LABORATORIO Nº 6

DETERMINACION DE FOSFORO TOTAL EN AGUAS RESIDUALES

1. OBJETIVO

 El objetivo de la práctica de laboratorio es la determinación del contenido de fosfatos solubles

en una muestra de agua residual mediante espectrofotometría ultravioleta- visible por el
método ácido vanadomolibdofosforico.

2. FUNDAMENTO TEORICO

El fósforo puede encontrarse en las aguas residuales disuelto o en partículas, ya sea en

compuestos orgánicos o inorgánicos. Para liberar el fósforo que está combinado en la materia
orgánica, es preciso someter la muestra de agua a un proceso de digestión ácida. Tras la
digestión, el fósforo está en forma de ortofosfatos, que se determinan por métodos
colorimétricos. El fósforo es un elemento esencial para la vida. Las plantas lo necesitan para
crecer y desarrollar su potencial genético y otros organismos biológicos.

Debido a que en aguas superficiales tienen lugar nocivas proliferaciones incontroladas de algas,
es de mucho interés limitar la cantidad de compuestos de fósforo que alcanzan las aguas
superficiales por medio de vertidos de aguas residuales domésticas, industriales, y a través de
las escorrentías naturales. Como ejemplo se puede citar el caso de las aguas residuales
municipales, cuyo contenido en fósforo como P puede variar entre 4 y 15 mg/l. Las formas más
frecuentes en las que se presenta el fósforo en soluciones acuosas incluyen; el ortofosfato, el
polifosfato y los fosfatos orgánicos.

Los ortofosfatos por ejemplo, se hallan disponibles para el metabolismo biológico sin que sea
precisa una ruptura posterior. Los ortofosfatos incluyen las moléculas con dos o más átomos de
fósforo, átomos de oxígeno y, en determinados casos, átomos de hidrógeno combinados en
moléculas complejas. La hidrólisis de los polifosfatos, proceso en el que recuperan sus formas
como ortofosfatos, tiene lugar en soluciones acuosas. No obstante, esta hidrólisis suele ser un
proceso bastante lento. Análogamente al nitrógeno, el fósforo es un nutriente de gran importancia
para el crecimiento y reproducción de los microorganismos que participan en la estabilización de
la materia orgánica presente en las aguas residuales.

El fósforo aparece en dos formas: en compuestos orgánicos (proteínas) y en compuestos

minerales (polifosfatos y ortofosfatos). Los polifosfatos se encuentran principalmente en los
residuos que contienen detergentes sintéticos (no biodegradables). En el caso de las aguas
residuales domésticas, el contenido de fósforo es preocupante no por insuficiencia, sino por
exceso, ya que efluentes de la planta de tratamiento ricos en fósforo provocan proliferación
excesiva de algas y plantas acuáticas en el curso del cuerpo.

Método ácido vanadomolibdofosforico

En una disolución diluida de ortofosfatos, el molibdato de amonio reacciona en condiciones
ácidas con el vanadato para formar un heteropoliácido, ácido vanadomolibdofosfórico. En la
presencia de vanadio, se forma ácido vanadomolibdofosfórico de color amarillo. La longitud de
onda a la cual la intensidad del color es medida depende de la detección requerida. La intensidad
del color amarillo es directamente proporcional a la concentración de fosfato.
3. MATERIALES Y EQUIPOS
Materiales
 Probetas de 50 ml.
 Vasos de precipitados de 50 ml.
 Pipetas de 1-10 ml.
 Succionadores de 1-10 ml.
 Matraces aforados de 50 ml.
 Pipeta aforada de 20 ml.
 Bote de agua destilada.
 Varilla de vidrio.
 papel filtro
 papel suave.
 Matraz quitazato con tampón de goma.
 Embudo buchner de plástico.
 Espátula de metal.
 Vidrio reloj.

Equipos
 Bomba al vacío.
 Balanza analítica.
 Placa calefactora.
 Termómetro.

Reactivos
 Reactivo vanadato- molibdato.
 Solución patrón de fosforo 50 ppm.
 Muestra de agua residual o natural.

4. PROCEDIMIENTO

Preparación de los Reactivos

Solución estándar de fosforo
 Disolver 0.2195 gr de fosfato dihidrogenado de potasio cristalizado (KH2P04), previamente
secado a 105 ºC durante 1 hora.
 Diluir con agua destilada en un matraz volumétrico de 1 Lt y completar el volumen, esta
solución contendrá 50 ppm de P.

Reactivo Vanadato-Molibdato
 Solución A: Disolver 25 gr de molibdato de amonio en 300 ml de agua destilada.
 Solución B: Disolver 1.25 gr de metavanadato de amonio, por calentamiento a ebullición en
300 ml de agua destilada, enfriar solo a temperatura ambiente.
 Solución final: Vaciar la solución A sobre la solución B, mezclar y diluir a 1 Lt.
Preparación de la recta de calibración:
Blanco S.1.00 ppm S.2.00 ppm S.4.00 ppm S.5.00 ppm

Solución estándar de P
-------- 1 ml 2 ml 4 ml 5 ml
(50 ppm).

Reactivo Vanadato –
10 ml 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml
Molibdato.

Volumen final 50 ml 50 ml 50 ml 50 ml 50 ml

Pasos a seguir:
Preparar los diferentes patrones que se muestran en el cuadro, el blanco y las diferentes
soluciones: 1.00 ppm, 2.00 ppm, 4.00 ppm y 5.00 ppm.

Blanco: Tomar 10 ml del reactivo vanadato-molibdato con una pipeta y transferirlo a un matraz
aforado de 50 ml, completar el aforo hasta un volumen los 50 ml y homogenizar.

Primer patrón: Tomar 1 ml de la solución patrón de fosforo 50 ppm, y transferir a un matraz de

50 ml con la ayuda de una pipeta de 1 ml, seguidamente adicionar con una probeta o pipeta 10
ml del reactivo de vanadato-molibdato , llevar al aforo con agua destilada hasta completar el
volumen de 50 ml y homogenizar.

Segundo patrón: Tomar 2 ml de la solución patrón de fosforo 50 ppm, y transferir a un matraz

de 50 ml con la ayuda de una pipeta de 1 ml, seguidamente adicionar con una probeta o pipeta
10 ml del reactivo de vanadato-molibdato , llevar al aforo con agua destilada hasta completar el
volumen de 50 ml y homogenizar.

Tercer patrón: Tomar 4 ml de la solución patrón de fosforo 50 ppm, y transferir a un matraz de

50 ml con la ayuda de una pipeta de 1 ml, seguidamente adicionar con una probeta o pipeta 10
ml del reactivo de vanadato-molibdato ,llevar al aforo con agua destilada hasta completar el
volumen de 50 ml y homogenizar.

Cuarto patrón: Tomar 5 ml de la solución patrón de fosforo 50 ppm, y transferir a un matraz

de 50 ml con la ayuda de una pipeta de 1 ml, seguidamente adicionar con una probeta o pipeta
10 ml del reactivo de vanadato-molibdato , llevar al aforo con agua destilada hasta completar el
volumen de 50 ml y homogenizar.

Preparación de la muestra:

Muestra Volumen
Muestra 25 ml
Reactivo Vanadato- Molibdato( RVM) 10 ml
Volumen final 50 ml
Pasos para la preparación de la muestra:
 Medir 25 ml de la muestra con pipeta aforada.
 Agregar 10 ml de reactivo vanadato- molibdato; usando la probeta.
 Vaciar a un matraz aforado y llevar a un volumen de 50 ml con agua destilada.
 Aforar por goteo con agua destilada si es necesario.
 Homogenizar.
 Esperar 10 minutos para el desarrollo del color.
 La intensidad del color es proporcional a la concentración de fosforo.
 Luego de esperar a que el color aparezca debemos medir la absorbancia en el equipo
espectrofotómetro.

Equipo de trabajo:
 Espectrofotómetro UV- Visible
 Tabla de intervalos para elegir la longitud de onda para efectuar la medición

Rango ( mg/ l) Longitud de onda (nm)

1-5 400
2 - 10 420
4 - 20 470

Calibración del espectrofotómetro:

 Manipular el selector de longitud de onda que uno requiera fijar la onda de trabajo en 400
nm por ejemplo.
 Colocar la solución blanco a la celda, agarrando del lado de las líneas con guantes, nunca
tomar del lado liso de la celda.
 Fijar 0 en transmitancia.
 Limpiar la celda con papel suave, colocar en la cubeta el blanco, observando que la parte
liza de la celda enfoque al transmisor de la luz uv.
 Calibrar a T= 100% (A=0) con el botón correspondiente en el espectrofotómetro; hasta que
esté de 100% de T.
 Luego seleccionar la función absorbancia (A) con el botón mode sin quitar la muestra del
interior.
 Leer la absorbancia de las soluciones patrones, (partir de la solución más diluida a solución
concentrada).
 Anotar el valor de la absorbancia S. 1 ppm.
 Entre cada lectura; controlar A= 0 con el blanco.
 Medir seguidamente los siguientes patrones: 2ppm, 4ppm, y 5 ppm.
 Y por último de la muestra de agua residual u natural, anotar todos los datos.
 Analizar los resultados obtenidos.
5. ESQUEMA

Preparación de la recta de calibración

BLANCO

Tomar 10 ml del reactivo vanadato-molibdato Aforar con agua destilada y homogenizar

y llevarlo a un matraz aforado de 50 ml

PATRÓN

Primer patrón: Tomar 1 ml Transferir 10 ml del Aforar con agua destilada

Segundo patrón: Tomar 2 ml reactivo de vanadato- hasta completar el volumen
Tercer patrón: Tomar 4 ml molibdato de 50 ml y homogenizar
Cuarto patrón: Tomar 5 ml
(De la solución patrón de
fosforo 50 ppm)
 Preparación de la muestra:

Medir 25 ml de la muestra Agregar 10 ml de reactivo Llevar a un volumen de 50

vanadato- molibdato ml con agua destilada y
Homogenizar

Esperar 10 minutos para el desarrollo del color

Calibración del espectrofotómetro:

Leer la absorbancia de las soluciones patrones, (partir de la solución más diluida a solución
concentrada).
6. CALCULOS

METODO º 1
Calculo de la concentración de la muestra por regresión
Anotar los valores leídos de absorbancia en el espectrofotómetro:

CONC.DE P( PPM) ABSORBANCIA ( A)

BLANCO 0
S. 1.00 PPM 1,38
S. 2.00 PPM 1,45
S. 4.00 PPM 1,64
S. 5.00 PPM 1,81

Calcular la concentración de la muestra por medio de la ecuación obtenida de la curva de

calibración y que es representada por la siguiente ecuación, por regresión lineal:

𝒀 = 𝑚𝑋 + 𝑏 ó 𝑨 = 𝑏 + 𝑚𝑃
𝑨−𝒃
𝑷= (𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑓ó𝑠𝑓𝑜𝑟𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑒𝑥𝑝𝑟𝑒𝑠𝑎𝑑𝑜 𝑒𝑛 𝑝𝑝𝑚)
𝒎

1,34 − 0,5837
𝑃=
0,2801

𝑃 = 2,7001𝑝𝑝𝑚

Donde:

m : Es la pendiente;
b : Es la ordenada al origen;
YoA : Es la absorbancia, y
X : Es la concentración (mg P/L).

Datos: Muestra de agua de CURUCHI

A = 1,34
m = 0,2801
b = 0 5837

En caso de haber dilución de la muestra a lo largo del desarrollo del método (digestión y alícuota
de muestra), utilizar la siguiente ecuación:

𝑷
𝒎𝒈 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 ∗ 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑳

Reportar los resultados en mg P/L con dos décimas, con la precisión correspondiente.
 METODO º 2
Calculo de la concentración de la muestra por el método gráfico
Registrar los valores obtenidos por espectrofotometría:
CONCENTRACIÓN DE “P” ( PPM) ABSORBANCIA ( A)
BLANCO 0
S. 1.00 PPM 1,38
S. 2.00 PPM 1,45
S. 4.00 PPM 1,64
S. 5.00 PPM 1,81

Realizar una gráfica con los datos obtenidos, absorbancia Vs concentración de P (ppm).

Ejemplo:

 Ingresar en la grafica el valor de absorbancia de la muestra leida en el espectrofotometro y

tantear el valor de la concentracion de P en ppm de la muestra.

ABSORBANCIA ( A)
2.5
y = 0.2801x + 0.5837
2 R² = 0.6473
ABSORBANCIA

1.5

0.5

0
0 1 2 3 4 5 6
CONC. DE P (PPM)

Absorbancia = 1,34
7. OBSERVACION

La experiencia se realizó sin inconvenientes.

8. CONCLUSION