“DETECCIÓN VISUAL DE LA

TOXICIDAD DE LAS AGUAS

RESIDUALES QUE CONTIENEN
IONES DE METALES PESADOS
MEDIANTE UN BIOSENSOR CON
CELDA DE COMBUSTIBLE
MICROBIANO
AUTOALIMENTADO Y UN
CÁTODO DE AZUL DE PRUSIA
(HEXACIANOFERRATO
FERRICO)”

Presentado por: Fiorella Olazabal, Diego Hernández, Mariafernanda

Coronado, Alejandro Valdivia y Julia Segura.
 1. RESUMEN
Se desarrolló con éxito un
biosensor de celda de
Se estudiaron y optimizaron
combustible microbiana
factores como la oxidación del
autoalimentado (MFC) que
blanco de Prusia (PW), la
contiene un bioanodo y un
resistencia externa y el tiempo
cátodo de azul de Prusia (PB)
de reducción.
para analizar la toxicidad del
agua residual.

Los resultados de este trabajo

Puede proporcionar una forma
indican que el biosensor
novedosa y razonable para la
autoalimentado podría
detección de toxicidad de
aplicarse a la evaluación de
aguas residuales. Además, se
toxicidad aguda de muestras
espera que el biosensor sirva
de iones de metales
como una técnica futura para
pesados con un excelente
el monitoreo in situ de aguas
rendimiento como detección
residuales.
recuperable y visual.
2

Las evaluaciones de biotoxicidad de los
iones de metales pesados son de gran
2. INTRODUCCIÓN importancia en el monitoreo ambiental,
y se han desarrollado varias estrategias
en los últimos años. Los organismos
superiores, como los ratones, la dafnia y
los peces, se aplican comúnmente a la
detección tradicional de biotoxicidad.
los biosensores electroquímicos de
toxinas microbianas que usan
mediadores electroquímicos redox para
sustituir el aceptor de electrones natural,
el oxígeno, han llamado la atención
debido a su conveniente
miniaturización, respuesta rápida y bajo
costo. Sin embargo, algunos iones de
metales pesados que se presentan en
las aguas residuales pueden reaccionar
con los mediadores.
3
El uso de microorganismos ubicuos
puede superar eficazmente estos
inconvenientes debido a su ciclo de
vida corto, respuesta rápida,
manipulación fácil, alta sensibilidad y
bajo costo. Las pruebas de toxicidad
microbiológica se basan en la inhibición
de tóxicos en las vías respiratorias o
actividad fotosintéticas de
microorganismos.
Actualmente, los sistemas
bioelectroquímicos ecológicos (BES),
como las células microbianas de tres
electrodos (M3Cs), las células
microbianas de biocombustible (MFC) y
las células electrolíticas microbianas
(MEC), pueden descomponer sustancias
orgánicas en las aguas residuales y
generar bioelectricidad.
 Pb (NO3) 2, Co Las tiras conductoras de
(CH3COO) 2 · 4H2O, óxido de indio y estaño
CdCl2 · 2.5H2O y K3Fe (ITO) (transmitancia> 83%,
(CN) 6, Cu (CH3COO) 2 resistencia de la hoja <15 Ω
· H2O / sq, Zhuhai. Se utilizaron
Kaivo Optoelectronic
Technology Co., Ltd.,
Todas las soluciones China) para la preparación
tóxicas que contienen de los cátodos PB.
iones de metales
pesados de Pb2 +, Co2
+, Cd2 + y Cu2 + se
prepararon frescas Todas las soluciones se
antes de su uso. prepararon con agua
desionizada recién
preparada (≥18.25 MΩ /
cm) de un sistema Milli-
Un litro de catolito Q Plus (Millipore).
contiene 50 mmol de
K3Fe (CN) 6 y 100 mmol
de solución de tampón
fosfato (PBS, que Ambos electrodos de
contiene 9,15 g de ánodo y cátodo se
Na2HPO4, 6,64 g de ensamblaron con un

MATERIALES
NaH2PO4 · H2O, 0,62 g espesor de fieltro de
de NH4Cl y 0,26 g de grafito de 3 mm o 10
KCl). mm
4
 Se tomaron imágenes de
Los voltajes en el circuito externo
microscopía electrónica de
se informaron automáticamente a
barrido (SEM) con un microscopio
través de un sistema de
electrónico de barrido de emisión
recolección de datos (Modelo
de campo XL30E a un voltaje de
2700, Keithley Instruments, Inc.).
aceleración de 15 kV.

Las mediciones de voltametría Usando el bioanodo como

cíclica (CV) se realizaron con una
estación de trabajo
electroquímica (CHI 832B,
Shanghai Chen Hua Instrument
Co., Ltd.) a 35 ° C.
electrodo de trabajo, un Ag /
AgCl (KCl saturado) preparado
como electrodo de referencia y
un alambre de platino (Pt) como
contraelectrodo.

La espectroscopía de
Todos los potenciales se
impedancia electroquímica (EIS)
informaron contra el electrodo de
se implementó con un Autolab /
referencia Ag / AgCl (KCl
PGSTAT 30 (Eco Chemie B.V.
saturado).
Utrecht, Países Bajos).

Las mediciones de EIS se llevaron a cabo a un potencial

base de 0.25 V bajo un potencial de oscilación de 5 mV en
el rango de frecuencia de 0.01 Hz a 100 kHz en una
INSTRUMENTOS solución que contiene 5 mmol / L K3Fe (CN) 6 / K4Fe (CN) 6
y 0.1 mol / L KCl.
5

Se usó un cubo de doble
cámara con un volumen
de trabajo de 14,1 ml)
hecho de plexiglás
como biosensor de
toxicidad MFC.
Se usó una mezcla de
solución media y fango
cultivado como el inóculo
anódico inicial. Todos los
medios se purgaron con
argón para eliminar el
oxígeno disuelto .
La solución anódica fue
reemplazada por el medio
para las siguientes pruebas
de toxicidad y
caracterización
electroquímica. Se midió el
voltaje de circuito abierto .
6
Cada cámara abarca El ánodo de MFC se
una cavidad con un aclimató en modo
tamaño de 15 mm de discontinuo con aguas
radio y 20 mm de ancho. residuales municipales
El ánodo y el cátodo se tomadas de la Segunda
conectaron a través de Planta de Tratamiento
un cable de titanio con de Aguas Residuales en
una resistencia externa. Changchun, China.
La solución K3Fe (CN) 6 El ánodo se consideró
se usó como aceptor de totalmente aclimatado
electrodos catódicos. Se cuando la salida de
utilizó glucosa como voltaje era estable y
carbohidratos para el repetible durante más
crecimiento de la de dos ciclos
biopelícula anódica. consecutivos.
CONSTRUCCIÓN Y PUESTA EN
MARCHA DEL BIOSENSOR MFC
 Esquema 1: Ilustración
esquemática de la detección de
toxicidad basada en el biosensor
de MFC con el cátodo PB.

Figura 1: Fotografías de
fieltro de grafito con
diferentes espesores
7
 PREPARACIÓN DE LA PELÍCULA DE PB
 Una solución recién preparada que contenía 0.1 mol / L de HCl, 0.1 mol / L de KCl, 2.5
mmol / L de K3Fe (CN) 6 y 2.5 mmol / L de FeCl3.

 La tira ITO, Ag / AgCl preparado (KCl saturado) y la lámina de Pt se utilizaron como

electrodo de trabajo, electrodo de referencia y contraelectrodo, respectivamente.

 Las tiras rectangulares de ITO (tamaño: 8 mm x 60 mm) se lavaron secuencialmente

con acetona, etanol y agua desionizada durante 10 minutos en un baño ultrasónico.

 Las tiras de ITO se sumergieron luego en una solución de 1 mol / l de NaOH / etanol
durante 15 minutos .

 Después de que las tiras de ITO se enjuagaron completamente con agua desionizada
y se secaron con flujo de gas nitrógeno, las tiras de ITO se electrodepositaron en el
electrolito anterior aplicando un potencial constante de 0.4 V para 1–10 min.

 Las franjas azules indicaron la preparación exitosa de los cátodos PB. Finalmente, los
cátodos PB preparados se enjuagaron completamente con agua desionizada y luego
se secaron en un horno a 100 ° C durante 6 h.
8
 PRINCIPIO Y CUANTIFICACIÓN DE
LA TOXICIDAD
Se puede diseñar el biosensor electrocrómico autoalimentado con el bioanodo y el
cátodo PB, y las dos reacciones de media celda del biosensor MFC son:

 Los electrones, generados por bioxidación de sustratos orgánicos en bioanodos, transferidos a

través de un circuito externo al Cátodo PB donde Fe (III) se redujo a Fe (II) en PB.

 La absorbancia del cátodo PB disminuyó debido a la eliminación de la interacción de PB

estructura molecular, y el color cambió de azul a transparente.

 Cuando se introdujeron los tóxicos, el sistema respiratorio y metabólico. Se inhibió la actividad de

los microorganismos, lo que resultó en una menor decoloración y una lenta transferencia de
electrones.
9
 Por lo tanto, se detectó el tóxico por el cambio de color del cátodo PB. La
absorbancia de inhibición de toxicidad (IA) se determina midiendo los
cambios de absorbancia del PB cátodo de acuerdo con la ecuación. (3):

ΔAcon y ΔAtox son los cambios de absorbancia del cátodo PB en la ausencia y

presencia de tóxicos.

El biosensor de MFC se alimentó con medio nuevo que contenía 1 g / L glucosa, 100
mmol / L PBS, vitaminas (5 mL / L) y minerales (12.5 mL / L). Se aplicó medio sin glucosa
como solución de limpieza.

De cada prueba de toxicidad, la solución del ánodo se reemplazó con medio nuevo
que contiene 1 g / L de glucosa para la recuperación de los microbios anódicos.

10
 3. RESULTADOS
Y
DISCUSIONES

11
 La resistencia del fieltro de
grafito de 10 mm de espesor
fue mucho mayor que el del
fieltro de grafito de 3 mm de
espesor.

La resistencia de transferencia
de carga (Rct) mostró un
Por lo tanto, se seleccionó un
resultado opuesto después de
fieltro de grafito de 10 mm de
que las bacterias
espesor como el material
electroquímicamente activas
óptimo del ánodo.
crecieron en el fieltro de
grafito.

Esto puede atribuirse al hecho

de que la presencia de
bacterias
electroquímicamente activas
en el fieltro de grafito más
CARACTERIZACIÓN grueso puede promover la
transferencia de carga.
12
DE LA MFC
  El cátodo PB exhibió una amplia absorción entre 500 nm y 800 nm. La absorbancia se
recuperó fácilmente a su estado original (línea negra) cuando se aplicó un potencial de
oxidación de 0,4 V, y la absorbancia del cátodo PB aumentó de 0,11 a 0,44 después de la
oxidación durante 2 s.
 PW puede ser oxidado a PB azul por oxígeno en el aire. Después de exponer durante 4 min
y 330 min en el aire, la absorbancia solo se restableció al 23,6% y al 75,4% del valor inicial,
respectivamente.
 La velocidad de oxidación fue muy lenta debido a la capacidad oxidante relativamente
débil del oxígeno.
 La absorbancia del cátodo PB aumentó de 0,08 a 0,31 en 20 s. Esto podría atribuirse al
excelente rendimiento catalítico de Pt hacia la reacción de reducción de oxígeno.
 La tasa de oxidación de PW en presencia de Pt es más rápida que la de PW en el aire; sin
embargo, ambos métodos de oxidación son lentos e insuficientes.

13
 FIGURA 2: (A) Los espectros de absorción del cátodo PB variaron con el
tiempo bajo el potencial de oxidación de 0,4 V. (B) Los espectros de
absorción del cátodo PB variaron con el tiempo en el aire. (C) Los espectros
de absorbancia del cátodo PB variaron con el tiempo cuando se
conectaron con el electrodo Pt.
14
 CICLO DE VIDA DEL CÁTODO PB
La morfología y la
Las señales de estructura de
corriente casi no estas tiras de La morfología
cambiaron cátodos PB y PW aparente de la
después de 162 se caracterizaron tira de cátodo PB
ciclos, lo que por SEM, y se no cambió
sugiere que el observó que mucho después
cátodo PB puede tenían estructuras de la reacción.
reutilizarse. bien ordenadas y
uniformes antes
de la reacción

Los resultados indicaron que no hubo daños en la

estructura de PB y el cátodo PW durante el
proceso redox.
15
 CICLO DE VIDA DEL CÁTODO PB

16
 El cátodo PB se usó posteriormente como un indicador
electrocrómico, y el biosensor basado en MFC se ensambló
conectando el bioanode y cátodo PB.

La resistencia externa del biosensor basado en MFC se

optimizó.Las absorbancias del cátodo PB disminuyeron
cuando la resistencia externa aumentó de 1 kΩ a 5 kΩ.
OPTIMIZACIÓN DE LA
DETECCIÓN DE LA Por lo tanto, se eligió 1 kΩ como la resistencia externa
optimizada porque se puede obtener la variación de
absorbancia
TOXICIDAD
La absorbancia disminuyó cuando el tiempo de reducción se
estableció en un rango de 0 a 100 s.

La curva de tiempo de absorbancia de los picos

correspondientes del espectro de absorción a 692 nm en la
que las absorbancias cayeron bruscamente en un rango de 0
a 10 s .

17
 OPTIMIZACIÓN DE LA
DETECCIÓN DE LA TOXICIDAD

FIGURA 5: (A) El espectro de absorción de los diferentes tiempos de

reducción con una resistencia de carga de 1 kΩ. (B) Los picos
correspondientes de los espectros de absorción a 692 nm.

18
 ENSAYO DE TOXICIDAD
El pico de absorbancia de la
muestra c fue mucho menor
que el de la muestra d. El
valor IA fue 28.4% según la
ecuación

Los valores de IA obtenidos

El biosensor propuesto es más
sensible que el convencional.
fueron 11.0%, 33.8% y 66.6%
para el muestras que
contienen 1 mg / L de Co2 +,
1 mg / L de Pb2 + y 1 mg / L
de Cu2 +, respectivamente.

El orden de toxicidad fue:

Co2 + <Cd2 + <Pb2 + <Cu2 +,
El biosensor propuesto para la detección de que fue consistente con el
toxicidad es favorable debido a sus resultado obtenido del
características simples, reutilizables, de bajo ensayo de toxicidad crónica
impacto ambiental, de bajo costo y visuales Microtox® [38]

19
 ENSAYO DE TOXICIDAD

FIGURA 6: Detección de toxicidad colorimétrica de iones de metales pesados: (A)

los espectros de absorción de la tira catódica PB y la tira catódica PW (a-Abs0; b-
Abs0 '; c-Abscon; d- Abstox) para la muestra que contiene 1 mg / L Cd2 + ; (B) el
histograma de las relaciones de inhibición de cuatro iones de metales pesados (1
mg / L).
20
 GRÁFICA DEL MECANISMO DE
DETECCIÓN
Los agentes tóxicos pueden inhibir la
La inhibición de la respiración microbiana
electroactividad de los microorganismos
puede considerarse la inhibición de la
en un bioanodo y la intensidad de la
reacción enzimática, la transmisión con la
toxicidad fue convenientemente
enzima activa u otra partes relacionadas
evaluado visualmente a partir de la
existían en microbios.
decoloración de PB a simple vista.

Cuando se agregó la concentración de

La glucosa se transporta a través de la
glucosa con una cierta concentración de
membrana de fosfolípidos a través de
tóxico, se inhibió la actividad respiratoria y
glucosa permeasa. El electrón intracelular
metabólica de los microorganismos, lo
se transporta al electrodo extracelular con
que resultó en una degradación de
las proteínas del citocromo C de la
glucosa de baja eficiencia y una menor
membrana externa.
producción de electrones.

21
 GRÁFICA DEL
MECANISMO DE
DETECCIÓN

FIGURA 7: Ilustración esquemática de la detección de

toxicidad en el bioanode.

22
 Se desarrolló un biosensor recuperable, de detección
visual y de toxicidad autoalimentado basado en MFC
combinando un bioanodo y un cátodo PB.

El cátodo PB exhibió una excelente estabilidad a largo

plazo y una reversibilidad sobresaliente

Según la visualización electrocrómica del cátodo PB, la

toxicidad de las aguas residuales que contienen los
iones metálicos podrían ensayarse convenientemente
usando detección colorimétrica.

El biosensor de MFC autoalimentado puede lograr un

ensayo visual recuperable de agua contaminada con
metales pesados.

23
 Thanks!
ANY QUESTIONS?

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