAH.
4. Para prevenir problemas de salud relacionados con enfermedades respiratorias,
gastrointestinales y de tipo alérgico, se debe realizar de manera rutinaria un análisis de la
calidad microbiológica del aire, así como una limpieza periódica de cada área para evitar
los padecimientos asociados con los microorganismos presentes en el ambiente interno.

BIBLIOGRAFIA

1. Crook B, Burton N. Indoor moulds, Sick Building Syndrome and building

related illness. Fungal Biology Reviews. 2010
2. EPA (Environmental Protection Agency). 2005. IAQ Reference Guide. Indoor
Air Quality Tools for Schools. Consultado el 3 oct 2011. Disponible en
www.epa.gov