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INTRODUCCIÓN

La microbiología es la rama de la biología que estudia los microorganismos o


microbios. Estos son tan abundantes y variados que se calcula que apenas se
han estudiado un 1% de los microorganismos presentes en nuestro planeta.
En el desarrollo de esta práctica se conoce las diferentes Normas de
Bioseguridad que se deben tener en cuenta en un Laboratorio, con el fin de
evitar accidentes o contraer enfermedades. Además, se identifican los
diferentes tipos de materiales y equipos necesarios para el desarrollo de las
diferentes practicas dentro del Laboratorio.

Se realiza un análisis Microbiológico con diferentes tipos de técnicas empleadas


en el campo de la Ingeniería, con el fin de determinar los distintos tipos de
hongos y bacterias.
OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Reconocer e identificar los diferentes tipos de técnicas de análisis utilizadas en


el campo de la Microbiología en el momento de determinar los diferentes tipos
de bacterias y hongos presentes en diferentes sustancias y/o medios.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Aplicar las Normas de Bioseguridad para la realización de prácticas en el


Laboratorio.
 Conocer las diferentes técnicas para identificar hongos y bacterias en el
laboratorio.
 Identificar los diferentes medios de cultivo para el crecimiento de
Microorganismos.
MATERIALES
Por estaciones
- Dos vasos de precipitado de 50-100 mL con 20 mL de agua destilada estéril.
X5
- Agitador de vidrio o espátula. X5
- Gotero estéril. X5
- Portaobjetos y cubreobjetos. X5
- Asa bacteriológica de punta redonda. X5
- Mechero de alcohol o gas. X5
- Azul de lactofenol (reactivo). X5
- Microscopio de luz. X5
Por Grupo
- Un vaso precipitado de 100 mL con 90 mL de agua destilada estéril.
- Un recipiente de plástico o vidrio con 20 mL de etanol al 70 %.
- Un recipiente de plástico o vidrio con 20 mL de hipoclorito de sodio (o
clorox) al 3 %.
- Cuatro tubos de ensayo con 9 mL de agua destilada estéril.
- Cinco pipetas de vidrio de 1 mL estériles.
- Azul de metileno (reactivo).
- Metanol o etanol (reactivo).
- Incubadora ajustada a 25 °C.
- Incubadora ajustada a 37 °C.
- Balanza gramera o analítica.
- Medio gramo de peptona pancreática de caseína (reactivo).
- Ocho cajas de Petri con agar nutritivo (AN).
- Un rastrillo de plástico estéril.
- Unas pinzas metálicas estériles.
- Láminas para cortar o bisturí.
- Una caja de Petri estéril vacía.
- Dos cajas de Petri con Agar Sabouraud y dextrosa (ASD).
- Embudo estéril.
- Papel filtro.
- Dos escobillones estériles.
- Dos tubos de ensayo con agua destilada estéril.
- Dos asas micológicas de punta recta.
- Cristal violeta para Gram (reactivo).
- Lugol para Gram (reactivo).
- Alcohol acetona para Gram (reactivo).
- Fuscina para Gram (reactivo).
Estación 2: Recuperación de hongos acuáticos verdaderos.
- Se limpio las semillas con agua destilada durante 30s cerca del
mechero.

- Se realizo un segundo lavado con etanol durante 30s cerca del mechero.
- Con la ayuda de un bisturí estéril, se realizaron cortes cerca del
mechero.
- Se puso las semillas en una caja Petri y colocamos 20 mL de la muestra
de agua de charca.

- Se incubo a temperatura ambiente en un lugar oscuro por una semana.


Resultados
Encontramos que las semillas estaban totalmente cubiertas por un
crecimiento micelial blanco alrededor de las semillas. Una pequeña parte de
semilla fue puesta en un portaobjetos cubriéndola con una gota de azul de
lactofenol y después de 3 min fue llevada al microscopio, donde
observamos hifas y septos.

Estación 3: Recuperación de hongos transitorios por filtración.


- Se utilizo papel filtro en un embudo estéril y se empapo con agua de
charca.

- Se llevo con mucho cuidado el papel filtro sobre una caja de Petri con
ASD.
- Después de 8 días se revisa el crecimiento micelial sobre el papel filtro.
- Se realizó un conteo de morfotipos.
- Con la utilización de asa de punta recta se puso la muestra de micelio
del morfotipo más abundante en un portaobjetos y se puso una gota de
azul de lactofenol sobre la muestra.
- Se dejo actuar por 3 min y se coloco el cubreobjetos.

- Se observo en microscopio a 4x,10x,40x y 100x.

Resultados
Pudimos observar y contar 14 colonias y 8 morfotipos. Tomamos una muestra
del morfotipo más abundante, en el cual encontramos hifas y esporas.
Estación 4. Aislamiento de bacterias habitantes de la piel.

- Mediante el uso de un escobillón se realizo frotis de piel a un estudiante


del grupo de trabajo, las muestras se realizaron en la palma de la mano
antes y después de lavar. Estas muestras se extendieron de forma
uniforme y con la ayuda de un escobillón en una caja Petri dividida por
mitad y se incubo a 37 por 2 días.

- Después del determinado tiempo solo se pudo observar el crecimiento de


solo 1 colmena de bacterias en la mitad de la muestra sin lavar. Esta
muestra de colmena la extendimos sobre una gota de agua en un
portaobjetos y se fijo la muestra al calor del mechero si dejar quemar.
Tinción de Gram

- Una vez que la muestra estaba fijada se procedió a cubrir la muestra con
cristal violeta, dejando actuar por 1 min y luego se lavó.

- Se aplico una gota de Lugol a la muestra y se dejó actuar por 1 min y


luego se lavó.
- A la muestra se le adiciono alcohol acetona y se dejó actuar por 3s y se
lavó con agua.

- Finalmente se cubrió con fuscina y se dejó actuar por 15s y se lavó con
agua.

Todo este procedimiento con el fin de colorear de colorear las bacterias Gram
positivas y Gran negativas.

Una vez seca la muestra tuvimos que aplicar una gota de aceite de inmersión
para poder observar al 100%.

Resultados
En nuestra observación pudimos ver bacilos que son de forma alargada, los
cocos que son de forma redonda y las bacterias Gram positivas,
desafortunadamente no encontramos Gram negativas que debían quedar
teñidas de color rosado o rojizos.
Estación 5. Aislamiento de microorganismos endófitos.

- Hicimos una división a una caja de Petri con AN, y en otra caja de Petri
ASD.
- Limpiamos la hoja de planta con agua, durante 30s para remover suciedad
y cerca al mechero.
- Se realizó un segundo lavado con etanol al 70 % (v/v) durante 30 s y
rápidamente se eliminó el exceso con agua y cerca del mechero.
- Se realizó un tercer lavado con hipoclorito de sodio al 3 % (v/v) durante
15 s y rápidamente se eliminó el exceso con abundante agua y cerca del
mechero.
- Se realizaron 6 cortes de la hoja de 1 cm x 1 cm y cerca del mechero.
- Pusimos 3 cortes sobre la primera mitad de la caja de Petri con AN, y
luego colocaban en la segunda mitad.
- Realizamos el mismo procedimiento con los otros 3 cortes en la caja de
Petri con ADS.

Resultados
Obtuvimos que en el agar natural no se obtuvieron cambios, este no
favoreció el crecimiento de hongos, en cuanto al agar de dextrosa se
presento gran cantidad de hongos y variedad, pudimos contar 10
colmenas. En cuanto a la vista en el microscopio pudimos observar hifas
y septos.