FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

PRACTICA N° 13
TEMA: DETERMINACION DE TRANSAMINASAS

CURSO: BIOQUIMICA

DOCENTE: Q.F. ENRIQUE LEON MEJIA

TURNO: MAÑANA

CICLO: VI

ALUMNOS:
 DE LA ROCA CONTRERAS JOSE
 MASGO HIDALGO RUTH

FECHA DE ENTREGA: 23/11/2018

2018-II
 DETERMINACION DE TRANSAMINASAS

I) INTRODUCCIÓN

Las transaminasas (o aminotransferasas) son enzimas transferasas que

catalizan la reacción de transferencia del grupo amino (-NH2) de un aminoácido
a un α-cetoglutarato (un α-cetoácido). Las transaminasas más conocidas son:

 Glutamato-oxalacetato transaminasa (GOT), llamada también aspartato

aminotransferasa (AST).
 Glutamato-piruvato transaminasa (GPT), o bien alanina aminotransferasa
(ALT).

Estas enzimas son importantes en la producción de varios aminoácidos, y su

medición en sangre se utiliza para diagnosticar y rastrear muchas enfermedades,
y en especial para evidenciar la presencia de daño hepático. Sus valores
normales se indican en los partes médicos de laboratorio y varían según la
metodología analítica adoptada. Un valor elevado de las transaminasas suele
ser indicativo de daño en el hígado.
 II) MARCO TEÓRICO

Las transaminasas están por todo el organismo. La GOT o AST está en

el hígado, miocardio, riñón, encéfalo y musculatura esquelética. La GPT o ALT
está presente en concentraciones mucho más elevadas en el hígado que en los
demás tejidos.

La GOT cataliza la siguiente reacción:

Aspartato + α-Cetoglutarato ⇔ Oxalacetato + Glutamato
La GPT cataliza esta otra reacción:
Alanina + α-Cetoglutarato ⇔ Piruvato + Glutamato

Estas enzimas son importantes en la producción de varios aminoácidos, y su

medición en sangre se utiliza para diagnosticar y rastrear muchas enfermedades,
y en especial para evidenciar la presencia de daño hepático. Sus valores
normales se indican en los partes médicos de laboratorio y varían según la
metodología analítica adoptada. Un valor elevado de las transaminasas suele
ser indicativo de daño en el hígado.

Las transaminasas requieren la coenzima piridoxal-fosfato, que se convierte en

piridoxamina en la primera fase de la reacción, cuando un aminoácido es
convertido en un ácido ceto. La piridoxamina enlazada a la enzima reacciona con
alanina, oxalacetato o alfa-cetoglutarato, dando piruvato, ácido aspártico o ácido
glutámico, respectivamente.

Cuando el azúcar en sangre es bajo, el organismo debe romper las proteínas en

aminoácidos, a expensas del tejido muscular. La preferencia de las
transaminasas del hígado por el oxalacetato o el alfa-cetoglutarato desempeña
un papel fundamental en la canalización del nitrógeno desde el metabolismo de
los aminoácidos a asparagina y glutarato, para la conversión a urea que sirve
como excreción del nitrógeno. Del mismo modo sucede en los músculos, donde
el uso del piruvato en la transaminación produce alanina, que es llevada por la
corriente sanguínea al hígado. Allí, otras transaminasas regeneran el piruvato,
que proporciona un valioso precursor para la gluconeogénesis. Este ciclo de la
alanina es análogo al ciclo de Cori, que permite el metabolismo anaerobio en los
músculos.
 III) PARTE EXPERIMENTAL

Equipo y Materiales

 Espectrofotómetro
 Centrifuga
 Baño maria regulado a 37°C
 Jeringas descartables
 Micropipietas
 Tubos de ensayo
 Gradillas, algodón y ligadura

Reactivos
 Sustrato GOT
 Sustraída GPT
 standar de piruvato

PROCEDIMIENTO

DETERMINACION DEL GOT

Realizamos la
obtención de la
muestra
sanguínea

Llevamos la
muestra
sanguínea a la
centrifuga para
obtener el suero
sanguíneo
 Mezclamos en un
tubo de ensayo
1ml del reactivo 1
+ 200ul del
reactivo 2

Colocamos 1 ml
del reactivo de
trabajo más 100ul
del suero
sanguíneo

DETERMINACION DEL GPT

Llevamos la
muestra
sanguínea a la
centrifuga para
obtener el suero
sanguíneo
 Mezclamos en un
tubo de ensayo
1ml del reactivo 1
+ 200ul del
reactivo 2

Colocamos 1 ml
del reactivo de
trabajo más 100ul
del suero
sanguíneo

Las 2 muestras
lo transferimos a
la cubeta
 Llevamos al
espectrofotómetro
a 340nm y
comenzamos a
leer cada 60” por 3
minutos

Tiempo GOT GPT

1 60” 0.223 1.054

2 60” 0.218 1.051

3 60” 0.214 1.048

Calculos para la determinacion del GOT

Actividad enzimatica (ui/L)= abs/min x 1768
(0.223 – 0.214) x 1768
0.009 x 1768
15.912ui

Calculos para la determinacion del GPT

Actividad enzimatica (ui/L)= abs/min x 1768
(1.054 – 1.048) x 1768
0.006 x 1768
10.608ui
 IV) RESULTADOS

 En la determinación del GOT obtuvimos el resultado de 15.912 y está

dentro de los rangos permitidos ya que el rango de referencia es hasta el
34u/l
 En la determinación del GPT obtuvimos el resultado de 10.608 y está
dentro de los rangos permitidos ya que el rango de referencia es hasta el
36u/l

V) DISCUSION

En esta prueba reafirmamos lo mencionado por Sibley en 1949, en relación a

que la aspartato-amino-transferasa y la alanino-aminotransferasa se encuentran
no sólo en el hígado, sino también en otros tejidos, entre ellos el músculo
esquelético2. Posteriormente se describe la presencia de estas enzimas en
hígado, riñones y músculo3-4, pero frente a una hipertransaminemia, los médicos
aún mantienen el foco en el estudio hepático, ignorando la posibilidad de otras
etiologías. Estudios en adultos asintomáticos con elevación de transaminasas
señalan mayoritariamente las causas hepáticas como etiologías probables,
recomendando la biopsia hepática. Sin embargo, se ha reportado que un 7%
corresponde a causas extrahepáticas como la enfermedad celíaca, miopatías y
ejercicio excesivo, lo cual es probablemente más frecuente en niños 5-6. La
aspartato aminotransferasa (AST o GOT) y alanina aminotransferasa (Alt o GPT)
son enzimas intracelulares que catalizan el aspartato y la alanina a glutamina y
acetil coA respectivamente, los cuales son utilizados en el ciclo de Krebs para la
producción de energía. La GOT se encuentra en mayores concentraciones en el
tejido miocárdico, seguido del músculo esquelético, hígado y riñones. En cambio,
GPT muestra mayores concentraciones en hígado y riñones, con bajos niveles
en músculo esquelético7. De acuerdo a esto, se esperaba encontrar niveles
mayores de GOT que de GPT, sin embargo, no encontramos diferencias
significativas entre estas enzimas 15.912UIy 10.608UI.
Estudios anteriores mencionan esta discordancia8. Los hallazgos podrían
explicarse por otros factores determinantes en la concentración plasmática,
como el catabolismo enzimático y su eliminación. Estudios en animales muestran
que la eliminación renal de GPT es más lenta y que el tiempo de vida media de
ésta es 42 horas, en cambio de GOT es de 17 horas 9, lo que podría explicar en
cierta medida nuestros resultados.

El aumento de transaminasas GOT y GPT en distrofias musculares se ha

comunicado en la literatura incluso en el período asintomático de la enfermedad,
como casos únicos o series pequeñas10-11
 VI) CONCLUSIONES

 Las transaminasas también se elevan en casos de complicaciones

hepáticas.
 Los valores normales de la TGO y TGP son entre 12 U/L y 36 U/L.
 Se determinó la concentración en suero, de las transaminasas:
alaninoaminotransferasa y aspartatoaminotransferasa.

VII) CUESTIONARIO

a) ¿Qué ocurre si una persona bebe alcohol en forma

permanente?

PELIGROSO PARA LA MENTE

El etanol, compuesto presente en la mayoría de las bebidas alcohólicas, es una

neurotoxina o, lo que es lo mismo, una sustancia capaz de deteriorar o destruir
el sistema nervioso. De hecho, la borrachera es un tipo de intoxicación. Cuando
se consume en grandes cantidades, el etanol puede dejar al bebedor en coma o
incluso matarlo.

La exposición prolongada al alcohol lleva a que la química cerebral se adapte

para contrarrestar el efecto tóxico del etanol y mantener las funciones cerebrales
a un nivel normal. Como consecuencia, se produce la tolerancia, situación que
implica que la misma cantidad de alcohol tiene menos efectos que antes.
La dependencia llega cuando el cerebro se acostumbra tanto al alcohol que ya
no puede funcionar bien sin él, de modo que el cuerpo lo pide con insistencia; si
no lo recibe, el equilibrio químico se desestabiliza por completo y sobrevienen
los síntomas de abstinencia, tales como ansiedad, temblores e incluso ataques.

Además de alterar la química cerebral, el abuso del alcohol puede ocasionar

atrofia y destrucción de las células, atentando así contra la propia estructura del
cerebro. Aunque con la abstinencia absoluta es posible la recuperación parcial
de algunos daños, otros son al parecer irreversibles, por lo que resultan aún más
afectadas la memoria y otras funciones cognitivas. Los estudios indican que el
cerebro sufre daños aun cuando los períodos en que se abusó del alcohol
no hayan sido prolongados, sino relativamente breves
ENFERMEDADES HEPÁTICAS Y CÁNCER

Los daños que recibe el hígado por estar expuesto mucho tiempo a esta
sustancia se suceden en tres etapas. En la primera, la descomposición del etanol
hace que las grasas se digieran con mayor lentitud y se acumulen en el hígado,
afección que se denomina esteatosis hepática, o hígado graso. En la segunda
etapa se produce inflamación crónica, o hepatitis. Aunque por sí solo el consumo
de alcohol puede causar hepatitis, por lo visto también favorece indirectamente
su aparición al mermar la resistencia del organismo a los virus de las hepatitis B
y C.* Si no se pone freno a la inflamación, las células terminan reventando y
muriendo. Para colmo de males, se cree que el alcohol activa la apoptosis,
proceso natural por el que las células se autodestruyen.

El alcohol ataca gradualmente al hígado desde otro ángulo: merma su capacidad

de contrarrestar los efectos de los agentes cancerígenos. Además de favorecer
la aparición de cáncer hepático, el alcohol incrementa de forma significativa el
riesgo de tener cáncer de boca, faringe, laringe y esófago. Por si fuera poco,
hace que las membranas mucosas de la boca se vuelvan más susceptibles a la
penetración de las sustancias cancerígenas del tabaco, lo que eleva el peligro
en el caso del fumador. Por otra parte, las mujeres que beben a diario tienen más
probabilidades de padecer cáncer de mama. De hecho, cierta investigación
indica que las que toman un mínimo de tres bebidas diarias son un 69% más
propensas a padecerlo que las que no beben.

b) ¿El dosaje de las transaminasas, se puede llevar acabo

sin la presencia del piridoxal pirofosfato?

Las transaminasas requieren la coenzima piridoxal-fosfato, que se convierte en

piridoxamina en la primera fase de la reacción, cuando un aminoácido es
convertido en un ácido ceto. La piridoxamina enlazada a la enzima reacciona
con alanina, oxalacetato o alfa-cetoglutarato, dando piruvato, ácido aspártico o
ácido glutámico, respectivamente.
 c) Cómo dosaría Ud. un suero que de antemano le indican,
que tiene más de mil unidades de TGO

El tejido miocárdico es muy rico en TGO y el ascenso de esta enzima acompaña

a los procesos destructivos del corazón; sube al máximo entre las 12 y 48 horas
y suele volver a lo normal a los 4 ó 7 días. El ascenso es, en general, proporcional
a la extensión del infarto; a veces da datos positivos en casos con datos
electrocardiográficos de difícil interpretación, pero tiene el inconveniente de
elevarse en diversos cuadros, sobre todo en la congestión hepática.

d) Explique a que se debe que para calcular las unidades de

aminotransferasas no se utilice factor.

La administración de un aminoácido con nitrógeno isotópico va seguida de la

aparición de dicho nitrógeno en numerosos aminoácidos de las proteínas
tisulares; es decir, el organismo utiliza el nitrógeno de un aminoácido para las
síntesis de otros. Esta reacción general de traspaso de nitrógeno de uno a otro
aminoácido se denomina transaminación y en ella participan un aminoácido y un
cetoácido.

Las reacciones de transaminación más frecuentes son aquellas en las que

participa en alfa-cetoglutarato cuya aminación produce glutamato. Por
consiguiente, casi todos los aminoácidos pueden ceder grupo amino al alfa-
cetoglutarato, a través de una reacción de transaminación para formar el
cetoácido correspondiente y glutamato.

e) Considera Ud., que un suero hemolizado, no se puede

utilizar para determinar aminotransferasas.

No se podría utilizar debido a que el suero este hemolizado generará una

interferencia en los resultados debido a que los hematíes están parcialmente
destruidos
VIII. REFERENCIA BIBLIOGRAFIA

1. Los excesos con el alcohol y su efecto en la salud.2005. disponible en:

https://wol.jw.org/es/wol/d/r4/lp-s/102005722#h=10
2. Sibley JA, Lehninger AL. Aldolasa en suero y tejidos de animales
portadores de tumores. J Natl cancer Inst 1949; 9: 303-9.

3. Thomson W, Leyburn P, Walton J. Actividad de la enzima sérica en la

distrofia muscula. BMJ 1960; 2: 1276-81
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N Eng J Med 1957; 256: 1069-75.
5. Daniel S, Ben-Menachem T, Vasudevan G, Ma CK, Blumenkehl M.
Evaluación prospectiva de anomalías no explicadas de la transaminasa
hepática crónica en pacientes asintomáticos y sintomáticos. Soy J
Gastroenterol 1999; 94: 3010-4.
6. Limdi JK, Hyde GM. Evaluación de pruebas anormales de función
hepática. Posgrado med J 2003; 79: 307-12.

7. Henry JB. Diagnóstico clínico y manejo por métodos de laboratorio.

Filadelfia, PA, W. B. Saunders, 1991: 248-84.
8. Kohli R, Harris D, Whitington P. Elevaciones relativas del suero alanina y
aspartato aminotransferasa en la distrofia muscular. J Pediatr
Gastroenterol Nutr 2005; 41 (1): 121-4
9. Rutledge J, Andersen J, Fink CW, Strickland A. La hipertransaminasemia
persistente como el hallazgo actual de la enfermedad muscular infantil.
Clin Pediatr (Phila) 1985; 24: 500-3.
10. Zamora S, Adams C, Butzner JD, Machida H, Scott RB. Actividad elevada
de aminotransferasa como una indicación de distrofia muscular: informes
de casos y revisión de la literatura. puede J Gastroenterol 1996; 10: 389-
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11. Urganci N, Erkan T, Serdaroglu P, Oztelik G, Dogan S, Kayaalp N. Una
causa rara de transaminasemia alta: distrofia muscular autosómica con
sarcoglicano gamma. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2001; 32 (3): 327-9