Practica No.

Determinación de Glucosa Pre y Post-

Prandial
Objetivos:
 Conocer los métodos de laboratorio útiles para la cuantificación
de glucosa.
 Conocer el fundamento de los métodos enzimáticos para
determinar la glucosa.
 Conocer las pruebas diagnosticas.
 Interpretar resultados.

Introducción:

La determinación de la glucosa (azúcar) sanguínea es necesaria para

establecer el diagnostico de la diabetes mellitus y otras
enfermedades en que existen alteraciones en el metabolismo de los
carbohidratos. En la diabetes mellitus hay una deficiencia de insulina,
hormona que regula el proceso metabólico del azúcar en e le
organismo.

La cuantificación de glucosa en sangre es una de las pruebas mas

comunes en el laboratorio. Se han desarrollado un gran número de
pruebas, en los últimos 15 años, lo que hace posible medir la glucosa
de una manera exacta en muestras tan pequeñas como 10
microlitros. Para la determinación de glucosa en sangre deben de
tenerse en cuenta los siguientes factores:

 Elección de la muestra.
 Elección del método.
 Especificidad del método.
 Interferencias.
 Facilidad de medición.

Material:

 Tubos de ensaye.
 Pipetas 1 y 2 ml.
 Micro pipetas.
  Estufa para incubar a 37*C.
 Centrifuga
 Espectrofotómetro.
 Cronómetro.

Reactivos:

Suero o plasma de 2 voluntarios por equipo que se

presentaran en ayunas de 12 hrs. para la toma de muestra.
Reactivo para glucosa (GOD-PAD).
Solución patrón de glucosa 100 mg/dl (5.55mmol/l)

Técnica:

Numerar 3 tubos de ensaye y seguir las siguientes indicaciones.

BLANCO PATRON PROBLEMA

Plasma --- --- 20 microlitros
Solución patrón --- 20 microlitros ---
Reac. p/glucosa 2 ml 2ml 2ml

Mezclar bien, incubar a 37*C durante 10 minutos.

Leer contra el blanco de reactivo a una longitud de 505 nm.

Cálculos:

Concentración de Glucosa Absorbancia del problema

=
X 100 mg/dl.
Absorbancia del patrón

Valores Normales: 76-120 mg/dl.

Muestra Concentración mg/dl.

Patrón ---
Juan Pablo (Pre) 89.91
Juan Pablo (Post) 89.92
Edgar (Pre) 93.83
Rata 1 (C1) 99.37
Rata 2 (I1) 89.19
Rata 3 (C2) 73.03
Rata 4 (I2) 85
Cuestionario:

1.-Explique la utilidad clínica de la determinación de glucosa.

La utilidad de la determinación de glucosa es que se pueden

determinar ciertas enfermedades como la diabetes, debido a que la
glucosa es la principal fuente energética para las células, por lo tanto
interviene en muchos ciclos, como la glucólisis, gluconeogénesis,
glucogenólisis, glucogénesis, etc., y una alteración en el metabolismo
de la glucosa puede causar determinadas patologías, las cuales
pueden determinarse mediante la obtención de los niveles de glucosa
en sangre.

2.-Explique en consiste una curva de tolerancia a la glucosa y

cual es su utilidad clínica.

Curva de tolerancia a la Glucosa

¿Por que se necesita hacerlo?
Una prueba de tolerancia a la glucosa se realiza cuando se tiene duda
de si un paciente es diabético o si tiene una intolerancia a la glucosa.
Si dos glucemias en ayunas son mayores de 126 mg/dl se dice que el
paciente es diabético.

¿Cómo el paciente debe presentarse?

El día del análisis deberá concurrir al laboratorio en ayunas y
permanecerá sentado por lo menos 15 minutos antes de la primera
extracción.
Su estancia se prolongará por aproximadamente 3 horas.
¿En que consiste la prueba?
Luego de hacerle una extracción de sangre para determinar el nivel
de glucosa basal, se le pedirá que tome una solución de agua de 75
gramos de glucosa. Debe ingerirlo en un lapso de 10 minutos.
Se le hará una nueva extracción de sangre a los 120 minutos
contando a partir de que comience a ingerir la solución.

El objetivo de esta serie de pruebas es obtener muestras de sangre

para cuantificar glucosa durante intervalos de tiempo determinados,
previa administración de 75g de glucosa por vía oral.
La cuantificación periódica de la glicemia en el transcurso de alguna
horas, después de estimular el páncreas con un a dosis de glucosa,
permite analizar en forma global el metabolismo de los glúcidos.

Mencione técnicas para determinación de glucosa en sangre y

en orina.
Técnica de la orto-toluidina, glucosa hexocinasa, Folin WV, glucosa
GOD-PAP.

Explique en que circunstancias el riñón permite la eliminación

de glucosa.
Cuando la sangre está saturada con glucosa por la deficiencia de
insulina, el riñón, cuya una de sus funciones, es la purificación de la
sangre, comienza a tratar de reducir los niveles de glucosa y los
elimina mediante la orina. De hecho, en base a esto, se pueden
determinar los niveles de glucosa en la orina.

¿Cuáles son los hallazgos clínicos en SOC y coma diabético?

Es una complicación de la diabetes mellitus tipo 2 (no
insulinodependiente) que provoca niveles extremadamente altos de
glucosa sin la presencia de cetonas (un subproducto de las grasas, las
cuales causan otras complicaciones). Se caracteriza por la
disminución del estado de conciencia, la deshidratación extrema y
niveles de glucosa en la sangre sumamente altos que no están
acompañados de una cetoacidosis. La condición suele precipitarse por
una infección o por ciertos medicamentos que deterioran la tolerancia
a la glucosa o incrementan la pérdida de líquido.
Los riñones pueden compensar los altos niveles de glucosa en la
sangre, excretando el exceso de glucosa en la orina; sin embargo,
cuando ocurre una deshidratación, los riñones conservan el líquido y
los niveles de glucosa se vuelven mas altos, ocasionando una
deshidratación aún mayor. Los factores de riesgo son la edad
avanzada, una insuficiencia renal subyacente, insuficiencia cardiaca
congestiva, suspensión reciente de la administración de insulina o de
agentes hipoglicémicos orales, manejo inadecuado de la diabetes y
un evento precipitante como una infección, un ataque cardiaco, una
apoplejía o una cirugía reciente.

Efecto de la Insulina sobre ka glucemia de la rata.

Objetivos:

Comprobar el efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata.

Relacionar los conocimientos sobre el metabolismo de la glucosa y los
mecanismos del control de la glucemia en un modelo experimental
sencillo.

Hipótesis:

Si la glucemia en la rata es modificada por la insulina, la rata control

mostrará una glucemia diferente a la experimental. Discutir la
hipótesis apropiada.
Material:

 Se utilizaran 2 ratas, una será el control y la otra el

experimento.
 Tijeras
 EDTA (anticoagulante).
 Espectrofotómetro.
 Tubos de ensaye.
 Balanza granataria.
 Jeringas para insulina.
 Jeringas de 3ml.
 Centrífuga.
 Pipetas.
 Baña maría
 Insulina 10u/ml.
 Solución de cloruro de sodio 0.9%.
 Éter.
 Solución patrón de glucosa 100mg/dl.
 Reactivo para glucosa (GOD-PAP).

Método:

 Seleccionar al azar 2 ratas: una experimental y otra control.

 Pesar las ratas en una balanza.
 Inyectar a la rata problema por vía intraperitoneal 0.025 U de
insulina por gramo de peso. Para identificarlas marcar cada
rata.
 Inyectar a la rata testigo con un volumen igual de solución de
cloruro de sodio 0.9% y marcarla.
 Esperar 20 minutos.
 Anestesiar las ratas con éter y sangrar por punción cardiaca, la
sangre se vaciará en tubos que contienen EDTA.
 Centrifugar la sangre.
 Determinar la concentración de glucosa.

Análisis de Resultados

1.- Discutir si los resultados obtenidos están de

acuerdo con la hipótesis planteada.
Si, las ratas constantemente adquieren sus alimentos están a su
disposición en el momento en que tengan hambre pueden
consumirlos, por lo tanto pomos constatar en las ratas control una
glucosa elevada en comparación con los niveles de glucosa en el
hombre, aunque en las ratas es normal. Después de que a las ratas
se les suministró insulina, medimos la concentración de glucosa y
obtuvimos los resultados esperados: la glucosa descendió en
comparación con los datos obtenidos de la rata control.
2.- Discutir cual sería el resultado esperado si se
hubiera trabajado con ratas diabéticas.
En ratas diabéticas hubiéramos encontrado niveles mucho más altos
de glucosa en las ratas control, anormales de acuerdo a los niveles
que manejan las ratas, y al administrarles insulina, encontraríamos
que estos valores se normalizan descendiendo los niveles de glucosa
en sangre.

3.- ¿Qué es la insulina?

La molécula de Insulina presenta tres segmentos con estructura
secundaría en a-Hélice
ADos segmentos en la Cadena A entre lo residuos Gly1 - Ile10, Ser12 -
Glu17
AUn segmento en la Cadena B entre los residuos Ser 9 - Gly20.
ALa estabilidad de esta conformación es conferida por la formación de
Puentes de Hidrógeno entre los átomos del enlace peptídico.
ADe acuerdo con las propiedades químicas de las cadenas laterales,
los residuos de las a-Hélices, poseen una orientación particular :
ALos Residuos Hidrofóbicos se orientan hacia el interior,
ALos Residuos Hidrofílicos se ubican hacia el exterior de la proteína,
donde interaccionan con las moléculas de agua y con el receptor
Hormonal.
A Esta es la distribución de los residuos en la molécula.
La insulina es una hormona producida por una glándula denominada
páncreas. La insulina ayuda a que los azúcares obtenidos a partir del
alimento que ingerimos lleguen a las células del organismo para
suministrar energía.
Hoy en día todas las insulinas del mercado son insulinas humanas
sintetizadas por ingeniería genética (DNA recombinante).
Las insulinas de origen bovino o porcino han desaparecido
prácticamente del mercado. Todas ellas están muy purificadas y tan
solo contienen proteínas de insulina y no contaminaciones de otro
tipo. El único factor que las diferencia es la duración de acción.
Como la insulina sólo se mantiene activa en la sangre durante
períodos cortos (menos de 15 minutos), se han utilizado diversas
maneras para retardar su liberación y por ello su acción .
Estos sistemas se basan en preparaciones inyectables que retardan la
liberación:
Mediante la unión a otras proteínas (protamina).
Mediante una cristalización: se añade Zinc y como las partículas son
más grandes tardan en hacerse solubles, por lo que va liberándose
poco a poco.
Dependiendo de cada sistema de retardo de su acción las insulinas
pueden ser rápidas, intermedias y lentas.
Todas las insulinas retardadas deben inyectarse vía subcutánea, y
sólo la no retardada se puede administrar vía endovenosa.

Es la hormona "anabólica" por excelencia; es decir, permite disponer

 a las células del aporte necesario de glucosa para los procesos de
síntesis con gasto de energía, que luego por glucolísis y respiración
celular se obtendrá la energía necesaria en forma de ATP (pastillas
concentradas de energía) para dichos procesos.

Existen fundamentalmente dos tipos de insulina :

• De acción rápida, que tiene un aspecto claro, como Su acción dura de
4 a 6 horas.
• De acción retardada, con aspecto lechoso, turbio.Su acción dura entre
22 a 24 horas.
• La insulina se puede inyectar con tres tipos de jeringa:
• La jeringa de toda la vida, casi siempre de un sólo uso, graduada en
unidades internacionales entre 0 y 40.
• La pluma para inyección de insulina.Es un aparato con el aspecto de
una pluma que tiene en su interior un cartucho que contiene la
insulina.El cartucho se cambia cuando la insulina se acaba, pero la
pluma dura para siempre.
• La jeringa precargada.Es un aparato parecido al anterior, pero está
previamente cargado de insulina. Una vez que se acaba la insulina se
tira toda la jeringa.
Tambien tenemos otros tipos de insulina:
Insulina de acción ULTRARRÁPIDA que comienza a hacer efecto a los 15
minutos de haberse inyectado, actuando con mayor intensidad entre
los 30 y los 70 minutos.
Insulina de acción RÁPIDA que empieza a hacer efecto a los 30 minutos
de haberse inyectado, actuando con mayor intensidad entre la 1 y 3
horas después de la inyección.
Insulinas de acción INTERMEDIA (NPH) o LENTA. que empieza a hacer
efecto a los 60 minutos de haberse inyectado, actuando con mayor
intensidad entre la 3 y 6 horas después de la inyección.

Conclusiones:

La práctica fue de gran utilidad para comprender el metabolismo de

la glucosa, su determinación y la función de la insulina. La diabetes
en México un grave problema de salud, por lo que considero que
tanto médico como paciente, deben conocer los fundamentos de esta
enfermedad y los conocimientos básicos acerca del mecanismo de
acción de la insulina.

Bibliografía

Murria, R.K. Granner, D.K., Mayes. P.A., Rodwell, V.W. Bioquímica de

Harper 15a Edición. El manual moderno, México, 2000.
www.tuotromedico .com/temas/inyección_insulina.html
www.wikipedia.com